脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮微板法)
简介:
脯氨酸(Proline,Pro) 是一种环状的α-亚氨基酸,呈中性,等电点为6.30,水中溶解度比任何氨基酸都大,水中可溶162g 左右,易潮解不易得结晶,有甜味。与茚三酮溶液共热,生成黄色化合物,一旦进入肽链后,可发生羟基化作用,从而形4-羟脯氨酸,是组成动物胶原蛋白的重要成分。羟脯氨酸也存在于多种植物蛋白质中,尤其与细胞壁的形成有关,在正常情况下脯氨酸含量较低,但在逆境下(旱、热、冷、冻、盐碱等) ,常有脯氨酸的明显积累,即积累指数与植物的抗逆性有关。在临床、生物材料、工业等方面均有广泛应用。
Leagene 脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮微板法) 检测原理是脯氨酸游离于磺基水杨酸溶液中,前者与茚三酮共热发生反应,能产生稳定的红色产物,以酶标仪测定处吸光度,在一定范围内颜色深浅(即吸光度) 与脯氨酸浓度成正比。该试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:
自备材料:
1、 蒸馏水 2、 研钵或匀浆器 3、 离心管或试管 4、 滤纸或纱布 5、 水浴锅 6、 96孔板 7、 酶标仪
操作步骤(仅供参考) :
1、 准备样品:
①植物样品:取新鲜植物组织,清洗干净,擦干,切碎,迅速称取,加入lPRO Lysis buffer后匀浆或研磨,沸水浴期间经常摇动) ,混匀,用滤纸或纱布过滤,滤液即为脯氨酸提取液,4℃保存备用。
②血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,-20℃冻存,用于脯氨酸的检测。
③细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如有必要用PRO Lysis buffer进行适当匀浆,留取上清即脯氨酸提取液,4℃保存备用,用于脯氨酸的检测。
④高活性样品:如果样品中含有较高浓度的脯氨酸,可以使用PRO Lysis buffer进行恰当的稀释。
2、 配制茚三酮显色液: 取出1支茚三酮,准确溶解于茚三酮稀释液,加热搅拌至完全溶解,
混匀,即为茚三酮显色液。4℃避光备用,48h 有效。注意:茚三酮稀释液具有一定腐蚀性,请小心操作。
3、 配制系列脯氨酸标准溶液:取出脯氨酸标准(100μg/ml)恢复至室温后,以脯氨酸标准
4、 PRO 加样:按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注
意避免产生气泡。如果样品中的脯氨酸浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置平行管。
5、PRO 测定:迅速冷却加入PRO 萃取液,振摇30s ,静置片刻,取上清液转移至新的离心管或试管,离心,取上清液备用。以空白调零,分光光度计(1cm光径比色杯) 检测标准管520nm 处吸光度;以PRO 萃取液调零,分光光度计(1cm光径比色杯)
检测测定管520nm 处吸光度。
计算:
以系列脯氨酸标准(1-6号管) 含量(μg) 为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,制作标准曲线,根据测定管的吸光度进而计算脯氨酸含量。根据如下公式计算具体样品中脯氨酸的含量:
植物组织样品PRO(μg /g)=C×V T /(W×V S ) 式中:C=从标准曲线上查得的脯氨酸含量(μg) V T =脯氨酸提取液总体积(ml) W=样品鲜重(g)
V S =测定时加入提取液体积(ml)
血清、尿液等样品AA(μg /ml)=C×N /VS 式中:C=从标准曲线上查得的脯氨酸含量(μg) N=稀释倍数
V S =测定时加入提取液体积(ml)
注意事项:
1、 实验材料应尽量新鲜,如取材后不立即使用,应存于4℃。 2、 PRO Assay buffer应密闭保存,防止挥发。
3、 如果没有分光光度计,也可以使用普通的酶标仪测定,但应考虑酶标仪的最大检测体
积。
4、 所测样本的浓度过高,应用PRO Lysis buffer稀释样品后重新测定。
有效期:6个月有效。 相关:
脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮微板法)
简介:
脯氨酸(Proline,Pro) 是一种环状的α-亚氨基酸,呈中性,等电点为6.30,水中溶解度比任何氨基酸都大,水中可溶162g 左右,易潮解不易得结晶,有甜味。与茚三酮溶液共热,生成黄色化合物,一旦进入肽链后,可发生羟基化作用,从而形4-羟脯氨酸,是组成动物胶原蛋白的重要成分。羟脯氨酸也存在于多种植物蛋白质中,尤其与细胞壁的形成有关,在正常情况下脯氨酸含量较低,但在逆境下(旱、热、冷、冻、盐碱等) ,常有脯氨酸的明显积累,即积累指数与植物的抗逆性有关。在临床、生物材料、工业等方面均有广泛应用。
Leagene 脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮微板法) 检测原理是脯氨酸游离于磺基水杨酸溶液中,前者与茚三酮共热发生反应,能产生稳定的红色产物,以酶标仪测定处吸光度,在一定范围内颜色深浅(即吸光度) 与脯氨酸浓度成正比。该试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:
自备材料:
1、 蒸馏水 2、 研钵或匀浆器 3、 离心管或试管 4、 滤纸或纱布 5、 水浴锅 6、 96孔板 7、 酶标仪
操作步骤(仅供参考) :
1、 准备样品:
①植物样品:取新鲜植物组织,清洗干净,擦干,切碎,迅速称取,加入lPRO Lysis buffer后匀浆或研磨,沸水浴期间经常摇动) ,混匀,用滤纸或纱布过滤,滤液即为脯氨酸提取液,4℃保存备用。
②血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,-20℃冻存,用于脯氨酸的检测。
③细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如有必要用PRO Lysis buffer进行适当匀浆,留取上清即脯氨酸提取液,4℃保存备用,用于脯氨酸的检测。
④高活性样品:如果样品中含有较高浓度的脯氨酸,可以使用PRO Lysis buffer进行恰当的稀释。
2、 配制茚三酮显色液: 取出1支茚三酮,准确溶解于茚三酮稀释液,加热搅拌至完全溶解,
混匀,即为茚三酮显色液。4℃避光备用,48h 有效。注意:茚三酮稀释液具有一定腐蚀性,请小心操作。
3、 配制系列脯氨酸标准溶液:取出脯氨酸标准(100μg/ml)恢复至室温后,以脯氨酸标准
4、 PRO 加样:按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注
意避免产生气泡。如果样品中的脯氨酸浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置平行管。
5、PRO 测定:迅速冷却加入PRO 萃取液,振摇30s ,静置片刻,取上清液转移至新的离心管或试管,离心,取上清液备用。以空白调零,分光光度计(1cm光径比色杯) 检测标准管520nm 处吸光度;以PRO 萃取液调零,分光光度计(1cm光径比色杯)
检测测定管520nm 处吸光度。
计算:
以系列脯氨酸标准(1-6号管) 含量(μg) 为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,制作标准曲线,根据测定管的吸光度进而计算脯氨酸含量。根据如下公式计算具体样品中脯氨酸的含量:
植物组织样品PRO(μg /g)=C×V T /(W×V S ) 式中:C=从标准曲线上查得的脯氨酸含量(μg) V T =脯氨酸提取液总体积(ml) W=样品鲜重(g)
V S =测定时加入提取液体积(ml)
血清、尿液等样品AA(μg /ml)=C×N /VS 式中:C=从标准曲线上查得的脯氨酸含量(μg) N=稀释倍数
V S =测定时加入提取液体积(ml)
注意事项:
1、 实验材料应尽量新鲜,如取材后不立即使用,应存于4℃。 2、 PRO Assay buffer应密闭保存,防止挥发。
3、 如果没有分光光度计,也可以使用普通的酶标仪测定,但应考虑酶标仪的最大检测体
积。
4、 所测样本的浓度过高,应用PRO Lysis buffer稀释样品后重新测定。
有效期:6个月有效。 相关: