胶质芽孢杆菌的活化、分离纯化、优良菌株的保藏
一、培养基的配方
1. 硅酸盐细菌培养基:酵母浸膏0.3克,蔗糖10.0克,硫酸铵0.5克,碳酸钙0.5克 ,七水硫酸镁0.5克,磷酸氢二钾1克,蒸馏水1000毫升,pH 值7.0-7.2。
2. 无机磷培养基:蒸馏水1000毫升,葡萄糖10.0克,硫酸铵0.5克,七水硫酸镁0.3克,氯化钠0.3克,氯化钾0.3克,硫酸亚铁0.036克,一水硫酸锰0.03克,磷酸三钙2.0克,琼脂15克,pH7.0-7.2。
3. 钾细菌筛选培养基:蔗糖(10g ),酵母膏(0.5g ),Na 2HPH 4(2g ),(NH 4)2SO 4(1g),MgSO 4.7H 2O(0.5g),CaCO 3(1g),钾长石粉(1g ),其中K 2O 质量分数为9.60%,琼脂(15g ),去离子水(1L ),调节初始pH 值为7.0。
二、菌株活化、培育和挑选:
将菌种提前从下层冰箱取出,然后接种到硅酸盐细菌培养基中进行28℃恒温培养2天,每隔12小时观察一次,并选取长势优良菌株,实施分离纯化,直到得到生长优良的纯菌落。
三、解磷、解钾能力的测定:
将上述所挑选的优良菌种接种于无磷培养基恒温培养七天,采用溶磷圈法进行解磷能力测定。用溶磷圈直径与菌落直径的比值(HD/CD)大小分析该菌种的解磷能力,比值越大,解磷性能就越好。把解磷能力优良的胶质芽孢杆菌采用低温斜面保藏法保藏。
四、菌种扩大培养
培养液用5个100ml 三角瓶分装,高压灭菌或间歇灭菌后,挑选斜面菌种上的菌苔接种到培养液中,25到28℃下培养3天。培养期间,每天要定时摇瓶3到5次,每次3分钟,以加速菌体繁殖。然后接种到5个500ml 的三角瓶扩大培养。最后接种到2000ml 的塑料壶中培养并保存。
钾细菌在这种以淀粉为能源的培养基中生长繁殖时,它们的夹馍消失,且能大量生成芽孢。因此培养液没有粘性,菌体是均匀的悬浮在培养液中的,这样的菌悬液很适合作固体菌剂接种的菌种。
胶质芽孢杆菌的活化、分离纯化、优良菌株的保藏
一、培养基的配方
1. 硅酸盐细菌培养基:酵母浸膏0.3克,蔗糖10.0克,硫酸铵0.5克,碳酸钙0.5克 ,七水硫酸镁0.5克,磷酸氢二钾1克,蒸馏水1000毫升,pH 值7.0-7.2。
2. 无机磷培养基:蒸馏水1000毫升,葡萄糖10.0克,硫酸铵0.5克,七水硫酸镁0.3克,氯化钠0.3克,氯化钾0.3克,硫酸亚铁0.036克,一水硫酸锰0.03克,磷酸三钙2.0克,琼脂15克,pH7.0-7.2。
3. 钾细菌筛选培养基:蔗糖(10g ),酵母膏(0.5g ),Na 2HPH 4(2g ),(NH 4)2SO 4(1g),MgSO 4.7H 2O(0.5g),CaCO 3(1g),钾长石粉(1g ),其中K 2O 质量分数为9.60%,琼脂(15g ),去离子水(1L ),调节初始pH 值为7.0。
二、菌株活化、培育和挑选:
将菌种提前从下层冰箱取出,然后接种到硅酸盐细菌培养基中进行28℃恒温培养2天,每隔12小时观察一次,并选取长势优良菌株,实施分离纯化,直到得到生长优良的纯菌落。
三、解磷、解钾能力的测定:
将上述所挑选的优良菌种接种于无磷培养基恒温培养七天,采用溶磷圈法进行解磷能力测定。用溶磷圈直径与菌落直径的比值(HD/CD)大小分析该菌种的解磷能力,比值越大,解磷性能就越好。把解磷能力优良的胶质芽孢杆菌采用低温斜面保藏法保藏。
四、菌种扩大培养
培养液用5个100ml 三角瓶分装,高压灭菌或间歇灭菌后,挑选斜面菌种上的菌苔接种到培养液中,25到28℃下培养3天。培养期间,每天要定时摇瓶3到5次,每次3分钟,以加速菌体繁殖。然后接种到5个500ml 的三角瓶扩大培养。最后接种到2000ml 的塑料壶中培养并保存。
钾细菌在这种以淀粉为能源的培养基中生长繁殖时,它们的夹馍消失,且能大量生成芽孢。因此培养液没有粘性,菌体是均匀的悬浮在培养液中的,这样的菌悬液很适合作固体菌剂接种的菌种。