实验十 植株中铁含量的测定
一、实验目的
1、掌握分光光度计的使用方法和测定原理。
2、掌握标准曲线的绘制方法。
二、实验原理
在pH2-9的溶液中，二价铁离子能与邻二氮菲生成稳定的橙红色络合物，在510nm 有最大吸收，其吸光度与铁的含量成正比，故可比色测定。反应式如下：
pH ＜2时反应进行较慢，而且酸度过低又会引起二价铁离子水解，故反应通常在pH ＝5左右的微酸条件下进行。此反应可用于微量Fe2+的测定，如果铁以Fe3+的形式存在，则应预先加入还原剂盐酸羟胺或对苯二酚将Fe3+还原成Fe2+。
三、仪器和试剂
1、仪器：分光光度计
2、试剂
(1) 10％盐酸羟胺溶液（新配）
(2) 0.12％邻二氮菲水溶液：避光保存，溶液颜色变暗时即不能使用
(3) 10％醋酸钠溶液
（4）铁标准贮备液：1000μg /mL。准确称取1.000g 纯金属铁溶于1+1盐酸50mL 中，用水稀释定容至1000mL ，或准确称取4.979g 硫酸亚铁(FeSO4·7H2O) 溶于l00m L 水中，加入5mL 浓硫酸微热溶解，用水定容至l000mL ，或准确称取7.020g 硫酸亚铁铵((NH4)2Fe(SO4) 2·6H 2O ，溶于（1+1）硫酸50mL 中，转移至1000mL ，摇匀，
得标准贮备液。
（5）铁标准工作液：10μg /mL。吸取铁标准贮备液10mL ，定容至1000mL 。
四、实验步骤
1、样品处理：称取均匀植物样品10.0g ，干法或湿法消化后，加入2mL1+1盐酸，在水浴上蒸干，再加入5mL 蒸馏水，加热煮沸后移入100mL 容量瓶中，以水定容，混匀。
2、标准曲线绘制：吸取10μg ／mL 铁标准溶液(标准溶液吸取量可根据样品含铁量高低来确定)0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于25mL 容量瓶中，加入1mol ／L 盐酸溶液1mL ，10％盐酸羟胺1m1，0.12％邻二氮菲lmL ，然后加入10％醋酸钠5mL ，用水稀释至刻度，摇匀，以不加铁的试剂空白溶液作参比液，在510nm 波长处，用1cm 比色皿测吸光度，绘制标准曲线。
3、样品测定：准确吸取样液5-10mL (视含铁量高低而定) 于25mL 容量瓶中，以下按标准曲线绘制操作，测定吸光度，在标准曲线上查出相对应的铁含量(μg) 。
五、结果计算
m0
X= --------------×100
V1
m ×------
V2
式中：X---样品中铁的含量，ｕg/100g；
m 0---从标准曲线上查得测定用样液相应的铁含量，ｕg ；
V1---测定用样液体积，mL ；
V2---样液定容总体积，mL ；
m ---样品质量，g 。
实验十 植株中铁含量的测定
一、实验目的
1、掌握分光光度计的使用方法和测定原理。
2、掌握标准曲线的绘制方法。
二、实验原理
在pH2-9的溶液中，二价铁离子能与邻二氮菲生成稳定的橙红色络合物，在510nm 有最大吸收，其吸光度与铁的含量成正比，故可比色测定。反应式如下：
pH ＜2时反应进行较慢，而且酸度过低又会引起二价铁离子水解，故反应通常在pH ＝5左右的微酸条件下进行。此反应可用于微量Fe2+的测定，如果铁以Fe3+的形式存在，则应预先加入还原剂盐酸羟胺或对苯二酚将Fe3+还原成Fe2+。
三、仪器和试剂
1、仪器：分光光度计
2、试剂
(1) 10％盐酸羟胺溶液（新配）
(2) 0.12％邻二氮菲水溶液：避光保存，溶液颜色变暗时即不能使用
(3) 10％醋酸钠溶液
（4）铁标准贮备液：1000μg /mL。准确称取1.000g 纯金属铁溶于1+1盐酸50mL 中，用水稀释定容至1000mL ，或准确称取4.979g 硫酸亚铁(FeSO4·7H2O) 溶于l00m L 水中，加入5mL 浓硫酸微热溶解，用水定容至l000mL ，或准确称取7.020g 硫酸亚铁铵((NH4)2Fe(SO4) 2·6H 2O ，溶于（1+1）硫酸50mL 中，转移至1000mL ，摇匀，
得标准贮备液。
（5）铁标准工作液：10μg /mL。吸取铁标准贮备液10mL ，定容至1000mL 。
四、实验步骤
1、样品处理：称取均匀植物样品10.0g ，干法或湿法消化后，加入2mL1+1盐酸，在水浴上蒸干，再加入5mL 蒸馏水，加热煮沸后移入100mL 容量瓶中，以水定容，混匀。
2、标准曲线绘制：吸取10μg ／mL 铁标准溶液(标准溶液吸取量可根据样品含铁量高低来确定)0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于25mL 容量瓶中，加入1mol ／L 盐酸溶液1mL ，10％盐酸羟胺1m1，0.12％邻二氮菲lmL ，然后加入10％醋酸钠5mL ，用水稀释至刻度，摇匀，以不加铁的试剂空白溶液作参比液，在510nm 波长处，用1cm 比色皿测吸光度，绘制标准曲线。
3、样品测定：准确吸取样液5-10mL (视含铁量高低而定) 于25mL 容量瓶中，以下按标准曲线绘制操作，测定吸光度，在标准曲线上查出相对应的铁含量(μg) 。
五、结果计算
m0
X= --------------×100
V1
m ×------
V2
式中：X---样品中铁的含量，ｕg/100g；
m 0---从标准曲线上查得测定用样液相应的铁含量，ｕg ；
V1---测定用样液体积，mL ；
V2---样液定容总体积，mL ；
m ---样品质量，g 。