土壤酶测定方法
(参考文献：关松荫 土壤酶及其研究法 实验室白色皮子的那本书) 1过氧化氢酶—容量法⑴P323
取5g风干土置于100ml三角瓶中，注入40ml蒸馏水和5ml 0.3％过氧化氢溶液。将三角瓶放在往复式振荡机上，以120次／分钟振荡30min。而后加入5ml
1.5mol/L的硫酸，以稳定未分解的过氧化氢。再将瓶中悬液用慢速型滤纸过滤。然后吸取25ml滤液，用0.02mol/L高锰酸钾滴定至淡粉红色为终点。
结果计算：用于滴定土壤滤液所消耗的高锰酸钾量（毫升数）为B，用于滴定25ml原始的过氧化氢混合液所消耗的高锰酸钾量（毫升数）为A。（A-B）×T即为过氧化氢酶活性。以30min后1g土壤的0.1N（即0.02mol/L）高锰酸钾的毫升数表示。T为高锰酸钾滴定度的矫正值，即高锰酸钾的标定后的真实浓度与试验所需配制的高锰酸钾的浓度（即0.02mol/L）的比值。
2脲酶—靛酚蓝比色法（2）P297
标准曲线绘制：吸取稀释的10ug/ml氮的标准液1、3、5、7、9、11、13ml，移于50ml容量瓶中，然后加蒸馏水至20ml。再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计上于波长578nm波长比色。根据光密度值与溶液浓度绘制标准曲线。
取5g风干土置于50ml三角瓶中，加1ml甲苯。15min后加入10ml 10％尿素液和20ml pH 6.7柠檬酸盐缓冲液。摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。过滤后取3ml滤液注入50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线显色方法进行比色测定。
结果计算：脲酶活性以24h后1g土壤中NH3-N的毫克数表示。
NH3-N（mg）=a*V*n/m a—从标准曲线中查得的NH3-N毫克数;V—显色液体积（50ml）；n为分取倍数；m为烘干土的质量。
3磷酸酶—磷酸苯二钠比色法（3）P310
标准曲线绘制：取1、3、5、7、9、11和13ml酚工作液，置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml硼酸盐缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定。以光密度为纵坐标，浓度为横坐标绘制成标准曲线。
取5g风干土置于200ml三角瓶中，加2.5ml甲苯，轻摇15min后加入20ml 0.5％磷酸苯二钠（测定酸性磷酸酶用醋酸盐缓冲液；碱性磷酸酶用硼酸盐缓冲液；中性磷酸酶用柠檬酸盐缓冲液。0.5％磷酸苯二钠溶液必须用相应的缓冲液配制），仔细摇匀后放入恒温箱，在37℃下培养24h。后于培养液中加100ml 0.3％硫酸铝溶液并过滤。吸取3ml滤液于50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线所述
方法显色。用硼酸缓冲液时，呈蓝色，在分光光度计上于660nm处比色。
结果计算:
磷酸酶活性，以24h后1g土壤中释出的酚的毫克数表示。
酚（mg）= a*V*n/m a—从标准曲线中查得的酚毫；V—显色液体积（50ml）；n为分取倍数；m为烘干土的质量。
4蔗糖酶—比色法（4）P275
标准曲线绘制：取0.01——0.5mg/ml不同浓度的葡萄糖（葡萄糖现在50——58℃条件下烘干至恒重）工作液1ml，并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。
取5g风干土置于50ml三角瓶中，注入15ml 8％蔗糖溶液，5ml pH5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。摇匀混合物候后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。到时取出，迅速过滤，从中吸取滤液1ml，注入50ml容量瓶中，加3,5—二硝基水杨酸，并在沸腾的水浴锅中加热5min，随后将容量瓶移至自来水流下冷却3min.溶液因生成3—氨基—5—硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50ml,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
结果计算:
蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。
葡萄糖（mg）= a*V*n/m a—从标准曲线中查得的葡萄糖毫克数；V—显色液体积（50ml）；n为分取倍数；m为烘干土的质量。；
土壤酶测定方法
(参考文献：关松荫 土壤酶及其研究法 实验室白色皮子的那本书) 1过氧化氢酶—容量法⑴P323
取5g风干土置于100ml三角瓶中，注入40ml蒸馏水和5ml 0.3％过氧化氢溶液。将三角瓶放在往复式振荡机上，以120次／分钟振荡30min。而后加入5ml
1.5mol/L的硫酸，以稳定未分解的过氧化氢。再将瓶中悬液用慢速型滤纸过滤。然后吸取25ml滤液，用0.02mol/L高锰酸钾滴定至淡粉红色为终点。
结果计算：用于滴定土壤滤液所消耗的高锰酸钾量（毫升数）为B，用于滴定25ml原始的过氧化氢混合液所消耗的高锰酸钾量（毫升数）为A。（A-B）×T即为过氧化氢酶活性。以30min后1g土壤的0.1N（即0.02mol/L）高锰酸钾的毫升数表示。T为高锰酸钾滴定度的矫正值，即高锰酸钾的标定后的真实浓度与试验所需配制的高锰酸钾的浓度（即0.02mol/L）的比值。
2脲酶—靛酚蓝比色法（2）P297
标准曲线绘制：吸取稀释的10ug/ml氮的标准液1、3、5、7、9、11、13ml，移于50ml容量瓶中，然后加蒸馏水至20ml。再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计上于波长578nm波长比色。根据光密度值与溶液浓度绘制标准曲线。
取5g风干土置于50ml三角瓶中，加1ml甲苯。15min后加入10ml 10％尿素液和20ml pH 6.7柠檬酸盐缓冲液。摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。过滤后取3ml滤液注入50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线显色方法进行比色测定。
结果计算：脲酶活性以24h后1g土壤中NH3-N的毫克数表示。
NH3-N（mg）=a*V*n/m a—从标准曲线中查得的NH3-N毫克数;V—显色液体积（50ml）；n为分取倍数；m为烘干土的质量。
3磷酸酶—磷酸苯二钠比色法（3）P310
标准曲线绘制：取1、3、5、7、9、11和13ml酚工作液，置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml硼酸盐缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定。以光密度为纵坐标，浓度为横坐标绘制成标准曲线。
取5g风干土置于200ml三角瓶中，加2.5ml甲苯，轻摇15min后加入20ml 0.5％磷酸苯二钠（测定酸性磷酸酶用醋酸盐缓冲液；碱性磷酸酶用硼酸盐缓冲液；中性磷酸酶用柠檬酸盐缓冲液。0.5％磷酸苯二钠溶液必须用相应的缓冲液配制），仔细摇匀后放入恒温箱，在37℃下培养24h。后于培养液中加100ml 0.3％硫酸铝溶液并过滤。吸取3ml滤液于50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线所述
方法显色。用硼酸缓冲液时，呈蓝色，在分光光度计上于660nm处比色。
结果计算:
磷酸酶活性，以24h后1g土壤中释出的酚的毫克数表示。
酚（mg）= a*V*n/m a—从标准曲线中查得的酚毫；V—显色液体积（50ml）；n为分取倍数；m为烘干土的质量。
4蔗糖酶—比色法（4）P275
标准曲线绘制：取0.01——0.5mg/ml不同浓度的葡萄糖（葡萄糖现在50——58℃条件下烘干至恒重）工作液1ml，并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。
取5g风干土置于50ml三角瓶中，注入15ml 8％蔗糖溶液，5ml pH5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。摇匀混合物候后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。到时取出，迅速过滤，从中吸取滤液1ml，注入50ml容量瓶中，加3,5—二硝基水杨酸，并在沸腾的水浴锅中加热5min，随后将容量瓶移至自来水流下冷却3min.溶液因生成3—氨基—5—硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50ml,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
结果计算:
蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。
葡萄糖（mg）= a*V*n/m a—从标准曲线中查得的葡萄糖毫克数；V—显色液体积（50ml）；n为分取倍数；m为烘干土的质量。；