第15卷第8期现代农业科学V o. l 15N o . 8
2008年8月M ode rn A g ricu ltura l Sc i ences A ug . 2008
水中病毒的检测方法研究
吴 楚, 吴宗斌
(温州大学生命与环境科学学院, 浙江温州325027)
摘 要:水中的病毒对人体健康的风险日益受到关注, 对环境水体中病毒的检测是预防疾病、评估水源卫生质量、环境卫生状况的一项有价值的工作。现代分子生物学技术的发展为水中病毒快速检测
方法的建立提供了可能。对水体中病毒浓缩的几种方法:N aC l-A l C l 3 6H 2O 沉淀法、滑石粉-硅藻土法、絮凝洗脱法进行了介绍与比较, 进一步提出理想的浓缩方法应满足的条件。对浓缩后水样中病毒的PCR 检测的方法也做了介绍。
关键词:水体; 病毒浓缩; 病毒检测
中图分类号:X 832 文献标识码:A 文章编号:1005-4650(2008) 06-0048-03
R esearch on the D etection M ethod of V iruses i n W ater
W U Zong -b i n , W U Chu
(C ollege ofL ife and Env i ronm en t Science , W enz hou U nivers it y , W en z hou, Zh eji ang 325027, Ch i n a)
Abstrac t :The risk o f hu m an hea lt h from v iruses i n wa ter is i ncreasi ng ly g iven attention , t he de tecti on o f v iruses i n the
env i ronm enta lw ate r i s a va l uab le wo rk for preventi ng diseases and evalua ti ng san itary qua lity of wa ter and hea lt h condition of env i ronm ent . The develop ment o f m ode rn m o l ecular b i o techno logy m akes it poss i ble to buil d rap i d de tecti on m ethod o f v iruses in w ater . T h i s article i ntroduced and com pared so m e me t hods of v irus concentra tion i n wa ter , such as N aC l-A l C l H 2O prec i pita ti on 36process , ta lc -diato m ite m ethod and floccu l a ti on e l uti on techn i que ,
and furthe r proposed correspond i ng cond i tion o f perfect
concentration m ethod . PCR m ethod for t he detecti on of v iruses after concentrating i n w ater was also introduced .
K ey word s :w ater ; concentration o f v i ruses ; detec tion o f v iruses 人类的生命活动与水密切相关, 而环境水体也是病毒等病原微生物存活的主要场所, 并频频引发传染病的流行。目前, 水体环境中存在有动、植物病毒及它们对人类健康和农业生产的危害性已引起人们普遍关注。事实上水体中有众多的植物病毒, 并有可能导致严重的植物病毒病流行, 如1994年福建省三明地区因 5. 2 大洪水, 水中带有大量的烟草病毒, 导致烟草花叶病大爆发, 仅宁化县就损失烟叶10多万担[1, 2]。了解水体病毒的污染状况与特征, 对于确定饮用水取水口、废水排放口的位置和决定水处理方法非常重要。然而一般水体中的病毒往往达不到可被直接检测的浓度(PCR 法除外), 常需经预先浓缩才可被检测, 因此要了解水体的病毒污染状况, 首要条件是其浓缩方法的有效性和准确性。但是, 目前还没有一种较理想的浓缩方法可供选用。总体上讲, 早期的浓缩方法, 应用范围有限且只能处理有限的水量, 还不能用于含有较高悬浮物或有机质的水体, 同时现场应用也很困难。曾认为膜吸附 洗脱法是较为理想的水体病毒浓缩方法, 然而也存在着许多难以解决的缺陷[3]。因此开发一种较为理想的水体病毒浓缩方法已迫在眉睫, 这对于社会经济水平落后, 又没有饮用水病毒学卫生标准的发展中国家显得更为重要。许多发展中国家的目标仍然是提供充足、安全和可靠的供水, 以防止传染病的传播。因此对饮用源水的病毒污染程度进行监测与预测具有重要意义。
1 水样浓缩方法选择
1. 1 水样病毒的浓缩
关于水中病毒浓缩的方法, 国内已有过一些报道[4, 7], 下面分别介绍几种常用的实验技术。1. 1. 1 N aC l-A l C l 3 6H 2O 沉淀法
将水样用1mo l/LH C l 调p H 至3. 5~4. 5, 按每L 水样加N aC l 10g (1%) 和A l C l 3 6H 2O 0. 24g 混匀, 室温静置过夜。去上清液, 滴加甘氨酸缓冲液。吹打沉渣5m in , 使病毒洗脱, 再1500r /mi n 离心10m in , 取上清8m 1, 用1mo l/LHC l 调p H 至7. 2, 加牛肉浸膏1m, 置-20 冰箱待检[8]。1. 1. 2 滑石粉 硅藻土法
将直径250m g 的圆形滤纸平铺于赛氏滤器网板上, 用无菌水浸湿, 用经高压灭菌的滑石粉一硅藻土混悬液(滑石粉1. 2g , 硅藻土0. 4g) 在滤纸上涂成均匀的薄膜层, 再用一张同样规格的滤纸覆盖其表面。将处理好的水样加到吸附层上加压过滤, 待水样全部通过吸附层后, 用30m l 的3%牛肉浸膏洗脱液洗脱吸附层的病毒, 抽滤, 收集洗脱液, 用1m o l/LHC l 调p H 至7. 2左右, 用0. 22 m 的微孔滤膜抽滤除菌, 得到水样浓缩液, 置4 冰箱待用[9, 11]。1. 1. 3 絮凝洗脱法
浓缩前, 先加入1mo l/L的盐酸将水样, p H 值调节至
:-
第8期 水中病毒的检测方法研究 4. 0~4. 5左右, 再加入300m g /L蒙脱石钠混合均匀, 约30m i n 后加入20mg /LPCA (聚合氯化铝) 及0. 005m o l/LCaC l 2充分混合, 在静置混凝沉降2h 后, 用虹吸法移出上清液并尽快带回悬浮液做实验室处理[12]。在5000r /mi n 离心10m in 后, 取沉淀物加入2倍体积p H9. 5浓度0. 05m o l/L的G ly-EDTA 缓冲液, 低温振荡30m i n 后, 4000r /m i n 离心10m in , 取上清液再加入聚合氯化铝和氯化钙进行第2次浓缩(冰箱过夜), 并将最终浓缩液p H 值调节至中性, 用0. 22 m 滤膜过滤除菌后-20 保存以供测病毒之用, 水样浓缩倍数约15000倍[13]。
49
能快和适于现场应用等优点。根据这一原则, 从最早的纱布包法、到后来的电泳、冷冻、相分离和目前应用最多的膜过滤法等都无法满足上述要求。但如能优化和利用水环境中病毒自身聚集、对颗粒物的吸附及解吸条件, 采用简易的絮凝洗脱法浓缩水体病毒是一个值得重视和深入研究的方法。单就操作条件而言, 该法无需昂贵的不锈钢过滤装置和空气压缩机, 也省去进口的阳电荷滤膜, 还可避免水样浊度对有过滤程序浓缩水体环境中病毒方法的制约以及易堵塞滤膜、耗时过长并造成大量病毒丢失, 更无法处理大量水样的缺陷。因此, 絮凝洗脱法对一般基层实验室不失是一种理想的水体病毒浓缩方法。
理想的水病毒浓缩方法应该具备以下条件: 敏感性, 能够回收水中的少量病毒。 特异性, 不浓集病毒以外的特质。 高效性, 不受水质和水量的限制。 应用性, 制备简单、操作简便、容易推广。尽管水病毒的浓集方法有很多种, 但由于病毒是一类体积微小的非细胞型微生物, 目前还没有一种方法能满足上述要求, 有待进一步探索。
1. 2 几种浓缩方法的比较
要监测水体病毒污染状况, 其首要条件是水样浓缩方法的有效性和准确性。浓缩方法的有效性取决于一系列因素, 其中所能处理水样的体积和对不同水质类型的适应性, 以及快速易于使用等都是衡量一个浓缩方法有效性的重要标志。另外, 浓缩的条件还要不使病毒在浓缩过程中灭活, 以及不利于病毒存活的操作时间要尽可能短等因素都需要考虑。开发简便、成本低、适用范围广、浓缩效率高的方法对发展中国家意义重大。我国张楚瑜等学者发展了滑石粉-硅藻土水体病毒浓缩方法, 该法由于其原理在于病毒吸附-膜过滤-洗脱, 因此也存在着膜过滤法本身固有的缺陷。赵淑敏等[14]比较了滑石粉 硅藻土浓缩法、阳电滤膜过滤法、三氯化铝沉淀法三种方法浓缩水体病毒的不同效果。实验发现:三氯化铝沉淀法无论在各种水源的检测中均显出较高的回收率(50. 12%~79. 43%), 其次是滑石粉-硅藻土法(35. 48%~50. 12%) 。还发现用滑石粉-硅藻土法的试验结果稳定性也很差, 同时试验操作所花时间最长且还需不锈钢过滤器和空气压缩机等设备。3种方法中三氯化铝絮凝沉淀法回收率最高, 方法也最简单。郭润霞等[15]也认为三氯化铝絮凝沉淀法操作简单、不需特殊的试剂和设备、适于基层实验室使用。郑耀通[19]在三氯化铝浓缩方法的基础上将以发展改良, 采用预先加入钠化高岭土吸附病毒以提高其沉降性能, 并选择性能优良的PCA 絮凝沉淀悬浮物的方法来浓缩水体环境中病毒, 该法对动物病毒(PV 1) 、噬菌体(E . co li phage) 、植物病毒(TM V ) 在3种不同水体中分别有平均90. 5%、88. 3%、94. 1%的回收率; 而在闽江水、自来水、生活污水中的回收率分别达91. 1%、93. 9%、87. 8%, 说明该法具有较广泛的适用性和应用价值。
前面介绍的沉淀法、吸附法、絮凝法等, 这些方法有的虽然可以得到较高的病毒回收率, 但其工序繁复(需要调p H 、制作滤层、制备洗脱液), 且不适用大量水样的处理。有的虽然特异性强, 灵敏度高, 但耗时长, 成本高, 操作复杂。而反冲超滤法不但可以有效的浓缩噬藻体, 而且与以往的水中病毒浓缩技术相比, 有耗时短, 费用低, 能够处理大量的天然水样(10L ~l00L ), 操作简便等特点, 特别是将初滤系统与超滤系统串接起来使用后, 大大简化了实验程序。
2 水样病毒的检测
分子生物学方法已深入到水病毒学领域, 利用基因探针和扩增技术检测水体病毒已成为重要的研究方法。用PCR 法检测水中病毒[16], 也需预防控制假阳性结果。因为水中病毒含量很低, 水样间交叉污染引起假阳性结果的可能性远低于PCR 产物污染引起假阳性的可能性。临床上应用的防止PCR 产物污染的方法也可以用到水样检测中。在PCR 反应体系中用d UT P 取代dTT P , 经PCR 扩增反应, 产物DNA 链中d U 取代d T 。每个样品PCR 反应前用UDG 酶消化, 如果有带d U 的扩增产物污染, 则d U 被U DG 酶切除, 污染产物不能再作为模板[17], 从而保证PCR 检出阳性结果均来源于被测样品的核酸作模板的扩增结果, 防止了产物污染引起的假阳性。
PCR 法检测水中病毒存在的不足在于:它所显示的阳性结果, 反映了样品被病毒污染的情况, 单凭这一检测方法, 还不能区分被检水样中的病毒是否具有感染性[18]。但是从敏感、快速、特异、经济等综合因素来看, 在预防控制水病毒所传播的疾病, 评估水卫生质量和环境卫生状况等方面工作中, 它不失为一重要的检测方法。
水中病毒检测方法的研究, 在国内已有少数单位开展此项工作[8, 9, 12, 19], 但尚未列人常规监测工作中。从病毒分离结果看, 环境水中病毒污染还是比较严重的。
3 结论
在水环境中影响病毒的数量及行为的因素包括生物因素和非生物因素:生物因素是指病毒与寄主的密度, 宿主与病毒之间的寄生关系; 非生物因素是指紫外线与可见光之间的作用、温度、p H 值、离子浓度等等。由于很多因素影响了病毒的生存与复制, 因此很难预测在环境中病毒的发生率与行为, 另外一个原因是从水环境中浓缩回收病毒的方法不一致及最后的检测与病毒的计数的不一致[20]。
对病毒的浓缩有好几种方法, 但是每种方法都有其不足, 充有的, 开发1. 3 理想的浓缩方法
理想的水体病毒浓缩方法应该能在最短的时间内完成, 可处理大量水样, 能浓缩存在于水环境中的大多数病毒且回收率高和稳定, 还能检测到沉积及吸附到悬浮颗粒上的病毒, ,
50
现 代 农 业 科 学 2008年
[J].环境科学, 1984(5):29-30.
浓缩方法。这样才能准确的检测水中的病毒的数量, 保证水质达到标准, 为人们创造更加健康的生活环境。
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-32.
(上接第37页)
表1 田间药效试验表1)
试验稀
试验药剂
释浓度/倍
4. 5%高氯
1. 8%阿维菌素0. 2%艾诺虫清一号
48%毒死蜱10. 5%阿维 毒
C K
[***********]00
虫口基数/(头/20株) 47. 0040. 0051. 0043. 0049. 0042. 00
残虫数
虫口减
防效/%88. 5991. 0691. 2491. 69
残虫数/(头/20株) 4. 002. 502. 003. 002. 0050. 00
虫口减退防效率/%91. 4993. 7596. 0893. 02
/%92. 8594. 7596. 7194. 14
残虫数/(头/20株) 4. 30
2. 001. 503. 001. 0051. 00
虫口减退防效率/%90. 8595. 0097. 0693. 02
/%92. 46
95. 8897. 5894. 25
/(头/20株) 退率/%6. 00
4. 005. 004. 004. 0047. 00
87. 2390. 0090. 2090. 70药后3d
药后7d
药后14d
91. 0892. 39-11. 9095. 9296. 57
-19. 1097. 9698. 32-21. 43
1) 表中数据为4次重复的平均值。
参考文献
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摘 要:水中的病毒对人体健康的风险日益受到关注, 对环境水体中病毒的检测是预防疾病、评估水源卫生质量、环境卫生状况的一项有价值的工作。现代分子生物学技术的发展为水中病毒快速检测
方法的建立提供了可能。对水体中病毒浓缩的几种方法:N aC l-A l C l 3 6H 2O 沉淀法、滑石粉-硅藻土法、絮凝洗脱法进行了介绍与比较, 进一步提出理想的浓缩方法应满足的条件。对浓缩后水样中病毒的PCR 检测的方法也做了介绍。
关键词:水体; 病毒浓缩; 病毒检测
中图分类号:X 832 文献标识码:A 文章编号:1005-4650(2008) 06-0048-03
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and furthe r proposed correspond i ng cond i tion o f perfect
concentration m ethod . PCR m ethod for t he detecti on of v iruses after concentrating i n w ater was also introduced .
K ey word s :w ater ; concentration o f v i ruses ; detec tion o f v iruses 人类的生命活动与水密切相关, 而环境水体也是病毒等病原微生物存活的主要场所, 并频频引发传染病的流行。目前, 水体环境中存在有动、植物病毒及它们对人类健康和农业生产的危害性已引起人们普遍关注。事实上水体中有众多的植物病毒, 并有可能导致严重的植物病毒病流行, 如1994年福建省三明地区因 5. 2 大洪水, 水中带有大量的烟草病毒, 导致烟草花叶病大爆发, 仅宁化县就损失烟叶10多万担[1, 2]。了解水体病毒的污染状况与特征, 对于确定饮用水取水口、废水排放口的位置和决定水处理方法非常重要。然而一般水体中的病毒往往达不到可被直接检测的浓度(PCR 法除外), 常需经预先浓缩才可被检测, 因此要了解水体的病毒污染状况, 首要条件是其浓缩方法的有效性和准确性。但是, 目前还没有一种较理想的浓缩方法可供选用。总体上讲, 早期的浓缩方法, 应用范围有限且只能处理有限的水量, 还不能用于含有较高悬浮物或有机质的水体, 同时现场应用也很困难。曾认为膜吸附 洗脱法是较为理想的水体病毒浓缩方法, 然而也存在着许多难以解决的缺陷[3]。因此开发一种较为理想的水体病毒浓缩方法已迫在眉睫, 这对于社会经济水平落后, 又没有饮用水病毒学卫生标准的发展中国家显得更为重要。许多发展中国家的目标仍然是提供充足、安全和可靠的供水, 以防止传染病的传播。因此对饮用源水的病毒污染程度进行监测与预测具有重要意义。
1 水样浓缩方法选择
1. 1 水样病毒的浓缩
关于水中病毒浓缩的方法, 国内已有过一些报道[4, 7], 下面分别介绍几种常用的实验技术。1. 1. 1 N aC l-A l C l 3 6H 2O 沉淀法
将水样用1mo l/LH C l 调p H 至3. 5~4. 5, 按每L 水样加N aC l 10g (1%) 和A l C l 3 6H 2O 0. 24g 混匀, 室温静置过夜。去上清液, 滴加甘氨酸缓冲液。吹打沉渣5m in , 使病毒洗脱, 再1500r /mi n 离心10m in , 取上清8m 1, 用1mo l/LHC l 调p H 至7. 2, 加牛肉浸膏1m, 置-20 冰箱待检[8]。1. 1. 2 滑石粉 硅藻土法
将直径250m g 的圆形滤纸平铺于赛氏滤器网板上, 用无菌水浸湿, 用经高压灭菌的滑石粉一硅藻土混悬液(滑石粉1. 2g , 硅藻土0. 4g) 在滤纸上涂成均匀的薄膜层, 再用一张同样规格的滤纸覆盖其表面。将处理好的水样加到吸附层上加压过滤, 待水样全部通过吸附层后, 用30m l 的3%牛肉浸膏洗脱液洗脱吸附层的病毒, 抽滤, 收集洗脱液, 用1m o l/LHC l 调p H 至7. 2左右, 用0. 22 m 的微孔滤膜抽滤除菌, 得到水样浓缩液, 置4 冰箱待用[9, 11]。1. 1. 3 絮凝洗脱法
浓缩前, 先加入1mo l/L的盐酸将水样, p H 值调节至
:-
第8期 水中病毒的检测方法研究 4. 0~4. 5左右, 再加入300m g /L蒙脱石钠混合均匀, 约30m i n 后加入20mg /LPCA (聚合氯化铝) 及0. 005m o l/LCaC l 2充分混合, 在静置混凝沉降2h 后, 用虹吸法移出上清液并尽快带回悬浮液做实验室处理[12]。在5000r /mi n 离心10m in 后, 取沉淀物加入2倍体积p H9. 5浓度0. 05m o l/L的G ly-EDTA 缓冲液, 低温振荡30m i n 后, 4000r /m i n 离心10m in , 取上清液再加入聚合氯化铝和氯化钙进行第2次浓缩(冰箱过夜), 并将最终浓缩液p H 值调节至中性, 用0. 22 m 滤膜过滤除菌后-20 保存以供测病毒之用, 水样浓缩倍数约15000倍[13]。
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能快和适于现场应用等优点。根据这一原则, 从最早的纱布包法、到后来的电泳、冷冻、相分离和目前应用最多的膜过滤法等都无法满足上述要求。但如能优化和利用水环境中病毒自身聚集、对颗粒物的吸附及解吸条件, 采用简易的絮凝洗脱法浓缩水体病毒是一个值得重视和深入研究的方法。单就操作条件而言, 该法无需昂贵的不锈钢过滤装置和空气压缩机, 也省去进口的阳电荷滤膜, 还可避免水样浊度对有过滤程序浓缩水体环境中病毒方法的制约以及易堵塞滤膜、耗时过长并造成大量病毒丢失, 更无法处理大量水样的缺陷。因此, 絮凝洗脱法对一般基层实验室不失是一种理想的水体病毒浓缩方法。
理想的水病毒浓缩方法应该具备以下条件: 敏感性, 能够回收水中的少量病毒。 特异性, 不浓集病毒以外的特质。 高效性, 不受水质和水量的限制。 应用性, 制备简单、操作简便、容易推广。尽管水病毒的浓集方法有很多种, 但由于病毒是一类体积微小的非细胞型微生物, 目前还没有一种方法能满足上述要求, 有待进一步探索。
1. 2 几种浓缩方法的比较
要监测水体病毒污染状况, 其首要条件是水样浓缩方法的有效性和准确性。浓缩方法的有效性取决于一系列因素, 其中所能处理水样的体积和对不同水质类型的适应性, 以及快速易于使用等都是衡量一个浓缩方法有效性的重要标志。另外, 浓缩的条件还要不使病毒在浓缩过程中灭活, 以及不利于病毒存活的操作时间要尽可能短等因素都需要考虑。开发简便、成本低、适用范围广、浓缩效率高的方法对发展中国家意义重大。我国张楚瑜等学者发展了滑石粉-硅藻土水体病毒浓缩方法, 该法由于其原理在于病毒吸附-膜过滤-洗脱, 因此也存在着膜过滤法本身固有的缺陷。赵淑敏等[14]比较了滑石粉 硅藻土浓缩法、阳电滤膜过滤法、三氯化铝沉淀法三种方法浓缩水体病毒的不同效果。实验发现:三氯化铝沉淀法无论在各种水源的检测中均显出较高的回收率(50. 12%~79. 43%), 其次是滑石粉-硅藻土法(35. 48%~50. 12%) 。还发现用滑石粉-硅藻土法的试验结果稳定性也很差, 同时试验操作所花时间最长且还需不锈钢过滤器和空气压缩机等设备。3种方法中三氯化铝絮凝沉淀法回收率最高, 方法也最简单。郭润霞等[15]也认为三氯化铝絮凝沉淀法操作简单、不需特殊的试剂和设备、适于基层实验室使用。郑耀通[19]在三氯化铝浓缩方法的基础上将以发展改良, 采用预先加入钠化高岭土吸附病毒以提高其沉降性能, 并选择性能优良的PCA 絮凝沉淀悬浮物的方法来浓缩水体环境中病毒, 该法对动物病毒(PV 1) 、噬菌体(E . co li phage) 、植物病毒(TM V ) 在3种不同水体中分别有平均90. 5%、88. 3%、94. 1%的回收率; 而在闽江水、自来水、生活污水中的回收率分别达91. 1%、93. 9%、87. 8%, 说明该法具有较广泛的适用性和应用价值。
前面介绍的沉淀法、吸附法、絮凝法等, 这些方法有的虽然可以得到较高的病毒回收率, 但其工序繁复(需要调p H 、制作滤层、制备洗脱液), 且不适用大量水样的处理。有的虽然特异性强, 灵敏度高, 但耗时长, 成本高, 操作复杂。而反冲超滤法不但可以有效的浓缩噬藻体, 而且与以往的水中病毒浓缩技术相比, 有耗时短, 费用低, 能够处理大量的天然水样(10L ~l00L ), 操作简便等特点, 特别是将初滤系统与超滤系统串接起来使用后, 大大简化了实验程序。
2 水样病毒的检测
分子生物学方法已深入到水病毒学领域, 利用基因探针和扩增技术检测水体病毒已成为重要的研究方法。用PCR 法检测水中病毒[16], 也需预防控制假阳性结果。因为水中病毒含量很低, 水样间交叉污染引起假阳性结果的可能性远低于PCR 产物污染引起假阳性的可能性。临床上应用的防止PCR 产物污染的方法也可以用到水样检测中。在PCR 反应体系中用d UT P 取代dTT P , 经PCR 扩增反应, 产物DNA 链中d U 取代d T 。每个样品PCR 反应前用UDG 酶消化, 如果有带d U 的扩增产物污染, 则d U 被U DG 酶切除, 污染产物不能再作为模板[17], 从而保证PCR 检出阳性结果均来源于被测样品的核酸作模板的扩增结果, 防止了产物污染引起的假阳性。
PCR 法检测水中病毒存在的不足在于:它所显示的阳性结果, 反映了样品被病毒污染的情况, 单凭这一检测方法, 还不能区分被检水样中的病毒是否具有感染性[18]。但是从敏感、快速、特异、经济等综合因素来看, 在预防控制水病毒所传播的疾病, 评估水卫生质量和环境卫生状况等方面工作中, 它不失为一重要的检测方法。
水中病毒检测方法的研究, 在国内已有少数单位开展此项工作[8, 9, 12, 19], 但尚未列人常规监测工作中。从病毒分离结果看, 环境水中病毒污染还是比较严重的。
3 结论
在水环境中影响病毒的数量及行为的因素包括生物因素和非生物因素:生物因素是指病毒与寄主的密度, 宿主与病毒之间的寄生关系; 非生物因素是指紫外线与可见光之间的作用、温度、p H 值、离子浓度等等。由于很多因素影响了病毒的生存与复制, 因此很难预测在环境中病毒的发生率与行为, 另外一个原因是从水环境中浓缩回收病毒的方法不一致及最后的检测与病毒的计数的不一致[20]。
对病毒的浓缩有好几种方法, 但是每种方法都有其不足, 充有的, 开发1. 3 理想的浓缩方法
理想的水体病毒浓缩方法应该能在最短的时间内完成, 可处理大量水样, 能浓缩存在于水环境中的大多数病毒且回收率高和稳定, 还能检测到沉积及吸附到悬浮颗粒上的病毒, ,
50
现 代 农 业 科 学 2008年
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浓缩方法。这样才能准确的检测水中的病毒的数量, 保证水质达到标准, 为人们创造更加健康的生活环境。
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-32.
(上接第37页)
表1 田间药效试验表1)
试验稀
试验药剂
释浓度/倍
4. 5%高氯
1. 8%阿维菌素0. 2%艾诺虫清一号
48%毒死蜱10. 5%阿维 毒
C K
[***********]00
虫口基数/(头/20株) 47. 0040. 0051. 0043. 0049. 0042. 00
残虫数
虫口减
防效/%88. 5991. 0691. 2491. 69
残虫数/(头/20株) 4. 002. 502. 003. 002. 0050. 00
虫口减退防效率/%91. 4993. 7596. 0893. 02
/%92. 8594. 7596. 7194. 14
残虫数/(头/20株) 4. 30
2. 001. 503. 001. 0051. 00
虫口减退防效率/%90. 8595. 0097. 0693. 02
/%92. 46
95. 8897. 5894. 25
/(头/20株) 退率/%6. 00
4. 005. 004. 004. 0047. 00
87. 2390. 0090. 2090. 70药后3d
药后7d
药后14d
91. 0892. 39-11. 9095. 9296. 57
-19. 1097. 9698. 32-21. 43
1) 表中数据为4次重复的平均值。
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