土壤硝态氮的测定
酚二磺酸比色法
１ 原理 用饱和CaSO4·2H2O溶液浸提后，取一份浸出液在微碱性条件下蒸干，残渣用酚二磺酸试剂溶
－
解，此时NO3既与试剂生成硝基酚二磺酸：
C6H3OH（HSO3）2＋HNO3=C6H2OH（HSO3）2NO2＋H2O 2，4-酚二磺酸 6-硝基酚-2，4-二磺酸
此反应必须在无水的条件下才能迅速完成，产物在酸性介质中无色，碱化后为稳定的黄色盐溶液，可在400～425 nm处有最大吸收峰，用分光光度计比色测定。本法中Cl-为主要干扰物，但在15mg·L-1以下无影响，大于此范围可用AgSO4 消除（按0.1mg AgSO4可沉淀22.7mgCl-）。 ２ 仪器设备
分光光度计；水浴锅；蒸发皿，震荡机；三角瓶；容量瓶等。 ３ 试剂
３.１CaSO4·2H2O（分析纯、粉状） ３.２CaＣO３（分析纯、粉状）
３.３酚二磺酸试剂：25.0ｇ白色苯酚于500ml三角瓶，加225ml浓硫酸，混匀，瓶口松松的加塞，于沸水
浴加热６小时。试剂冷却后可能会有结晶，用时需重新加热溶解，但不可加水。必须贮于玻塞棕色瓶中，严防吸潮。
－
３.４NO３－Ｎ标准溶液：取0.1805ｇ120℃烘干2ｈ的KNO３溶解并定容于250ml，此为100mg·L-1，取
此液20ml，定容于200ml，为10mg·L-1标准液。
３.５其它试剂：１：１NH４OH；AgSO4；MgCO３ ４ 操作步骤
４.１提取：称取新鲜土样50克于500ml三角瓶，加250ml饱和硫酸钙（或风干土样５ｇ，加30ml饱和硫
－１
酸钙），加塞，于震荡机上震荡１０分钟，（24℃，150r·min），澄清10分钟后，过滤，将最初的２～３ｍｌ滤液弃去。同时做空白。
４.２吸取滤液10ｍｌ于蒸发皿中，加0.05gCaＣO３，水浴加热，蒸干后不要继续加热。冷却，迅速加入酚
二磺酸试剂２ｍｌ，旋转器皿，使试剂接触到所有蒸干物，静止10分钟，使其充分作用。
４.３向作用后的液体中加５ｍｌ水，用玻棒搅拌直到蒸干物完全溶解，洗入50ｍｌ容量瓶，冷却后缓缓
加入15ml１：１NH４OH（应保证NH４OH过量），定容后摇匀，溶液呈黄色。 ４.４用上清液于410nm处比色，空白调零。
４.５标准曲线绘制：取6支干洁试管编号，按下表加试剂，并按4.2~4.4操作，以浓度为横坐标，OD值
５ 结果计算
NO２―Ｎ（mg·L-1）＝浓度×液土比×
－
定容后体积
吸取反应液体积
本实验：液土比：５
定容后体积
＝５
吸取反应液体积
浓度：标准曲线查得（mg·L-1）。 ６ 注意事项
６.１土壤含cl超过15mg·kg-1浸出液需再用AgSO4处理，每100ml加０.１ｇAgSO4，震荡15分钟，再
加０.２ｇCa（OH）２和０.５ｇMgCO３以沉淀过剩的Ag+，震荡５分钟，过滤，吸取清液测定。
－－
６.２如NO２，超过１mg·kg-1，每10ｍｌ待测液加20ｍｇ尿素放置过夜以破坏之。NO２可用亚硝酸试
－
粉检查，５滴浸出液加0.1ｍｇ，放置10分钟，显出红色既有１mg·ｋｇ-1 NO２。 ６.３碱化时不用NaOH等，因NH３与Ag+可络合成水溶性物质，不会生成沉淀影响比色。
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土壤硝态氮的测定
酚二磺酸比色法
１ 原理 用饱和CaSO4·2H2O溶液浸提后，取一份浸出液在微碱性条件下蒸干，残渣用酚二磺酸试剂溶
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解，此时NO3既与试剂生成硝基酚二磺酸：
C6H3OH（HSO3）2＋HNO3=C6H2OH（HSO3）2NO2＋H2O 2，4-酚二磺酸 6-硝基酚-2，4-二磺酸
此反应必须在无水的条件下才能迅速完成，产物在酸性介质中无色，碱化后为稳定的黄色盐溶液，可在400～425 nm处有最大吸收峰，用分光光度计比色测定。本法中Cl-为主要干扰物，但在15mg·L-1以下无影响，大于此范围可用AgSO4 消除（按0.1mg AgSO4可沉淀22.7mgCl-）。 ２ 仪器设备
分光光度计；水浴锅；蒸发皿，震荡机；三角瓶；容量瓶等。 ３ 试剂
３.１CaSO4·2H2O（分析纯、粉状） ３.２CaＣO３（分析纯、粉状）
３.３酚二磺酸试剂：25.0ｇ白色苯酚于500ml三角瓶，加225ml浓硫酸，混匀，瓶口松松的加塞，于沸水
浴加热６小时。试剂冷却后可能会有结晶，用时需重新加热溶解，但不可加水。必须贮于玻塞棕色瓶中，严防吸潮。
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３.４NO３－Ｎ标准溶液：取0.1805ｇ120℃烘干2ｈ的KNO３溶解并定容于250ml，此为100mg·L-1，取
此液20ml，定容于200ml，为10mg·L-1标准液。
３.５其它试剂：１：１NH４OH；AgSO4；MgCO３ ４ 操作步骤
４.１提取：称取新鲜土样50克于500ml三角瓶，加250ml饱和硫酸钙（或风干土样５ｇ，加30ml饱和硫
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酸钙），加塞，于震荡机上震荡１０分钟，（24℃，150r·min），澄清10分钟后，过滤，将最初的２～３ｍｌ滤液弃去。同时做空白。
４.２吸取滤液10ｍｌ于蒸发皿中，加0.05gCaＣO３，水浴加热，蒸干后不要继续加热。冷却，迅速加入酚
二磺酸试剂２ｍｌ，旋转器皿，使试剂接触到所有蒸干物，静止10分钟，使其充分作用。
４.３向作用后的液体中加５ｍｌ水，用玻棒搅拌直到蒸干物完全溶解，洗入50ｍｌ容量瓶，冷却后缓缓
加入15ml１：１NH４OH（应保证NH４OH过量），定容后摇匀，溶液呈黄色。 ４.４用上清液于410nm处比色，空白调零。
４.５标准曲线绘制：取6支干洁试管编号，按下表加试剂，并按4.2~4.4操作，以浓度为横坐标，OD值
５ 结果计算
NO２―Ｎ（mg·L-1）＝浓度×液土比×
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定容后体积
吸取反应液体积
本实验：液土比：５
定容后体积
＝５
吸取反应液体积
浓度：标准曲线查得（mg·L-1）。 ６ 注意事项
６.１土壤含cl超过15mg·kg-1浸出液需再用AgSO4处理，每100ml加０.１ｇAgSO4，震荡15分钟，再
加０.２ｇCa（OH）２和０.５ｇMgCO３以沉淀过剩的Ag+，震荡５分钟，过滤，吸取清液测定。
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６.２如NO２，超过１mg·kg-1，每10ｍｌ待测液加20ｍｇ尿素放置过夜以破坏之。NO２可用亚硝酸试
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粉检查，５滴浸出液加0.1ｍｇ，放置10分钟，显出红色既有１mg·ｋｇ-1 NO２。 ６.３碱化时不用NaOH等，因NH３与Ag+可络合成水溶性物质，不会生成沉淀影响比色。
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