脱氢酶活性测定实验报告
TTC标准曲线的绘制：
TTC浓度(ug/mL) 8
吸光值A 0.041
16 0.186 24 0.298 32 0.312 40 0.456
土壤脱氢酶的吸光值记录：
由标准曲线可得相应TTC浓度为：2.0314 ug/mL
则土壤脱氢酶活性= ABC
= 2.0314*18*1
= 36.5652
式中：A为查出的TTC浓度(ug/mL)；B为培养时间校正值(18h);C为比色时稀释倍数(1)。
思考题：
1.影响脱氢酶活性的因素有哪些？
答：pH：每种酶都有最适pH，在此pH下，酶活性最大；
温度：酶活性随着温度的升高而增加，在最适温度时达到最高值，然
后开始下降；
激活剂：可以促进酶活性；
抑制剂：会使酶活性降低；
还有内因如底物浓度和酶浓度。
2.已知乳酸脱氢酶（LDH）在NAD+的递氢作用下，使乳酸脱氢生成丙酮酸。丙酮酸在碱性溶液中与2,4-二硝基苯肼生成2,4-二硝基苯腙使溶液呈蓝色。颜色的深浅与丙酮酸浓度成正比。请设计一个测定动物肝脏乳酸脱氢酶活性的实验。 答：1，校正曲线的制作：（1）按下表操作：
加入物(ml) B 1 2 3 4 5
丙酮酸标准液 0 0.025 0.05 0.1 0.15 0.2
底物缓冲液 0.5 0.475 0.45 0.4 0.35 0.3
去离子水 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11
二硝基苯肼 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
NaOH 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
相当于金氏单位 0 125 250 500 750 1000
（2）37度水浴15分钟，室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm，用B管调零，读取各管吸光度。以吸光度值为纵坐标，相应的酶活性单位为横坐标绘制校正曲线。
2，酶活性的测定：
（1）
加入物(ml) 测定管 对照管
血清 0.01 0.01
NAD＋底物缓冲液 0.5 0.5
（37度水浴5min）
NAD＋溶液 0.1 －
（37度水浴15min）
2,4二硝基苯肼 0.5 0.5
NAD＋溶液 － 0.1
（37度水浴15分钟）
0.4mol/L溶液 5.0 5.0
（2）
混匀，室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm，用蒸馏水调零，读取各管吸光度。以测定管与对照管吸光度之差值查校正曲线，得酶活性。 单位定义：以100ml血清，37度，作用底物15min，产生1umol丙酮酸为一个金氏单位。
脱氢酶活性测定实验报告
TTC标准曲线的绘制：
TTC浓度(ug/mL) 8
吸光值A 0.041
16 0.186 24 0.298 32 0.312 40 0.456
土壤脱氢酶的吸光值记录：
由标准曲线可得相应TTC浓度为：2.0314 ug/mL
则土壤脱氢酶活性= ABC
= 2.0314*18*1
= 36.5652
式中：A为查出的TTC浓度(ug/mL)；B为培养时间校正值(18h);C为比色时稀释倍数(1)。
思考题：
1.影响脱氢酶活性的因素有哪些？
答：pH：每种酶都有最适pH，在此pH下，酶活性最大；
温度：酶活性随着温度的升高而增加，在最适温度时达到最高值，然
后开始下降；
激活剂：可以促进酶活性；
抑制剂：会使酶活性降低；
还有内因如底物浓度和酶浓度。
2.已知乳酸脱氢酶（LDH）在NAD+的递氢作用下，使乳酸脱氢生成丙酮酸。丙酮酸在碱性溶液中与2,4-二硝基苯肼生成2,4-二硝基苯腙使溶液呈蓝色。颜色的深浅与丙酮酸浓度成正比。请设计一个测定动物肝脏乳酸脱氢酶活性的实验。 答：1，校正曲线的制作：（1）按下表操作：
加入物(ml) B 1 2 3 4 5
丙酮酸标准液 0 0.025 0.05 0.1 0.15 0.2
底物缓冲液 0.5 0.475 0.45 0.4 0.35 0.3
去离子水 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11
二硝基苯肼 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
NaOH 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
相当于金氏单位 0 125 250 500 750 1000
（2）37度水浴15分钟，室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm，用B管调零，读取各管吸光度。以吸光度值为纵坐标，相应的酶活性单位为横坐标绘制校正曲线。
2，酶活性的测定：
（1）
加入物(ml) 测定管 对照管
血清 0.01 0.01
NAD＋底物缓冲液 0.5 0.5
（37度水浴5min）
NAD＋溶液 0.1 －
（37度水浴15min）
2,4二硝基苯肼 0.5 0.5
NAD＋溶液 － 0.1
（37度水浴15分钟）
0.4mol/L溶液 5.0 5.0
（2）
混匀，室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm，用蒸馏水调零，读取各管吸光度。以测定管与对照管吸光度之差值查校正曲线，得酶活性。 单位定义：以100ml血清，37度，作用底物15min，产生1umol丙酮酸为一个金氏单位。