酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)
染色液简介：
酸性磷酸酶(acid phosphatase ，ACP) 分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法) 以萘酚AS-BI 为底物，在酸性pH 下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚与重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中。多用于新鲜血涂片、细胞涂片、冰冻切片等，亦可用于石蜡切片。
操作步骤(仅供参考) ：
(一) 血液、细胞涂片：
1、 推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至铺满
血膜为止。
2、 自然晾干，AS-BI 固定液4℃固定。 3、 水洗，稍微晾干(不易过分干燥) 。
4、 切片入ACP 孵育液，置于37℃温箱，避光浸染，水洗。 5、 复染：Lea 苏木素染色液染色或甲基绿染色液染色3min 。 6、 水洗、晾干、镜检。 (二) 冰冻切片：
1、 冰冻切片回温至37℃，水中浸泡1～2min 。 2、 自然晾干，AS-BI 固定液4℃固定。 3、 水洗，稍微晾干(不易过分干燥) 。
4、 切片入ACP 孵育液，置于37℃温箱，避光浸染45～60min ，水洗。 5、 复染：Lea 苏木素染色液染色或甲基绿染色液染色3min 。 6、 水洗、晾干、镜检。 (三) 石蜡切片：
1、 石蜡切片脱蜡5～10min ，重复一次。
2、 无水乙醇5min ，90%乙醇和70%乙醇各2min 。 3、 水洗2min 。
4、 自然晾干，AS-BI 固定液4℃固定。 5、 水洗，稍微晾干(不易过分干燥) 。
6、 切片入ACP 孵育液，置于37℃温箱，浸染，水洗。 7、 复染：Lea 苏木素染色液染色或甲基绿染色液染色3min 。 8、 水洗、晾干、镜检。
染色结果：
临床意义：
1、 毛细胞白血病的毛细胞ACP 染色呈强阳性或中度阳性，且不被酒石酸抑制。 2、 急性白血病幼单核细胞ACP 染色呈阳性，原淋巴细胞呈弱阳性，原粒细胞对ACP 反应
不一。
3、 T 淋巴细胞ACP 染色呈阳性，颗粒粗大、分布密集。B 淋巴细胞呈阴性或颗粒细小的
弱阳性。
4、 戈谢细胞呈强阳性，尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性。
注意事项：
1、 ACP 孵育液易失效，本法宜用皮肤穿刺血涂片，晾干后应及时染色 2、 对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。 3、 样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
4、 组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24h ，否则酶活性会减弱或消失。 5、 组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56℃。应使用熔点为52～54℃的石蜡进行浸蜡，浸
蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。
酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)
染色液简介：
酸性磷酸酶(acid phosphatase ，ACP) 分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法) 以萘酚AS-BI 为底物，在酸性pH 下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚与重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中。多用于新鲜血涂片、细胞涂片、冰冻切片等，亦可用于石蜡切片。
操作步骤(仅供参考) ：
(一) 血液、细胞涂片：
1、 推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至铺满
血膜为止。
2、 自然晾干，AS-BI 固定液4℃固定。 3、 水洗，稍微晾干(不易过分干燥) 。
4、 切片入ACP 孵育液，置于37℃温箱，避光浸染，水洗。 5、 复染：Lea 苏木素染色液染色或甲基绿染色液染色3min 。 6、 水洗、晾干、镜检。 (二) 冰冻切片：
1、 冰冻切片回温至37℃，水中浸泡1～2min 。 2、 自然晾干，AS-BI 固定液4℃固定。 3、 水洗，稍微晾干(不易过分干燥) 。
4、 切片入ACP 孵育液，置于37℃温箱，避光浸染45～60min ，水洗。 5、 复染：Lea 苏木素染色液染色或甲基绿染色液染色3min 。 6、 水洗、晾干、镜检。 (三) 石蜡切片：
1、 石蜡切片脱蜡5～10min ，重复一次。
2、 无水乙醇5min ，90%乙醇和70%乙醇各2min 。 3、 水洗2min 。
4、 自然晾干，AS-BI 固定液4℃固定。 5、 水洗，稍微晾干(不易过分干燥) 。
6、 切片入ACP 孵育液，置于37℃温箱，浸染，水洗。 7、 复染：Lea 苏木素染色液染色或甲基绿染色液染色3min 。 8、 水洗、晾干、镜检。
染色结果：
临床意义：
1、 毛细胞白血病的毛细胞ACP 染色呈强阳性或中度阳性，且不被酒石酸抑制。 2、 急性白血病幼单核细胞ACP 染色呈阳性，原淋巴细胞呈弱阳性，原粒细胞对ACP 反应
不一。
3、 T 淋巴细胞ACP 染色呈阳性，颗粒粗大、分布密集。B 淋巴细胞呈阴性或颗粒细小的
弱阳性。
4、 戈谢细胞呈强阳性，尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性。
注意事项：
1、 ACP 孵育液易失效，本法宜用皮肤穿刺血涂片，晾干后应及时染色 2、 对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。 3、 样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
4、 组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24h ，否则酶活性会减弱或消失。 5、 组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56℃。应使用熔点为52～54℃的石蜡进行浸蜡，浸
蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。