第35卷
分析化学(FE NX I HUAXUE ) 研究简报第5期
2007年5月Chinese Journal of Analytical Che m istry 719～722
中药中有机酸成分快速甲酯化方法的研究
池玉梅
1
31
于生 许黎君 武露凌
112
(南京中医药大学, 南京210029) 2(江苏省体育科学研究院, 南京210014)
摘 要 以中药材猫爪草为分析对象, 研究了简便快速分析中药中有机酸成分的方法。方法以10%硫酸甲醇2苯(1∶1) 溶液为甲酯化试剂, 利用微波辅助直接甲酯化药材, 在微波功率600W 、压力0. 2MPa 的条件下, 反应1m in 即完成对药材中有机酸的甲酯化; 采用气相色谱2质谱(GC 2MS ) 联用技术进行分析, 检出有23个色谱峰; 经N I ST2000标准谱库检索, 识别了18种有机酸(占总峰面积的96. 79%) , 。对不同来源的猫爪草药材进行分析, 检出有20个共有峰, 经方法学验证, 关键词 微波, 气相色谱2质谱联用, 甲酯化, 有机酸, 猫爪草, 1 引 言
, 。用于此类化合
[3][4][5][6]
、离子色谱及毛细管电泳等。而中药中有
[7]
GC 2MS 。柱前衍生化方法有三氟化硼法、酸催化或碱催化酯化法等, 、操作繁琐。本研究采用了硫酸催化甲酯化, 利用微波加热物品渗透力强的特性, 首次对采用微波辅助直接甲酯化中药材中有机酸的方法进行了研究, 并改进了后处理方法, 使反应、萃取过程成为一体, 大大简化了操作过程。
中药材猫爪草(R adix ranunculi Ternati . ) 为毛茛科植物小毛茛(R anunculus ternatus Thunb . ) 的块根,
[8][9]
性甘、辛, 微温, 具有清热解毒、消肿散结之功效。文献报道小毛茛内酯为其抗结核成分, 十六烷酸
[10]
为抗肿瘤成分。但有关药材中有机酸成分的分析及分析方法的研究至今未见报道。本研究采用微波辅助直接甲酯化中药材猫爪草中有机酸成分, 结合气相色谱2质谱联用技术, 通过与未甲酯化药材及对照品比对的方法, 分析了其中的有机酸成分, 并通过检测不同来源的药材, 研究了药材中共有的有机酸成分, 首次对猫爪草中的有机酸成分及有机酸成分的指纹图谱进行了较全面的研究分析。
[1, 2]
2 实验部分
2. 1 仪器与试剂
GC 68902MS 型气相色谱2质谱联用仪(美国Agilent 公司) , 配HP7683全自动进样器、N I ST2000标准谱库;MDS 26型微波消解炉(上海新仪微波化学科技有限公司) 。草酸、丁二酸、柠檬酸、棕榈酸、油
酸、硬脂酸、浓硫酸、苯及氯化钠均为分析纯, 甲醇为色谱纯。药材购于河南信阳、安徽亳州及南京等地。
取草酸、丁二酸、柠檬酸、棕榈酸、油酸、硬脂酸各0. 1g, 准确称定, 分别置于5. 0mL 容量瓶中, 加甲醇溶解并定容, 摇匀。准确吸取上述各溶液1. 0mL 于同一25mL 容量瓶中, 定容, 得混合有机酸对照品贮备液(Ⅰ) 。在冰水浴中, 将10mL 浓H 2S O 4缓慢倒入90mL CH 3OH 中, 搅匀, 待冷却后加入100mL 苯, 摇匀即得甲酯化试剂。2. 2 微波条件
微波功率600W , 压力0. 2MP A , 辐射1m in 。2. 3 GC 2M S 分析条件
质谱条件:E I 离子源; 电子能量70e V; 离子源温度230℃; 四级杆温度150℃; 检测电压1482V; 溶
2006208222收稿; 2006212205接受
本文系国家自然科学基金资助项目(No . 20475027) 3E 2mail:y mchi@sina . com
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分析化学第35卷
剂延迟5m in 。
色谱条件:HP 2I N NOVAX 色谱柱(30m ×320μm ×0. 5μm ) ; 氦气(99. 999%) 为载气, 流速1. 5mL /min; 柱前压0. 171MPa; 进样口温度220℃; 分流进样(分流比10∶1) ; 程序升温:初始温度60℃
5℃/min
200℃(1m in ) 。
2. 4 供试品溶液制备
准确称取药材粉末(0. 24mm 粒径) 0. 2g, 置于聚四氟乙烯样品杯中, 加入甲酯化试剂3. 0mL, 盖塞后放入密闭罐中, 旋好外盖, 置于微波炉中进行反应。待反应结束降至常压后, 取出; 准确加入1. 0mL 苯和0. 5mL 饱和NaCl 溶液, 涡旋3m in, 取适量溶液离心5m in (12000r/min ) , 取上清液备用。
3 结果与讨论
3. 1 药材中有机酸成分的分析
按2. 4节的方法分别制备试剂空白、试样空白、012μL 按2. 3节的条件分别进行GC 2MS 分析, (图1) 和样品和混合对照品的总离子流色谱图(图2) 。图1色谱峰, 经N I ST2000, 个色谱峰(. ) , 1。图1c 谱图中的10, 表明药材中存在这3种成分, 但试样空白中的丰度远远低于药材甲酯化中对应色谱峰的丰度。由此可见, 药材甲酯化总离子流色谱图中的各色谱峰主要为甲酯化后产生。图
图1 样品及各空白总离子流色谱图
3表明, 混合对照品中各色谱峰的保留时间与样品Fig . 1 T otal i on chr omat ogra m of sa mp le and blank 总离子流色谱图中的10、13、14、15及17号一致, 分a . 试剂(reagent ) ; b . 试剂空白(reagent blank ) ; c . 样品空白别为棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸及柠檬酸。图3(samp le blank ) ; d . 样品(sa mp le ) 。显示丁二酸色谱峰与药材甲酯化总离子流色谱图中
的1号峰比较接近。但经质谱辨认, 1号峰不是丁二酸。从1号峰的峰形判断, 拖尾峰中可能包裹有丁
二酸。另因溶剂延迟未能采集到草酸色谱峰, 尚不能判断药材中是否含有草酸。
3. 2 共有峰的标定
对不同来源的猫爪草药材按样品溶液制备方法分别处理。取0. 2μL 按2. 3节的条件分别进行GC 2MS 分析, 得各样品的总离子流色谱图(图3) 。采用相对保留时间标定共有峰:以棕榈酸为参照物(S ) , 将各色谱峰保留时间与同一图谱中S 的保留时间比较, 其比值为各色谱峰的相对保留时间。分别计算6批猫爪草药材的图谱中各色谱峰的相对保留时间。结果显示猫爪草药材有机酸总离子流色谱图
第5期池玉梅等:中药中有机酸成分快速甲酯化方法的研究
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中有20个共有峰, 并且各对应色谱峰所占相对比例一致, 表明6批不同药材含有的有机酸成分及比例
均一致, 可作为猫爪草药材有机酸成分的指纹图谱。
表1 样品分析结果
Table 1 Analysis results of the sa mp le
峰号
Peak No .
[***********][***********]3
保留时间
Retenti on ti m e
(m in )
6. 5910. 5010. 7112. 7113. 5214. 5915. 0215. 2815. 9416. 2816. 5817. 4821. 3321. 5822. 4222. 5723. 6525. 1926. 5127. 78
化合物
Compounds
42氧代戊酸甲酯Pentanoic acid, 42oxo 2, methyl ester
化学式
Molecular
f or mula C 6H 10O 3C 9H 18O 3C 8H 12O 2C 16H 分子量
Molecular weight 130. 06
归一化面积
Nor malized area (%) 23. 931. 26
未知Unknown 22甲基212丙酰基21, 32戊二醇1, 32Pentanedi ol, 22methyl 2, 12
p r opanoate
2, 42二烯庚酸甲酯Hep ta 22, 42dienoic acid, methyl ester
174. 13140. 080. 5519. 740. 580. 570. 280. 36
未知Unknown
十五酸甲酯Pentadecanoic acid, methyl ester 未知Unknown 未知Unknown
壬二酸二甲酯Nonanedi oic acid, di m 棕榈酸甲酯Hexadecanoic acid, 32乙酰基232羟2甲丙酸酯32oxy 2hydr oxy 222
methyl p r op i ester
22氧acid, 22oxo 2, di m ethyl ester
C 20C 17H 34O 2C 7H 12O 5C 7H 10O 5C 19H 38O 2C 19H 36O 2C 19H 34O 2C 19H 32O 2C 9H 14O 7C 21H 42O 2
216. 14270. 26176. 07174. 05298. 29296. 27294. 26292. 24234. 07326. 32
0. 5315. 580. 411. 800. 793. 3618. 503. 314. 410. 480. 490. 82
acid, methyl ester 92Octadecenoic acid, methyl ester 亚油酸甲酯9, 122Octadecadienoic acid, methyl ester 亚麻酸甲酯9, 12, 152Octadecatrienoic acid, methyl ester 柠檬酸三甲酯Citric acid, tri m ethyl ester 花生酸甲酯Eicosanoic acid, methyl ester 未知Unknown 未知Unknown
二十二酸甲酯Docosanoic acid, methyl ester 二十三酸甲酯Tricosanoic acid, methyl ester 二十四酸甲酯Tetracosanoic acid, methyl ester
C 23H 46O 2C 24H 48O 2C 25H 50O 2
354. 35368. 37382. 38
0. 760. 530. 96
3. 3 方法学验证
取药材(M6) 按样品溶液制备方法处理样品, 连续进样6次, 作精密度实验, 并分别在0、4、8、12、16、20及24h 进样进行GC 2MS 分析作稳定性实验。重复处理样品6份, 进行重复性实验, 比较共有指
纹峰的相对保留时间和相对峰面积, 结果表明, 各共有峰的相对保留时间RS D
分别以二(三) 氯甲烷、二(三) 氯甲烷2乙醚(1∶2) 、苯、甲苯、正己烷等作为萃取溶剂, 进行实验, 结果表明, 正己烷萃取转移率较低, 其它相当。但因三氯甲烷在下层操作不便, 乙醚沸点太低易挥发, 而甲苯溶剂峰比苯更滞后, 影响有机酸甲酯的检出, 故本法选用了苯作为溶剂。
经分析室温反应24h 、超声反应4h 、水浴回流反应2h 、微波辅助反应1m in 的各溶液, 它们的甲酯化效率相当, 各总离子流色谱图中色谱峰的数目、保留时间均一致。本研究选择了用微波甲酯化猫爪草药材的方法。实验结果表明:功率600W 、压力0. 2MPa 的微波条件下反应1m in 为宜。报道, 在酯化体系中加入一定量的苯或甲苯能使酯化反应效率有较大提高。本实验分别以10%硫酸甲醇溶液、10%硫酸甲醇2苯(1∶1) 作为甲酯化试剂进行研究, 结果表明, 在10%硫酸甲醇
Garces 等
[11]
体系中加入一定量的苯能使甲酯化效率有较大的提高。通过对硫酸浓度、硫酸甲醇和苯的比例、甲酯化试剂用量等条件的实验, 对甲酯化试剂进行了优化实验, 结果表明:以10%硫酸甲醇2苯(1∶1) 作为甲酯化试剂, 药材与甲酯化试剂的比例以1∶15进行反应为宜。
实验中发现, 甲酯化后的反应液分层不清。通过加NaCl 固体、加不同体积的饱和与不加饱和NaCl
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分析化学第35卷
溶液及水进行后处理, 结果表明, 加入一定量的水溶液容易分层。但水量越大, 萃取速率越低。实验表明, 在反应液中加入饱和NaCl 溶液0. 5mL 比较适宜。3. 5 色谱条件的选择在HP5、HP35和I N NOVAX 色谱柱上进样分析, 结果表明, 这些色谱柱都能使有机酸甲酯得到较好的分离。但油酸甲酯和亚油酸甲酯则只能在I N NOVAX 色谱柱上基线分离。通过调整升温程序, 建立了本法的色谱条件。本实验中由于色谱柱老化不充分, 升温后色谱柱固定相流失, 导致基线飘移。References
1 Tang Chuanhe (唐传核) , Xu J ianxiang (徐建祥) , Peng Zhiying (彭志英) . China O ils and Fats (中国油脂) , 2000, 25
(6) :20～23
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出版社) , 1986:396
3 Pu Xufeng (蒲旭峰) , Lei Shaor ong (雷绍荣) , Hou Shixiang (. Journal (中国药学杂
志) , 2005, 40(20) :1581～1583
4 Guo Ying (郭 瑛) , Xiao Zhaop ing () , W ) . J. A nal . Che m . (分析化学) , 2004, 32
(12) :1624～1626
5 Zhu Yan (朱. (. ang (王素芬) . Chinese J. A nal . Che m. (分析化学) , 1999, 27(9) :
1050～6 L ü) , Sheng Yong (盛 勇) , Zhou L ian wen (周连文) . Che m ical Engineer (化学工程师) , 2005, 10:
25～26
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1999:544
9 Zhan L i (詹 莉) , Dai Huacheng (戴华成) , Yang Zhi p ing (杨治平) . Chinese Phar m acological B ulletion (中国药理学通
报) . 2001, 17(4) :405～40810 Zhou L i (周 立) , ZhangW ei (张 伟) , Xu J in (许 津) . A cta A cade m iae M edicinae S inicae (中国医学科学院学报) ,
1995, 17(6) :456～460
11 GarceslM ancha M. A nalbioche m , 1993, 211(2) :139
A M ethod for Ana lyz i n g O rgan i c Ac i ds i n Ch i n ese M ed i c i n e,
R adix R am uncu li Terna ti .
Chi Yu 2Mei , Yu Sheng , Xu L i 2Jun , W u Lu 2L ing
1
2
31
112
(N anjing U niversity of Traditional Chinese M edicine, N anjing 210029)
(J iangsu Institutes of Sports Science, N anjing 210014)
Abstract A si m p le and rap id method f or analyzing organic acids in Chinese medicine, R adix ranunculi
Ternati, was devel oped . U sing CH 3OH (10%H 2S O 4) 2C 6H 6(1∶1) as the methyl esterificati on s olvent, the direct methyl esterificati on of organic acids in the Chinese medicinal material was comp leted within one m inute, under the m icr owave conditi ons of the power (600W ) and the p ressure (0. 2MPa ) . 23components were deter m ined by GC 2MS . And 18compounds, which were 96. 79%of the t otal chr o mat ographic peak areas, were identified by using N I ST2000s pectrum base . 20common peaks of t otal i on chr omat ogra m were deter m ined by analyzing organic acids of the R adix ranunculi Ternati . fr om the different s ources .
Keywords M icr owave, gas chr omat ography 2mass s pectr ometry, methyl esterificati on, R adix ranunculi Ternati . , organic acid, finger p rint
(Received 22August 2006; accep ted 5December 2006)
第35卷
分析化学(FE NX I HUAXUE ) 研究简报第5期
2007年5月Chinese Journal of Analytical Che m istry 719～722
中药中有机酸成分快速甲酯化方法的研究
池玉梅
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31
于生 许黎君 武露凌
112
(南京中医药大学, 南京210029) 2(江苏省体育科学研究院, 南京210014)
摘 要 以中药材猫爪草为分析对象, 研究了简便快速分析中药中有机酸成分的方法。方法以10%硫酸甲醇2苯(1∶1) 溶液为甲酯化试剂, 利用微波辅助直接甲酯化药材, 在微波功率600W 、压力0. 2MPa 的条件下, 反应1m in 即完成对药材中有机酸的甲酯化; 采用气相色谱2质谱(GC 2MS ) 联用技术进行分析, 检出有23个色谱峰; 经N I ST2000标准谱库检索, 识别了18种有机酸(占总峰面积的96. 79%) , 。对不同来源的猫爪草药材进行分析, 检出有20个共有峰, 经方法学验证, 关键词 微波, 气相色谱2质谱联用, 甲酯化, 有机酸, 猫爪草, 1 引 言
, 。用于此类化合
[3][4][5][6]
、离子色谱及毛细管电泳等。而中药中有
[7]
GC 2MS 。柱前衍生化方法有三氟化硼法、酸催化或碱催化酯化法等, 、操作繁琐。本研究采用了硫酸催化甲酯化, 利用微波加热物品渗透力强的特性, 首次对采用微波辅助直接甲酯化中药材中有机酸的方法进行了研究, 并改进了后处理方法, 使反应、萃取过程成为一体, 大大简化了操作过程。
中药材猫爪草(R adix ranunculi Ternati . ) 为毛茛科植物小毛茛(R anunculus ternatus Thunb . ) 的块根,
[8][9]
性甘、辛, 微温, 具有清热解毒、消肿散结之功效。文献报道小毛茛内酯为其抗结核成分, 十六烷酸
[10]
为抗肿瘤成分。但有关药材中有机酸成分的分析及分析方法的研究至今未见报道。本研究采用微波辅助直接甲酯化中药材猫爪草中有机酸成分, 结合气相色谱2质谱联用技术, 通过与未甲酯化药材及对照品比对的方法, 分析了其中的有机酸成分, 并通过检测不同来源的药材, 研究了药材中共有的有机酸成分, 首次对猫爪草中的有机酸成分及有机酸成分的指纹图谱进行了较全面的研究分析。
[1, 2]
2 实验部分
2. 1 仪器与试剂
GC 68902MS 型气相色谱2质谱联用仪(美国Agilent 公司) , 配HP7683全自动进样器、N I ST2000标准谱库;MDS 26型微波消解炉(上海新仪微波化学科技有限公司) 。草酸、丁二酸、柠檬酸、棕榈酸、油
酸、硬脂酸、浓硫酸、苯及氯化钠均为分析纯, 甲醇为色谱纯。药材购于河南信阳、安徽亳州及南京等地。
取草酸、丁二酸、柠檬酸、棕榈酸、油酸、硬脂酸各0. 1g, 准确称定, 分别置于5. 0mL 容量瓶中, 加甲醇溶解并定容, 摇匀。准确吸取上述各溶液1. 0mL 于同一25mL 容量瓶中, 定容, 得混合有机酸对照品贮备液(Ⅰ) 。在冰水浴中, 将10mL 浓H 2S O 4缓慢倒入90mL CH 3OH 中, 搅匀, 待冷却后加入100mL 苯, 摇匀即得甲酯化试剂。2. 2 微波条件
微波功率600W , 压力0. 2MP A , 辐射1m in 。2. 3 GC 2M S 分析条件
质谱条件:E I 离子源; 电子能量70e V; 离子源温度230℃; 四级杆温度150℃; 检测电压1482V; 溶
2006208222收稿; 2006212205接受
本文系国家自然科学基金资助项目(No . 20475027) 3E 2mail:y mchi@sina . com
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分析化学第35卷
剂延迟5m in 。
色谱条件:HP 2I N NOVAX 色谱柱(30m ×320μm ×0. 5μm ) ; 氦气(99. 999%) 为载气, 流速1. 5mL /min; 柱前压0. 171MPa; 进样口温度220℃; 分流进样(分流比10∶1) ; 程序升温:初始温度60℃
5℃/min
200℃(1m in ) 。
2. 4 供试品溶液制备
准确称取药材粉末(0. 24mm 粒径) 0. 2g, 置于聚四氟乙烯样品杯中, 加入甲酯化试剂3. 0mL, 盖塞后放入密闭罐中, 旋好外盖, 置于微波炉中进行反应。待反应结束降至常压后, 取出; 准确加入1. 0mL 苯和0. 5mL 饱和NaCl 溶液, 涡旋3m in, 取适量溶液离心5m in (12000r/min ) , 取上清液备用。
3 结果与讨论
3. 1 药材中有机酸成分的分析
按2. 4节的方法分别制备试剂空白、试样空白、012μL 按2. 3节的条件分别进行GC 2MS 分析, (图1) 和样品和混合对照品的总离子流色谱图(图2) 。图1色谱峰, 经N I ST2000, 个色谱峰(. ) , 1。图1c 谱图中的10, 表明药材中存在这3种成分, 但试样空白中的丰度远远低于药材甲酯化中对应色谱峰的丰度。由此可见, 药材甲酯化总离子流色谱图中的各色谱峰主要为甲酯化后产生。图
图1 样品及各空白总离子流色谱图
3表明, 混合对照品中各色谱峰的保留时间与样品Fig . 1 T otal i on chr omat ogra m of sa mp le and blank 总离子流色谱图中的10、13、14、15及17号一致, 分a . 试剂(reagent ) ; b . 试剂空白(reagent blank ) ; c . 样品空白别为棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸及柠檬酸。图3(samp le blank ) ; d . 样品(sa mp le ) 。显示丁二酸色谱峰与药材甲酯化总离子流色谱图中
的1号峰比较接近。但经质谱辨认, 1号峰不是丁二酸。从1号峰的峰形判断, 拖尾峰中可能包裹有丁
二酸。另因溶剂延迟未能采集到草酸色谱峰, 尚不能判断药材中是否含有草酸。
3. 2 共有峰的标定
对不同来源的猫爪草药材按样品溶液制备方法分别处理。取0. 2μL 按2. 3节的条件分别进行GC 2MS 分析, 得各样品的总离子流色谱图(图3) 。采用相对保留时间标定共有峰:以棕榈酸为参照物(S ) , 将各色谱峰保留时间与同一图谱中S 的保留时间比较, 其比值为各色谱峰的相对保留时间。分别计算6批猫爪草药材的图谱中各色谱峰的相对保留时间。结果显示猫爪草药材有机酸总离子流色谱图
第5期池玉梅等:中药中有机酸成分快速甲酯化方法的研究
721
中有20个共有峰, 并且各对应色谱峰所占相对比例一致, 表明6批不同药材含有的有机酸成分及比例
均一致, 可作为猫爪草药材有机酸成分的指纹图谱。
表1 样品分析结果
Table 1 Analysis results of the sa mp le
峰号
Peak No .
[***********][***********]3
保留时间
Retenti on ti m e
(m in )
6. 5910. 5010. 7112. 7113. 5214. 5915. 0215. 2815. 9416. 2816. 5817. 4821. 3321. 5822. 4222. 5723. 6525. 1926. 5127. 78
化合物
Compounds
42氧代戊酸甲酯Pentanoic acid, 42oxo 2, methyl ester
化学式
Molecular
f or mula C 6H 10O 3C 9H 18O 3C 8H 12O 2C 16H 分子量
Molecular weight 130. 06
归一化面积
Nor malized area (%) 23. 931. 26
未知Unknown 22甲基212丙酰基21, 32戊二醇1, 32Pentanedi ol, 22methyl 2, 12
p r opanoate
2, 42二烯庚酸甲酯Hep ta 22, 42dienoic acid, methyl ester
174. 13140. 080. 5519. 740. 580. 570. 280. 36
未知Unknown
十五酸甲酯Pentadecanoic acid, methyl ester 未知Unknown 未知Unknown
壬二酸二甲酯Nonanedi oic acid, di m 棕榈酸甲酯Hexadecanoic acid, 32乙酰基232羟2甲丙酸酯32oxy 2hydr oxy 222
methyl p r op i ester
22氧acid, 22oxo 2, di m ethyl ester
C 20C 17H 34O 2C 7H 12O 5C 7H 10O 5C 19H 38O 2C 19H 36O 2C 19H 34O 2C 19H 32O 2C 9H 14O 7C 21H 42O 2
216. 14270. 26176. 07174. 05298. 29296. 27294. 26292. 24234. 07326. 32
0. 5315. 580. 411. 800. 793. 3618. 503. 314. 410. 480. 490. 82
acid, methyl ester 92Octadecenoic acid, methyl ester 亚油酸甲酯9, 122Octadecadienoic acid, methyl ester 亚麻酸甲酯9, 12, 152Octadecatrienoic acid, methyl ester 柠檬酸三甲酯Citric acid, tri m ethyl ester 花生酸甲酯Eicosanoic acid, methyl ester 未知Unknown 未知Unknown
二十二酸甲酯Docosanoic acid, methyl ester 二十三酸甲酯Tricosanoic acid, methyl ester 二十四酸甲酯Tetracosanoic acid, methyl ester
C 23H 46O 2C 24H 48O 2C 25H 50O 2
354. 35368. 37382. 38
0. 760. 530. 96
3. 3 方法学验证
取药材(M6) 按样品溶液制备方法处理样品, 连续进样6次, 作精密度实验, 并分别在0、4、8、12、16、20及24h 进样进行GC 2MS 分析作稳定性实验。重复处理样品6份, 进行重复性实验, 比较共有指
纹峰的相对保留时间和相对峰面积, 结果表明, 各共有峰的相对保留时间RS D
分别以二(三) 氯甲烷、二(三) 氯甲烷2乙醚(1∶2) 、苯、甲苯、正己烷等作为萃取溶剂, 进行实验, 结果表明, 正己烷萃取转移率较低, 其它相当。但因三氯甲烷在下层操作不便, 乙醚沸点太低易挥发, 而甲苯溶剂峰比苯更滞后, 影响有机酸甲酯的检出, 故本法选用了苯作为溶剂。
经分析室温反应24h 、超声反应4h 、水浴回流反应2h 、微波辅助反应1m in 的各溶液, 它们的甲酯化效率相当, 各总离子流色谱图中色谱峰的数目、保留时间均一致。本研究选择了用微波甲酯化猫爪草药材的方法。实验结果表明:功率600W 、压力0. 2MPa 的微波条件下反应1m in 为宜。报道, 在酯化体系中加入一定量的苯或甲苯能使酯化反应效率有较大提高。本实验分别以10%硫酸甲醇溶液、10%硫酸甲醇2苯(1∶1) 作为甲酯化试剂进行研究, 结果表明, 在10%硫酸甲醇
Garces 等
[11]
体系中加入一定量的苯能使甲酯化效率有较大的提高。通过对硫酸浓度、硫酸甲醇和苯的比例、甲酯化试剂用量等条件的实验, 对甲酯化试剂进行了优化实验, 结果表明:以10%硫酸甲醇2苯(1∶1) 作为甲酯化试剂, 药材与甲酯化试剂的比例以1∶15进行反应为宜。
实验中发现, 甲酯化后的反应液分层不清。通过加NaCl 固体、加不同体积的饱和与不加饱和NaCl
722
分析化学第35卷
溶液及水进行后处理, 结果表明, 加入一定量的水溶液容易分层。但水量越大, 萃取速率越低。实验表明, 在反应液中加入饱和NaCl 溶液0. 5mL 比较适宜。3. 5 色谱条件的选择在HP5、HP35和I N NOVAX 色谱柱上进样分析, 结果表明, 这些色谱柱都能使有机酸甲酯得到较好的分离。但油酸甲酯和亚油酸甲酯则只能在I N NOVAX 色谱柱上基线分离。通过调整升温程序, 建立了本法的色谱条件。本实验中由于色谱柱老化不充分, 升温后色谱柱固定相流失, 导致基线飘移。References
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R adix R am uncu li Terna ti .
Chi Yu 2Mei , Yu Sheng , Xu L i 2Jun , W u Lu 2L ing
1
2
31
112
(N anjing U niversity of Traditional Chinese M edicine, N anjing 210029)
(J iangsu Institutes of Sports Science, N anjing 210014)
Abstract A si m p le and rap id method f or analyzing organic acids in Chinese medicine, R adix ranunculi
Ternati, was devel oped . U sing CH 3OH (10%H 2S O 4) 2C 6H 6(1∶1) as the methyl esterificati on s olvent, the direct methyl esterificati on of organic acids in the Chinese medicinal material was comp leted within one m inute, under the m icr owave conditi ons of the power (600W ) and the p ressure (0. 2MPa ) . 23components were deter m ined by GC 2MS . And 18compounds, which were 96. 79%of the t otal chr o mat ographic peak areas, were identified by using N I ST2000s pectrum base . 20common peaks of t otal i on chr omat ogra m were deter m ined by analyzing organic acids of the R adix ranunculi Ternati . fr om the different s ources .
Keywords M icr owave, gas chr omat ography 2mass s pectr ometry, methyl esterificati on, R adix ranunculi Ternati . , organic acid, finger p rint
(Received 22August 2006; accep ted 5December 2006)