Kernel喹诺酮说明书(2014-1-7)

Kernel喹诺酮酶联免疫反应试剂盒说明书

(货号：EVFQS-01)

1．概述

Kernel 喹诺酮酶联免疫反应测试盒是用于检测鸡蛋、鱼/虾、鸡肉/猪肉、牛奶、血清/尿液、蜂蜜等样品中喹诺酮的残留量。该试剂盒特点包括：

   

高回收率（>80%），快速（10-40分钟），多种样品低成本提取方法。 高灵敏度（0.3ng/g或ppb）。

快速的ELISA检测方法（只需不到90分钟）。 高重现性。

2．试剂盒原理

Kernel 喹诺酮酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有喹诺酮的药物抗原已经包被于微孔板上，在分析时，样品中药物特异性地与抗体相结合。如果药品中有药物存在，它将阻

止包被于微孔板上的药物与抗体结合。当与样品药物相结合的药物抗体被洗涤去除后，只剩下与微孔内药物相结合的抗体，与经酶标记物相结合。反应后颜色深度与样品中喹诺酮的含量成反比。 3.试剂盒组成部分和储存

10ng/mL 30ng/mL 0.8mL

4.样品检测下限

5.交叉反应

6．未提供的设备或材料 1) 酶标仪(450nm) 2) 匀质器 3)

漩涡振荡器

4) 5) 6)

微量加样器(10、20、100和1000L各一支) 多道枪：50-300L 甲醇

7.注意事项

实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9)

标准品中含有喹诺酮，请小心使用。 不要使用过期的试剂盒。

不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。确保酶结合物及酶结合物稀释液正确配制。

尽量保持室温（22.5±2.5）°C，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。

加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。 孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。 从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。 将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。

8．样品的制备

样品保存在2-4℃不超过1-2天，如果需要保存较长的时间，应该放置-20℃。样品使用前应恢复到室温。 1×样品提取液：1(10×样品提取液)：9(蒸馏水) 35%甲醇/样品提取液

混合6.5体积1×样品提取液和3.5体积100%甲醇。举例：取35ml 100%甲醇加入到65ml 1X样品提取液中，配制成100ml的35%甲醇/样品提取液，按需要，可同比例放大或缩小。 70%甲醇

按7：3的比例配制无水甲醇和双蒸馏水。举例：取70ml无水甲醇加入到30ml双蒸馏水中，配制成100ml的70%甲醇。按需要，可同比例放大或缩小。 鸡蛋

（1） 称取1g鸡蛋样品，加入4mL的70%甲醇。 （2） 最大速度涡旋振荡2分钟。

（3） 室温（22.5±2.5）°C下4000g离心5分钟。

（4） 移取0.5mL上清液到离心管中，加入0.5mL的1×样品提取液，混匀。 （5） 取50uL处理好的样品液用于分析。

稀释倍数：10.0

鱼/ 虾

（1） 去除样品中的脂肪，对样品进行匀质； （2） 取1.0g匀质样品，加入4mL70%甲醇； （3） 最大速度涡旋震荡10分钟；

（4） 室温（22.5±2.5）°C下4000g离心5分钟；

（5） 移取0.5mL上清液，加入0.5mL1×样品提取液，混合均匀。 （6） 取50µL用于检测。

稀释倍数：10.0

肌肉/肝脏/肾脏

（1） 去除样品中的脂肪，对样品进行匀质；

（2） 取1.0g匀质样品，加入4mL的35%甲醇/1×样品提取液，加入50uL的肌肉提取液I，最大速度涡旋震荡3分钟； （3） 室温（22.5±2.5）°C下4000g离心10分钟；

（4） 移取0.5mL上清液到离心管中，加入25uL的肌肉提取液II和 0.5mL的35%甲醇/1×样品提取液，涡旋振荡混匀30秒。 （5） 取出50uL上清液用于分析。

稀释倍数：10

牛奶

（1） 对于无脂牛奶，用35%甲醇/样品提取液进行5倍稀释即可（如200µL牛奶+800µL的35%甲醇/样品提取液），每孔取50µL稀释样品进行检测；

（2） 对于含脂牛奶，离心力4000g离心5分钟以去除上层脂肪层，再以35%甲醇/样品提取液进行5倍稀释即可（如200µL牛奶+800µL35%甲醇/样品提取液），每孔取50µL稀释样品进行检测。 稀释倍数：5.0 血清/尿液

（1） 取0.5mL样品在离心力4000g离心5分钟； （2） 取0.2mL上清液，加入0.8mL35%甲醇/样品提取液。 （3） 每孔取50µL用于检测

稀释倍数：5.0

蜂蜜

（1） 称取0.1g蜂蜜，加入1.9mL的35%甲醇/样品提取液，混匀。 （2） 每孔取50µL用于检测

稀释倍数：20

9检测步骤 试剂准备

注意：试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时，确定在使用前阅读过注意事项。准备适量的检测用试剂，所有的试剂摇匀后使用。准备足够所有小管所需的用量，不能将试剂倒回原来的瓶子中，处理试剂时建议用废弃的瓶子以降低污染的风险。 1x洗液的制备

1体积的10x洗液同9体积的蒸馏水混合 1 x酶标结合物的制备

1体积的200x酶标结合物同199体积的1×样品提取液混合 检测：

以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

（1） 加入100L的标准于所设定的孔中； （2） 加入100L的样品于所设定的孔中；

（3） 在每孔中加入50L酶结合物，混匀；25°C避光孵育50分钟；

（4） 洗板3次，每次加入250L 1×洗液，最后一次尽量甩干并在吸水纸上吸干； （5） 加入100L的TMB底物，用手敲板边缘1分钟混合均匀；

（6） 在室温（22.5±2.5）°C避光培养20分钟， 加入100L的终止液终止反应。 （7） 在450nm下读OD值(读数前，用无绒布擦拭除去微孔底部的水分和指痕)。 10．结果计算

（1） 分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值。 （2） 相对吸光度值 (%) = (标准或样品吸光度值/零标准吸光度值)  100 （3） 以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度为横坐标建立标准曲线。 （4） 从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。

Kernel喹诺酮酶联免疫反应试剂盒说明书

(货号：EVFQS-01)

1．概述

Kernel 喹诺酮酶联免疫反应测试盒是用于检测鸡蛋、鱼/虾、鸡肉/猪肉、牛奶、血清/尿液、蜂蜜等样品中喹诺酮的残留量。该试剂盒特点包括：

   

高回收率（>80%），快速（10-40分钟），多种样品低成本提取方法。 高灵敏度（0.3ng/g或ppb）。

快速的ELISA检测方法（只需不到90分钟）。 高重现性。

2．试剂盒原理

Kernel 喹诺酮酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有喹诺酮的药物抗原已经包被于微孔板上，在分析时，样品中药物特异性地与抗体相结合。如果药品中有药物存在，它将阻

止包被于微孔板上的药物与抗体结合。当与样品药物相结合的药物抗体被洗涤去除后，只剩下与微孔内药物相结合的抗体，与经酶标记物相结合。反应后颜色深度与样品中喹诺酮的含量成反比。 3.试剂盒组成部分和储存

10ng/mL 30ng/mL 0.8mL

4.样品检测下限

5.交叉反应

6．未提供的设备或材料 1) 酶标仪(450nm) 2) 匀质器 3)

漩涡振荡器

4) 5) 6)

微量加样器(10、20、100和1000L各一支) 多道枪：50-300L 甲醇

7.注意事项

实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9)

标准品中含有喹诺酮，请小心使用。 不要使用过期的试剂盒。

不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。确保酶结合物及酶结合物稀释液正确配制。

尽量保持室温（22.5±2.5）°C，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。

加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。 孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。 从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。 将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。

8．样品的制备

样品保存在2-4℃不超过1-2天，如果需要保存较长的时间，应该放置-20℃。样品使用前应恢复到室温。 1×样品提取液：1(10×样品提取液)：9(蒸馏水) 35%甲醇/样品提取液

混合6.5体积1×样品提取液和3.5体积100%甲醇。举例：取35ml 100%甲醇加入到65ml 1X样品提取液中，配制成100ml的35%甲醇/样品提取液，按需要，可同比例放大或缩小。 70%甲醇

按7：3的比例配制无水甲醇和双蒸馏水。举例：取70ml无水甲醇加入到30ml双蒸馏水中，配制成100ml的70%甲醇。按需要，可同比例放大或缩小。 鸡蛋

（1） 称取1g鸡蛋样品，加入4mL的70%甲醇。 （2） 最大速度涡旋振荡2分钟。

（3） 室温（22.5±2.5）°C下4000g离心5分钟。

（4） 移取0.5mL上清液到离心管中，加入0.5mL的1×样品提取液，混匀。 （5） 取50uL处理好的样品液用于分析。

稀释倍数：10.0

鱼/ 虾

（1） 去除样品中的脂肪，对样品进行匀质； （2） 取1.0g匀质样品，加入4mL70%甲醇； （3） 最大速度涡旋震荡10分钟；

（4） 室温（22.5±2.5）°C下4000g离心5分钟；

（5） 移取0.5mL上清液，加入0.5mL1×样品提取液，混合均匀。 （6） 取50µL用于检测。

稀释倍数：10.0

肌肉/肝脏/肾脏

（1） 去除样品中的脂肪，对样品进行匀质；

（2） 取1.0g匀质样品，加入4mL的35%甲醇/1×样品提取液，加入50uL的肌肉提取液I，最大速度涡旋震荡3分钟； （3） 室温（22.5±2.5）°C下4000g离心10分钟；

（4） 移取0.5mL上清液到离心管中，加入25uL的肌肉提取液II和 0.5mL的35%甲醇/1×样品提取液，涡旋振荡混匀30秒。 （5） 取出50uL上清液用于分析。

稀释倍数：10

牛奶

（1） 对于无脂牛奶，用35%甲醇/样品提取液进行5倍稀释即可（如200µL牛奶+800µL的35%甲醇/样品提取液），每孔取50µL稀释样品进行检测；

（2） 对于含脂牛奶，离心力4000g离心5分钟以去除上层脂肪层，再以35%甲醇/样品提取液进行5倍稀释即可（如200µL牛奶+800µL35%甲醇/样品提取液），每孔取50µL稀释样品进行检测。 稀释倍数：5.0 血清/尿液

（1） 取0.5mL样品在离心力4000g离心5分钟； （2） 取0.2mL上清液，加入0.8mL35%甲醇/样品提取液。 （3） 每孔取50µL用于检测

稀释倍数：5.0

蜂蜜

（1） 称取0.1g蜂蜜，加入1.9mL的35%甲醇/样品提取液，混匀。 （2） 每孔取50µL用于检测

稀释倍数：20

9检测步骤 试剂准备

注意：试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时，确定在使用前阅读过注意事项。准备适量的检测用试剂，所有的试剂摇匀后使用。准备足够所有小管所需的用量，不能将试剂倒回原来的瓶子中，处理试剂时建议用废弃的瓶子以降低污染的风险。 1x洗液的制备

1体积的10x洗液同9体积的蒸馏水混合 1 x酶标结合物的制备

1体积的200x酶标结合物同199体积的1×样品提取液混合 检测：

以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

（1） 加入100L的标准于所设定的孔中； （2） 加入100L的样品于所设定的孔中；

（3） 在每孔中加入50L酶结合物，混匀；25°C避光孵育50分钟；

（4） 洗板3次，每次加入250L 1×洗液，最后一次尽量甩干并在吸水纸上吸干； （5） 加入100L的TMB底物，用手敲板边缘1分钟混合均匀；

（6） 在室温（22.5±2.5）°C避光培养20分钟， 加入100L的终止液终止反应。 （7） 在450nm下读OD值(读数前，用无绒布擦拭除去微孔底部的水分和指痕)。 10．结果计算

（1） 分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值。 （2） 相对吸光度值 (%) = (标准或样品吸光度值/零标准吸光度值)  100 （3） 以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度为横坐标建立标准曲线。 （4） 从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。