中国卫生检验杂志2006年10月第16卷第10期 Ch i n ese Jou r n al ofH ealth Laborat ory Tec hno l ogy , O ct 2006; Vo l16 N o 101261
方法探讨
食品中甲醛合次硫酸氢钠的测定方法探讨
李 光, 赵建民, 高中灿, 王秋霞, 高素贞, 员利娜
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(1 河南省许昌县疾病预防控制中心, 河南许昌 461100; 2 河南省许昌县妇幼保健院, 河南许昌 461100) [摘要] 目的:建立快速检验食品中甲醛合次硫酸氢钠(吊白块) 的定性检验方法, 完善卫法监法[2001]159号文附件2中的甲醛合次硫酸氢钠的测定方法, 确定吊白块定量检验的检测限和几种常见食品的甲醛本底值。方法:定性方法是利
用吊白块在酸性条件下分解出甲醛和二氧化硫等化合物, 将蒸馏液用蒸馏水吸收, 用显色剂变色酸或乙酰丙酮与蒸馏液中的甲醛反应, 对某些食品同时测定蒸馏液中的二氧化硫, 在甲醛和二氧化硫同时存在的情况下, 判定为吊白块的存在。在定性的基础上, 进行定量测定。定量测定方法中用外推法求得检测限。结果:变色酸法的回收率86 8%~93 7%; 乙酰丙酮法的回收率88 3%~93 7%。变色酸法的检测限是2 2m g /kg; 乙酰丙酮法的检测限是1 3mg /kg。结论:用变色酸和乙酰丙酮法定性测定食品中吊白块, 具有操作简单、方法灵敏、结果可靠, 可用于食品中的吊白块的定性检测。卫法监法[2001]159号文附件2中的吊白块的测定方法缺乏应有的严密性。[关键词] 甲醛合次硫酸氢钠; 定性检验方法; 定量检验方法; 检测限; 本底值
[中图分类号] R 155 5+1 [文献标识码] B [文章编号] 1004-8685(2006) 10-1261-03 我国目前没有甲醛合次硫酸氢钠(吊白块) 的检测方法的国家标准, 虽然卫生部法监司2001年下发了卫法监法[2001]159号文, 在附件中给出了吊白块的检验方法, 但是里面存在诸多问题。如方法中未给出定性检验方法(由于! 吊白块∀是我国禁止使用的非食品添加剂, 所以定性检验就显得尤为重要, 在定性的基础上进行定量检测, 可以进一步测得吊白块的污染程度); 方法的检测限未指明; 各类食品的本底值问题(食品的化学成分非常复杂, 影响的因素很多, 碳水化合物在酸性条件下可能水解出醛基, 参与显色反应, 导致样品存在有甲醛本底值[1]。这往往给结果的判定带来难度。应该在方法附录中根据有关文献或进行检测给出常见食品的本底值, 为结果的判定提供参考); 同时测定二氧化硫含量问题(吊白块的测定, 不一定对所有的样品均需要进行二氧化硫的测定, 应该根据具体样品来确定。); 变色酸测定方法中溶液的配制和标准系列的配制等在实际操作中不方便。
本文针对卫法监法[2001]159号文存在的上述问题, 逐条提出了改进措施, 具体如下:1 吊白块定性检验方法
1 1 变色酸法
1 1 1 原理 在磷酸酸性条件下对样品进行水蒸汽蒸馏, 用水吸收, 吸收液中甲醛与变色酸在硫酸溶液中生成特有的紫色化合物[2], 根据颜色反应与阳性管对照进行定性。1 1 2 试剂 磷酸溶液(1+4) :取磷酸20m , l 慢慢加入80m l 水中, 混匀。甲醛溶液:吸取市售无聚合甲醛5m l 于250m l 容量瓶中, 加入0 5m l 硫酸溶液(1+35), 加水至250m , l 为原液; 取原液50倍稀释后为稀释液; 取稀释液20倍稀释为使用液。硫酸溶液(45+55):取硫酸45m , l 慢慢注入55m l 水中, 边加酸边搅匀。变色酸溶液(1g /L) :取变色酸
[作者简介] 李光(1965-), 女, 大学本科, 主管检验技师, 主要
从事理化检验研究。
0 1g 于研钵中研磨, 用硫酸(45+55) 溶液100m l 溶解, 用玻璃棉过滤。此液冰箱中可保存15d 。硫酸溶液(1+35):取1m l 硫酸, 缓缓注入35m l 水中。
1 1 3 分析步骤 样品处理:装好水蒸汽蒸馏装置, 在水蒸汽发生器内装水至三分之二处, 加入数粒玻璃珠, 加热煮沸水蒸汽发生器内的水。向接收管内加5m l 水, 并使冷凝管的下端插入液面下, 接收管要冰浴。取粉碎混匀的样品(5~10) g 于500m l 全玻蒸馏器中, 加水10m , l 5m l 磷酸(1+4) , 立即用水蒸汽蒸馏, 收集蒸馏液约20m , l 混匀蒸馏液为样液。
显色操作:分别取样液1m l 、甲醛使用液1m l 、水1m l 于三支比色管中, 分别加4m l 变色酸溶液(1g /L), 混匀, 置沸水浴中加热15m i n , 从沸水浴中拿出比色管后可以立即与阳性、阴性对照目视比色。阳性呈紫色, 阴性呈浅黄色。1 2 乙酰丙酮法
1 2 1 原理 在磷酸酸性条件下对样品进行蒸馏, 用水吸收, 吸收液中的甲醛与乙酰丙酮及铵离子反应生成黄色化合物, 与阳性、阴性对照定性。1 2 2 试剂 磷酸溶液(1+4) :见1 1 2; 甲醛溶液:见1 1 2; 乙酰丙酮溶液:在100m l 蒸馏水中加入醋酸铵25g , 冰醋酸3m l 和乙酰丙酮0 40m , l 振摇促溶, 溶解后储于棕色瓶中。此液可保存1个月。硫酸溶液(1+35):见1 1 2。1 2 3 分析步骤 样品处理:同1 1 3。
显色操作:分别吸取样液10m l 、水10m l 、甲醛标准应用液5m l 于三支比色管中, 标准对照管中加水5m ; l 各管分别加入乙酰丙酮溶液1m , l 混匀, 置沸水浴中3m i n ; 从沸水浴中取出即可与阳性、阴性对照目视比色。阳性的呈黄色, 阴性的无色。
1 3 准确度实验
分别取20 g /ml 甲醛标准溶液1 00、2 50、5 00、10 00、15 00m l 于全玻蒸馏器中, 加水至15m , l 进行水蒸汽蒸馏、测定, 结果见表1。
1262中国卫生检验杂志2006年10月第16卷第10期 C h i nese J ou rnal ofH eal th Laboratory Technol ogy , Oct 2006; Vol 16 No 10
表1 变色酸法和乙酰丙酮法回收率
由上式计算得出:本方法的检测限为0 22 g 。当取5g 样品, 蒸馏定容至100m , l 取2m l 蒸馏液时, 为2 2mg /kg。2 2 乙酰丙酮法检测限的测定
2 2 1 主要试剂 乙酰丙酮溶液; 甲醛标准溶液(1m l=5 g) 。
2 2 2 标准曲线的制备 吸取甲醛标准应用液0 00、0 30、0 50、0 70m , l 加蒸馏水至10m l , 加入乙酰丙酮溶液1m l 混匀, 置沸水浴3m in , 取出冷却。以蒸馏水调零, 于波长435nm 处, 以1c m 比色杯进行比色, 记录吸光度。绘制标准曲线。低浓度标准系列吸光值见表4。
表4 甲醛标准曲线各点吸光度值
标准管甲醛标液量(ml ) 甲醛含量( g)
吸光度结果
10 000 000 004r =1 0000
20 301 50 020
30 502 50 031
40 703 50 042b=0 0109
加甲醛量( g) [1**********]00
平均回收率(%)
变色酸法乙酰丙酮法
测定值( g) 回收率(%) 测定值( g) 回收率(%)
17 447 896 8196 9272 4
86 895 696 898 490 893 7
9 647 295 2187 6264 8
95 994 495 293 888 395 7
2 确定方法的检测限
用外推法求得检测限。即选3个低浓度范围内的3个浓
度, 用线性回归法作出回归曲线。对全试剂空白进行多次测定, 对各吸光值求出标准差。主要仪器有:723可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司分析仪器总厂) 。
2 1 变色酸法检测限的测定
2 1 1 主要试剂 1g /L变色酸溶液; 甲醛标准应用液(1m l =1 g ) 。
2 1 2 标准曲线的制备 吸取甲醛标准应用液0 00、0 25、0 50、0 75m , l 加蒸馏水至2m , l 加入变色酸溶液(1g /L) 8m , l 混匀, 置沸水浴15m i n , 取出冷却。以蒸馏水调零, 于波长575n m 处, 以1c m 比色杯进行比色, 用公式L =ks /b求出检测限。低浓度标准系列吸光值见表2。
表2 甲醛标准曲线各点吸光度值
标准管甲醛标液量(m l ) 甲醛含量( g)
吸光度结果
10 000 000 000
20 250 250 010
30 500 500 021
40 750 750 031
a=0 0039
2 2 3 全试剂空白实验 处理方法同1 1 3。吸取10m l 蒸
馏液, 以下从加入乙酰丙酮溶液起操作同1 2 3。记录吸光值, 测定结果见表5。
表5 全试剂空白吸光值(n =20)
吸光度
0 0110 0090 0070 004结果
0 0050 0080 0050 0040 0060 0040 0110 003
平均值=0 005
0 0050 0050 0060 0050 0030 0030 0020 005
标准差s =0 002355
相关系数r =0 9998截距a =-0 0001斜率b=0 0416
2 2 4 计算 同2 1 4。
本方法的检测限为0 65 g 。当取5g 样品, 蒸馏定容至100m , l 取10m l 蒸馏液时, 检测限为1 3mg /kg。
2 1 3 全试剂空白实验 在500m l 全玻蒸馏瓶中加入蒸馏
水20m , l 液体石蜡2 5m l 和磷酸(1+4) 5m , l 立即通入水蒸汽蒸馏。冷凝管下事先插入盛有10m l 蒸馏水且置于冰浴的容器中, 准确收集蒸馏液100m l 。吸取2m , l 以下从加入变色酸溶液起操作同1 1 3。记录吸光值, 测定结果见表3。
表3 全试剂空白吸光值(n =20)
吸光度
0 0080 0020 0000 0040 0070 010结果
0 0030 0040 0020 0010 0100 0040 0000 002
0 0010 0040 0040 0010 0070 007
3 本底值问题
每种样品的原材料和成品的甲醛本底值不一样, 建议使用每种产品的本底值, 而不要使用原料的本底值。下面是一些食品中的甲醛本底值, 以供参考。
表6 部分食品中甲醛的本底值
食品种类腐竹豆腐皮大豆丝
甲醛含量(mg /kg)6 75 16 3
食品种类黄豆腐竹皮干香蕈[4]
甲醛含量(mg /kg)4 24 8244 0
食品种类粉条豆筋丝市售面粉
甲醛含量(mg /kg)8 05 06 9
平均值=0 004标准差s =0 003057
2 1 4 计算 由表2和表3, 可以计算出该检出限[3]检出限:L =ks/b
式中:
L #检出限k #取3
s #全试剂空白值的标准偏差4 二氧化硫测定问题
吊白块是作为添加剂加进食品中的, 加入吊白块的目的是为了改善产品的品质和提高产品的成品率; 商品甲醛常温下是液态的, 添加到粉状食品中无意义; 吊白块具有增白和增加面粉及其制品和干燥豆制品筋度的作用; 吊白块还可以增率。根据情况可以把各品分
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为两种情况进行分析。一类是干燥豆制品、面粉及其制品、淀粉及其制品等干燥或经过蒸煮方法加工制成的食品, 不用测定二氧化硫, 可以根据是否含有甲醛直接判定吊白块的存在与否; 另一类是其他食品, 同时测定甲醛与二氧化硫, 当二者同时存在时方能判定吊白块的存在。
二氧化硫的测定:取测甲醛时的蒸馏液用GB /T500 9 34-2003中盐酸副玫瑰苯胺法进行测定。
5 变色酸法测定方法中的试剂和标准系列的配制
5 1 变色酸溶液的配制
卫法监法[2001]159号文附件2的变色酸溶液的配制用的是市售的浓硫酸配制而成, 在测定时利用水与浓硫酸反应产生的热来满足变色酸与甲醛的显色反应。这样操作的不利方面有三, 其一是比较危险; 其二是由于硫酸和水产生的热量不能使变色酸与甲醛的反应完全; 其三是比较浪费试剂。基于以上的考虑, 建议将变色酸溶液按1 1 2配制。5 2 标准曲线的制备
卫法监法[2001]159号文附件2中的变色酸法定量检验方法中的标准系列操作麻烦, 本人认为按以下操作较合适:吸取0 00、0 05、0 10、0 25、0 50、1 00m l 甲醛标准应用液(相当于0 00、0 50、1 0、2 5、5 0、10 0 g 甲醛), 分别置于25m l 比色管中, 各管分别加水至2m , l 摇匀。分别加8m l 变色酸
溶液(1g /L), 摇匀, 置沸水浴中加热20m i n , 取出放冷。用1c m 比色杯, 以零管调零, 于波长575n m 处测吸光度, 绘制标
准曲线。
变色酸和乙酰丙酮法定性测定食品中的吊白块具有操作简单、方法灵敏、结果可靠, 可用于食品中的吊白块的定性检测。
本人认为卫法监发[2001]159号文中的! 食品中甲醛次硫酸氢钠的测定方法∀缺乏应有的严密性, 有些地方可操作性不强。未指明方法的检出限, 未提供常见食品的甲醛本底值, 变色酸测定方法中的试剂配制实际操作不方便和加热时间短, 使反应不能进行完全。希望有关部门予以重视, 尽快完善该方法, 也希望各位同仁提出不同的看法。
[参考文献]
[1]刘纯英 乙酰丙酮法测定食品中甲醛次硫酸氢钠的方法探讨
[J].中国卫生检验杂志, 2004, 14(会刊):63
[2]王涨富 毒物快速系列分析手册[M] 合肥:安徽科学技术出版
社, 1986 871
[3]GB /T5009-2003 食品卫生检验方法理化部分(一) [S] [4]中华人民共和国商品检验局, 中国科学技术情报研究所 日本食
品卫生法规(下) [M] 北京:科学技术文献出版社, 1979 78-79
(收稿日期:2006-07-11)
(上接第1255页)
敏感性为98 33%, 特异性为96 57%, 与文献报道相一致[4], 但由于TPPA 操作较复杂, 试剂昂贵, 结果判断难以自动化, 不适合大规模的血液筛查。
EL ISA 是利用重组梅毒螺旋体的特异性抗原包被酶标板孔, 并采用双抗原夹心法检测血清标本中的梅毒特异性抗体, 对梅毒各期的检出率都较高。本组表明EL ISA 有很高的敏感性和特异性, 分别为98 89%和90 86%, 与TPPA 非常接近。而EL ISA 操作标准简便, 通过酶标仪可直接读取数据, 克服了肉眼难以判断结果的缺点, 减少了人为操作和判断失误, 价格适中。而且本组说明了不存在EL IS A 阳性TPPA 阴性的标本, 即EL ISA 的假阴性率很低, 本文的假阴性率仅为1 11%, 与文献报道基本一致。故认为EL ISA 适合手术前检查和输血等大批量样本的筛查试验。
T PPA 和EL ISA 两种特异性方法的比较。对133例EL IS A 阳性和150例EL IS A 阴性的标本进行TPPA 检测时发现8例EL ISA 阳性而T PPA 阴性, 并对8例患者进行临床追踪调查, 发现3例为肝炎, 2例为妊娠孕妇, 1例为肿瘤, 2例为类风湿性关节炎, 没有梅毒患者。这表明EL ISA 法存在假阳性。但没有发现EL ISA 检测阴性而TPPA 阳性的标本。因此我们认为对手术前检查和输血等大批量样本的筛查试验时, 若EL IS A 检测为阳性时应进一步做T PPA 确认。而对EL IS A 检测阴性的标本不需要再做TPPA 确认。
[5]
通过上述3种方法的比较我们认为TRU ST 与EL IS A 、TP PA 是不同的检测方法, 特异性和敏感性与EL IS A, TPPA 无可比性。但TRU S T 可判断梅毒患者的病情, 而EL ISA 、TPPA 不适合对梅毒病情的判断。因而临床医生应根据病人不同情况开不同的检查单, 避免增加病人的经济负担。
梅毒各种方法操作都较简单, 各级医院均可开展, 而且每所医院实验室同时可开展多种检测方法, 为了避免梅毒的漏报和误报, 避免同一病人在同一实验室出现不同的实验结果, 建议每个实验室都应建立一套完整的、统一的梅毒实验室报告系统。
[参考文献]
[1]程艳杰, 王广杰, 王旭, 等 梅毒螺旋体血清学检测方法的实验室
评价[J] 中国皮肤性病学杂志, 2005, 19(8):504
[2]周萍 不同检测方法对梅毒检测结果比较[J] 淮海医药, 2005,
23(1):27
[3]何浩明, 姜建平, 蔡建萍 现代检验医学与临床[M] 上海:上海
同济医科大学出版社, 2001 264
[4]程艳杰, 王广杰, 王旭, 等 梅毒螺旋体血清学检测方法的实验室
评价[J] 中华检验医学杂志, 2006, 29(3):272
[5]刘保林 EL I SA 与RPR 法检测梅毒抗体结果分析[J] 中国误诊
学杂志, 2005, 5(13):2493
(收稿日期:2006-05-15)
中国卫生检验杂志2006年10月第16卷第10期 Ch i n ese Jou r n al ofH ealth Laborat ory Tec hno l ogy , O ct 2006; Vo l16 N o 101261
方法探讨
食品中甲醛合次硫酸氢钠的测定方法探讨
李 光, 赵建民, 高中灿, 王秋霞, 高素贞, 员利娜
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(1 河南省许昌县疾病预防控制中心, 河南许昌 461100; 2 河南省许昌县妇幼保健院, 河南许昌 461100) [摘要] 目的:建立快速检验食品中甲醛合次硫酸氢钠(吊白块) 的定性检验方法, 完善卫法监法[2001]159号文附件2中的甲醛合次硫酸氢钠的测定方法, 确定吊白块定量检验的检测限和几种常见食品的甲醛本底值。方法:定性方法是利
用吊白块在酸性条件下分解出甲醛和二氧化硫等化合物, 将蒸馏液用蒸馏水吸收, 用显色剂变色酸或乙酰丙酮与蒸馏液中的甲醛反应, 对某些食品同时测定蒸馏液中的二氧化硫, 在甲醛和二氧化硫同时存在的情况下, 判定为吊白块的存在。在定性的基础上, 进行定量测定。定量测定方法中用外推法求得检测限。结果:变色酸法的回收率86 8%~93 7%; 乙酰丙酮法的回收率88 3%~93 7%。变色酸法的检测限是2 2m g /kg; 乙酰丙酮法的检测限是1 3mg /kg。结论:用变色酸和乙酰丙酮法定性测定食品中吊白块, 具有操作简单、方法灵敏、结果可靠, 可用于食品中的吊白块的定性检测。卫法监法[2001]159号文附件2中的吊白块的测定方法缺乏应有的严密性。[关键词] 甲醛合次硫酸氢钠; 定性检验方法; 定量检验方法; 检测限; 本底值
[中图分类号] R 155 5+1 [文献标识码] B [文章编号] 1004-8685(2006) 10-1261-03 我国目前没有甲醛合次硫酸氢钠(吊白块) 的检测方法的国家标准, 虽然卫生部法监司2001年下发了卫法监法[2001]159号文, 在附件中给出了吊白块的检验方法, 但是里面存在诸多问题。如方法中未给出定性检验方法(由于! 吊白块∀是我国禁止使用的非食品添加剂, 所以定性检验就显得尤为重要, 在定性的基础上进行定量检测, 可以进一步测得吊白块的污染程度); 方法的检测限未指明; 各类食品的本底值问题(食品的化学成分非常复杂, 影响的因素很多, 碳水化合物在酸性条件下可能水解出醛基, 参与显色反应, 导致样品存在有甲醛本底值[1]。这往往给结果的判定带来难度。应该在方法附录中根据有关文献或进行检测给出常见食品的本底值, 为结果的判定提供参考); 同时测定二氧化硫含量问题(吊白块的测定, 不一定对所有的样品均需要进行二氧化硫的测定, 应该根据具体样品来确定。); 变色酸测定方法中溶液的配制和标准系列的配制等在实际操作中不方便。
本文针对卫法监法[2001]159号文存在的上述问题, 逐条提出了改进措施, 具体如下:1 吊白块定性检验方法
1 1 变色酸法
1 1 1 原理 在磷酸酸性条件下对样品进行水蒸汽蒸馏, 用水吸收, 吸收液中甲醛与变色酸在硫酸溶液中生成特有的紫色化合物[2], 根据颜色反应与阳性管对照进行定性。1 1 2 试剂 磷酸溶液(1+4) :取磷酸20m , l 慢慢加入80m l 水中, 混匀。甲醛溶液:吸取市售无聚合甲醛5m l 于250m l 容量瓶中, 加入0 5m l 硫酸溶液(1+35), 加水至250m , l 为原液; 取原液50倍稀释后为稀释液; 取稀释液20倍稀释为使用液。硫酸溶液(45+55):取硫酸45m , l 慢慢注入55m l 水中, 边加酸边搅匀。变色酸溶液(1g /L) :取变色酸
[作者简介] 李光(1965-), 女, 大学本科, 主管检验技师, 主要
从事理化检验研究。
0 1g 于研钵中研磨, 用硫酸(45+55) 溶液100m l 溶解, 用玻璃棉过滤。此液冰箱中可保存15d 。硫酸溶液(1+35):取1m l 硫酸, 缓缓注入35m l 水中。
1 1 3 分析步骤 样品处理:装好水蒸汽蒸馏装置, 在水蒸汽发生器内装水至三分之二处, 加入数粒玻璃珠, 加热煮沸水蒸汽发生器内的水。向接收管内加5m l 水, 并使冷凝管的下端插入液面下, 接收管要冰浴。取粉碎混匀的样品(5~10) g 于500m l 全玻蒸馏器中, 加水10m , l 5m l 磷酸(1+4) , 立即用水蒸汽蒸馏, 收集蒸馏液约20m , l 混匀蒸馏液为样液。
显色操作:分别取样液1m l 、甲醛使用液1m l 、水1m l 于三支比色管中, 分别加4m l 变色酸溶液(1g /L), 混匀, 置沸水浴中加热15m i n , 从沸水浴中拿出比色管后可以立即与阳性、阴性对照目视比色。阳性呈紫色, 阴性呈浅黄色。1 2 乙酰丙酮法
1 2 1 原理 在磷酸酸性条件下对样品进行蒸馏, 用水吸收, 吸收液中的甲醛与乙酰丙酮及铵离子反应生成黄色化合物, 与阳性、阴性对照定性。1 2 2 试剂 磷酸溶液(1+4) :见1 1 2; 甲醛溶液:见1 1 2; 乙酰丙酮溶液:在100m l 蒸馏水中加入醋酸铵25g , 冰醋酸3m l 和乙酰丙酮0 40m , l 振摇促溶, 溶解后储于棕色瓶中。此液可保存1个月。硫酸溶液(1+35):见1 1 2。1 2 3 分析步骤 样品处理:同1 1 3。
显色操作:分别吸取样液10m l 、水10m l 、甲醛标准应用液5m l 于三支比色管中, 标准对照管中加水5m ; l 各管分别加入乙酰丙酮溶液1m , l 混匀, 置沸水浴中3m i n ; 从沸水浴中取出即可与阳性、阴性对照目视比色。阳性的呈黄色, 阴性的无色。
1 3 准确度实验
分别取20 g /ml 甲醛标准溶液1 00、2 50、5 00、10 00、15 00m l 于全玻蒸馏器中, 加水至15m , l 进行水蒸汽蒸馏、测定, 结果见表1。
1262中国卫生检验杂志2006年10月第16卷第10期 C h i nese J ou rnal ofH eal th Laboratory Technol ogy , Oct 2006; Vol 16 No 10
表1 变色酸法和乙酰丙酮法回收率
由上式计算得出:本方法的检测限为0 22 g 。当取5g 样品, 蒸馏定容至100m , l 取2m l 蒸馏液时, 为2 2mg /kg。2 2 乙酰丙酮法检测限的测定
2 2 1 主要试剂 乙酰丙酮溶液; 甲醛标准溶液(1m l=5 g) 。
2 2 2 标准曲线的制备 吸取甲醛标准应用液0 00、0 30、0 50、0 70m , l 加蒸馏水至10m l , 加入乙酰丙酮溶液1m l 混匀, 置沸水浴3m in , 取出冷却。以蒸馏水调零, 于波长435nm 处, 以1c m 比色杯进行比色, 记录吸光度。绘制标准曲线。低浓度标准系列吸光值见表4。
表4 甲醛标准曲线各点吸光度值
标准管甲醛标液量(ml ) 甲醛含量( g)
吸光度结果
10 000 000 004r =1 0000
20 301 50 020
30 502 50 031
40 703 50 042b=0 0109
加甲醛量( g) [1**********]00
平均回收率(%)
变色酸法乙酰丙酮法
测定值( g) 回收率(%) 测定值( g) 回收率(%)
17 447 896 8196 9272 4
86 895 696 898 490 893 7
9 647 295 2187 6264 8
95 994 495 293 888 395 7
2 确定方法的检测限
用外推法求得检测限。即选3个低浓度范围内的3个浓
度, 用线性回归法作出回归曲线。对全试剂空白进行多次测定, 对各吸光值求出标准差。主要仪器有:723可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司分析仪器总厂) 。
2 1 变色酸法检测限的测定
2 1 1 主要试剂 1g /L变色酸溶液; 甲醛标准应用液(1m l =1 g ) 。
2 1 2 标准曲线的制备 吸取甲醛标准应用液0 00、0 25、0 50、0 75m , l 加蒸馏水至2m , l 加入变色酸溶液(1g /L) 8m , l 混匀, 置沸水浴15m i n , 取出冷却。以蒸馏水调零, 于波长575n m 处, 以1c m 比色杯进行比色, 用公式L =ks /b求出检测限。低浓度标准系列吸光值见表2。
表2 甲醛标准曲线各点吸光度值
标准管甲醛标液量(m l ) 甲醛含量( g)
吸光度结果
10 000 000 000
20 250 250 010
30 500 500 021
40 750 750 031
a=0 0039
2 2 3 全试剂空白实验 处理方法同1 1 3。吸取10m l 蒸
馏液, 以下从加入乙酰丙酮溶液起操作同1 2 3。记录吸光值, 测定结果见表5。
表5 全试剂空白吸光值(n =20)
吸光度
0 0110 0090 0070 004结果
0 0050 0080 0050 0040 0060 0040 0110 003
平均值=0 005
0 0050 0050 0060 0050 0030 0030 0020 005
标准差s =0 002355
相关系数r =0 9998截距a =-0 0001斜率b=0 0416
2 2 4 计算 同2 1 4。
本方法的检测限为0 65 g 。当取5g 样品, 蒸馏定容至100m , l 取10m l 蒸馏液时, 检测限为1 3mg /kg。
2 1 3 全试剂空白实验 在500m l 全玻蒸馏瓶中加入蒸馏
水20m , l 液体石蜡2 5m l 和磷酸(1+4) 5m , l 立即通入水蒸汽蒸馏。冷凝管下事先插入盛有10m l 蒸馏水且置于冰浴的容器中, 准确收集蒸馏液100m l 。吸取2m , l 以下从加入变色酸溶液起操作同1 1 3。记录吸光值, 测定结果见表3。
表3 全试剂空白吸光值(n =20)
吸光度
0 0080 0020 0000 0040 0070 010结果
0 0030 0040 0020 0010 0100 0040 0000 002
0 0010 0040 0040 0010 0070 007
3 本底值问题
每种样品的原材料和成品的甲醛本底值不一样, 建议使用每种产品的本底值, 而不要使用原料的本底值。下面是一些食品中的甲醛本底值, 以供参考。
表6 部分食品中甲醛的本底值
食品种类腐竹豆腐皮大豆丝
甲醛含量(mg /kg)6 75 16 3
食品种类黄豆腐竹皮干香蕈[4]
甲醛含量(mg /kg)4 24 8244 0
食品种类粉条豆筋丝市售面粉
甲醛含量(mg /kg)8 05 06 9
平均值=0 004标准差s =0 003057
2 1 4 计算 由表2和表3, 可以计算出该检出限[3]检出限:L =ks/b
式中:
L #检出限k #取3
s #全试剂空白值的标准偏差4 二氧化硫测定问题
吊白块是作为添加剂加进食品中的, 加入吊白块的目的是为了改善产品的品质和提高产品的成品率; 商品甲醛常温下是液态的, 添加到粉状食品中无意义; 吊白块具有增白和增加面粉及其制品和干燥豆制品筋度的作用; 吊白块还可以增率。根据情况可以把各品分
中国卫生检验杂志2006年10月第16卷第10期 Ch i n ese Jou r n al ofH ealth Laborat ory Tec hno l ogy , O ct 2006; Vo l16 N o 101263
为两种情况进行分析。一类是干燥豆制品、面粉及其制品、淀粉及其制品等干燥或经过蒸煮方法加工制成的食品, 不用测定二氧化硫, 可以根据是否含有甲醛直接判定吊白块的存在与否; 另一类是其他食品, 同时测定甲醛与二氧化硫, 当二者同时存在时方能判定吊白块的存在。
二氧化硫的测定:取测甲醛时的蒸馏液用GB /T500 9 34-2003中盐酸副玫瑰苯胺法进行测定。
5 变色酸法测定方法中的试剂和标准系列的配制
5 1 变色酸溶液的配制
卫法监法[2001]159号文附件2的变色酸溶液的配制用的是市售的浓硫酸配制而成, 在测定时利用水与浓硫酸反应产生的热来满足变色酸与甲醛的显色反应。这样操作的不利方面有三, 其一是比较危险; 其二是由于硫酸和水产生的热量不能使变色酸与甲醛的反应完全; 其三是比较浪费试剂。基于以上的考虑, 建议将变色酸溶液按1 1 2配制。5 2 标准曲线的制备
卫法监法[2001]159号文附件2中的变色酸法定量检验方法中的标准系列操作麻烦, 本人认为按以下操作较合适:吸取0 00、0 05、0 10、0 25、0 50、1 00m l 甲醛标准应用液(相当于0 00、0 50、1 0、2 5、5 0、10 0 g 甲醛), 分别置于25m l 比色管中, 各管分别加水至2m , l 摇匀。分别加8m l 变色酸
溶液(1g /L), 摇匀, 置沸水浴中加热20m i n , 取出放冷。用1c m 比色杯, 以零管调零, 于波长575n m 处测吸光度, 绘制标
准曲线。
变色酸和乙酰丙酮法定性测定食品中的吊白块具有操作简单、方法灵敏、结果可靠, 可用于食品中的吊白块的定性检测。
本人认为卫法监发[2001]159号文中的! 食品中甲醛次硫酸氢钠的测定方法∀缺乏应有的严密性, 有些地方可操作性不强。未指明方法的检出限, 未提供常见食品的甲醛本底值, 变色酸测定方法中的试剂配制实际操作不方便和加热时间短, 使反应不能进行完全。希望有关部门予以重视, 尽快完善该方法, 也希望各位同仁提出不同的看法。
[参考文献]
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[3]GB /T5009-2003 食品卫生检验方法理化部分(一) [S] [4]中华人民共和国商品检验局, 中国科学技术情报研究所 日本食
品卫生法规(下) [M] 北京:科学技术文献出版社, 1979 78-79
(收稿日期:2006-07-11)
(上接第1255页)
敏感性为98 33%, 特异性为96 57%, 与文献报道相一致[4], 但由于TPPA 操作较复杂, 试剂昂贵, 结果判断难以自动化, 不适合大规模的血液筛查。
EL ISA 是利用重组梅毒螺旋体的特异性抗原包被酶标板孔, 并采用双抗原夹心法检测血清标本中的梅毒特异性抗体, 对梅毒各期的检出率都较高。本组表明EL ISA 有很高的敏感性和特异性, 分别为98 89%和90 86%, 与TPPA 非常接近。而EL ISA 操作标准简便, 通过酶标仪可直接读取数据, 克服了肉眼难以判断结果的缺点, 减少了人为操作和判断失误, 价格适中。而且本组说明了不存在EL IS A 阳性TPPA 阴性的标本, 即EL ISA 的假阴性率很低, 本文的假阴性率仅为1 11%, 与文献报道基本一致。故认为EL ISA 适合手术前检查和输血等大批量样本的筛查试验。
T PPA 和EL ISA 两种特异性方法的比较。对133例EL IS A 阳性和150例EL IS A 阴性的标本进行TPPA 检测时发现8例EL ISA 阳性而T PPA 阴性, 并对8例患者进行临床追踪调查, 发现3例为肝炎, 2例为妊娠孕妇, 1例为肿瘤, 2例为类风湿性关节炎, 没有梅毒患者。这表明EL ISA 法存在假阳性。但没有发现EL ISA 检测阴性而TPPA 阳性的标本。因此我们认为对手术前检查和输血等大批量样本的筛查试验时, 若EL IS A 检测为阳性时应进一步做T PPA 确认。而对EL IS A 检测阴性的标本不需要再做TPPA 确认。
[5]
通过上述3种方法的比较我们认为TRU ST 与EL IS A 、TP PA 是不同的检测方法, 特异性和敏感性与EL IS A, TPPA 无可比性。但TRU S T 可判断梅毒患者的病情, 而EL ISA 、TPPA 不适合对梅毒病情的判断。因而临床医生应根据病人不同情况开不同的检查单, 避免增加病人的经济负担。
梅毒各种方法操作都较简单, 各级医院均可开展, 而且每所医院实验室同时可开展多种检测方法, 为了避免梅毒的漏报和误报, 避免同一病人在同一实验室出现不同的实验结果, 建议每个实验室都应建立一套完整的、统一的梅毒实验室报告系统。
[参考文献]
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评价[J] 中国皮肤性病学杂志, 2005, 19(8):504
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23(1):27
[3]何浩明, 姜建平, 蔡建萍 现代检验医学与临床[M] 上海:上海
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[4]程艳杰, 王广杰, 王旭, 等 梅毒螺旋体血清学检测方法的实验室
评价[J] 中华检验医学杂志, 2006, 29(3):272
[5]刘保林 EL I SA 与RPR 法检测梅毒抗体结果分析[J] 中国误诊
学杂志, 2005, 5(13):2493
(收稿日期:2006-05-15)