·4198·中华医院感染学杂志2011年第21卷第20期ChinJNosocomiolVol.21No.202011
·论 著·
耐碳青霉烯类抗菌药物鲍氏不动杆菌的
分子流行病学研究
马红映1,虞亦鸣1,汪丽2,吕婉飞2,邓在春1
()1.宁波大学医学院附属医院呼吸内科,浙江宁波315020;2.宁波大学医学院附属医院细菌室,浙江宁波315020摘要:目的 调查医院耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌(的同源性,并了解是否存在耐药菌株的克隆流行。CRAB)方法 收集2用微量稀释法检测其对1009年6月-2010年6月临床分离的CRAB39株,3种抗菌药物的敏感 性;用脉冲场凝胶电泳(的方法对所分离的菌株进行分子分型。结果 3PFGE)9株鲍氏不动杆菌主要分离自对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率为1敏感率较好的为米诺环素、阿米卡星、多黏菌素E,敏感率分别ICU;00.0%,脉冲凝胶电泳结果显示,其中A型1为100.0%、94.9%、61.5%;39株CRAB分为A、B、C型,7株、A1亚型1株、A2亚型1株、A3亚型1株,B型15株、B1亚型2株、B2亚型1株,C型1株。结论 调查期间医院主要为A型和B型菌株克隆流行,菌株流行主要集中在IC型菌株为散发株;CU。关键词:鲍氏不动杆菌;脉冲场凝胶电泳;碳青霉烯类;耐药
()中图分类号:R378 文献标识码:A 文章编号:10054529201120419804---
MoleculareidemioloofcarbaenemresistantAcinetobacterbaumannii - pgyp
*
,,WANG,,MA HonYU YiinLiL WanfeiDENGZaichunin--m - -ggyg
(heAiliated HositaloSchooloMedicineoNinbo Universit*T ffpf f f gy,
Ninbo,Zheian15020,China)gjg3
:AbstractOBJECTIVETostudthehomoloofCRABandtoidentiftheofthedruresistantclones.revalence - ygyygp ,METHODSAtotalof39consecutiveCRABisolatescollectedfromJune2009toJune2010werescreened )aulsedelmicrodilutionmethodwasusedtodeterminetheminimalinhibitorconcentration(MICsndfield - pgy (electrohoresisPFGE)wasusedtodetecthomoloofAcinetobacterbaumannii.RESULTSTotall39isolates pgyy weremainlcomefromICU.Resistantratesofimienemandmeroenem were100.0%.Sensitivitratesof yppy ,olmxinminocclineamikacinandwere100.0%,94.9%and61.5%,resectivel.Allof39isolatesbeloned pyyypyg((threePFGEA,B,C).PulsoteA were20isolates17ofteA,1ofsubteA1,1ofsubtetoulsotes ypypypyppyp);();A2,1ofsubteA3PulsoteBwere18isolates15ofteB,2ofsubteB1,1ofsubteB21pulsote ypypypypypypisolate.CONCLUSIONTheemerenceofCRABisassociatedwiththesreadofA.baumanniistrainsofcloneAC gpandB.
:KewordsAcinetobacterbaumannii;PFGE;Carbaenem;Druresistance pgy
广泛分 鲍氏不动杆菌是非发酵革兰阴性杆菌,
土壤、医院环境和人体皮肤表面,已成为医布于水、
1,2]
,院获得性感染的主要病原菌之一[主要引起医
。我院近年antAcinetobacterBaumannii,CRAB)
来也出现耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌分离菌株增多,本研究通过脉冲场凝胶电泳(ulsedfieldele- -pg
,的方法,对我院临床分离的lectrohoresisPFGE)p了解有无克鲍氏不动杆菌进行分子流行病学调查,隆播散。1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 标本来源 用WHONET软件从实验室检测数据库中分析筛选2009年6月-2010年6月临床分离的C去除同一患者重复菌株,对RAB39株,
院获得性肺炎,尤其是呼吸机相关性肺炎、菌血症、
]15-
。随着广谱抗菌药物尿路感染、外科伤口感染等[
的广泛使用,多药耐药菌日益增多,且极易造成流行,给临床抗感染治疗带来很大的困难,也对医院感染的控制提出了新的要求。1美国首先分离991年,出耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌(Carbaenem Resistp
收稿日期:20110625;20110728-- 修回日期:--:通讯作者:邓在春,.comE-maildzc631526@qq
中华医院感染学杂志2011年第21卷第20期ChinJNosocomiolVol.21No.202011 ·4199·
筛选出来的菌株用VITEK32自动微生物分析仪-重新进行菌种鉴定。
1.1.2 主要试剂与仪器 鲍氏不动杆菌MIC检测试剂盒订购于天津市金章科技发展有限公司。限制性内切酶AaⅠ购自上海申能博彩公司,Lambdap
PFG Marker购自NewEnlandbiolab,Ladder g蛋白Seakem GoldAarose购自CAMBREX公司, g
低熔点琼脂糖购自生工生物(上海)公司。酶K、
CHEP-MAPPER脉冲电泳仪及VersaDocimain ggmodel3000均为Bioad公司产品,sstem -Ry
HWS12型电热恒温水浴箱购自上海一恒科学仪器
有限公司,SHZB水浴恒温摇床购自上海跃进医疗-器械厂。1.2 方法
1.2.1 细菌鉴定 39株CRAB经VITEK32型全-
自动微生物分析仪鉴定为乙酸钙-鲍氏不动杆菌,确定菌株PCR扩增balOXA51like基因全部阳性,--
为鲍氏不动杆菌。
1.2.2 抗菌药物敏感试验 采用微量稀释法测定13种抗菌药物的MIC值。定制鲍氏不动杆菌微量稀释法M操作步骤按照说明书。药IC检测试剂盒,敏试验以大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞 菌ATCC27853作为质控菌株。结果判断按照美 )国临床实验室标准化研究所(CLSI2009年的标准,药敏数据用WHONET5.4软件分析。1.2.3 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 将细菌接种于/的L2mlB液体培养基中,35℃培养过夜。8000rmin离心2m倒去上清液,扣干。用4in,00μlEC缓冲 调节细菌浊度4个麦氏点。加入已融液混匀沉淀,
化的等体积的2%的低熔点胶,混匀后迅速倒入模,具,每个样本制作3块胶,每块体积100μl4℃冰
/)箱中凝固约2浓度80min。以蛋白酶K(00μmlg吸干消化液,加1m50℃消化过夜,l1×TE缓冲液
,处理3再用1×T0minE缓冲液冲洗4~5次,4℃保存。取半块胶块,用120μl1×Aa缓冲液处理 p,用限制性内切酶3反应体胶块30min7℃酶切(系:10×缓冲液12μl+BSA12μl+AaⅠ4μl+ p)92μl12h。0.5×TBE配置1%SeakemddH2O ,融化后冷却至6GoldAarose100ml0℃缓缓倒入 g
模具,冷却凝固后拔去样品梳,小心加入酶切后的样本胶块和标志物,电泳条件为0.5×TBE缓冲液,/,,脉冲时间5~2电2500ml14℃,6Vcm,120°0s
电场角度1泳时间20h,20度电泳结束后EB染色,VersaDocimainsstem model3000成像拍照。 ggy 1.2.4 结果判定标准 判定标准参考Tenover
6]
,无法区分:等[紧密相关:0个条带差异;2~3个
可能相关:不同:条带差异;4~6个条带差异;≥7个条带差异。流行菌株报道为A型,图形与流行菌株命名为紧密相关或可能相关的认为是A型的亚型,认为分子流行病学可能或大概相关。图A1、A2等,
形与流行菌株不同的命名为B、认为分子流C型等,行病学不相关。2 结 果
2.1 标本来源及科室分布 39株病原菌的标本来源及科室分布构成比见表1。
表1 39株病原菌的标本来源及科室分布构成比(%)athoensTable1 Constituentratios(%)of39strainsof pg
indeartmentsandsecimensdistribution pp
项 目
标本 痰液 分泌物 脓液 引流液科室 ICU 呼吸内科 神经内科 肿瘤外科 骨科 消化内科 普外科
株数34 3 1 1 28 4 2 2 1 1 1
构成比87.17.72.62.671.810.25.15.12.62.62.6
2.2 耐药率 39株CRAB对13种抗菌药物的药
敏显示,米诺环素、阿米卡星和多黏菌素E的耐药率低,其他药物的耐药情况严重。见表2。
2.3 PFEG结果 39株CRAB分为A、B、C3个 不同的型,主要流行菌株为A型和B型,C型为一散发菌株。A型17株、A1亚型1株、A2亚型1株、A3亚型1株;B型15株,B1亚型2株、B2亚型1株;消化C型1株。A型主要分离自ICU共14株,内科、神经内科、呼吸内科各1株,A1亚型1株分离自肿瘤外科,查A2、A3亚型各1株均分离自ICU,阅所有非I发现患者均在分离到CU分离到的菌株,CRAB前入住过ICU。B型也主要分离自ICU共
其余神经内科、肿瘤外科、骨科各1株,呼吸10株,
内科2株,B1亚型2株均分离自ICU,B2亚型1株分离自普外科,呼吸内科1株B型菌株患者曾收住ICU。部分PFGE图见图1。3 讨 论
鲍氏不动杆菌强大的环境生存能力及广泛的耐药性决定了其成为最主要的医院获得性感染病原菌。
·4200·中华医院感染学杂志2011年第21卷第20期ChinJNosocomiolVol.21No.202011
/)表2 3及M9株CRAB对13种抗菌药物的药敏率(%)IC值(mlgμ
/)Table2 Drusensitivitrates(%)andMICvalne(mlto13antibioticsof39strainsofCRAB gyg μ
抗菌药物
氨苄西林/舒巴坦阿米卡星氨曲南环丙沙星亚胺培南美罗培南头孢吡肟
头孢他啶/克拉维酸米诺环素庆大霉素哌拉西林
哌拉西林/他唑巴坦多黏菌素E
耐药株数38 2 39 39 39 39 39 39 0 39 39 39 0
耐药率97.4 5.1 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 0.0 100.0 100.0 100.0 0.0
株数0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 15
中介
中介率0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 38.5
株数1 37 0 0 0 0 0 0 39 0 0 0 24
敏感
敏感率2.6 94.9 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 100.0 0.0 0.00.061.5
MIC5064 4 128 64 128 64 256 128 2 256 G256G256
2
MIC90128 8 128 128 256 256 256 256 4 256 G256
4
MIC范围8~2562~51232~25614~12864~25616~25664~25664~256
2~432~256256~1024
2~
4
G256024~1024 1
8]
。本研究显含舒巴坦制剂,多黏菌素和米诺环素[
示,米诺环素的敏感率1阿米卡星的敏感性00.0%,多黏菌素的敏感率6对美罗培南和亚94.4%,1.5%;
[]
利胺培南均100.0%耐药。最近的研究结果显示9,福平在动物模型中显示出对C但能RAB的有效性,很快导致耐药而不能单独使用。多黏菌素是个古老的抗菌药物,在体外研究中显示很好的活性而重新很多研究已经证实,其在严重感染包括呼吸机使用,
相关性肺炎及脑膜炎的安全性、有效性。本试验未测定替加环素对C但多项资料显示,RAB的敏感性,CRAB对替加环素敏感性好。Karaeorooulosggp
10]等[对2其中包括12个研究进行了分析,906株鲍
注:菌株编号。M.DNA标志物;16~29:
图1 部分CRAB的PFGE结果Fiure1 PartofCRABbPFGE yg
氏不动杆菌,0.0%的不动杆菌属对替加环素敏≥9感,支持临床使用。虽然有很多替加环素治疗肺部但目前替加环素在联合治疗感染有效的临床数据,
及替代多黏菌素(吸入或鞘内注射)中的地位仍没有
9]
。建立[
近几年多药耐药的鲍氏不动杆菌已经在全球各地流行,甚至造成了暴发性流行,并伴随着耐药性的不断增强。1美国首先分离出耐碳青霉烯类鲍氏991年,不动杆菌,国内对耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌分离
[]
率也日益升高。M全国8ohnarin2008年度报道7,9
临床分离菌株的同源性分析对于流行病学调特别是传染源和传播途径的追踪具有重要意义。查,
研究表明,基因分型优于其他方法。基因分型的方法主要有质粒图谱分析、随机扩增多态DNA
(、、重复序列聚合酶链反应(稀有RAPD)REPPCR)-和脉冲场凝胶电泳限制区聚合酶链反应(IRSPCR)-(。P重复性好,PFGE)FGE分型PFGE分辨率高,是目前国际上公认的医院获得性感染病原菌同源性
11]
。分析的金标准[
所医院细菌耐药性检测,41956株非发酵菌中不动 杆菌属占第2位,占3其中以鲍氏不动杆菌为5.1%,主,占8与2对亚胺3.7%,006-2007年度比有增加,培南的敏感性为60.1%。3067株对碳青霉烯类不敏感的鲍氏不动杆菌除对多黏菌素B保持较好的敏感性8对其他所有的抗菌药物的敏感性都4.8%外,很低,其中米诺环素和头孢哌酮/舒巴坦的敏感性分别为5其他抗菌药物的敏感性均<4.6%和33.2%,20.0%。
CRAB可能只对少数几种抗菌药物保持敏感,
鲍氏不动杆菌易于引起医院暴发流行,欧洲多个国家报道存在欧Ⅰ和欧Ⅱ型克隆株的CRAB流
1,2,12]
。2行[北京协和医院出现鲍氏不动杆菌004年,
波及1其中>5耐药菌株暴发,8个病房,0.0%患者
中华医院感染学杂志2011年第21卷第20期ChinJNosocomiolVol.21No.202011 ·4201·
引起肺部感染和菌血症。
本研究39株连续分离到的CRAB主要分布在可能是I机体免疫功能受损,ICU,CU重症患者多,侵入性操作频繁等原因。P主要FGE分为3个型,流行型为A型和B型,主要分布在I但进一步CU,分析发现,分离出A型CRAB菌株患者均曾经收住全部曾行机械通气治疗,ICU,A型菌株主要在ICU感染和流行。B型菌株最早也分离自I有9例CU,患者转往神经内科、呼吸内科、消化科、脑外科、肿瘤随后随着医院转科播科,B型菌株可能起源于ICU,散至其他科室。C型菌株分离自呼吸内科,该患者未曾入住过I也未行机械通气治疗,可以解释其CU,有独特的PFGE图形。时间上2009年下半年以A型株为主,2010年上半年以B型株为主。ICU成为CRAB传播的中心和枢纽。国内外几项研究结果与
13]
。本研究相同[
不动杆菌属是条件致病菌,是惟一能在人类皮肤表面生存的革兰阴性杆菌。可广泛存在于自然环境和医院环境中。污染的环境在不动杆菌的暴发流行中有重要意义。克隆株在病房内和病房间的克隆播散已经成为全球性的问题,是造成耐药菌株不断增加的重要原因。因此,一旦发现鲍氏不动杆菌的暴发流行,就必须采取严格的措施,防止交叉感染。医务人员在日常工作中加强无菌观念,及时洗手,呼防止造成医源性感染。吸道管理应该注意严格消毒,
同时,加强细菌耐药性的检测,也是预防CRAB和医院感染的重要措施。参考文献
[1]ikshoornL,NemecA,SeifertH.Anincreasinthreatin D jg
:hositalsmultidruresistantAcinetobacterbaumannii[J].- pg,():NatRevMicrobiol2007,125939951. -
[2]eleAR,SeifertH,PatersonDL.Acinetobacterbaumannii: P g
],athoen[emerenceofasuccessfulJ.CliniMicrobiolRev pgg():2008,213538582.-
[3]unenshineRH,WrihtMO,MaraakisLL,etal.Multidru S -ggg
resistantAcinetobacterinfectionmortalitrateandlenthof yg [],():hositalizationJ.EmerInfectDis2007,13197103. -pg
[4]arrilliR,CasilloR,DiPooloA,etal.Moleculareidemiolo Z -pp
ofaclonaloutbreakofmultidruresistantAcinetobacter - gyg ]inauniversithositalinItalJ.ClinMicrobiolbaumannii ypy[ ,():Infect2007,135481489.-
[5]sakrisA,IkonomidisA,PoulouA,etal.Clustersofimien T -p
emresistantAcinetobacterbaumanniiclonesdifferroducin- -pg []entcarbaenemasesinanintensivecareunitJ.ClinMicrobi -p,():olInfect2008,146588594. -
[6]enoverFC,ArbeitRD,GoerinRV,etal.Interretinchromo T -gpg
somalDNArestrictionbfieldelecroatternsroducedulsedel - -ypppg :[],horesiscriteriaforbacterialstraintinJ.JClinMicrobiol pypg,():199533922332239.-
[陈东科.M非发酵革兰阴性杆7]ohnarin2008年度报告: 胡云建,
]():菌耐药性检测[J.中国抗生素杂志,2010,357548555.-
[8]allaostaLM,CoelhoJM,SouzaHA,etal.Outbreakof D-C
Carbaenem-ResistantAcinetobacterbaumanniiProducinthe pg ,B,23EnzmeinCuritibarazil[J].JclinMicrobiolOXA- y():2003,41734033406.-
[,9]arnachoonteroJoséAmaaillarR.MultiresistantAcineto- G-M -V y
:bacterbaumanniiinfectionseidemioloandmanaement[J]. pgyg ,,():CurrOininInfectDis2010234332339. -p
[],10araeorooulosDE,KelesidisT,KelesidisIetal.Tiec K -ggpgy
clineforthetreatmentofmultidruresistant(includincar --gg )A:baenemresistantcinetobacterinfectionsareviewofthe- p[],:scientificevidenceJ.JAntimicrobChemother2008,62(1) 4555.-
[]尤莉莉,徐一君.鲍氏不动杆菌基因分型方法的研究进11 谢芬,
]():中国病原微生物杂志,展[J.2008,316971.-
[]12emecA,KrízováL,MaixnerováM,etal.Emerenceofcar N -g
baenemresistanceinAcinetobacterbaumanniiintheCzech pisassociatedwiththesreadofmultidruresistantReublic -pgp,strainsofEuroeancloneII[J].JAntimicrobChemother p():2008,623484489.-
[]13iannouliM,CuccurulloS,CrivaroV,etal.Moleculareide G -p
mioloofmultidruresistantAcinetobacterbaumanniiina - gyg ,,tertiarcarehositalinnalesitalshowstheemerenceof yppyg ,:noveleidemicclone[J].JClinMicrobiol2010,48(4)a p12231230.-
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·论 著·
耐碳青霉烯类抗菌药物鲍氏不动杆菌的
分子流行病学研究
马红映1,虞亦鸣1,汪丽2,吕婉飞2,邓在春1
()1.宁波大学医学院附属医院呼吸内科,浙江宁波315020;2.宁波大学医学院附属医院细菌室,浙江宁波315020摘要:目的 调查医院耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌(的同源性,并了解是否存在耐药菌株的克隆流行。CRAB)方法 收集2用微量稀释法检测其对1009年6月-2010年6月临床分离的CRAB39株,3种抗菌药物的敏感 性;用脉冲场凝胶电泳(的方法对所分离的菌株进行分子分型。结果 3PFGE)9株鲍氏不动杆菌主要分离自对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率为1敏感率较好的为米诺环素、阿米卡星、多黏菌素E,敏感率分别ICU;00.0%,脉冲凝胶电泳结果显示,其中A型1为100.0%、94.9%、61.5%;39株CRAB分为A、B、C型,7株、A1亚型1株、A2亚型1株、A3亚型1株,B型15株、B1亚型2株、B2亚型1株,C型1株。结论 调查期间医院主要为A型和B型菌株克隆流行,菌株流行主要集中在IC型菌株为散发株;CU。关键词:鲍氏不动杆菌;脉冲场凝胶电泳;碳青霉烯类;耐药
()中图分类号:R378 文献标识码:A 文章编号:10054529201120419804---
MoleculareidemioloofcarbaenemresistantAcinetobacterbaumannii - pgyp
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,,WANG,,MA HonYU YiinLiL WanfeiDENGZaichunin--m - -ggyg
(heAiliated HositaloSchooloMedicineoNinbo Universit*T ffpf f f gy,
Ninbo,Zheian15020,China)gjg3
:AbstractOBJECTIVETostudthehomoloofCRABandtoidentiftheofthedruresistantclones.revalence - ygyygp ,METHODSAtotalof39consecutiveCRABisolatescollectedfromJune2009toJune2010werescreened )aulsedelmicrodilutionmethodwasusedtodeterminetheminimalinhibitorconcentration(MICsndfield - pgy (electrohoresisPFGE)wasusedtodetecthomoloofAcinetobacterbaumannii.RESULTSTotall39isolates pgyy weremainlcomefromICU.Resistantratesofimienemandmeroenem were100.0%.Sensitivitratesof yppy ,olmxinminocclineamikacinandwere100.0%,94.9%and61.5%,resectivel.Allof39isolatesbeloned pyyypyg((threePFGEA,B,C).PulsoteA were20isolates17ofteA,1ofsubteA1,1ofsubtetoulsotes ypypypyppyp);();A2,1ofsubteA3PulsoteBwere18isolates15ofteB,2ofsubteB1,1ofsubteB21pulsote ypypypypypypisolate.CONCLUSIONTheemerenceofCRABisassociatedwiththesreadofA.baumanniistrainsofcloneAC gpandB.
:KewordsAcinetobacterbaumannii;PFGE;Carbaenem;Druresistance pgy
广泛分 鲍氏不动杆菌是非发酵革兰阴性杆菌,
土壤、医院环境和人体皮肤表面,已成为医布于水、
1,2]
,院获得性感染的主要病原菌之一[主要引起医
。我院近年antAcinetobacterBaumannii,CRAB)
来也出现耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌分离菌株增多,本研究通过脉冲场凝胶电泳(ulsedfieldele- -pg
,的方法,对我院临床分离的lectrohoresisPFGE)p了解有无克鲍氏不动杆菌进行分子流行病学调查,隆播散。1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 标本来源 用WHONET软件从实验室检测数据库中分析筛选2009年6月-2010年6月临床分离的C去除同一患者重复菌株,对RAB39株,
院获得性肺炎,尤其是呼吸机相关性肺炎、菌血症、
]15-
。随着广谱抗菌药物尿路感染、外科伤口感染等[
的广泛使用,多药耐药菌日益增多,且极易造成流行,给临床抗感染治疗带来很大的困难,也对医院感染的控制提出了新的要求。1美国首先分离991年,出耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌(Carbaenem Resistp
收稿日期:20110625;20110728-- 修回日期:--:通讯作者:邓在春,.comE-maildzc631526@qq
中华医院感染学杂志2011年第21卷第20期ChinJNosocomiolVol.21No.202011 ·4199·
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1.1.2 主要试剂与仪器 鲍氏不动杆菌MIC检测试剂盒订购于天津市金章科技发展有限公司。限制性内切酶AaⅠ购自上海申能博彩公司,Lambdap
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1.2.1 细菌鉴定 39株CRAB经VITEK32型全-
自动微生物分析仪鉴定为乙酸钙-鲍氏不动杆菌,确定菌株PCR扩增balOXA51like基因全部阳性,--
为鲍氏不动杆菌。
1.2.2 抗菌药物敏感试验 采用微量稀释法测定13种抗菌药物的MIC值。定制鲍氏不动杆菌微量稀释法M操作步骤按照说明书。药IC检测试剂盒,敏试验以大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞 菌ATCC27853作为质控菌株。结果判断按照美 )国临床实验室标准化研究所(CLSI2009年的标准,药敏数据用WHONET5.4软件分析。1.2.3 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 将细菌接种于/的L2mlB液体培养基中,35℃培养过夜。8000rmin离心2m倒去上清液,扣干。用4in,00μlEC缓冲 调节细菌浊度4个麦氏点。加入已融液混匀沉淀,
化的等体积的2%的低熔点胶,混匀后迅速倒入模,具,每个样本制作3块胶,每块体积100μl4℃冰
/)箱中凝固约2浓度80min。以蛋白酶K(00μmlg吸干消化液,加1m50℃消化过夜,l1×TE缓冲液
,处理3再用1×T0minE缓冲液冲洗4~5次,4℃保存。取半块胶块,用120μl1×Aa缓冲液处理 p,用限制性内切酶3反应体胶块30min7℃酶切(系:10×缓冲液12μl+BSA12μl+AaⅠ4μl+ p)92μl12h。0.5×TBE配置1%SeakemddH2O ,融化后冷却至6GoldAarose100ml0℃缓缓倒入 g
模具,冷却凝固后拔去样品梳,小心加入酶切后的样本胶块和标志物,电泳条件为0.5×TBE缓冲液,/,,脉冲时间5~2电2500ml14℃,6Vcm,120°0s
电场角度1泳时间20h,20度电泳结束后EB染色,VersaDocimainsstem model3000成像拍照。 ggy 1.2.4 结果判定标准 判定标准参考Tenover
6]
,无法区分:等[紧密相关:0个条带差异;2~3个
可能相关:不同:条带差异;4~6个条带差异;≥7个条带差异。流行菌株报道为A型,图形与流行菌株命名为紧密相关或可能相关的认为是A型的亚型,认为分子流行病学可能或大概相关。图A1、A2等,
形与流行菌株不同的命名为B、认为分子流C型等,行病学不相关。2 结 果
2.1 标本来源及科室分布 39株病原菌的标本来源及科室分布构成比见表1。
表1 39株病原菌的标本来源及科室分布构成比(%)athoensTable1 Constituentratios(%)of39strainsof pg
indeartmentsandsecimensdistribution pp
项 目
标本 痰液 分泌物 脓液 引流液科室 ICU 呼吸内科 神经内科 肿瘤外科 骨科 消化内科 普外科
株数34 3 1 1 28 4 2 2 1 1 1
构成比87.17.72.62.671.810.25.15.12.62.62.6
2.2 耐药率 39株CRAB对13种抗菌药物的药
敏显示,米诺环素、阿米卡星和多黏菌素E的耐药率低,其他药物的耐药情况严重。见表2。
2.3 PFEG结果 39株CRAB分为A、B、C3个 不同的型,主要流行菌株为A型和B型,C型为一散发菌株。A型17株、A1亚型1株、A2亚型1株、A3亚型1株;B型15株,B1亚型2株、B2亚型1株;消化C型1株。A型主要分离自ICU共14株,内科、神经内科、呼吸内科各1株,A1亚型1株分离自肿瘤外科,查A2、A3亚型各1株均分离自ICU,阅所有非I发现患者均在分离到CU分离到的菌株,CRAB前入住过ICU。B型也主要分离自ICU共
其余神经内科、肿瘤外科、骨科各1株,呼吸10株,
内科2株,B1亚型2株均分离自ICU,B2亚型1株分离自普外科,呼吸内科1株B型菌株患者曾收住ICU。部分PFGE图见图1。3 讨 论
鲍氏不动杆菌强大的环境生存能力及广泛的耐药性决定了其成为最主要的医院获得性感染病原菌。
·4200·中华医院感染学杂志2011年第21卷第20期ChinJNosocomiolVol.21No.202011
/)表2 3及M9株CRAB对13种抗菌药物的药敏率(%)IC值(mlgμ
/)Table2 Drusensitivitrates(%)andMICvalne(mlto13antibioticsof39strainsofCRAB gyg μ
抗菌药物
氨苄西林/舒巴坦阿米卡星氨曲南环丙沙星亚胺培南美罗培南头孢吡肟
头孢他啶/克拉维酸米诺环素庆大霉素哌拉西林
哌拉西林/他唑巴坦多黏菌素E
耐药株数38 2 39 39 39 39 39 39 0 39 39 39 0
耐药率97.4 5.1 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 0.0 100.0 100.0 100.0 0.0
株数0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 15
中介
中介率0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 38.5
株数1 37 0 0 0 0 0 0 39 0 0 0 24
敏感
敏感率2.6 94.9 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 100.0 0.0 0.00.061.5
MIC5064 4 128 64 128 64 256 128 2 256 G256G256
2
MIC90128 8 128 128 256 256 256 256 4 256 G256
4
MIC范围8~2562~51232~25614~12864~25616~25664~25664~256
2~432~256256~1024
2~
4
G256024~1024 1
8]
。本研究显含舒巴坦制剂,多黏菌素和米诺环素[
示,米诺环素的敏感率1阿米卡星的敏感性00.0%,多黏菌素的敏感率6对美罗培南和亚94.4%,1.5%;
[]
利胺培南均100.0%耐药。最近的研究结果显示9,福平在动物模型中显示出对C但能RAB的有效性,很快导致耐药而不能单独使用。多黏菌素是个古老的抗菌药物,在体外研究中显示很好的活性而重新很多研究已经证实,其在严重感染包括呼吸机使用,
相关性肺炎及脑膜炎的安全性、有效性。本试验未测定替加环素对C但多项资料显示,RAB的敏感性,CRAB对替加环素敏感性好。Karaeorooulosggp
10]等[对2其中包括12个研究进行了分析,906株鲍
注:菌株编号。M.DNA标志物;16~29:
图1 部分CRAB的PFGE结果Fiure1 PartofCRABbPFGE yg
氏不动杆菌,0.0%的不动杆菌属对替加环素敏≥9感,支持临床使用。虽然有很多替加环素治疗肺部但目前替加环素在联合治疗感染有效的临床数据,
及替代多黏菌素(吸入或鞘内注射)中的地位仍没有
9]
。建立[
近几年多药耐药的鲍氏不动杆菌已经在全球各地流行,甚至造成了暴发性流行,并伴随着耐药性的不断增强。1美国首先分离出耐碳青霉烯类鲍氏991年,不动杆菌,国内对耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌分离
[]
率也日益升高。M全国8ohnarin2008年度报道7,9
临床分离菌株的同源性分析对于流行病学调特别是传染源和传播途径的追踪具有重要意义。查,
研究表明,基因分型优于其他方法。基因分型的方法主要有质粒图谱分析、随机扩增多态DNA
(、、重复序列聚合酶链反应(稀有RAPD)REPPCR)-和脉冲场凝胶电泳限制区聚合酶链反应(IRSPCR)-(。P重复性好,PFGE)FGE分型PFGE分辨率高,是目前国际上公认的医院获得性感染病原菌同源性
11]
。分析的金标准[
所医院细菌耐药性检测,41956株非发酵菌中不动 杆菌属占第2位,占3其中以鲍氏不动杆菌为5.1%,主,占8与2对亚胺3.7%,006-2007年度比有增加,培南的敏感性为60.1%。3067株对碳青霉烯类不敏感的鲍氏不动杆菌除对多黏菌素B保持较好的敏感性8对其他所有的抗菌药物的敏感性都4.8%外,很低,其中米诺环素和头孢哌酮/舒巴坦的敏感性分别为5其他抗菌药物的敏感性均<4.6%和33.2%,20.0%。
CRAB可能只对少数几种抗菌药物保持敏感,
鲍氏不动杆菌易于引起医院暴发流行,欧洲多个国家报道存在欧Ⅰ和欧Ⅱ型克隆株的CRAB流
1,2,12]
。2行[北京协和医院出现鲍氏不动杆菌004年,
波及1其中>5耐药菌株暴发,8个病房,0.0%患者
中华医院感染学杂志2011年第21卷第20期ChinJNosocomiolVol.21No.202011 ·4201·
引起肺部感染和菌血症。
本研究39株连续分离到的CRAB主要分布在可能是I机体免疫功能受损,ICU,CU重症患者多,侵入性操作频繁等原因。P主要FGE分为3个型,流行型为A型和B型,主要分布在I但进一步CU,分析发现,分离出A型CRAB菌株患者均曾经收住全部曾行机械通气治疗,ICU,A型菌株主要在ICU感染和流行。B型菌株最早也分离自I有9例CU,患者转往神经内科、呼吸内科、消化科、脑外科、肿瘤随后随着医院转科播科,B型菌株可能起源于ICU,散至其他科室。C型菌株分离自呼吸内科,该患者未曾入住过I也未行机械通气治疗,可以解释其CU,有独特的PFGE图形。时间上2009年下半年以A型株为主,2010年上半年以B型株为主。ICU成为CRAB传播的中心和枢纽。国内外几项研究结果与
13]
。本研究相同[
不动杆菌属是条件致病菌,是惟一能在人类皮肤表面生存的革兰阴性杆菌。可广泛存在于自然环境和医院环境中。污染的环境在不动杆菌的暴发流行中有重要意义。克隆株在病房内和病房间的克隆播散已经成为全球性的问题,是造成耐药菌株不断增加的重要原因。因此,一旦发现鲍氏不动杆菌的暴发流行,就必须采取严格的措施,防止交叉感染。医务人员在日常工作中加强无菌观念,及时洗手,呼防止造成医源性感染。吸道管理应该注意严格消毒,
同时,加强细菌耐药性的检测,也是预防CRAB和医院感染的重要措施。参考文献
[1]ikshoornL,NemecA,SeifertH.Anincreasinthreatin D jg
:hositalsmultidruresistantAcinetobacterbaumannii[J].- pg,():NatRevMicrobiol2007,125939951. -
[2]eleAR,SeifertH,PatersonDL.Acinetobacterbaumannii: P g
],athoen[emerenceofasuccessfulJ.CliniMicrobiolRev pgg():2008,213538582.-
[3]unenshineRH,WrihtMO,MaraakisLL,etal.Multidru S -ggg
resistantAcinetobacterinfectionmortalitrateandlenthof yg [],():hositalizationJ.EmerInfectDis2007,13197103. -pg
[4]arrilliR,CasilloR,DiPooloA,etal.Moleculareidemiolo Z -pp
ofaclonaloutbreakofmultidruresistantAcinetobacter - gyg ]inauniversithositalinItalJ.ClinMicrobiolbaumannii ypy[ ,():Infect2007,135481489.-
[5]sakrisA,IkonomidisA,PoulouA,etal.Clustersofimien T -p
emresistantAcinetobacterbaumanniiclonesdifferroducin- -pg []entcarbaenemasesinanintensivecareunitJ.ClinMicrobi -p,():olInfect2008,146588594. -
[6]enoverFC,ArbeitRD,GoerinRV,etal.Interretinchromo T -gpg
somalDNArestrictionbfieldelecroatternsroducedulsedel - -ypppg :[],horesiscriteriaforbacterialstraintinJ.JClinMicrobiol pypg,():199533922332239.-
[陈东科.M非发酵革兰阴性杆7]ohnarin2008年度报告: 胡云建,
]():菌耐药性检测[J.中国抗生素杂志,2010,357548555.-
[8]allaostaLM,CoelhoJM,SouzaHA,etal.Outbreakof D-C
Carbaenem-ResistantAcinetobacterbaumanniiProducinthe pg ,B,23EnzmeinCuritibarazil[J].JclinMicrobiolOXA- y():2003,41734033406.-
[,9]arnachoonteroJoséAmaaillarR.MultiresistantAcineto- G-M -V y
:bacterbaumanniiinfectionseidemioloandmanaement[J]. pgyg ,,():CurrOininInfectDis2010234332339. -p
[],10araeorooulosDE,KelesidisT,KelesidisIetal.Tiec K -ggpgy
clineforthetreatmentofmultidruresistant(includincar --gg )A:baenemresistantcinetobacterinfectionsareviewofthe- p[],:scientificevidenceJ.JAntimicrobChemother2008,62(1) 4555.-
[]尤莉莉,徐一君.鲍氏不动杆菌基因分型方法的研究进11 谢芬,
]():中国病原微生物杂志,展[J.2008,316971.-
[]12emecA,KrízováL,MaixnerováM,etal.Emerenceofcar N -g
baenemresistanceinAcinetobacterbaumanniiintheCzech pisassociatedwiththesreadofmultidruresistantReublic -pgp,strainsofEuroeancloneII[J].JAntimicrobChemother p():2008,623484489.-
[]13iannouliM,CuccurulloS,CrivaroV,etal.Moleculareide G -p
mioloofmultidruresistantAcinetobacterbaumanniiina - gyg ,,tertiarcarehositalinnalesitalshowstheemerenceof yppyg ,:noveleidemicclone[J].JClinMicrobiol2010,48(4)a p12231230.-
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