作物学报ＡＣＴＡＡＧＲＯＮＯＭＩＣＡＳＩＭＣＡ
ＩＳＳＮ０４９６．３４９０；ＣＯＤＥＮＴＳＨＰＡ９
２０１１，３７（９）：１６７６－－１６８２ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｈｉｎａｃｒｏｐｓ．ｏｒｇ／ｚｗｘｂ／
Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｂｚｗ＠ｃｈｉｎａｊｏｕｒｎａｌ．ｎｅｔ．ｃｎ
ＤｏＩ：１０．３７２利ＳＰ．Ｊ．１００６．２０１１．０１６７６
花生种子脂肪酶活力定量测定及其与储藏特性的相关性
高张
奇１，３琛３
张瑛１，２，＋刘泽１张正竹３，。
蒋岚１滕斌１吴敬德１
吴跃进２
禹山林４
１安徽省农业科学院水稻研究所，安徽省水稻遗传育种重点试验室，安徽合肥２３００３１；２中国科学院安徽省离子柬生物工程学重点试
验室。安徽合肥２３００３１；３安徽农业大学农业部茶及药用植物安全生产重点开放试验室，安徽合肥２３００３６；４山东省花生研究所。山东青岛２６６１００
摘
要：对已有水稻脂肪酶活力比色测定方法进一步修改和优化，建立了花生脂肪酶活力定量测定方法，并确定取
ｍｇ
样量５ｍｇ、底物浓度３０
ｍＬ。１为最适试验条件，该方法具有精确性好、特异性强、重复性好等特点。利用该方法
检测２１６份花生种质资源的脂肪酶活性，表明不同材料间差异极显著（，Ｉ＜０．００１）。试验筛选出酶活力高低差异显著的材料１０份（高低各５份），并以其中２份高脂肪酶活性和２份低脂肪酶活性材料进行高温、高湿人工加速老化试验，结果表明，随老化时间延长，高脂肪酶活性材料发芽率下降较快，而低脂肪酶活性材料发芽率下降较慢，花生脂肪酶活
力与其种子活力呈负相关（相关系数为－０．８８７５）。该结果为进一步深入研究脂肪酶对花生储藏劣变的影响提供了参考。
关键词：花生；脂肪酶活力：定量测定；储藏特性
ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＰｅａｎｕｔＳｅｅｄＬｉｐａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＩｔｓＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ
ｗｉｔｈＳｔｏｒａｇｅＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
ＧＡＯ
Ｑｉｌ∥，ＺＨＡＮＧＢｉｎｌ，ＷＵ
Ｙｉｎ９１＇２’，ＬＩＵＺｅｌ，ＺＨＡＮＧ
Ｚｈｅｎｇ．Ｚｈｕ３，，ＷＵ
Ｙｕｅ．Ｊｉｎ２，ＹＵ
Ｓｈａｈ—Ｌｏ，７＿ＨＡＮＧ
Ｃｈｅｎ３，
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１
Ｊｉｎｇ—Ｄｅｌ，ａｎｄＪＩＡＮＧＬａｎｌ
ＲｉｃｅＲｅｓｅａｒｃｈ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ。ＡｎｈｎｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ／ＡｎｈｕｌＰｒｏｖｉｎｃｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｏ／ｏｆＲｉｃｅＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇ，Ｈｅｆｅｉ２３００３１，
Ｃｈｉｎａ；２
ＡｎｈｕｌＰｒｏｖｉｎｃｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＩｏｎＢｅａｍ
Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ。Ｃｈｉｎ雠ＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｅｆｅｉ
ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳａｆｅｔｙ，ＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｈａｆｅｉ２６６１００，ＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ：Ｂａｓｅｄ
２３００３６，‰４
２３００３１，蛐３
ＴｅａａｎｄＨｅｒｂｓＫｅｙ
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Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ。Ｑ．ｍ９４ａｏ
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ｗａｓｖａｌｉｄａｔｅｄｔｏｂｅａｃｃｕｒａｔｅ．ｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｄｗｅｌｌｒｅｐｅａｔａｂｌｅ．１１他ｆｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆ２１６ｐｅａｎｕｔｇｅｒｍ－
ｐｌａｓｍ
ｒｅｓｏｕｒｃｃｓ
ｌｏｗｅｒｌｉｐａｓｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（ｐ＜０．００１）ａｍｏｎｇｔｈｅｍ．Ｆｉｖｅｗｉｔｈｈｉｇｈｅｒｌｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｆｉｖｅｗｉｔｈ
ａｃｔｉｖｉｔｙＷｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄ，ａｎｄｅａｃｈｔｗｏｏｆｗｈｉｃｈｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｔｏｐｅｒｆｏｒｍａｎａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ．ａｇｉｎｇｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｕｎｄｅｒｈｉ吐ａｎｄｈｉｇｈｍｏｉｓｔｕｒｅ．１１埒ｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔ，ｗｉｔｈｅｘｔｅｎｓｉｏｎｏｆｓｔｏｒａｇｅｔｉｍｅ．ｔｈｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｐｅａｎｕｔｗｉｔｈ
ｗｅｒｅ
ｄｅｔｅｃｔｅｄ，ｗｉｔｈ
ｌｏｗｅｒｌｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｌｏｗｌｙ，ｗｈｉｌｅｔｈａｔｏｆｐｅａｎｕｔｗｉｔｈｈｉｇｈｅｒｌｌｐａｓｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｒａｐｉｄｌｙ，ｓｈｏｗｉｎｇａｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｓｅｅｄｖｉｇｏｒａｎｄｐｅａｎｕｔｌｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ（ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｗａｓ－０．８８７５）．１１地ｓｔｕｄｙｐｒｏｖｉｄｅｓａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｆｕｉｔ［圮ｒｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｆｉｐａｓｅＫｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｅａｎｕｔ；Ｌｉｐａｓｅ
ｏｎ
ｐｅａｎｕｔｓｔｏｒａｇｅｃｈａｒａｃｔａｄｓｔｉｃｓ．
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
ａｃｔｉｖｉｔｙ；Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；Ｓｔｏｒａｇｅ
花生是重要的食用植物油资源和经济作物，其
４位；我国花生种植面积仅次于油菜和大豆，但总产和单产一直位居全国油料作物之首，占油料作物总
食用植物油年产量占世界总量的近１４％，居世界第
本研究由安徽省自然科学基金资助项目（１１０４０６０６Ｍ９７），安徽省优秀青年基金项目（０８０４０１０６８０２）和安徽省水稻遗传育种重点试验室开放基金项目（ＳＤ２００９．４）资助。
‘通讯作者（Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒｓ）：张瑛．Ｅ．ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｙｉｎ９５６８８８＠ｓｉｎａ．ｔｏｍ；张正竹。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｚｚ＠ａｈａｕ．ｅｄｕ．∞，Ｔｅｌ：０５５１．２１６０１８２。
０５５ｌ一２１６０４５３
第一作者联系方式：Ｅ．ｍａｉｌ：ｗｗ４１２７＠１６３．ｃｏｍ
Ｒｅｃｅｉｖｅｄ（收稿日期）：２０１１—０２．１２；Ａｃｃｅｐｔｅｄ（接受日期）：２０１１－０５—２７；Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄｏｎｌｉｎｅ（网络出版日期）：２０１１－０６．２８．
ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔｕｉｌ／１ｌ－１８０９．Ｓ．２０１１０６２８．１０１１．０２１．ｈｕｎｌ
万方数据
第９期高奇等：花生种子脂肪酶活力定量测定及其与储藏特性的相关性
１６７７
产的５０％左右【ｌ也】。花生种子中脂肪含量平均达到５０％左右，特别是不饱和脂肪酸的含量很高，占油脂的８０％以上，适宜制造各种营养食品１３巧】。
花生在储藏过程中极易发生氧化、酸败、霉变、走油等现象，食用变质的花生或花生制品会对人体造成伤害，诱发各种病变【６】。花生种子储藏过程中，脂肪代谢过程是其品质劣变的重要原因。脂肪酶是
脂肪分解代谢中第一个参与反应的酶，对脂肪的转
化速率起着调控的作用，脂肪酶首先识别并攻击脂肪酸链中的酯基，并导致脂肪水解反应的发生１７－８１。
然而，长期以来，关于油料作物种子脂肪酶的
研究主要集中于种子萌发过程和形成期脂肪酶活性
的变化‘１１１。张弛等‘１２１和翟征秋等㈣分别研究了硒和
重金属铬、铜对花生种子萌发前后脂肪酶活力变化
的影响，申琳等【１４】贝悃于究了花生种子萌发过程中蛋
白酶、脂肪酶及ＳＯＤ、ＣＡＴ酶活性变化。但对于油料作物干种子特别是储藏过程中脂肪酶作用的研究尚未见报道。
张瑛等【１５】发明一种简易、高效的作物种子脂肪酶定性比色法并应用于水稻干种子检测。刘洁等【１６１
在其基础上进一步深入研究，提出了水稻干种子脂肪酶活力精确定量分析技术，可以快速、准确地检
测出水稻种子脂肪酶活力。本文将该方法应用到花生种子脂肪酶活力检测，并对方法进一步优化，对花生种子材料的脂肪酶活性进行了大规模筛选和花生储藏过程中脂肪酶作用的初步探索，为进一步探讨花生种子脂肪酶在其储藏过程中作用提供了方法和材料的准备。
１材料与方法
１，１试验材料
对照材料皖花４号由安徽农业科学院作物所提
供，２１６份花生种质资源材料由山东花生所提供。吡
啶、醋酸铜、正辛酸均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；异辛烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限公司：橄榄油、吐温．２０为化学纯，购
自国药集团化学试剂有限公司；Ｔｒｉｓ为分析纯，购自
Ｓｉｇｍａ公司；水为去离子水：其他试剂均为分析纯。电子天平（上海天平仪器厂）、Ａ１１型分析研磨机（德国ＩＫＡ）、ＴＧＬ．１６Ｇ型离心机（上海安亭科学仪器厂）、ＨＳＺ．Ｈ型水浴振荡器（哈尔滨市东联电子技术开发有限公司）、ＳＴＳ．３型脱色摇床（上海琪特分析仪器厂）、７２１Ｗ型分光光度计（上海光学仪器厂）、
万方数据
ＺＲＸ．２５８Ｄ智能人工气候箱（杭州钱江设备有限公司）、ＬＲＨ．４００一ＧＳ人工气候箱（发芽箱）（广东省医疗器械厂）、研钵、容量瓶、离心管等。１．２花生脂肪酶活力检测方法
根据刘洁等比色法【１６】略修改、优化。
１．２．１
原理
以橄榄油作为底物，在给定时间内，
脂肪酶酶活高低与其催化水解底物生成的脂肪酸物质的量成正比，再利用铜离子与脂肪酸形成铜皂【１７】，在７１５ｎｍ测其吸光度以鉴定脂肪酶反应体系生成的脂肪酸量。
１．２．２
底物微乳液的制备
将橄榄油和
Ｔｗｅｅｎ一２０按ｌ：１（ｗ／ｗ）混合，经磁力搅拌器搅拌均匀，得底物微乳液。１．２．３粗酶浸提液的制备
选取新鲜饱满、表皮
光滑、无病斑和损伤的花生果数粒，剥壳去皮去胚，将子叶粉碎。称取５ｍｇ（优化过程见结果２．１．１），用研钵研碎，加入１
ｍＬ
Ｔｒｉｓ．ＨＣＩ缓冲液研磨成匀浆后
转移至２５ｘ２００试管中，再用１ｎｌＬ缓冲液冲洗研钵两次，并将缓冲液转移至试管中。１．２．４脂肪酸显色剂的配制
称取５ｇ乙酸铜，
溶解于１００ｍＬ去离子水中，再加３ｍＬ吡啶，混匀即得脂肪酸显色剂。反应生成的游离脂肪酸与醋酸铜溶液形成的铜皂加入吡啶后，随着溶液ｐＨ值的增大，铜皂的吸光度大大增加，在ｐＨ６．０—６．２范围内，铜皂的吸收最强。因此，必须控制醋酸铜．吡啶的ｐＨ在６．１处【”】。１．２．５脂肪酶活力的测定
将３ｍＬ微乳液底物
加入２５ｘ２００试管与粗酶浸提液混合，在ＨＳＺ—Ｈ型水浴振荡器中３７℃，用封口膜封口，１６０转水浴振荡
２０
ｈ。反应完毕后，把反应液转移到１５ｍＬ具盖试管
中并加入７ｍＬ异辛烷，将试管置ＳＴＳ一３型脱色摇床充分振荡３０ｍｉｎ。其后把试管置试管架上静置１０ｈ，
待其分层后，移取上层有机相６ｍＬ分装于Ａ、Ｂ两
只５ｍＬ离心管中，各３ｍＬ。每只离心管中分别加人０．７５ｍＬ脂肪酸显色剂，在ＳＴＳ．３型脱色摇床上充分振荡混匀１０ｍｉｎ，使其显色后，８０００ｘｇ离心１０ｍｉｎ。合并Ａ、Ｂ两管淡蓝色上清液，在７１５ｎｍ处测定吸光度。上清液吸光值的高低对应于脂肪酶活性的高低。对照管试验方法同上，用ｐＨ７．５的Ｔｒｉｓ．ＨＣｌ缓冲液３ｍＬ代替３ｍＬ酶液。比色时，脂肪酶活性管和对照管均用纯水调零。
１．２．６脂肪酸吸光度标准曲线的绘制
配制一系
列不同浓度的正辛酸，异辛烷溶液６ｍＬ等量分装于
１６７８
作物学报第３７卷
２只５ｍＬ离心管中，各加０．７５ⅡｌＬ脂肪酸显色剂，于ＳＴＳ．３型脱色摇床充分振荡混匀１０ｍｉｎ。离心后取两管上层有机相合并后在７１５ｎｍ以异辛烷作参比测定吸光度，试验重复３次，以平均吸光度作为结果。用ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ进行数据处理，绘制脂肪酸标准曲线如图１所示。
Ｆａｔｔｙ∞ｉｄｃｏｎｔｅｎｔ（ｍｇｍＬ－’）
图１脂肪酸吸光度标准曲线
Ｆｉｇ．１
Ｓｔａｎｄａｒｄ
ｃｕｒｖｅ
ｏｆａｂｓｏｒｂａｎｃｙｏｆｆａｔｔｙａｄｄ
该标准曲线相关系数较好，数据偏差很小，回
归方程Ｙ＝０．６７１６ｘ＋０．０７８９僻２＝０．９９８７）可以代表吸
光度和游离脂肪酸浓度之间的关系。
１．２．７脂肪酶活力的定义与计算
假设用上述方法测得某样品管ＯＤ值为Ｙ对照管ＯＤ值为Ｙ。查标准曲线可得该反应体系中游离脂肪酸浓度的变化，以上述反应条件下样品中含的脂肪酶在２４ｈ内消化底物所生成０．００１ｍｇ脂肪酸作为一个酶活力单位
Ｕ，则该样品的脂肪酶活力为Ａ＝【（ｙ＿ｌ神．０７８９）／
０．６７１６］／０．００１，单位为Ｕ。
由于底物橄榄油亦可以在水浴过程中分解生成游离脂肪酸，所以应设对照管排除橄榄油的本底干扰作用。用脂肪酶活性管ｙ与对照管ｙｏ的差值代表产生的脂肪酸引起的吸光度变化，即脂肪酶的相对活性。将（ｙ．ｔｏ）代入上述回归方程可得该样品管中游离脂肪酸浓度的变化量，再根据本文中对脂肪酶酶活的定义可以得到样品脂肪酶的总活力。
１．３取样量对脂肪酶活力检测的影响
分别取皖花４号花生粉１、３、５、１０、１５、２０和３０ｍｇ，底物浓度为３０
ｎａｇ
ｍＬ－１，其他试验步骤同
上。另设一组对照管，每个浓度梯度各设３个平行酶
活性管，取测定平均值，以酶活性管与对照管的ＯＤ
值代入公式计算该样品脂肪酶的活力。１．４取样量与提取液蛋白质浓度的相关性
取皖花４号花生粉０．５、１、５、１０、１５、２０和
２５
ｍｇ，加Ｔｆｉｓ．ＨＣｌ缓冲液３ｍＬ研磨成匀浆，离心
后取１．５ｍＬ上清液，加Ｔｎｓ．ＨＣｌ缓冲液１．５ｍＬ稀释，万方数据
在波长２６０ｎｍ和２８０ｎｍ处分别测吸光度。
蛋白质浓度（ｒａｇｍＬ－１）＝（１．４５ｘＡ２８旷＿０．７４８ｘＡ２６０）ｘ２式中Ａ２８０和Ａ２６０分别是蛋白质溶液在２８０ｎｍ和
２６０
ｎｍ波长下测得的吸光度，２为溶液的稀释倍数。
试验重复３次，取平均值。用ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ处理数据。
１．５酶液浓度对脂肪酶活力检测的影响
称取１２０ｍｇ皖花４号花生粉加Ｔｎｓ．ＨＣｌ缓冲液
１０
ｍＬ研磨成匀浆后离心得到粗酶液，再分别用缓
冲液稀释２４、１２、８、４和２倍，即设置粗酶液浓度分别为０．５、１、１．５、３、６和１２ｒａｇ
ｍＬ。１浓度梯度，底
物浓度为３０
ｍｇ
ｍＬ－１，其他试验步骤同上。另设置
一组对照管，每个浓度梯度各设３个平行酶活性管，取测定平均值，以酶活性管与对照管的ＯＤ值代入公式计算该样品脂肪酶的活力。
１．６底物浓度对脂肪酶活力检测的影响
分别配置底物（橄榄油的微乳液）浓度为１、５、
１０、２０、３０和４０
ｍｇ
ｍＥ－１的微乳液，称取皖花４号
花生粉５ｍｇ，其他试验步骤同上。每个浓度梯度各
设３个平行酶活性管，取测定平均值，另设一个对照管，以酶活性管与对照管的ＯＤ值代入公式计算该样品脂肪酶的活力。
１．７脂肪酶活性差异材料筛选
以２１６个花生种质资源为材料，按田间编号分为２１组，每组加入皖花４号作为对照，利用优化后的方法进行脂肪酶活性检测，每个样品测定设置２
个重复，取平均值，另设置一对照管，以酶活性管与
对照管的ＯＤ值代人公式计算该样品脂肪酶的活力。
１．８人工加速老化试验
选取扩繁后的２份高脂肪酶活性和２份低脂肪酶活性材料各１００ｇ，装入尼龙纱网袋中，设３个重复，于４２．５℃、湿度８７．５％的恒温恒湿箱进行人工加速老化。在５、１０、１５、２０和２５ｄ，每次２０ｇ，定期取样进行发芽试验。
１．９花生种子发芽试验
采用ＧＢ／Ｔ３５４３．４－１９９５中规定的的纸间法（ＢＰ）ｕ剐，
选用滤纸作为芽床，在培养皿中铺２层滤纸后将种
子置其上，再在种子上覆盖１层滤纸。将芽床用纯水充分润湿，放于恒温培养箱中，恒定温度２７℃，保持芽床湿润，干时加水。每处理２０粒种子，３次重复。每天观察记载发芽种子数，当胚根长≥种长时视为发芽种子，结果取３次重复的平均值。试验期
间如有发霉种子将其取出。发霉严重时更换芽床，
第９期高奇等：花生种子脂肪酶活力定量测定及其与储藏特性的相关性
１６７９
置床６ｄ后统计发芽率。
发芽率＝正常发芽种子数／种子总数ｘ１００％。
２结果与分析
２．１脂肪酶活力检测试验条件的探索
２．１．１取样量对脂肪酶活力的影响
由图２可知。
花生取样量少于５ｒｎｇ时，酶活力与花生取样量呈正比。当取样量达到５ｍｇ后酶活力逐渐趋于平稳，上升幅度变缓。表明５ｍｇ花生中的酶量在２０ｈ内可以将绝大部分底物彻底分解。因此，最适取样量为５ｎａｇ。２．１．２取样量与提取液蛋白质浓度的相关性
由
图３可见，在取样量增加到２５ｍｇ时，提取液的蛋白
浓度与取样量仍为正比关系（铲＝０．９９７９），说明试验
中使用的取样量未超出缓冲液的提取能力范围，试验结果明显。
；置零餐葛譬暑
∞∞∞加∞舯∞柏加０
Ｓａｍｐｌｅ
ｖｏｌｕｍｅ（嘲
图２取样量对脂肪酶活力的影响
Ｆｉｇ．２
Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓａｍｐｌｉｎｇａｍｏｕｎｔ
ｏｎ
ｉｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ
２２２Ｏｌ８ｌ６ｌ４ｌ２ｌＯＯ８Ｏ６Ｏ４Ｏ２
Ｏ
Ｓａｍｐｌｅ
ｖｏｌｕｍｅ（ｍｇ）
圈３取样量对提取液的蛋白浓度的影响
Ｆｉｇ．３
Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓａｍｐｌｉｎｇａｍｏｕｎｔ
ｏｎ
ｅｘｔｒａｃｔｐｒｏｔｅｉｎ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａ廿ｏｎ
２．１．３
酶液浓度对脂肪酶活力的影响
由图４可
知，酶浓度低于１．５ｍｇ
ｍＬ－１时，酶活力与酶浓度呈
正比。当酶浓度达到１．５ｍｇ
ｍＬ一１后酶活力逐渐趋于
平稳，上升幅度变缓。表明当酶浓度达到１．５
ｎａｇ
ｍＬ－１以后，在２０ｈ内可以将绝大部分底物彻底分
万方数据
解。因此，酶液浓度应小于１．５ｍｇｍＬ－１使酶活力与
酶浓度始终保持正比关系，１．５
ｍｇ
ｍＬ－１的酶液３
ｍＬ
所用样品粉约４．５ｍｇ左右，与上述结果基本一致。２．１．４底物浓度对脂肪酶活力的影响
从图５可
以看出，底物浓度增加，脂肪酶活力也增加，在底物浓度低范围内，脂肪酶活力与底物浓度呈正比，当橄榄油浓度增加到３０
ｍｇ
ｍＬ以时，酶活基本稳定
不再增加，最适底物浓度为３０ｍｇ
ｍＬ－１。
Ｅｍｙｍｅｃｏｎｃｅｎ劬ｔｉｏｎ（ｍｇｍＬ－ｔ）
图４酶液浓度对脂肪酶活力的影响
Ｆｉｇ．４
Ｅｆｆｅｃｔｏｆ
ｅｎｚｙｍｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｎ
ｌｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ
１６０
藏
薯８０
莹４０６０
—２０
０
Ｓｕｂｓｔｒａｃｔｃｏｎｃｅａｔｒａｔｉｏｎ（ｍｇ
ｍＬ－Ｉ）
图５底物浓度对脂肪酶活力的影响
Ｆ．ｇ．ｓ
Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓｕｂｓｔｒａｃｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｌｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ
２．１．５方法的精密度试验应用优化得到的最适
条件对皖花４号脂肪酶活性检测平行试验７次，测得酶活力分别为１５７．３５４、１６２．５５、１４８．３６４、１５３．９８４、
１６３．２５３、１６１．１２和１５１．６６９。对结果进行统计计算
后得到相对标准偏差（ＲＳＤ）为３．４％，小于５％，证明该方法稳定性好、重复性好，可以作为花生脂肪酶活力检测的基本方法。
２．２花生种子脂肪酶活性差异材料的筛选
利用上述优化的脂肪酶检测方法获得２１６个花生资源材料脂肪酶活性直方图（图６），脂肪酶活性呈曲线分布，变幅为３５—５２５，最大峰值落在１５０附近，
主要分布区域在７５—３７５。
由表１可得，样品平行组内重复的无差别的概率Ｐ＝Ｏ．１９６８＞０．０５，说明平行组问差异不显著，结果较为稳定，重复性较好，样品间的无差别的概率Ｐ＝０．００００＜０．０１，说明不同材料间差异极其显著，其
１６８０
作物学报第３７卷
脂肪酶活性有很大差异。综合考虑试验组别、平行间稳定性等因素后，筛选得到特异性脂肪酶活性材料见表２。
弱∞笱加
吞ｃ口‰
：２ｍ
５Ｏ
７５
１５０
２２５Ｌｉｐａｓｅ
３００
３７５
４５０
５２５
５５０
差异打下良好的基础。
２．３人工加速老化试验
选取脂肪酶活性高的花生种子９９号和１７５号，脂肪酶活性低的花生种子１０６号和２２１号扩大种植，收获后按国标纸间法进行发芽试验。发芽率结果如图７。
从图７可以发现，脂肪酶活性高的花生种子９９
号和１７５号在人工加速老化过程中的发芽率下降趋势更大，明显高于脂肪酶活性低的花生种子１０６号和２２１号的下降趋势。在人工加速老化１５ｄ后，高脂肪酶活性材料发芽率下降至２０％左右，而低脂肪酶活力的材料１０６号发芽率仍保持在４５％，２２１号材料仍保持了９３．３３％的高发芽率。在人工老化２５ｄ后，
ａｃｔｉｖ崎（Ｕ）
图６不同花生种子材料脂肪酶活力分布
Ｆｉｇ．６
Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｌｉｐａｓｅ
ａｃｆｉｖｔｔｙｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｅａｎｕｔｓｅｅｄｓ
高脂肪酶活性材料发芽率下降至５％左右，而低脂肪
酶活力的材料发芽率仍保持在３０％左右，为高脂肪
表２中左侧５个材料花生种子酶活较高，右侧５个材料花生种子酶活较低，２组平均酶活力相差超过３倍，为比较不同脂肪酶活性材料在储藏中的变化
表１
Ｔａｂｌｅｌ
酶活性材料发芽率的５倍。ＳＰＳＳ软件相关性分析表
明，花生脂肪酶活力与人工加速老化２５ｄ种子发芽
率的平均值呈负相关（相关系数为－０．８８７５）。
不同花生种子脂肪酶活力差异的显著性分析
平方和
均方丛塑！！ｇ旦！堡
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４３１
３讨论
脂肪酶催化脂肪水解生成大量的游离脂肪酸。一方面，游离脂肪酸增多使油脂酸败、酸价增高、油脂风味变差，加工过程中的得率减少，损失加大，生产成本增高。游离脂肪酸发生断裂后，不饱和键形成氧化物，分解为低级脂肪酸和醛类、酮类等物质【９ｄ０１。另一方面，游离脂肪酸增多会导致酸中毒，
作物种子储藏变质问题十分重要。
花生因其含油分高，在高温、高湿、机械损伤、氧气、日光及生物的综合作用下，极易发生酸败变质，降低种子的发芽率，不仅影响其食用品质，往往也影响其商品价值。目前延长花生储藏时间的方法多是控制其含水量或仓库温湿度等外界环境条件，
对种子自身变化则鲜有探讨【ｌ们。如前言所述，对花
生脂肪酶的研究多集中于种子萌发过程和形成期脂肪酶活性的变化，干种子脂肪酶活力较低，用已有
造成种子芽率降低。因此，研究脂肪酶对解决油料万方数据
第９期
高奇等：花生种子脂肪酶活力定量测定及其与储藏特性的相关性
１６８１
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ｈｉｇｈ・ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄＲＨ８７．５％ｏｆｈｉｇｈｈｕｍｉｄｉｔｙ
的方法难以检测【２０１。
本文优化了花生干种子脂肪酶检测的方法，其中。取样量的精确化是本研究的关键，试验获得５ｍｇ的最适取样量（图２），并确定了最适底物浓度量
３０ｍｇ
ｍＬ－１（图５），筛选出脂肪酶活力高、低各５个
的两组材料（表２），其中低脂肪酶活力的２２１号材料表现特别突出，在人工加速老化２０ｄ后，仍然保持了８０％以上的高发芽率。
方法上，首次将比色法应用于花生种子脂肪酶活力的检测，克服了传统的碱滴定法灵敏度低的缺点。对原有方法加以优化和改进，使其适应于大规模材料的筛选。精密度试验表明，本方法分辨率高、稳定性强，经济适用，方便推广。通过大规模的种质筛选得到差异显著的特异性材料，并利用人工加速老化试验初步证实了脂肪酶活力差异影响花生种子的耐储藏性。为延长花生储藏期的研究开辟了一条新的思路。
４结论
比色法可以有效地测定花生脂肪酶活力，测定的最适试验条件是取样量５ｍｇ、底物浓度３０
ｍｇ
ｍＬ－１：２１６个花生材料问脂肪酶活力差异显著，筛选出了特异性脂肪酶活力材料；在人工加速老化条件下，脂肪酶活力高的花生种子的发芽率下降趋势明显高于脂肪酶活力低的花生种子，由此初步表明脂肪酶活力低的种子具有较好的耐储藏特性。
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ【１】１
Ｓｈａｈ
Ｓ－Ｈ（单世华）．ＷａｎＳ－Ｂ（万书波）．ＱｉｕＱｓ（邱庆树），Ｕ
Ｃ－Ｊ（李春娟）＇ＸｕＴ－Ｔ（许婷婷）．ＧｏｎｇＱ－Ｘ（宫清轩）．Ｑｕａｆｉｔｙ
ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ
０１１
ｇｒｏｕｎｄｎｕｔ
ｇｅｒｍｐｌａｓｍｒｅｓｏｕｒｏ酷ｉｎＣｌｆｉｎａ．Ｓｌｕｍ・
ｄｏｎｓＡｇｔｉｃ
Ｓｃｉ（山东农业科学）．２００７．（６）：柏－４２饰Ｃｈｉｎｅｓｅ万方数据
ｗｉｔｈＥｎｇｌｉｓｈａｂｓｔｒａｃｔ）
【２】Ｔａｎｇｓ（汤松），ＹｕＳ．Ｕ禹山林）＇ＬｉａｏＢ—Ｓ（廖伯寿），２五ａｎｇ
Ｘ．Ｙ（张新友），ＳｕｎＨ－Ｙ（孙海艳）．Ｉｎｄｕｓｔｒｙ
ｓｔａｔｕｓ，ｅｘｉｓｔｉｎｇｐｒｏ－
ｂｌｅｍｓａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｔｒａｔｅｇｙｏｆｐｅａｎｕｔｉｎＣｈｉｎａ．ＪＰｅａｎｕｔＳｃｉ
（花生学报），２０１０，３９（３）：３５－３８（ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅｗｉｔｈ
Ｅｎｇｌｉｓｈａｂ－
ｓｔｒａｃｔ）
【３】ＤａｉｔｒＹ（戴凌燕）．Ｓｔｕｄｙ
ｏｎ
ｔｈｅｅｆｆｅｃｔ
ｏｆｔｈｒｅｅ
ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ
ｏｎ
ｔｈｅｐｅａｎｕｔｓｐｒｏｕｔｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔｓ．ＡｃａｄＰｅｒｉｏｄ
ＦａｒｍＰｒｏｄ
Ｐｒｏｃ（农产品加工・学刊）。２００８。（３）：４６＿４７（ｉｎ
Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅｗｉｔｈＥｎｇｌｉｓｈａｂｓｔｒａｃｔ）【４】Ｘｉａｏ
Ｃ－ｚ（肖昌珍）．ｗｕＹ（吴渝）．ＧａｎＤ－Ｓ（甘冬生），Ｔｏｎｇ
ｃ．ｘ（童春霞）＇“ｕＧ—Ｍ（刘桂梅）．Ｔｈｅ
ａｎａｌｙｓｉｓ
ｏｆｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｑｕａｌｉｔｙｏｆＣｈｉｎａｐｅａｎｕｔ
ｇｃｒｍｐｌａｓｍ．Ｐｅａｎｕｔ
Ｓｃｉ
Ｔｅｃｈｎｏｌ（花生科
技），１９９９，（ｓｕｐｐｌ）：１６１－１６６（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅ）
【５】ＧａｏＨ・Ｍ（高慧敏），ＺｌｕｍｇＹ（张颖）．Ｍｉｃｒｏａｎａｌｙｓｉｓａｎｄ
ｆａｓｔ
ａｎａｌｙｓｉｓ
０１１
ｒａｕｙａｃｉｄｓｏｆｐｅａｎｕｔｓｅｅｄ
ｂｙｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．
ＣｈｉｎＡｇｒｉｃＳｃｉＢｕｌｌ（中国农学通报），２０１０．２６（１３）：９８－－１０３（ｉｎ
ＣｈｉｎｅｓｅｗｉｔｈＥｎｇｌｉｓｈａｂｓｗａｃｔ）
【６】ＬｉＹ（李颖）．Ｓｔｕｄｙ
０１１
ｅｘｔｅｎｓｉｏｎｏｆｓｔｏｒａｇｅｐｅｒｉｏｄｏｆｐｅａｎｕｔ．Ｓｃｉ
Ｔｅｃｈｎｏｌ
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Ｔｅｃｈｎｏｌ
Ｉｎｆｏｒｍ（科技信息）’２００８，１９：５８（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅ）
【９】ＹａｍａｍｏｔｏＡ．ＦｕｊｉｉＹＹａｓｕｍｏｔｏｌ【＇ＭＲｓｕｄａＨ．Ｐａｒｔｉａｌｐｍｉｆｉｃａ－
ｔｉｏｎ
ａｎｄｓｔｕｄｙｏｆ８０ｍｅｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ
ｏｆｒｉｃｅ
ｇｅｒｍｆｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ．
ＡｇｒｉｃＢｉｏｌＣｈｅｍ，１９８０，４４：４４３．４４５
【１０］ＡｒａｋｉＴ，ＫｉｔａｏｋａＨ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｐｒｏｂｕｃｏｌｅｓｌｉ－
ｍａｔｅｄｂｙｔｈｅｒｅａｃｔｉｖｉｔｙｗｉｔｈｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅａｎｄｂｙｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ
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【ｌｌ】ＹｕａｎＷ－Ｗ（袁伟伟），ＴａｎＸ．Ｌ（谭小力）．ＺｈｏｕＪ（周佳）ｔＺｈｕ
Ｆ—Ｇ（朱福各），ｘｕＦ（胥峰），ＹｕＬ广Ｌ（于莉莉）．Ｄｙｎａｍｉｃ
ｃｈａｎｇｅ
ｏｆ
ｌｉｐａｓｅｓａｃｔｉｖｉｔｙｄｕｒｉｎｇ
ｐｏｓｔ－ｇｅｒｍｉｎａｔｉｖｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｓｅｅｄｄｅｖｅ－
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Ｇ－Ｚ（田国政）．Ｔｈｅ
ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆ
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ｆｅｃｔｏｆｈｅａｖｙｍｅｔａｌｓＣｒａｎｄＣｕ
Ｏｎ
ｓｅｅｄｓｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄｌｉｐａｓｅ
ａｃｔｉｖｉｔｙ
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ＦａｎＢ（范蓓），ＳｈｅｎｇＪ－Ｐ（生吉萍）．Ｃｈａｎｇｅｓ
ｏｆｔｈｅ
ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆ
ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ。Ｌｉｐａｓｅ，ＳＯＤａｎｄＣＡＴｄｕｒｉｎｇｔｈｅｇｅｒｎｌｉｎａｆｉｏｎ
ｏｆｔｈｅ
ｐｅａｎｕｔｓｅｅｄ．ＪＣｈｉｎｌｕｓｔＦｏｏｄＳｃｉＴｅｃｈｎｏｌ（中国食品学报），２００３，
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Ｃｌｉｉｎ雠埘ｔＩｌ
Ｅｎｇｌｉｓｈ
ａｂｓｔｒａｃｔ）
【１５】ＺｈａｎｇＹ（张瑛），ＷｕＹ４（吴跃进）＇Ｙｕ二Ｌ（余增亮），ＷａｎｇＹ（王
钰）．ＳｈｅＤ－Ｈ（余德红）．ＳｏｎｇＭ（宋美）．Ｔｈｅ
ｒａｐｉｄ
ｄ咖ｃ咖ｏｆ
１６８２
作物学报第３７卷
ｓｅｅｄｓｌｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｃｈｉｎａ，Ｐａｔｅｎｔｓｅｒｉａｌｎｕｍｂｅｒ：２００５１００３７７２０．
Ｘ．Ｌ（常秀兰），ＹａｎｇＳ－ｔｌ（杨淑惠），ＲｅｎＳ－Ｐ（任淑萍），ｗｕｚ－ｘ（吴志行），ｕＲ—Ｆ（李仁风），ＺｈａｏＪ－Ｙ（赵菊英）．Ｒｕｋｓ
Ｓｅｅｄ
ｆｏｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
６．２００５．２（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅ）
【１６】ＬｊｕＪ（刘洁），ＺｈａｎｇＹ（张瑛），ＳｏｎｇＭ（宋美），Ｒｅｎｃ（任冲）．Ｊｉａｎｇ
Ｊ．Ｙ（蒋家月），Ｙｕ乙Ｌ（余增亮），ＷｕＹ－Ｊ（吴跃进）．Ｓｔｕｄｙ
ｒａｔｅ
ｏｎａｃｃ＂ｕ－
芽试验）．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＳｔａｎｄａｒｄＰｒ鹳ｓｏｆＣｈｉｎａ，１９９５（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅ）
【１９】ＪｉｎＪ－Ｍ（金建猛）’ＲｅｎＵ任丽）＇ＧｕＪ－Ｚ（谷建中），ＦａｎＪ－Ｌ（范君
Ｔｅｓｔｉｎｇ删ｏｎ
Ａ
Ｔｅｓｔ（农作物种子检验规程——发
ａｎａｌｙｓｉｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅｏｆｆｉｃｅｓｅｅｄＵｐａｓｅ．ＣｈｉｎＨｉｇｈＴｅｃｈｎｏｌＬｅｕ
ｗｉｔｈＦａｇ．
（高技术通讯），２００７，１７（１０）：１０７７－１０８１恤ＣｌｉｉｌｌＣＳｅ
１ｉｓｈ
龙）’ｕｕｘ－Ｙ（刘向阳）．Ｓａｆｅ
ｓｔｏｒａｇｅｏｆｐｅａｎｕｔ
ｓ∞ｄｃａｕｓｅａｎａｌｙｓｉｓ
ａｂｓｔｒａｃｔ）
ａｎｄｃｏｕｎｔｅｒｍｅａｓｕｒｅｓ．ＭｏｄＡ占廊（现代农业）。２００７，（８）：４１恤
Ｃｈｉｎｅｓｅ）
【１７】ＨｕａｎｇＸ．Ｒ（黄锡荣），ＺｈａｎｇＷ－Ｊ（张文娟），ＳｏｎｇＳ－Ｆ（宋少芳）．Ｌｉ
Ｙ－Ｚ（李越中）’ＱｕＹ－Ｂ（Ｉ出音波）．Ｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ
ａｃｔｉｖｉｔｙ
ａｓｓａｙｏｆｆｉｐａｓｅ
【２０】Ｍａｇａａ
Ｍ，ＴａｒｅｋＭＭ，ＳａｌｅｈＡＭ，ＡｆａｆＳＥＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｌｉ—
ｉｎｍｉｃｒｏａｎｕｉｓｉｏｎ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（化学通报），２００１，（１０）：
ｐａｓｅｓｉｎｔｈｅ
ｇｒａｍｉｎｅａｅ：ｐａｐａｌ
ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ａｎｄ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ
６５９－６６１（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅｗｉｔｈＥｎｇｌｉｓｈａｂｓｔｒａｃｔ）【１８】ＺｈｉＪ－ｚ（支巨振）＇Ｂｉｘ—Ｈ（毕辛华），Ｄｕ
ｏｆｅｓ妊ｆａｓｅ
２２’７＿２３４
ｆｒｏｍＡｖｅｎａｆａｔｕａ．ＢｉｏｒｅｓｏｕｒＴｅｃｈｎｏｌ，２０００。７３：
Ｋ－Ｍ（杜克敏）。Ｃｈａｎｇ
欢迎订阅２０１２年《中国农业科学》中、英文版
《中国农业科学》中、英文版由农业部主管、中国农业科学院主办。主要刊登农牧业基础科学和应用基础科学研究论文、综述、简报等。设有作物遗传育种；耕作栽培．生理生化；植物保护；土壤肥料．节水灌
溉・农业生态环境；园艺；园林；贮藏．保鲜．力Ⅱ工；畜牧．兽医等栏目。读者对象是国内外农业科研院（所）、农业大专院校的科研、教学人员。
《中国农业科学》中文版总被引频次、影响因子连续多年居全国农业科技期刊最前列或前列位次。１９９９年起连续１０年获“国家自然科学基金重点学术期刊专项基金”资助；２００１年入选中国期刊方阵双高期刊；１９９９
年获“首届国家期刊奖”，２００３、２００５年获“第二、三届国家期刊奖提名奖”；２００４－－２００６年连续荣获第四、五
届全国农业优秀期刊特等奖；２００２年起７次被中信所授予“百种中国杰出学术期刊”称号；２００８年获中国科技
信息研究所“精品科技期刊”称号，及武汉大学中国科学评价中心“权威期刊”称号；２０１０年荣获“第二届中国
出版政府奖期刊提名奖”。在北京大学《中文核心期刊要目总览（２００８年版）》中位居“农业综合类核心期刊表”首位。２０１０年１月起中文版改为半月刊，将有更多最新农业科研成果通过《中国农业科学》及时报道。
《中国农业科学》英文版（ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ
１月起英文版页码增至１６０页。２０１０年Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ为ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｉｖｅＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ。
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Ｃｈｉｎａ）２００２年创刊，２００６年１月起正式与国际著名出
Ｃｈｉｎａ被ＳＣＩＥ收录，拟于２０１２年１月更名
版集团Ｅｌｓｅｖｉｅｒ合作，海外发行由Ｅｌｓｅｖｉｅｒ全面代理，全文数据在ＳｃｉｅｎｃｅＤｉｒｅｃｔ平台面向世界发行。２０１０年
Ｓｃｉｅｎｃｅｓｉｎ
《中国农业科学》中文版大１６开，每月１、１６日出版，国内外公开发行。每期２２４页，定价４９．５０元，全年定价１１８８．００元，国内统一刊号：ＣＮｌｌ—１３２８／Ｓ，国际标准刊号：ＩＳＳＮ０５７８．１７５２，邮发代号：２．１３８，国外代号：ＢＭ４３。
《中国农业科学：》英文版大１６开，每月２０日出版，国内外公开发行。每期１６０页，国内订价３６．００元，全年４３２．００元，国内统一刊号：ＣＮ１１．４７２０／Ｓ，国际标准刊号：ＩＳＳＮ１６７１．２９２７，邮发代号：２－８５１，国外代号：
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电话：０１０．８２１０９８０８，８２１０６２８０，８２１０６２８１，８２１０６２８２，传真：０１０．８２１０６２４７网址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ＣｈｉｎａＡｇｒｉＳｃｉ．ｃｏｍ
Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｇｎｙｋｘ＠ｍａｉｌ．ｃａａｓ．ｎｅｔ．ｃｎ
万方数据
花生种子脂肪酶活力定量测定及其与储藏特性的相关性
作者：
高奇， 张瑛， 刘泽， 张正竹， 吴跃进， 禹山林， 张琛， 滕斌， 吴敬德， 蒋岚， GAO Qi，ZHANG Ying， LIU Ze， ZHANG Zheng-Zhu， WU Yue-Jin， YU Shan-Lin， ZHANG Chen， TENG Bin，WU Jing-De， JIANG Lan
高奇,GAO Qi(安徽省农业科学院水稻研究所/安徽省水稻遗传育种重点试验室,安徽合肥230031;安徽农业大学农业部茶及药用植物安全生产重点开放试验室,安徽合肥230036)， 张瑛,ZHANG Ying(安徽省农业科学院水稻研究所/安徽省水稻遗传育种重点试验室,安徽合肥230031;中国科学院安徽省离子束生物工程学重点试验室,安徽合肥230031)， 刘泽,滕斌,吴敬德,蒋岚,LIU Ze,TENG Bin,WU Jing-De,JIANG Lan(安徽省农业科学院水稻研究所/安徽省水稻遗传育种重点试验室,安徽合肥,230031)， 张正竹,张琛,ZHANGZheng-Zhu,ZHANG Chen(安徽农业大学农业部茶及药用植物安全生产重点开放试验室,安徽合肥,230036)， 吴跃进,WU Yue-Jin(中国科学院安徽省离子束生物工程学重点试验室,安徽合肥,230031)， 禹山林,YUShan-Lin(山东省花生研究所,山东青岛,266100)作物学报
Acta Agronomica Sinica2011,37(9)2次
作者单位：
刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
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引用本文格式：高奇.张瑛.刘泽.张正竹.吴跃进.禹山林.张琛.滕斌.吴敬德.蒋岚.GAO Qi.ZHANG Ying.LIU Ze.ZHANG Zheng-Zhu.WU Yue-Jin.YU Shan-Lin.ZHANG Chen.TENG Bin.WU Jing-De.JIANG Lan 花生种子脂肪酶活力定量测定及其与储藏特性的相关性[期刊论文]-作物学报 2011(9)
作物学报ＡＣＴＡＡＧＲＯＮＯＭＩＣＡＳＩＭＣＡ
ＩＳＳＮ０４９６．３４９０；ＣＯＤＥＮＴＳＨＰＡ９
２０１１，３７（９）：１６７６－－１６８２ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｈｉｎａｃｒｏｐｓ．ｏｒｇ／ｚｗｘｂ／
Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｂｚｗ＠ｃｈｉｎａｊｏｕｒｎａｌ．ｎｅｔ．ｃｎ
ＤｏＩ：１０．３７２利ＳＰ．Ｊ．１００６．２０１１．０１６７６
花生种子脂肪酶活力定量测定及其与储藏特性的相关性
高张
奇１，３琛３
张瑛１，２，＋刘泽１张正竹３，。
蒋岚１滕斌１吴敬德１
吴跃进２
禹山林４
１安徽省农业科学院水稻研究所，安徽省水稻遗传育种重点试验室，安徽合肥２３００３１；２中国科学院安徽省离子柬生物工程学重点试
验室。安徽合肥２３００３１；３安徽农业大学农业部茶及药用植物安全生产重点开放试验室，安徽合肥２３００３６；４山东省花生研究所。山东青岛２６６１００
摘
要：对已有水稻脂肪酶活力比色测定方法进一步修改和优化，建立了花生脂肪酶活力定量测定方法，并确定取
ｍｇ
样量５ｍｇ、底物浓度３０
ｍＬ。１为最适试验条件，该方法具有精确性好、特异性强、重复性好等特点。利用该方法
检测２１６份花生种质资源的脂肪酶活性，表明不同材料间差异极显著（，Ｉ＜０．００１）。试验筛选出酶活力高低差异显著的材料１０份（高低各５份），并以其中２份高脂肪酶活性和２份低脂肪酶活性材料进行高温、高湿人工加速老化试验，结果表明，随老化时间延长，高脂肪酶活性材料发芽率下降较快，而低脂肪酶活性材料发芽率下降较慢，花生脂肪酶活
力与其种子活力呈负相关（相关系数为－０．８８７５）。该结果为进一步深入研究脂肪酶对花生储藏劣变的影响提供了参考。
关键词：花生；脂肪酶活力：定量测定；储藏特性
ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＰｅａｎｕｔＳｅｅｄＬｉｐａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＩｔｓＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ
ｗｉｔｈＳｔｏｒａｇｅＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
ＧＡＯ
Ｑｉｌ∥，ＺＨＡＮＧＢｉｎｌ，ＷＵ
Ｙｉｎ９１＇２’，ＬＩＵＺｅｌ，ＺＨＡＮＧ
Ｚｈｅｎｇ．Ｚｈｕ３，，ＷＵ
Ｙｕｅ．Ｊｉｎ２，ＹＵ
Ｓｈａｈ—Ｌｏ，７＿ＨＡＮＧ
Ｃｈｅｎ３，
ＴＥＮＧ
１
Ｊｉｎｇ—Ｄｅｌ，ａｎｄＪＩＡＮＧＬａｎｌ
ＲｉｃｅＲｅｓｅａｒｃｈ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ。ＡｎｈｎｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ／ＡｎｈｕｌＰｒｏｖｉｎｃｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｏ／ｏｆＲｉｃｅＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇ，Ｈｅｆｅｉ２３００３１，
Ｃｈｉｎａ；２
ＡｎｈｕｌＰｒｏｖｉｎｃｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＩｏｎＢｅａｍ
Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ。Ｃｈｉｎ雠ＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｅｆｅｉ
ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳａｆｅｔｙ，ＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｈａｆｅｉ２６６１００，ＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ：Ｂａｓｅｄ
２３００３６，‰４
２３００３１，蛐３
ＴｅａａｎｄＨｅｒｂｓＫｅｙ
ＳｈａｎｄｏｎｇＰｅａｎｕｔＲｅｓｅａｒｃｈ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ。Ｑ．ｍ９４ａｏ
ｏｎ
ｃｏｌｏｒｉｍｅｌｒｉｃｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｒｅｐｏｒｔｅｄｆｏｒｒｉｃｅｌｉｐａｓｅ，ｗｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ
ｐｅａｎｕｔ
ａ
ｎｅｗｍｅｔｈｏｄｉｍｐｒｏｖｉｎｇａｎｄｏｐ－
ｔｉｍｉｚｉｎｇｔｈｅｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｆｏｒ
ｏｆ３０ｍｇｍＬ－‘．ｒ１１１ｅ
ｍｅｔｈｏｄ
ｓｅｅｄｌｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ，ｗｉｔｈｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｓａｍｐｌｉｎｇａｍｏｕｎｔｏｆ５ｍｇａｎｄｓｕｂｓｔｒａｔａｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｗａｓｖａｌｉｄａｔｅｄｔｏｂｅａｃｃｕｒａｔｅ．ｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｄｗｅｌｌｒｅｐｅａｔａｂｌｅ．１１他ｆｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆ２１６ｐｅａｎｕｔｇｅｒｍ－
ｐｌａｓｍ
ｒｅｓｏｕｒｃｃｓ
ｌｏｗｅｒｌｉｐａｓｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（ｐ＜０．００１）ａｍｏｎｇｔｈｅｍ．Ｆｉｖｅｗｉｔｈｈｉｇｈｅｒｌｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｆｉｖｅｗｉｔｈ
ａｃｔｉｖｉｔｙＷｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄ，ａｎｄｅａｃｈｔｗｏｏｆｗｈｉｃｈｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｔｏｐｅｒｆｏｒｍａｎａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ．ａｇｉｎｇｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｕｎｄｅｒｈｉ吐ａｎｄｈｉｇｈｍｏｉｓｔｕｒｅ．１１埒ｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔ，ｗｉｔｈｅｘｔｅｎｓｉｏｎｏｆｓｔｏｒａｇｅｔｉｍｅ．ｔｈｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｐｅａｎｕｔｗｉｔｈ
ｗｅｒｅ
ｄｅｔｅｃｔｅｄ，ｗｉｔｈ
ｌｏｗｅｒｌｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｌｏｗｌｙ，ｗｈｉｌｅｔｈａｔｏｆｐｅａｎｕｔｗｉｔｈｈｉｇｈｅｒｌｌｐａｓｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｒａｐｉｄｌｙ，ｓｈｏｗｉｎｇａｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｓｅｅｄｖｉｇｏｒａｎｄｐｅａｎｕｔｌｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ（ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｗａｓ－０．８８７５）．１１地ｓｔｕｄｙｐｒｏｖｉｄｅｓａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｆｕｉｔ［圮ｒｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｆｉｐａｓｅＫｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｅａｎｕｔ；Ｌｉｐａｓｅ
ｏｎ
ｐｅａｎｕｔｓｔｏｒａｇｅｃｈａｒａｃｔａｄｓｔｉｃｓ．
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
ａｃｔｉｖｉｔｙ；Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；Ｓｔｏｒａｇｅ
花生是重要的食用植物油资源和经济作物，其
４位；我国花生种植面积仅次于油菜和大豆，但总产和单产一直位居全国油料作物之首，占油料作物总
食用植物油年产量占世界总量的近１４％，居世界第
本研究由安徽省自然科学基金资助项目（１１０４０６０６Ｍ９７），安徽省优秀青年基金项目（０８０４０１０６８０２）和安徽省水稻遗传育种重点试验室开放基金项目（ＳＤ２００９．４）资助。
‘通讯作者（Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒｓ）：张瑛．Ｅ．ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｙｉｎ９５６８８８＠ｓｉｎａ．ｔｏｍ；张正竹。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｚｚ＠ａｈａｕ．ｅｄｕ．∞，Ｔｅｌ：０５５１．２１６０１８２。
０５５ｌ一２１６０４５３
第一作者联系方式：Ｅ．ｍａｉｌ：ｗｗ４１２７＠１６３．ｃｏｍ
Ｒｅｃｅｉｖｅｄ（收稿日期）：２０１１—０２．１２；Ａｃｃｅｐｔｅｄ（接受日期）：２０１１－０５—２７；Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄｏｎｌｉｎｅ（网络出版日期）：２０１１－０６．２８．
ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔｕｉｌ／１ｌ－１８０９．Ｓ．２０１１０６２８．１０１１．０２１．ｈｕｎｌ
万方数据
第９期高奇等：花生种子脂肪酶活力定量测定及其与储藏特性的相关性
１６７７
产的５０％左右【ｌ也】。花生种子中脂肪含量平均达到５０％左右，特别是不饱和脂肪酸的含量很高，占油脂的８０％以上，适宜制造各种营养食品１３巧】。
花生在储藏过程中极易发生氧化、酸败、霉变、走油等现象，食用变质的花生或花生制品会对人体造成伤害，诱发各种病变【６】。花生种子储藏过程中，脂肪代谢过程是其品质劣变的重要原因。脂肪酶是
脂肪分解代谢中第一个参与反应的酶，对脂肪的转
化速率起着调控的作用，脂肪酶首先识别并攻击脂肪酸链中的酯基，并导致脂肪水解反应的发生１７－８１。
然而，长期以来，关于油料作物种子脂肪酶的
研究主要集中于种子萌发过程和形成期脂肪酶活性
的变化‘１１１。张弛等‘１２１和翟征秋等㈣分别研究了硒和
重金属铬、铜对花生种子萌发前后脂肪酶活力变化
的影响，申琳等【１４】贝悃于究了花生种子萌发过程中蛋
白酶、脂肪酶及ＳＯＤ、ＣＡＴ酶活性变化。但对于油料作物干种子特别是储藏过程中脂肪酶作用的研究尚未见报道。
张瑛等【１５】发明一种简易、高效的作物种子脂肪酶定性比色法并应用于水稻干种子检测。刘洁等【１６１
在其基础上进一步深入研究，提出了水稻干种子脂肪酶活力精确定量分析技术，可以快速、准确地检
测出水稻种子脂肪酶活力。本文将该方法应用到花生种子脂肪酶活力检测，并对方法进一步优化，对花生种子材料的脂肪酶活性进行了大规模筛选和花生储藏过程中脂肪酶作用的初步探索，为进一步探讨花生种子脂肪酶在其储藏过程中作用提供了方法和材料的准备。
１材料与方法
１，１试验材料
对照材料皖花４号由安徽农业科学院作物所提
供，２１６份花生种质资源材料由山东花生所提供。吡
啶、醋酸铜、正辛酸均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；异辛烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限公司：橄榄油、吐温．２０为化学纯，购
自国药集团化学试剂有限公司；Ｔｒｉｓ为分析纯，购自
Ｓｉｇｍａ公司；水为去离子水：其他试剂均为分析纯。电子天平（上海天平仪器厂）、Ａ１１型分析研磨机（德国ＩＫＡ）、ＴＧＬ．１６Ｇ型离心机（上海安亭科学仪器厂）、ＨＳＺ．Ｈ型水浴振荡器（哈尔滨市东联电子技术开发有限公司）、ＳＴＳ．３型脱色摇床（上海琪特分析仪器厂）、７２１Ｗ型分光光度计（上海光学仪器厂）、
万方数据
ＺＲＸ．２５８Ｄ智能人工气候箱（杭州钱江设备有限公司）、ＬＲＨ．４００一ＧＳ人工气候箱（发芽箱）（广东省医疗器械厂）、研钵、容量瓶、离心管等。１．２花生脂肪酶活力检测方法
根据刘洁等比色法【１６】略修改、优化。
１．２．１
原理
以橄榄油作为底物，在给定时间内，
脂肪酶酶活高低与其催化水解底物生成的脂肪酸物质的量成正比，再利用铜离子与脂肪酸形成铜皂【１７】，在７１５ｎｍ测其吸光度以鉴定脂肪酶反应体系生成的脂肪酸量。
１．２．２
底物微乳液的制备
将橄榄油和
Ｔｗｅｅｎ一２０按ｌ：１（ｗ／ｗ）混合，经磁力搅拌器搅拌均匀，得底物微乳液。１．２．３粗酶浸提液的制备
选取新鲜饱满、表皮
光滑、无病斑和损伤的花生果数粒，剥壳去皮去胚，将子叶粉碎。称取５ｍｇ（优化过程见结果２．１．１），用研钵研碎，加入１
ｍＬ
Ｔｒｉｓ．ＨＣＩ缓冲液研磨成匀浆后
转移至２５ｘ２００试管中，再用１ｎｌＬ缓冲液冲洗研钵两次，并将缓冲液转移至试管中。１．２．４脂肪酸显色剂的配制
称取５ｇ乙酸铜，
溶解于１００ｍＬ去离子水中，再加３ｍＬ吡啶，混匀即得脂肪酸显色剂。反应生成的游离脂肪酸与醋酸铜溶液形成的铜皂加入吡啶后，随着溶液ｐＨ值的增大，铜皂的吸光度大大增加，在ｐＨ６．０—６．２范围内，铜皂的吸收最强。因此，必须控制醋酸铜．吡啶的ｐＨ在６．１处【”】。１．２．５脂肪酶活力的测定
将３ｍＬ微乳液底物
加入２５ｘ２００试管与粗酶浸提液混合，在ＨＳＺ—Ｈ型水浴振荡器中３７℃，用封口膜封口，１６０转水浴振荡
２０
ｈ。反应完毕后，把反应液转移到１５ｍＬ具盖试管
中并加入７ｍＬ异辛烷，将试管置ＳＴＳ一３型脱色摇床充分振荡３０ｍｉｎ。其后把试管置试管架上静置１０ｈ，
待其分层后，移取上层有机相６ｍＬ分装于Ａ、Ｂ两
只５ｍＬ离心管中，各３ｍＬ。每只离心管中分别加人０．７５ｍＬ脂肪酸显色剂，在ＳＴＳ．３型脱色摇床上充分振荡混匀１０ｍｉｎ，使其显色后，８０００ｘｇ离心１０ｍｉｎ。合并Ａ、Ｂ两管淡蓝色上清液，在７１５ｎｍ处测定吸光度。上清液吸光值的高低对应于脂肪酶活性的高低。对照管试验方法同上，用ｐＨ７．５的Ｔｒｉｓ．ＨＣｌ缓冲液３ｍＬ代替３ｍＬ酶液。比色时，脂肪酶活性管和对照管均用纯水调零。
１．２．６脂肪酸吸光度标准曲线的绘制
配制一系
列不同浓度的正辛酸，异辛烷溶液６ｍＬ等量分装于
１６７８
作物学报第３７卷
２只５ｍＬ离心管中，各加０．７５ⅡｌＬ脂肪酸显色剂，于ＳＴＳ．３型脱色摇床充分振荡混匀１０ｍｉｎ。离心后取两管上层有机相合并后在７１５ｎｍ以异辛烷作参比测定吸光度，试验重复３次，以平均吸光度作为结果。用ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ进行数据处理，绘制脂肪酸标准曲线如图１所示。
Ｆａｔｔｙ∞ｉｄｃｏｎｔｅｎｔ（ｍｇｍＬ－’）
图１脂肪酸吸光度标准曲线
Ｆｉｇ．１
Ｓｔａｎｄａｒｄ
ｃｕｒｖｅ
ｏｆａｂｓｏｒｂａｎｃｙｏｆｆａｔｔｙａｄｄ
该标准曲线相关系数较好，数据偏差很小，回
归方程Ｙ＝０．６７１６ｘ＋０．０７８９僻２＝０．９９８７）可以代表吸
光度和游离脂肪酸浓度之间的关系。
１．２．７脂肪酶活力的定义与计算
假设用上述方法测得某样品管ＯＤ值为Ｙ对照管ＯＤ值为Ｙ。查标准曲线可得该反应体系中游离脂肪酸浓度的变化，以上述反应条件下样品中含的脂肪酶在２４ｈ内消化底物所生成０．００１ｍｇ脂肪酸作为一个酶活力单位
Ｕ，则该样品的脂肪酶活力为Ａ＝【（ｙ＿ｌ神．０７８９）／
０．６７１６］／０．００１，单位为Ｕ。
由于底物橄榄油亦可以在水浴过程中分解生成游离脂肪酸，所以应设对照管排除橄榄油的本底干扰作用。用脂肪酶活性管ｙ与对照管ｙｏ的差值代表产生的脂肪酸引起的吸光度变化，即脂肪酶的相对活性。将（ｙ．ｔｏ）代入上述回归方程可得该样品管中游离脂肪酸浓度的变化量，再根据本文中对脂肪酶酶活的定义可以得到样品脂肪酶的总活力。
１．３取样量对脂肪酶活力检测的影响
分别取皖花４号花生粉１、３、５、１０、１５、２０和３０ｍｇ，底物浓度为３０
ｎａｇ
ｍＬ－１，其他试验步骤同
上。另设一组对照管，每个浓度梯度各设３个平行酶
活性管，取测定平均值，以酶活性管与对照管的ＯＤ
值代入公式计算该样品脂肪酶的活力。１．４取样量与提取液蛋白质浓度的相关性
取皖花４号花生粉０．５、１、５、１０、１５、２０和
２５
ｍｇ，加Ｔｆｉｓ．ＨＣｌ缓冲液３ｍＬ研磨成匀浆，离心
后取１．５ｍＬ上清液，加Ｔｎｓ．ＨＣｌ缓冲液１．５ｍＬ稀释，万方数据
在波长２６０ｎｍ和２８０ｎｍ处分别测吸光度。
蛋白质浓度（ｒａｇｍＬ－１）＝（１．４５ｘＡ２８旷＿０．７４８ｘＡ２６０）ｘ２式中Ａ２８０和Ａ２６０分别是蛋白质溶液在２８０ｎｍ和
２６０
ｎｍ波长下测得的吸光度，２为溶液的稀释倍数。
试验重复３次，取平均值。用ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ处理数据。
１．５酶液浓度对脂肪酶活力检测的影响
称取１２０ｍｇ皖花４号花生粉加Ｔｎｓ．ＨＣｌ缓冲液
１０
ｍＬ研磨成匀浆后离心得到粗酶液，再分别用缓
冲液稀释２４、１２、８、４和２倍，即设置粗酶液浓度分别为０．５、１、１．５、３、６和１２ｒａｇ
ｍＬ。１浓度梯度，底
物浓度为３０
ｍｇ
ｍＬ－１，其他试验步骤同上。另设置
一组对照管，每个浓度梯度各设３个平行酶活性管，取测定平均值，以酶活性管与对照管的ＯＤ值代入公式计算该样品脂肪酶的活力。
１．６底物浓度对脂肪酶活力检测的影响
分别配置底物（橄榄油的微乳液）浓度为１、５、
１０、２０、３０和４０
ｍｇ
ｍＥ－１的微乳液，称取皖花４号
花生粉５ｍｇ，其他试验步骤同上。每个浓度梯度各
设３个平行酶活性管，取测定平均值，另设一个对照管，以酶活性管与对照管的ＯＤ值代入公式计算该样品脂肪酶的活力。
１．７脂肪酶活性差异材料筛选
以２１６个花生种质资源为材料，按田间编号分为２１组，每组加入皖花４号作为对照，利用优化后的方法进行脂肪酶活性检测，每个样品测定设置２
个重复，取平均值，另设置一对照管，以酶活性管与
对照管的ＯＤ值代人公式计算该样品脂肪酶的活力。
１．８人工加速老化试验
选取扩繁后的２份高脂肪酶活性和２份低脂肪酶活性材料各１００ｇ，装入尼龙纱网袋中，设３个重复，于４２．５℃、湿度８７．５％的恒温恒湿箱进行人工加速老化。在５、１０、１５、２０和２５ｄ，每次２０ｇ，定期取样进行发芽试验。
１．９花生种子发芽试验
采用ＧＢ／Ｔ３５４３．４－１９９５中规定的的纸间法（ＢＰ）ｕ剐，
选用滤纸作为芽床，在培养皿中铺２层滤纸后将种
子置其上，再在种子上覆盖１层滤纸。将芽床用纯水充分润湿，放于恒温培养箱中，恒定温度２７℃，保持芽床湿润，干时加水。每处理２０粒种子，３次重复。每天观察记载发芽种子数，当胚根长≥种长时视为发芽种子，结果取３次重复的平均值。试验期
间如有发霉种子将其取出。发霉严重时更换芽床，
第９期高奇等：花生种子脂肪酶活力定量测定及其与储藏特性的相关性
１６７９
置床６ｄ后统计发芽率。
发芽率＝正常发芽种子数／种子总数ｘ１００％。
２结果与分析
２．１脂肪酶活力检测试验条件的探索
２．１．１取样量对脂肪酶活力的影响
由图２可知。
花生取样量少于５ｒｎｇ时，酶活力与花生取样量呈正比。当取样量达到５ｍｇ后酶活力逐渐趋于平稳，上升幅度变缓。表明５ｍｇ花生中的酶量在２０ｈ内可以将绝大部分底物彻底分解。因此，最适取样量为５ｎａｇ。２．１．２取样量与提取液蛋白质浓度的相关性
由
图３可见，在取样量增加到２５ｍｇ时，提取液的蛋白
浓度与取样量仍为正比关系（铲＝０．９９７９），说明试验
中使用的取样量未超出缓冲液的提取能力范围，试验结果明显。
；置零餐葛譬暑
∞∞∞加∞舯∞柏加０
Ｓａｍｐｌｅ
ｖｏｌｕｍｅ（嘲
图２取样量对脂肪酶活力的影响
Ｆｉｇ．２
Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓａｍｐｌｉｎｇａｍｏｕｎｔ
ｏｎ
ｉｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ
２２２Ｏｌ８ｌ６ｌ４ｌ２ｌＯＯ８Ｏ６Ｏ４Ｏ２
Ｏ
Ｓａｍｐｌｅ
ｖｏｌｕｍｅ（ｍｇ）
圈３取样量对提取液的蛋白浓度的影响
Ｆｉｇ．３
Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓａｍｐｌｉｎｇａｍｏｕｎｔ
ｏｎ
ｅｘｔｒａｃｔｐｒｏｔｅｉｎ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａ廿ｏｎ
２．１．３
酶液浓度对脂肪酶活力的影响
由图４可
知，酶浓度低于１．５ｍｇ
ｍＬ－１时，酶活力与酶浓度呈
正比。当酶浓度达到１．５ｍｇ
ｍＬ一１后酶活力逐渐趋于
平稳，上升幅度变缓。表明当酶浓度达到１．５
ｎａｇ
ｍＬ－１以后，在２０ｈ内可以将绝大部分底物彻底分
万方数据
解。因此，酶液浓度应小于１．５ｍｇｍＬ－１使酶活力与
酶浓度始终保持正比关系，１．５
ｍｇ
ｍＬ－１的酶液３
ｍＬ
所用样品粉约４．５ｍｇ左右，与上述结果基本一致。２．１．４底物浓度对脂肪酶活力的影响
从图５可
以看出，底物浓度增加，脂肪酶活力也增加，在底物浓度低范围内，脂肪酶活力与底物浓度呈正比，当橄榄油浓度增加到３０
ｍｇ
ｍＬ以时，酶活基本稳定
不再增加，最适底物浓度为３０ｍｇ
ｍＬ－１。
Ｅｍｙｍｅｃｏｎｃｅｎ劬ｔｉｏｎ（ｍｇｍＬ－ｔ）
图４酶液浓度对脂肪酶活力的影响
Ｆｉｇ．４
Ｅｆｆｅｃｔｏｆ
ｅｎｚｙｍｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｎ
ｌｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ
１６０
藏
薯８０
莹４０６０
—２０
０
Ｓｕｂｓｔｒａｃｔｃｏｎｃｅａｔｒａｔｉｏｎ（ｍｇ
ｍＬ－Ｉ）
图５底物浓度对脂肪酶活力的影响
Ｆ．ｇ．ｓ
Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓｕｂｓｔｒａｃｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｌｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ
２．１．５方法的精密度试验应用优化得到的最适
条件对皖花４号脂肪酶活性检测平行试验７次，测得酶活力分别为１５７．３５４、１６２．５５、１４８．３６４、１５３．９８４、
１６３．２５３、１６１．１２和１５１．６６９。对结果进行统计计算
后得到相对标准偏差（ＲＳＤ）为３．４％，小于５％，证明该方法稳定性好、重复性好，可以作为花生脂肪酶活力检测的基本方法。
２．２花生种子脂肪酶活性差异材料的筛选
利用上述优化的脂肪酶检测方法获得２１６个花生资源材料脂肪酶活性直方图（图６），脂肪酶活性呈曲线分布，变幅为３５—５２５，最大峰值落在１５０附近，
主要分布区域在７５—３７５。
由表１可得，样品平行组内重复的无差别的概率Ｐ＝Ｏ．１９６８＞０．０５，说明平行组问差异不显著，结果较为稳定，重复性较好，样品间的无差别的概率Ｐ＝０．００００＜０．０１，说明不同材料间差异极其显著，其
１６８０
作物学报第３７卷
脂肪酶活性有很大差异。综合考虑试验组别、平行间稳定性等因素后，筛选得到特异性脂肪酶活性材料见表２。
弱∞笱加
吞ｃ口‰
：２ｍ
５Ｏ
７５
１５０
２２５Ｌｉｐａｓｅ
３００
３７５
４５０
５２５
５５０
差异打下良好的基础。
２．３人工加速老化试验
选取脂肪酶活性高的花生种子９９号和１７５号，脂肪酶活性低的花生种子１０６号和２２１号扩大种植，收获后按国标纸间法进行发芽试验。发芽率结果如图７。
从图７可以发现，脂肪酶活性高的花生种子９９
号和１７５号在人工加速老化过程中的发芽率下降趋势更大，明显高于脂肪酶活性低的花生种子１０６号和２２１号的下降趋势。在人工加速老化１５ｄ后，高脂肪酶活性材料发芽率下降至２０％左右，而低脂肪酶活力的材料１０６号发芽率仍保持在４５％，２２１号材料仍保持了９３．３３％的高发芽率。在人工老化２５ｄ后，
ａｃｔｉｖ崎（Ｕ）
图６不同花生种子材料脂肪酶活力分布
Ｆｉｇ．６
Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｌｉｐａｓｅ
ａｃｆｉｖｔｔｙｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｅａｎｕｔｓｅｅｄｓ
高脂肪酶活性材料发芽率下降至５％左右，而低脂肪
酶活力的材料发芽率仍保持在３０％左右，为高脂肪
表２中左侧５个材料花生种子酶活较高，右侧５个材料花生种子酶活较低，２组平均酶活力相差超过３倍，为比较不同脂肪酶活性材料在储藏中的变化
表１
Ｔａｂｌｅｌ
酶活性材料发芽率的５倍。ＳＰＳＳ软件相关性分析表
明，花生脂肪酶活力与人工加速老化２５ｄ种子发芽
率的平均值呈负相关（相关系数为－０．８８７５）。
不同花生种子脂肪酶活力差异的显著性分析
平方和
均方丛塑！！ｇ旦！堡
４３５８．５６８１３６２０．４０２２５９９．５５７８１０１．２７６
Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｌｉｐａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｅａｎｕｔｓｅｅｄｓ
变异来源！垦盟！堕壁垒！殳翌堡！重复Ｒｅｐｅａｔ
材料数Ｍａｓｔｉｆｆｎｕｍｂｅｒ试验误差Ｔｅｓｔ总和Ｔｏｔａｌ
ｅｒｒｏｒ
自由度Ｆ值Ｐ值
生
１２１５
墨ｇ坠坚！！
４３５８．５７２９２８３８６．４６５５８９０４．８１３４９１６４９．８４
至：！！！坠！
１．６７７５．２４０
￡：！型坠！
０．１９６８０．００００”
２１５
４３１
３讨论
脂肪酶催化脂肪水解生成大量的游离脂肪酸。一方面，游离脂肪酸增多使油脂酸败、酸价增高、油脂风味变差，加工过程中的得率减少，损失加大，生产成本增高。游离脂肪酸发生断裂后，不饱和键形成氧化物，分解为低级脂肪酸和醛类、酮类等物质【９ｄ０１。另一方面，游离脂肪酸增多会导致酸中毒，
作物种子储藏变质问题十分重要。
花生因其含油分高，在高温、高湿、机械损伤、氧气、日光及生物的综合作用下，极易发生酸败变质，降低种子的发芽率，不仅影响其食用品质，往往也影响其商品价值。目前延长花生储藏时间的方法多是控制其含水量或仓库温湿度等外界环境条件，
对种子自身变化则鲜有探讨【ｌ们。如前言所述，对花
生脂肪酶的研究多集中于种子萌发过程和形成期脂肪酶活性的变化，干种子脂肪酶活力较低，用已有
造成种子芽率降低。因此，研究脂肪酶对解决油料万方数据
第９期
高奇等：花生种子脂肪酶活力定量测定及其与储藏特性的相关性
１６８１
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图７４２．５＂Ｃ、相对湿度８７．５％的高温、高湿人工加速老化试验
Ｆｉｇ．７
Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄａｇｉｎｇｔｅｓｔｕｎｄｅｒ４２．５＂Ｃｏｆ
ｈｉｇｈ・ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄＲＨ８７．５％ｏｆｈｉｇｈｈｕｍｉｄｉｔｙ
的方法难以检测【２０１。
本文优化了花生干种子脂肪酶检测的方法，其中。取样量的精确化是本研究的关键，试验获得５ｍｇ的最适取样量（图２），并确定了最适底物浓度量
３０ｍｇ
ｍＬ－１（图５），筛选出脂肪酶活力高、低各５个
的两组材料（表２），其中低脂肪酶活力的２２１号材料表现特别突出，在人工加速老化２０ｄ后，仍然保持了８０％以上的高发芽率。
方法上，首次将比色法应用于花生种子脂肪酶活力的检测，克服了传统的碱滴定法灵敏度低的缺点。对原有方法加以优化和改进，使其适应于大规模材料的筛选。精密度试验表明，本方法分辨率高、稳定性强，经济适用，方便推广。通过大规模的种质筛选得到差异显著的特异性材料，并利用人工加速老化试验初步证实了脂肪酶活力差异影响花生种子的耐储藏性。为延长花生储藏期的研究开辟了一条新的思路。
４结论
比色法可以有效地测定花生脂肪酶活力，测定的最适试验条件是取样量５ｍｇ、底物浓度３０
ｍｇ
ｍＬ－１：２１６个花生材料问脂肪酶活力差异显著，筛选出了特异性脂肪酶活力材料；在人工加速老化条件下，脂肪酶活力高的花生种子的发芽率下降趋势明显高于脂肪酶活力低的花生种子，由此初步表明脂肪酶活力低的种子具有较好的耐储藏特性。
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ【１】１
Ｓｈａｈ
Ｓ－Ｈ（单世华）．ＷａｎＳ－Ｂ（万书波）．ＱｉｕＱｓ（邱庆树），Ｕ
Ｃ－Ｊ（李春娟）＇ＸｕＴ－Ｔ（许婷婷）．ＧｏｎｇＱ－Ｘ（宫清轩）．Ｑｕａｆｉｔｙ
ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ
０１１
ｇｒｏｕｎｄｎｕｔ
ｇｅｒｍｐｌａｓｍｒｅｓｏｕｒｏ酷ｉｎＣｌｆｉｎａ．Ｓｌｕｍ・
ｄｏｎｓＡｇｔｉｃ
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【２】Ｔａｎｇｓ（汤松），ＹｕＳ．Ｕ禹山林）＇ＬｉａｏＢ—Ｓ（廖伯寿），２五ａｎｇ
Ｘ．Ｙ（张新友），ＳｕｎＨ－Ｙ（孙海艳）．Ｉｎｄｕｓｔｒｙ
ｓｔａｔｕｓ，ｅｘｉｓｔｉｎｇｐｒｏ－
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Ｅｎｇｌｉｓｈａｂ－
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ｏｎ
ｔｈｅｅｆｆｅｃｔ
ｏｆｔｈｒｅｅ
ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ
ｏｎ
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Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅｗｉｔｈＥｎｇｌｉｓｈａｂｓｔｒａｃｔ）【４】Ｘｉａｏ
Ｃ－ｚ（肖昌珍）．ｗｕＹ（吴渝）．ＧａｎＤ－Ｓ（甘冬生），Ｔｏｎｇ
ｃ．ｘ（童春霞）＇“ｕＧ—Ｍ（刘桂梅）．Ｔｈｅ
ａｎａｌｙｓｉｓ
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ｒａｐｉｄ
ｄ咖ｃ咖ｏｆ
１６８２
作物学报第３７卷
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ｒａｔｅ
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Ａ
Ｔｅｓｔ（农作物种子检验规程——发
ａｎａｌｙｓｉｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅｏｆｆｉｃｅｓｅｅｄＵｐａｓｅ．ＣｈｉｎＨｉｇｈＴｅｃｈｎｏｌＬｅｕ
ｗｉｔｈＦａｇ．
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１ｉｓｈ
龙）’ｕｕｘ－Ｙ（刘向阳）．Ｓａｆｅ
ｓｔｏｒａｇｅｏｆｐｅａｎｕｔ
ｓ∞ｄｃａｕｓｅａｎａｌｙｓｉｓ
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Ｙ－Ｚ（李越中）’ＱｕＹ－Ｂ（Ｉ出音波）．Ｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ
ａｃｔｉｖｉｔｙ
ａｓｓａｙｏｆｆｉｐａｓｅ
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Ｍ，ＴａｒｅｋＭＭ，ＳａｌｅｈＡＭ，ＡｆａｆＳＥＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｌｉ—
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ｐａｓｅｓｉｎｔｈｅ
ｇｒａｍｉｎｅａｅ：ｐａｐａｌ
ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ａｎｄ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ
６５９－６６１（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅｗｉｔｈＥｎｇｌｉｓｈａｂｓｔｒａｃｔ）【１８】ＺｈｉＪ－ｚ（支巨振）＇Ｂｉｘ—Ｈ（毕辛华），Ｄｕ
ｏｆｅｓ妊ｆａｓｅ
２２’７＿２３４
ｆｒｏｍＡｖｅｎａｆａｔｕａ．ＢｉｏｒｅｓｏｕｒＴｅｃｈｎｏｌ，２０００。７３：
Ｋ－Ｍ（杜克敏）。Ｃｈａｎｇ
欢迎订阅２０１２年《中国农业科学》中、英文版
《中国农业科学》中、英文版由农业部主管、中国农业科学院主办。主要刊登农牧业基础科学和应用基础科学研究论文、综述、简报等。设有作物遗传育种；耕作栽培．生理生化；植物保护；土壤肥料．节水灌
溉・农业生态环境；园艺；园林；贮藏．保鲜．力Ⅱ工；畜牧．兽医等栏目。读者对象是国内外农业科研院（所）、农业大专院校的科研、教学人员。
《中国农业科学》中文版总被引频次、影响因子连续多年居全国农业科技期刊最前列或前列位次。１９９９年起连续１０年获“国家自然科学基金重点学术期刊专项基金”资助；２００１年入选中国期刊方阵双高期刊；１９９９
年获“首届国家期刊奖”，２００３、２００５年获“第二、三届国家期刊奖提名奖”；２００４－－２００６年连续荣获第四、五
届全国农业优秀期刊特等奖；２００２年起７次被中信所授予“百种中国杰出学术期刊”称号；２００８年获中国科技
信息研究所“精品科技期刊”称号，及武汉大学中国科学评价中心“权威期刊”称号；２０１０年荣获“第二届中国
出版政府奖期刊提名奖”。在北京大学《中文核心期刊要目总览（２００８年版）》中位居“农业综合类核心期刊表”首位。２０１０年１月起中文版改为半月刊，将有更多最新农业科研成果通过《中国农业科学》及时报道。
《中国农业科学》英文版（ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ
１月起英文版页码增至１６０页。２０１０年Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ为ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｉｖｅＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ。
ｉｎ
Ｃｈｉｎａ）２００２年创刊，２００６年１月起正式与国际著名出
Ｃｈｉｎａ被ＳＣＩＥ收录，拟于２０１２年１月更名
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Ｓｃｉｅｎｃｅｓｉｎ
《中国农业科学》中文版大１６开，每月１、１６日出版，国内外公开发行。每期２２４页，定价４９．５０元，全年定价１１８８．００元，国内统一刊号：ＣＮｌｌ—１３２８／Ｓ，国际标准刊号：ＩＳＳＮ０５７８．１７５２，邮发代号：２．１３８，国外代号：ＢＭ４３。
《中国农业科学：》英文版大１６开，每月２０日出版，国内外公开发行。每期１６０页，国内订价３６．００元，全年４３２．００元，国内统一刊号：ＣＮ１１．４７２０／Ｓ，国际标准刊号：ＩＳＳＮ１６７１．２９２７，邮发代号：２－８５１，国外代号：
１５９１Ｍ。
邮编：１０００８１；地址：北京中关村南大街１２号《中国农业科学》编辑部
电话：０１０．８２１０９８０８，８２１０６２８０，８２１０６２８１，８２１０６２８２，传真：０１０．８２１０６２４７网址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ＣｈｉｎａＡｇｒｉＳｃｉ．ｃｏｍ
Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｇｎｙｋｘ＠ｍａｉｌ．ｃａａｓ．ｎｅｔ．ｃｎ
万方数据
花生种子脂肪酶活力定量测定及其与储藏特性的相关性
作者：
高奇， 张瑛， 刘泽， 张正竹， 吴跃进， 禹山林， 张琛， 滕斌， 吴敬德， 蒋岚， GAO Qi，ZHANG Ying， LIU Ze， ZHANG Zheng-Zhu， WU Yue-Jin， YU Shan-Lin， ZHANG Chen， TENG Bin，WU Jing-De， JIANG Lan
高奇,GAO Qi(安徽省农业科学院水稻研究所/安徽省水稻遗传育种重点试验室,安徽合肥230031;安徽农业大学农业部茶及药用植物安全生产重点开放试验室,安徽合肥230036)， 张瑛,ZHANG Ying(安徽省农业科学院水稻研究所/安徽省水稻遗传育种重点试验室,安徽合肥230031;中国科学院安徽省离子束生物工程学重点试验室,安徽合肥230031)， 刘泽,滕斌,吴敬德,蒋岚,LIU Ze,TENG Bin,WU Jing-De,JIANG Lan(安徽省农业科学院水稻研究所/安徽省水稻遗传育种重点试验室,安徽合肥,230031)， 张正竹,张琛,ZHANGZheng-Zhu,ZHANG Chen(安徽农业大学农业部茶及药用植物安全生产重点开放试验室,安徽合肥,230036)， 吴跃进,WU Yue-Jin(中国科学院安徽省离子束生物工程学重点试验室,安徽合肥,230031)， 禹山林,YUShan-Lin(山东省花生研究所,山东青岛,266100)作物学报
Acta Agronomica Sinica2011,37(9)2次
作者单位：
刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
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引用本文格式：高奇.张瑛.刘泽.张正竹.吴跃进.禹山林.张琛.滕斌.吴敬德.蒋岚.GAO Qi.ZHANG Ying.LIU Ze.ZHANG Zheng-Zhu.WU Yue-Jin.YU Shan-Lin.ZHANG Chen.TENG Bin.WU Jing-De.JIANG Lan 花生种子脂肪酶活力定量测定及其与储藏特性的相关性[期刊论文]-作物学报 2011(9)