谱都表明含有效成分栀子苷, 可为其药材鉴材别及开发利用提供有力的科学依据. 见图5
。
中薄壁细胞是否呈明显链珠状等特征来区分三者; 茎的粗细, 皮层宽窄及石细胞散在或成环带、木部和髓部宽窄程度, 髓部草酸钙簇晶的有无或多少及晶鞘纤维的存在与否等特征可用来区分三者。从而为三种栀子属植物根和茎药材质量标准的规范化奠定坚实的基础。参考文献
[1]江苏新医学院. 中药大辞典(下册) [M].上海:上海科学技术
出版社, 1986:1989.
[2]中国医学科学院药物研究所等[M].中药志(第三册) . 北京:
人民卫生出版社, 1984:578.
[3]谢宗万. 水栀子的品种考证及品质评价刍议[J ].中药材,
1991, 14(7) :45.
[4]付小梅, 赖学文, 葛菲, 等. 中药栀子类药材资源调查和商品药
图5 三种栀子属植物的根和茎的薄层层析图
F i g 5 The T LC chr omat ogra m of r oots and ste m s of Zhi 2zi de 2rived fr om three Gardenia s pecies
1. 栀子根 2. 栀子茎 3. 重瓣栀子根 4. 栀子苷 5. 重瓣栀子茎 6. 水栀子根 7. 水栀子茎
1. r oot of Zhi 2zi 2. ste m of Zhi 2zi 3. r oot of Zhongban Zhi 2zi 4. geni 2poside 5. ste m of Zhongban Zhi 2zi 6. r oot of Shui Zhi 2zi 7. ste m of Shui Zhi 2zi
材鉴定[J ].中国野生植物资源, 2002, 21(5) :23.
[5]付小梅, 葛菲, 褚小兰, 等. 栀子和水栀子利胆抗炎作用的对比
研究[J ].江西中医学院学报, 2001, 14(4) :165.
[6]付小梅, 葛菲, 褚小兰, 等. 山栀子与水栀子的形态组织学研究
[J ].中国药业. 2001, 10(5) :53.
[7], , . [23(12) :754.
[8]. 浙江药用植物志[M].下册. 浙
4. 4 三种栀子属植物的根和茎在性状、, 1974:1212.
收稿日期:2004209202
明显差异, 列数, , 石斛中石斛多糖的提取工艺研究
钱叶, 吕不望(杭州胡庆余堂药业有限公司, 浙江 杭州
310016)
摘要:目的 研究石斛中石斛多糖的提取工艺。方法 采用正交试验法进行优选, 紫外分光光度法测定多糖含量。结果 粉碎度、提取次数和加水量因素对石斛中石斛多糖的提取有显著性影响。结论 石斛中石斛多糖的最佳提取工艺为将药材粉碎至粗粉, 加水20倍量, 提取4次, 每次8h 。关键词:石斛; 正交试验; 石斛多糖; 紫外分光光度法
中图分类号:R282. 710. 2 文献标识码:A 文章编号:100727693(2005) 0420293202
Study on extracti on process of polys acchar i de from Caulis D endrob ii
m aceutical Co . , L td, Hangzhou 310016, China ) Q I A N Ye, LV Bu 2wang (Hangzhou Hu Q ing Yu Tang Phar
ABSTRACT:OBJECT I VE To study the extracti on p r ocess of polysaccharide fr om Caulis Dendr obii . M ETHOD The op ti m u m ex 2tracti on p r ocess was selected with the orthogonal design . The content of polysaccharide was deter m ined by UV 2s pectr ophot ometry . RE 2SU L TS After breaking, the ti m es of extracting and the a mount of water had marked influence on the extracti on of polysaccharide fr om Caulis Dendr obii . CO NCL US I O N The op ti m u m extracti on p r ocess of polysaccharide fr om Caulis Dendr obii was as f oll owing:grind Caulis Dendr obii t o r ough grains, adding 20ti m es water, extracting 4ti m es and 8hours each ti m e . KE Y WO R D S:Caulis Dendr obii; orthogonal design; polysaccharide; UV 2s pectr ophot ometry
石斛为兰科植物环草石斛、马鞭石斛、黄草石斛、铁皮石斛或金钗石斛的新鲜或干燥茎, 为一常用补阴药, 具有益胃
・293・
中国现代应用药学杂志2005年8月第22卷第4期 Chin J MAP, 2005August, Vol . 22No . 4
生津, 滋阴清热的功能, 其主要化学成分为多糖及生物碱。近年来研究表明, 石斛多糖是石斛强壮作用的有效成分, 能增强机体免疫功能, 并具有抗肿瘤活性[1]。笔者通过正交试验优选提取石斛中石斛多糖的最佳工艺。
1 仪器与材料
751-G W 型紫外分光光度计(惠普上海分析仪器有限
6份, 按以上方法测定, RS D 为0. 98%。2. 3 结果
按正交试验条件进行试验, 计算多糖含量, 并将结果进行方差分析, 结果见表2、表3。从表中可知, A Ⅲj >A Ⅱj >
A Ⅰj , B Ⅲj >BⅡj >B Ⅰj , C Ⅲj >C Ⅱj >C Ⅰj , D Ⅲj >D Ⅱj >D Ⅰj , 各因
素影响程度依次为D >C >A>B, 因而石斛中石斛多糖最佳的提取条件是A 3B 3C 3D 3, 其中D 和C, A 因素对石斛中石斛多糖的提取分别有非常显著和显著性影响。表2 正交试验设计及结果表
Tab 2 O rthogonal design and results 试验号
1
23456789
A 1112223316. 19. 19. 2.
B 1231231254. 56. 18. 18. 18. 0.
C 1232313153. 62. 16. 17. 20. 4.
D 1233122348. 49. 66. 16. 16. 22. 5.
公司) ; 石斛药材经鉴定为铁皮石斛D endrobium candidum
W all . ex L indl . 的干燥茎; 化学试剂均为分析纯。2 方法与结果2. 1 正交实验设计
根据多糖性能, 选用水煎煮工艺, 选择提取时的加水量、提取时间、提取次数、药材粉碎度4个试验因素, 每个因素3个水平进行优选, 采用L 9(34) 表对石斛进行石斛多糖的提取和测定, 并作为考察指标。因素水平表见表1。表1 试验因素与水平
Tab 1 Fact ors and levels in the experi m ent
因素
水平
123
A 加水量() 102030
B 提取
C 提取
石斛多糖的
含量(%)
11. 14. 23. 22. 19. 15. 20. 21. 17.
[***********]037004291
时间(h )
468
次数
234
D 粉碎度
饮片0. 5c m 2. 2 实验方法
2. 2. 1 样品的提取 , L 9(34) 表
j
j ⅡⅢj
R
条件进行提取, 1. 05, 加4倍量乙醇使沉淀, 混匀5m in 后, 以3000r/min 离心5m in, 弃去上清液:残渣用体积分数为80%乙醇溶液数毫升洗涤, 离心后弃去上清液, 反复操作3～4次, 真空干燥, 得多糖粗品。
2. 2. 2 样品测定方法 取经105℃干燥至恒重的粗多糖约50mg, 精密称定, 置于50mL 量瓶中, 加水溶解, 并稀释至刻
[***********][***********][***********]0914ρyi =165. 318
i =1
607
2
266=3036. 671
9
638
202ρyi 2=3153. 777
i =1
937
表3 方差分析表
Tab 3 Variance analysis 方差来源
A
B C D
离差平方和
16. 0. 33. 66. 0.
[**************]
自由度
22222
方差
8. 0. 16. 33. 0.
[**************]
F 值
显著性
(P ) 0.
05050501
度, 摇匀, 精密量取10mL, 置于100mL 量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 备用, 准确吸取样品测定液2. 0mL, 置于25mL 比色管中, 加入50g/L苯酚溶液1. 0mL , 在旋转混匀器上混匀, 小心加入浓硫酸10. 0mL, 于旋转混匀器上小心混匀, 置沸水浴中煮沸10m in, 取出, 冷却至室温后用分光光度计在485n m 波长处测定吸收度
[2]
32. 62166. 24130. 51
误差
注:F 1-0. 05(2, 2) =19. 00, F 1-0. 01(2, 2) =99. 00
3 讨论
。
从L 9(34) 正交表对石斛中石斛多糖提取工艺的比较结果看, 影响石斛多糖含量的因素依次为粉碎度>提取次数>加水量>提取时间, 最佳提取条件为A 3B 3C 3D 3, 但根据计算, A 因素2, 3水平间几乎在同一数量级, 从省时节能, 降低成本的角度考虑, 选择A 2B 3C 3D 3, 即石斛中石斛多糖的最佳提取条件为将药材粉碎至粗粉, 加水20倍量, 提取4次, 每次8h 。参考文献
[1]黄民权, 蔡体育, 刘庆伦. 铁皮石斛多糖对小白鼠白细胞和淋
2. 2. 3 标准曲线 精密称取经105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg, 置100mL 量瓶中, 加水适量使溶解, 稀释至刻度, 摇
匀, 精密吸取10mL, 置100mL 量瓶中, 加水至刻度, 摇匀, 备用, 此标准溶液l m L 含葡萄糖0. 1mg 。
准确吸取葡萄糖标准溶液0, 0. 2, 0. 4, 0. 6, 0. 8, 1. 0mL
(相当于葡萄糖0, 0. 02, 0. 04, 0. 06, 0. 08, 0. 1mg ) , 分别置于25mL 比色管中, 准确补充水至2. 0mL, 加入50g/L苯酚溶液1. 0mL, 在旋转混匀器上混匀, 小心加入浓硫酸10. 0mL, 于旋
转混匀器上小心混匀, 置沸水浴中煮沸10m in, 取出, 冷却至室温后用分光光度计在485n m 波长处测定吸收度, 以吸收度值为Y, 葡萄糖浓度为X, 得回归方程:Y =0. 00900+
0. 00567X, r =-0. 9996。
2. 2. 4 重复性试验 取在某一试验水平获得的粗多糖样品・294・
巴细胞移动抑制因子的影响[J ].天然产物研究与开发,
1996, 8(3) :39.
[2]王光亚. 粗多糖的测定方法———分光光度法[J ].保健食品功
效成分的检测方法. 北京:中国轻工业出版社, 2002:19223.
收稿日期:2003210215
Chin J MAP, 2005August, Vol . 22No . 4 中国现代应用药学杂志2005年8月第22卷第4期
谱都表明含有效成分栀子苷, 可为其药材鉴材别及开发利用提供有力的科学依据. 见图5
。
中薄壁细胞是否呈明显链珠状等特征来区分三者; 茎的粗细, 皮层宽窄及石细胞散在或成环带、木部和髓部宽窄程度, 髓部草酸钙簇晶的有无或多少及晶鞘纤维的存在与否等特征可用来区分三者。从而为三种栀子属植物根和茎药材质量标准的规范化奠定坚实的基础。参考文献
[1]江苏新医学院. 中药大辞典(下册) [M].上海:上海科学技术
出版社, 1986:1989.
[2]中国医学科学院药物研究所等[M].中药志(第三册) . 北京:
人民卫生出版社, 1984:578.
[3]谢宗万. 水栀子的品种考证及品质评价刍议[J ].中药材,
1991, 14(7) :45.
[4]付小梅, 赖学文, 葛菲, 等. 中药栀子类药材资源调查和商品药
图5 三种栀子属植物的根和茎的薄层层析图
F i g 5 The T LC chr omat ogra m of r oots and ste m s of Zhi 2zi de 2rived fr om three Gardenia s pecies
1. 栀子根 2. 栀子茎 3. 重瓣栀子根 4. 栀子苷 5. 重瓣栀子茎 6. 水栀子根 7. 水栀子茎
1. r oot of Zhi 2zi 2. ste m of Zhi 2zi 3. r oot of Zhongban Zhi 2zi 4. geni 2poside 5. ste m of Zhongban Zhi 2zi 6. r oot of Shui Zhi 2zi 7. ste m of Shui Zhi 2zi
材鉴定[J ].中国野生植物资源, 2002, 21(5) :23.
[5]付小梅, 葛菲, 褚小兰, 等. 栀子和水栀子利胆抗炎作用的对比
研究[J ].江西中医学院学报, 2001, 14(4) :165.
[6]付小梅, 葛菲, 褚小兰, 等. 山栀子与水栀子的形态组织学研究
[J ].中国药业. 2001, 10(5) :53.
[7], , . [23(12) :754.
[8]. 浙江药用植物志[M].下册. 浙
4. 4 三种栀子属植物的根和茎在性状、, 1974:1212.
收稿日期:2004209202
明显差异, 列数, , 石斛中石斛多糖的提取工艺研究
钱叶, 吕不望(杭州胡庆余堂药业有限公司, 浙江 杭州
310016)
摘要:目的 研究石斛中石斛多糖的提取工艺。方法 采用正交试验法进行优选, 紫外分光光度法测定多糖含量。结果 粉碎度、提取次数和加水量因素对石斛中石斛多糖的提取有显著性影响。结论 石斛中石斛多糖的最佳提取工艺为将药材粉碎至粗粉, 加水20倍量, 提取4次, 每次8h 。关键词:石斛; 正交试验; 石斛多糖; 紫外分光光度法
中图分类号:R282. 710. 2 文献标识码:A 文章编号:100727693(2005) 0420293202
Study on extracti on process of polys acchar i de from Caulis D endrob ii
m aceutical Co . , L td, Hangzhou 310016, China ) Q I A N Ye, LV Bu 2wang (Hangzhou Hu Q ing Yu Tang Phar
ABSTRACT:OBJECT I VE To study the extracti on p r ocess of polysaccharide fr om Caulis Dendr obii . M ETHOD The op ti m u m ex 2tracti on p r ocess was selected with the orthogonal design . The content of polysaccharide was deter m ined by UV 2s pectr ophot ometry . RE 2SU L TS After breaking, the ti m es of extracting and the a mount of water had marked influence on the extracti on of polysaccharide fr om Caulis Dendr obii . CO NCL US I O N The op ti m u m extracti on p r ocess of polysaccharide fr om Caulis Dendr obii was as f oll owing:grind Caulis Dendr obii t o r ough grains, adding 20ti m es water, extracting 4ti m es and 8hours each ti m e . KE Y WO R D S:Caulis Dendr obii; orthogonal design; polysaccharide; UV 2s pectr ophot ometry
石斛为兰科植物环草石斛、马鞭石斛、黄草石斛、铁皮石斛或金钗石斛的新鲜或干燥茎, 为一常用补阴药, 具有益胃
・293・
中国现代应用药学杂志2005年8月第22卷第4期 Chin J MAP, 2005August, Vol . 22No . 4
生津, 滋阴清热的功能, 其主要化学成分为多糖及生物碱。近年来研究表明, 石斛多糖是石斛强壮作用的有效成分, 能增强机体免疫功能, 并具有抗肿瘤活性[1]。笔者通过正交试验优选提取石斛中石斛多糖的最佳工艺。
1 仪器与材料
751-G W 型紫外分光光度计(惠普上海分析仪器有限
6份, 按以上方法测定, RS D 为0. 98%。2. 3 结果
按正交试验条件进行试验, 计算多糖含量, 并将结果进行方差分析, 结果见表2、表3。从表中可知, A Ⅲj >A Ⅱj >
A Ⅰj , B Ⅲj >BⅡj >B Ⅰj , C Ⅲj >C Ⅱj >C Ⅰj , D Ⅲj >D Ⅱj >D Ⅰj , 各因
素影响程度依次为D >C >A>B, 因而石斛中石斛多糖最佳的提取条件是A 3B 3C 3D 3, 其中D 和C, A 因素对石斛中石斛多糖的提取分别有非常显著和显著性影响。表2 正交试验设计及结果表
Tab 2 O rthogonal design and results 试验号
1
23456789
A 1112223316. 19. 19. 2.
B 1231231254. 56. 18. 18. 18. 0.
C 1232313153. 62. 16. 17. 20. 4.
D 1233122348. 49. 66. 16. 16. 22. 5.
公司) ; 石斛药材经鉴定为铁皮石斛D endrobium candidum
W all . ex L indl . 的干燥茎; 化学试剂均为分析纯。2 方法与结果2. 1 正交实验设计
根据多糖性能, 选用水煎煮工艺, 选择提取时的加水量、提取时间、提取次数、药材粉碎度4个试验因素, 每个因素3个水平进行优选, 采用L 9(34) 表对石斛进行石斛多糖的提取和测定, 并作为考察指标。因素水平表见表1。表1 试验因素与水平
Tab 1 Fact ors and levels in the experi m ent
因素
水平
123
A 加水量() 102030
B 提取
C 提取
石斛多糖的
含量(%)
11. 14. 23. 22. 19. 15. 20. 21. 17.
[***********]037004291
时间(h )
468
次数
234
D 粉碎度
饮片0. 5c m 2. 2 实验方法
2. 2. 1 样品的提取 , L 9(34) 表
j
j ⅡⅢj
R
条件进行提取, 1. 05, 加4倍量乙醇使沉淀, 混匀5m in 后, 以3000r/min 离心5m in, 弃去上清液:残渣用体积分数为80%乙醇溶液数毫升洗涤, 离心后弃去上清液, 反复操作3～4次, 真空干燥, 得多糖粗品。
2. 2. 2 样品测定方法 取经105℃干燥至恒重的粗多糖约50mg, 精密称定, 置于50mL 量瓶中, 加水溶解, 并稀释至刻
[***********][***********][***********]0914ρyi =165. 318
i =1
607
2
266=3036. 671
9
638
202ρyi 2=3153. 777
i =1
937
表3 方差分析表
Tab 3 Variance analysis 方差来源
A
B C D
离差平方和
16. 0. 33. 66. 0.
[**************]
自由度
22222
方差
8. 0. 16. 33. 0.
[**************]
F 值
显著性
(P ) 0.
05050501
度, 摇匀, 精密量取10mL, 置于100mL 量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 备用, 准确吸取样品测定液2. 0mL, 置于25mL 比色管中, 加入50g/L苯酚溶液1. 0mL , 在旋转混匀器上混匀, 小心加入浓硫酸10. 0mL, 于旋转混匀器上小心混匀, 置沸水浴中煮沸10m in, 取出, 冷却至室温后用分光光度计在485n m 波长处测定吸收度
[2]
32. 62166. 24130. 51
误差
注:F 1-0. 05(2, 2) =19. 00, F 1-0. 01(2, 2) =99. 00
3 讨论
。
从L 9(34) 正交表对石斛中石斛多糖提取工艺的比较结果看, 影响石斛多糖含量的因素依次为粉碎度>提取次数>加水量>提取时间, 最佳提取条件为A 3B 3C 3D 3, 但根据计算, A 因素2, 3水平间几乎在同一数量级, 从省时节能, 降低成本的角度考虑, 选择A 2B 3C 3D 3, 即石斛中石斛多糖的最佳提取条件为将药材粉碎至粗粉, 加水20倍量, 提取4次, 每次8h 。参考文献
[1]黄民权, 蔡体育, 刘庆伦. 铁皮石斛多糖对小白鼠白细胞和淋
2. 2. 3 标准曲线 精密称取经105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg, 置100mL 量瓶中, 加水适量使溶解, 稀释至刻度, 摇
匀, 精密吸取10mL, 置100mL 量瓶中, 加水至刻度, 摇匀, 备用, 此标准溶液l m L 含葡萄糖0. 1mg 。
准确吸取葡萄糖标准溶液0, 0. 2, 0. 4, 0. 6, 0. 8, 1. 0mL
(相当于葡萄糖0, 0. 02, 0. 04, 0. 06, 0. 08, 0. 1mg ) , 分别置于25mL 比色管中, 准确补充水至2. 0mL, 加入50g/L苯酚溶液1. 0mL, 在旋转混匀器上混匀, 小心加入浓硫酸10. 0mL, 于旋
转混匀器上小心混匀, 置沸水浴中煮沸10m in, 取出, 冷却至室温后用分光光度计在485n m 波长处测定吸收度, 以吸收度值为Y, 葡萄糖浓度为X, 得回归方程:Y =0. 00900+
0. 00567X, r =-0. 9996。
2. 2. 4 重复性试验 取在某一试验水平获得的粗多糖样品・294・
巴细胞移动抑制因子的影响[J ].天然产物研究与开发,
1996, 8(3) :39.
[2]王光亚. 粗多糖的测定方法———分光光度法[J ].保健食品功
效成分的检测方法. 北京:中国轻工业出版社, 2002:19223.
收稿日期:2003210215
Chin J MAP, 2005August, Vol . 22No . 4 中国现代应用药学杂志2005年8月第22卷第4期