种子培养基:每升含葡萄糖60g,KH2PO4 2.5g , MgSO4.7H2O 0.5g (NH4)2SO4 5g ,玉米浆30g ,pH 7.2 115℃ 20min
发酵培养基:每升含葡萄糖70g, KH2PO4 2.5g, K2HPO4 2.5g, MgSO4.7H2O 0.5g, (NH4)2SO4 25g ,玉米浆45g ,pH7.0
(四)罐上的工艺控制
1)预热:打开夹套蒸汽进汽阀,微开排污阀,将罐温加热至100℃
2)灭菌:关闭夹套蒸汽进汽阀,开启蒸汽进罐阀,使罐温升至121℃;打开空气管路蒸汽阀门对空气过滤器进行灭菌;调整蒸汽进罐阀、排气阀的开度使罐压保持在0.12MPa左右(如此时温度与121℃相差较大,则可用121℃重新标定罐内温度);保持30min;关闭所有蒸汽阀门,让罐压下降至0.01MPa,打开空气进气阀,引无菌空气保压(0.03~0.05MPa),确保罐压小于过滤器空气压。
3)发酵准备阶段:开启冷却模式,开启进水阀,快速降温至28℃;退出冷却模式,开启发酵模式,保温运作;开启搅拌器(100rpm),如果排气阀没有过度的逃液,则可加大搅拌速率,或加大空气进气量。
4)发酵:采用火焰法接种,调节排气阀、进气阀开度,还有搅拌器速率,在不过分逃液的前提下,保持较高的DO值;发酵过程中微开取样管路(蒸汽进罐阀紧闭)保持较小的蒸汽排出(时刻保持取样管路无菌)。
5)取样:关闭蒸汽排出阀,关闭蒸汽进汽阀,开启蒸汽排出阀,开启蒸汽进罐阀,并调节该两阀门的开度使发酵液以适宜的流量流出,用三角瓶接约20mL;关闭蒸汽进罐阀门,开启蒸汽进汽阀。
6)放罐:关闭空气进气管路,开启夹套加热管路,关闭冷凝水管路,关闭蒸汽排出阀,引蒸汽进罐,待罐温升至100℃后,计时3min;关闭蒸汽进罐阀,关闭蒸汽进汽阀;开启空气进气管路,开启蒸汽进罐阀,利用压强将液体放出;放完后,关闭空气进气管路;通自来水按以上步骤洗罐3次;通入自来水,待下次发酵开始。
种子培养基:每升含葡萄糖60g,KH2PO4 2.5g , MgSO4.7H2O 0.5g (NH4)2SO4 5g ,玉米浆30g ,pH 7.2 115℃ 20min
发酵培养基:每升含葡萄糖70g, KH2PO4 2.5g, K2HPO4 2.5g, MgSO4.7H2O 0.5g, (NH4)2SO4 25g ,玉米浆45g ,pH7.0
(四)罐上的工艺控制
1)预热:打开夹套蒸汽进汽阀,微开排污阀,将罐温加热至100℃
2)灭菌:关闭夹套蒸汽进汽阀,开启蒸汽进罐阀,使罐温升至121℃;打开空气管路蒸汽阀门对空气过滤器进行灭菌;调整蒸汽进罐阀、排气阀的开度使罐压保持在0.12MPa左右(如此时温度与121℃相差较大,则可用121℃重新标定罐内温度);保持30min;关闭所有蒸汽阀门,让罐压下降至0.01MPa,打开空气进气阀,引无菌空气保压(0.03~0.05MPa),确保罐压小于过滤器空气压。
3)发酵准备阶段:开启冷却模式,开启进水阀,快速降温至28℃;退出冷却模式,开启发酵模式,保温运作;开启搅拌器(100rpm),如果排气阀没有过度的逃液,则可加大搅拌速率,或加大空气进气量。
4)发酵:采用火焰法接种,调节排气阀、进气阀开度,还有搅拌器速率,在不过分逃液的前提下,保持较高的DO值;发酵过程中微开取样管路(蒸汽进罐阀紧闭)保持较小的蒸汽排出(时刻保持取样管路无菌)。
5)取样:关闭蒸汽排出阀,关闭蒸汽进汽阀,开启蒸汽排出阀,开启蒸汽进罐阀,并调节该两阀门的开度使发酵液以适宜的流量流出,用三角瓶接约20mL;关闭蒸汽进罐阀门,开启蒸汽进汽阀。
6)放罐:关闭空气进气管路,开启夹套加热管路,关闭冷凝水管路,关闭蒸汽排出阀,引蒸汽进罐,待罐温升至100℃后,计时3min;关闭蒸汽进罐阀,关闭蒸汽进汽阀;开启空气进气管路,开启蒸汽进罐阀,利用压强将液体放出;放完后,关闭空气进气管路;通自来水按以上步骤洗罐3次;通入自来水,待下次发酵开始。