中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2008年第29卷第5期339
液0.8mL。USP30版中由于相邻两管体积相差到约40μL,需用生理盐水补足溶液体积。本文方法相邻管只差10μL,可忽略不计,因此操作更为简便。计算结果时USP30版中需分别算出3个连续管中的肝素体积对数值的均数及其相对应的凝结程度的均数,较为繁琐,本文中采用比较供试品和标准品溶液的V1/2即可计算出供试品的效价。
本文对不同生产企业的共9批肝素钠原料、6批肝素钠注射液的效价用兔全血法与羊血浆法进行测定并作了比较,结果表明,用这两种方法测得的肝素钠及其制剂效价无显著性差异。对同一批肝素钠
原料用羊血浆法多次测定效价,结果重复性良好(RSD
[1] 中国药典[S].二部.2005:附录102.
[2] 郭凤仙,崔向珍,刘丽.不同浓度氯化钙溶液对羊血浆测定肝素
钠效价的影响[J].,2000,21(2):76278.
[3] 江燕,张力跃,周跃光,等.效价[J].(5):251.
[4]王磊,,[J].,2002,23(3):1492150.
薛巧如,梁蔚阳
(广东省药品检验所,广东广州510180)
摘 要:目的建立快速准确的测定氢化大豆油中脂肪酸组成的方法。方法以三氟化硼为酯化剂,采用气相色谱法,程序升温测定氢化大豆油中脂肪酸组成。结果8种脂肪酸能在20min内基线分离,线性、精密度、重现性良好。结论此法简单快捷,可用于氢化大豆油中脂肪酸组成的测定。 关键词:氢化大豆油;脂肪酸;气相色谱
中图分类号:TQ460.72 文献标识码:A 文章编号:100521678(2008)0520339203
DeterminationoffattyacidsinhydrogenatedsoybeanoilbyGC
XUEQiao2ru,LIANGWei2yang
(GuangdongProvincialInstituteforDrugControl,Guangzhou510180,China)
Abstract:PurposeTodevelopasimpleandaccuratedeterminationmethodofthefattyacidsinhydro2
genatedsoybeanoil.MethodsThefattyacidsfractionofoilwasdeterminedafterconversiontothecorrespond2ingfattyacidmethylestersusingborontrifluoridemethanolsolution14%byprogrammedGC.ResultsEightfattyacidsinhydrogenatedsoybeanoilcanbeidentifiedanddeterminedwithin20minutesbythismethod.Themethodshowsgoodlinearity,precisionandrecurrence.ConclusionThemethodissimpleandrapidforthedeterminationofthefattyacidsinhydrogenatedsoybeanoil.
Keywords:hydrogenatedsoybeanoil;fattyacids;gaschromatography
氢化大豆油为药用辅料,系豆科植物大豆(GlycinesoyaBentham)的种子提炼得到的大豆油经精炼、脱色、氢化和除臭而成。为白色至淡黄色的块
状物或粉末。国内未收载氢化大豆油质量标准,本
文参考美国药典(USP)[1],欧洲药典(EP)[2],按中国药典药品质量标准分析方法验证指导原则[3],采用气相色谱法[425]对氢化大豆油中的脂肪酸组成测定进行了考察和质量研究。1 仪器与试药1.1 仪器
收稿日期:2008201210
作者简介:薛巧如(19782),女,浙江嵊州人,主管药师,主要从事生化药品检验及质量标准研究。
340中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2008年第29卷第5期
Agilent6890N气相色谱仪,火焰离子化检测器;VarianCP2Sil88色谱柱(50m×0.25mm,0.20μm);AgilentDB2WAX色谱柱(15m×0.53mm,1μm)。1.2 试药与对照品
肉豆蔻酸(批号:125K0705)、棕榈酸(批号:105K1157)、亚油酸(批号:33H0423)、亚麻酸(批号:026K1588)、14%三氟化硼甲醇溶液,均为Sigma公
司;硬脂酸(批号:054K5303)、油酸(批号:095K1272),均为Sigma2Aldrich公司;花生酸(批号:10933),Fluka公司;二十二碳烷酸(批号:13830HD),Aldrich公司;氢化大豆油(批号:20060217,20060427,20061210),南海油脂工业(赤湾)有限公司;剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件
程序升,保持3min,以10℃/min的速至180℃,保持5.5min,以15℃/min的速率升温至215℃,保持3min。
载气:氮气,进样口温度250℃,检测器温度280℃,分流比50∶1,恒压模式:柱头压20psi。进样量0.2μL。理论板数按棕榈酸峰计算应不低于20000。2.2 供试品的制备
取氢化大豆油100mg,至50mL平底烧瓶中,加0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液4mL,水浴回流10min
,加14%三氟化硼甲醇溶液5mL,回流加热2min,放冷,加入正己烷5mL回流1min,冷却至室
温,加入饱和氯化钠溶液10mL,待分层,取上清,加少量无水硫酸钠脱水,取上清0.2μL注入气相色谱仪,记录色谱图。2.3 对照品溶液的制备精密称取肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、二十二碳烷酸、花生酸适量,至50mL平底烧瓶中,加0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液4mL,水浴回流10min,加14%三氟化硼甲醇溶液5mL,回流加热2min,放冷,加入正己烷5mL回流1min,冷却至室温,加入饱和氯化钠溶液10mL,待分层,取上清,用正己烷定容至5mL,加少量无水硫酸钠脱水,按美国药典限度比例精密量取并混合均匀。2.4 专属性
取甲酯化后混合对照品溶液注入气相色谱仪,各色谱峰分离度均大于2,硬脂酸甲酯理论板数为67404,如图1所示。
取供试品溶液注入气相色谱仪,各对照品峰分离度符合要求,如图2所示。
2.5 线性
取对照品溶液稀释至5个浓度,进样,以各脂肪酸浓度为X轴,相应峰面积为Y轴进行线性回归,结果见表1。2.6 精密度
取甲酯化后混合对照品溶液(含肉豆蔻酸0.25mg/mL、棕榈酸5.65mg/mL、硬脂酸40.21mg/mL、油酸2.00mg/mL、亚油酸0.49mg/mL、亚麻酸0.098mg/mL、二十二碳烷酸0.49mg/mL、花生酸0.20mg/mL)重复进样6次,按面积归一化法计算各组分百分含量。各成分RSD均小于2.0%。2.7 检测限
取对照品溶液,稀释至合适浓度,进样,记录信噪比为3∶1时相应的量。得各组分的检测限分别为
中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2008年第29卷第5期341
肉豆蔻酸0.5ng、棕榈酸1.1ng、硬脂酸0.8ng、油酸0.8ng、亚油酸1.0ng、亚麻酸1.0ng、二十二碳烷酸4.9ng、花生酸1.0ng。2.8 供试品测定结果
照2.2项下处理方法考察3批氢化大豆油供试品(批号20060217,20060427,20061210),按面积归一
化法计算各脂肪酸组成含量,结果见表2。2.9 耐用性 采用AgilentDB2WAX色谱柱(15m×0.53mm,1μm)对同3份供试品溶液进行测定。脂肪酸组成结果与VarianCP2Sil88色谱柱(50m×0.25mm,0.20μm)吻合,结果见表2。
表1 氢化大豆油脂肪酸组成检查对照品线性和回归方程结果
Tab1 Linearityrangesandtheirregressionequations
组分
肉豆蔻酸棕榈酸硬脂酸油酸亚油酸亚麻酸
二十二碳烷酸花生酸浓度范围/(mg/mL)0.0492～0.98441.1293～22.58788.0411～160.82360.4000～8.00000.098596960.3931.00.82.1560回归方程
Y=35.958X+3.29.+69.Y=905X+6.522Y=32.057X+1.716Y=17.192X+2.497Y=57.909X+3.658r60.99600.99490.99620.99560.99840.99760.9997
2 3批供试品脂肪酸含量(%,n=2)及美国药典限度规定
Tab2ofcompoundoffattyacidsinhydrogenatedsoybeanoilsampleandanalysisbyUSP30requirement
20060217
组 分
VarianCP2Sil88
AgilentDB2WAX0.030.15
12.1685.390.610.1100.420.67
批 号20060427色谱柱VarianAgilent
CP2Sil880.030.1411.9485.950.540.1100.420.58
DB2WAX0.030.1512.0085.790.560.1100.420.66
20061210VarianCP2Sil880.030.1412.2085.710.610.1200.340.55
AgilentDB2WAX0.030.1412.1885.700.600.1200.330.65
USP30
限度/%
碳链小于14的 饱和脂肪酸肉豆蔻酸棕榈酸硬脂酸油酸亚油酸亚麻酸
二十二碳烷酸花生酸
0.030.1412.1285.500.620.1100.410.62
≤0.1≤0.59.0～16.079.0～89.0≤4.0≤1.0≤0.2≤1.0≤1.0
3 讨 论
酸,出峰在花生酸(C20)之后。AgilentDB2WAX色谱柱为高极性柱,亚麻酸和花生酸出峰顺序与VarianCP2Sil88不同,亚麻酸出峰在花生酸之前。耐用性
氢化大豆油中主要含棕榈酸和硬脂酸,其余6
种脂肪酸均为需要控制限度的杂质,其中硬脂酸和油酸均为18个碳原子的脂肪酸,两者在色谱柱中保留时间比较接近,不易分离,使用本实验的色谱柱和条件能达到各脂肪酸甲酯完全基线分离。
欧洲药典方法为氢氧化钾甲醇皂化后萃取,未使用14%三氟化硼甲醇溶液回流,试验过程中氢氧化钾甲醇皂化后供试品呈泡沫状,分离及萃取困难,故试验采用三氟化硼甲醇溶液甲酯化,操作快速简单,重现性好。
VarianCP2Sil色谱柱适用于脂肪酸甲酯的检测,在该色谱条件下,直链碳饱和脂肪酸甲酯,随碳链的增加依次出峰,由于亚麻酸(C1823)为不饱和脂肪
考察结果各脂肪酸组成与原结果吻合,方法可行,考虑到使用不同的气相色谱柱,各对照品峰出峰的顺序可能会有不同,建议每次试验需用对照品定位。参考文献:
[1] USP[S].2006:1221.[2] EP[S].2002:195121952.
[3] 中国药典[S].二部.2005:附录1722附录173.
[4] 张四喜,邓树海,宋燕青,等.超临界CO2萃取蚕蛹多不饱和脂
肪酸的工艺研究[J].中国生化药物杂志,2007,28(4):2542256.
[5] 李群,周淑萍,丁锐,等.气相色谱法测定鱼多烯乙酯的含量
[J].中国生化药物杂志,2002,23(2):72274.
中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2008年第29卷第5期339
液0.8mL。USP30版中由于相邻两管体积相差到约40μL,需用生理盐水补足溶液体积。本文方法相邻管只差10μL,可忽略不计,因此操作更为简便。计算结果时USP30版中需分别算出3个连续管中的肝素体积对数值的均数及其相对应的凝结程度的均数,较为繁琐,本文中采用比较供试品和标准品溶液的V1/2即可计算出供试品的效价。
本文对不同生产企业的共9批肝素钠原料、6批肝素钠注射液的效价用兔全血法与羊血浆法进行测定并作了比较,结果表明,用这两种方法测得的肝素钠及其制剂效价无显著性差异。对同一批肝素钠
原料用羊血浆法多次测定效价,结果重复性良好(RSD
[1] 中国药典[S].二部.2005:附录102.
[2] 郭凤仙,崔向珍,刘丽.不同浓度氯化钙溶液对羊血浆测定肝素
钠效价的影响[J].,2000,21(2):76278.
[3] 江燕,张力跃,周跃光,等.效价[J].(5):251.
[4]王磊,,[J].,2002,23(3):1492150.
薛巧如,梁蔚阳
(广东省药品检验所,广东广州510180)
摘 要:目的建立快速准确的测定氢化大豆油中脂肪酸组成的方法。方法以三氟化硼为酯化剂,采用气相色谱法,程序升温测定氢化大豆油中脂肪酸组成。结果8种脂肪酸能在20min内基线分离,线性、精密度、重现性良好。结论此法简单快捷,可用于氢化大豆油中脂肪酸组成的测定。 关键词:氢化大豆油;脂肪酸;气相色谱
中图分类号:TQ460.72 文献标识码:A 文章编号:100521678(2008)0520339203
DeterminationoffattyacidsinhydrogenatedsoybeanoilbyGC
XUEQiao2ru,LIANGWei2yang
(GuangdongProvincialInstituteforDrugControl,Guangzhou510180,China)
Abstract:PurposeTodevelopasimpleandaccuratedeterminationmethodofthefattyacidsinhydro2
genatedsoybeanoil.MethodsThefattyacidsfractionofoilwasdeterminedafterconversiontothecorrespond2ingfattyacidmethylestersusingborontrifluoridemethanolsolution14%byprogrammedGC.ResultsEightfattyacidsinhydrogenatedsoybeanoilcanbeidentifiedanddeterminedwithin20minutesbythismethod.Themethodshowsgoodlinearity,precisionandrecurrence.ConclusionThemethodissimpleandrapidforthedeterminationofthefattyacidsinhydrogenatedsoybeanoil.
Keywords:hydrogenatedsoybeanoil;fattyacids;gaschromatography
氢化大豆油为药用辅料,系豆科植物大豆(GlycinesoyaBentham)的种子提炼得到的大豆油经精炼、脱色、氢化和除臭而成。为白色至淡黄色的块
状物或粉末。国内未收载氢化大豆油质量标准,本
文参考美国药典(USP)[1],欧洲药典(EP)[2],按中国药典药品质量标准分析方法验证指导原则[3],采用气相色谱法[425]对氢化大豆油中的脂肪酸组成测定进行了考察和质量研究。1 仪器与试药1.1 仪器
收稿日期:2008201210
作者简介:薛巧如(19782),女,浙江嵊州人,主管药师,主要从事生化药品检验及质量标准研究。
340中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2008年第29卷第5期
Agilent6890N气相色谱仪,火焰离子化检测器;VarianCP2Sil88色谱柱(50m×0.25mm,0.20μm);AgilentDB2WAX色谱柱(15m×0.53mm,1μm)。1.2 试药与对照品
肉豆蔻酸(批号:125K0705)、棕榈酸(批号:105K1157)、亚油酸(批号:33H0423)、亚麻酸(批号:026K1588)、14%三氟化硼甲醇溶液,均为Sigma公
司;硬脂酸(批号:054K5303)、油酸(批号:095K1272),均为Sigma2Aldrich公司;花生酸(批号:10933),Fluka公司;二十二碳烷酸(批号:13830HD),Aldrich公司;氢化大豆油(批号:20060217,20060427,20061210),南海油脂工业(赤湾)有限公司;剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件
程序升,保持3min,以10℃/min的速至180℃,保持5.5min,以15℃/min的速率升温至215℃,保持3min。
载气:氮气,进样口温度250℃,检测器温度280℃,分流比50∶1,恒压模式:柱头压20psi。进样量0.2μL。理论板数按棕榈酸峰计算应不低于20000。2.2 供试品的制备
取氢化大豆油100mg,至50mL平底烧瓶中,加0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液4mL,水浴回流10min
,加14%三氟化硼甲醇溶液5mL,回流加热2min,放冷,加入正己烷5mL回流1min,冷却至室
温,加入饱和氯化钠溶液10mL,待分层,取上清,加少量无水硫酸钠脱水,取上清0.2μL注入气相色谱仪,记录色谱图。2.3 对照品溶液的制备精密称取肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、二十二碳烷酸、花生酸适量,至50mL平底烧瓶中,加0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液4mL,水浴回流10min,加14%三氟化硼甲醇溶液5mL,回流加热2min,放冷,加入正己烷5mL回流1min,冷却至室温,加入饱和氯化钠溶液10mL,待分层,取上清,用正己烷定容至5mL,加少量无水硫酸钠脱水,按美国药典限度比例精密量取并混合均匀。2.4 专属性
取甲酯化后混合对照品溶液注入气相色谱仪,各色谱峰分离度均大于2,硬脂酸甲酯理论板数为67404,如图1所示。
取供试品溶液注入气相色谱仪,各对照品峰分离度符合要求,如图2所示。
2.5 线性
取对照品溶液稀释至5个浓度,进样,以各脂肪酸浓度为X轴,相应峰面积为Y轴进行线性回归,结果见表1。2.6 精密度
取甲酯化后混合对照品溶液(含肉豆蔻酸0.25mg/mL、棕榈酸5.65mg/mL、硬脂酸40.21mg/mL、油酸2.00mg/mL、亚油酸0.49mg/mL、亚麻酸0.098mg/mL、二十二碳烷酸0.49mg/mL、花生酸0.20mg/mL)重复进样6次,按面积归一化法计算各组分百分含量。各成分RSD均小于2.0%。2.7 检测限
取对照品溶液,稀释至合适浓度,进样,记录信噪比为3∶1时相应的量。得各组分的检测限分别为
中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2008年第29卷第5期341
肉豆蔻酸0.5ng、棕榈酸1.1ng、硬脂酸0.8ng、油酸0.8ng、亚油酸1.0ng、亚麻酸1.0ng、二十二碳烷酸4.9ng、花生酸1.0ng。2.8 供试品测定结果
照2.2项下处理方法考察3批氢化大豆油供试品(批号20060217,20060427,20061210),按面积归一
化法计算各脂肪酸组成含量,结果见表2。2.9 耐用性 采用AgilentDB2WAX色谱柱(15m×0.53mm,1μm)对同3份供试品溶液进行测定。脂肪酸组成结果与VarianCP2Sil88色谱柱(50m×0.25mm,0.20μm)吻合,结果见表2。
表1 氢化大豆油脂肪酸组成检查对照品线性和回归方程结果
Tab1 Linearityrangesandtheirregressionequations
组分
肉豆蔻酸棕榈酸硬脂酸油酸亚油酸亚麻酸
二十二碳烷酸花生酸浓度范围/(mg/mL)0.0492～0.98441.1293～22.58788.0411～160.82360.4000～8.00000.098596960.3931.00.82.1560回归方程
Y=35.958X+3.29.+69.Y=905X+6.522Y=32.057X+1.716Y=17.192X+2.497Y=57.909X+3.658r60.99600.99490.99620.99560.99840.99760.9997
2 3批供试品脂肪酸含量(%,n=2)及美国药典限度规定
Tab2ofcompoundoffattyacidsinhydrogenatedsoybeanoilsampleandanalysisbyUSP30requirement
20060217
组 分
VarianCP2Sil88
AgilentDB2WAX0.030.15
12.1685.390.610.1100.420.67
批 号20060427色谱柱VarianAgilent
CP2Sil880.030.1411.9485.950.540.1100.420.58
DB2WAX0.030.1512.0085.790.560.1100.420.66
20061210VarianCP2Sil880.030.1412.2085.710.610.1200.340.55
AgilentDB2WAX0.030.1412.1885.700.600.1200.330.65
USP30
限度/%
碳链小于14的 饱和脂肪酸肉豆蔻酸棕榈酸硬脂酸油酸亚油酸亚麻酸
二十二碳烷酸花生酸
0.030.1412.1285.500.620.1100.410.62
≤0.1≤0.59.0～16.079.0～89.0≤4.0≤1.0≤0.2≤1.0≤1.0
3 讨 论
酸,出峰在花生酸(C20)之后。AgilentDB2WAX色谱柱为高极性柱,亚麻酸和花生酸出峰顺序与VarianCP2Sil88不同,亚麻酸出峰在花生酸之前。耐用性
氢化大豆油中主要含棕榈酸和硬脂酸,其余6
种脂肪酸均为需要控制限度的杂质,其中硬脂酸和油酸均为18个碳原子的脂肪酸,两者在色谱柱中保留时间比较接近,不易分离,使用本实验的色谱柱和条件能达到各脂肪酸甲酯完全基线分离。
欧洲药典方法为氢氧化钾甲醇皂化后萃取,未使用14%三氟化硼甲醇溶液回流,试验过程中氢氧化钾甲醇皂化后供试品呈泡沫状,分离及萃取困难,故试验采用三氟化硼甲醇溶液甲酯化,操作快速简单,重现性好。
VarianCP2Sil色谱柱适用于脂肪酸甲酯的检测,在该色谱条件下,直链碳饱和脂肪酸甲酯,随碳链的增加依次出峰,由于亚麻酸(C1823)为不饱和脂肪
考察结果各脂肪酸组成与原结果吻合,方法可行,考虑到使用不同的气相色谱柱,各对照品峰出峰的顺序可能会有不同,建议每次试验需用对照品定位。参考文献:
[1] USP[S].2006:1221.[2] EP[S].2002:195121952.
[3] 中国药典[S].二部.2005:附录1722附录173.
[4] 张四喜,邓树海,宋燕青,等.超临界CO2萃取蚕蛹多不饱和脂
肪酸的工艺研究[J].中国生化药物杂志,2007,28(4):2542256.
[5] 李群,周淑萍,丁锐,等.气相色谱法测定鱼多烯乙酯的含量
[J].中国生化药物杂志,2002,23(2):72274.