黄柏总生物碱提取方法及工艺研究

第１６卷第２期２０１０年２月

Ｃｈｉｎｅｓｅ

中国实验方剂学杂志

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃａｌＦｏｒｍｕｌａｅ

Ｖ０１．１６，Ｎｏ．２Ｆｅｂ．，２０１０

黄柏总生物碱提取方法及工艺研究

刘丽梅１，王瑞海１，陈

琳１，陈韩英２，杨立新３，刘风华¨，许剑琴５

１００７００；２．石河子大学药学院，新疆石河子８３２０００；１００７００；４．北京农学院，北京

１０２２０６）

１０２２０６；

（１．中国中医科学院中医基础理论研究所，北京

３．中国中医科学院中药所，北京

５．中国农业大学动物医学院，北京

［摘要］目的：筛选二类中兽药畜禽抗应激颗粒中黄柏总生物碱提取工艺。方法：采用Ｌ。（３４）正交设计法对黄柏药材提

取时所用乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数进行考察；采用单因素考察法对黄柏药材提取粒度进行考察。结果：黄柏提取总生物碱最佳提取工艺为：黄柏细丝２—３ｍｍ，用药材１０倍量７５％乙醇回流提取３次，每次提取１．５ｈ。结论：该工艺稳定，质量可控，可用于产业化生产。

［关键词］

黄柏；总生物碱；提取；正交设计

Ｒ２８３．６

［中图分类号］［文献标识码］

Ｂ

［文章编号］１００５—９９０３（２０１０）０２—０００３－０３

畜禽抗应激颗粒由黄柏、苍术、藿香、石膏以不

同比例组成的二类复方中兽药。在兽医临床研究中发现，该复方可提高猪等畜禽对高热环境的适应能

［收稿日期］［基金项目】

２００８－０５．１８

力，黄柏是其中的主药。黄柏为芸香科植物黄皮树

Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎｃｈｉｎｅｎｓｅ

北京市科技计划课题（Ｙ０７０５００３０４１６３１；２００８ＢＡＤＢ４８０７）

Ｓｃｈｎｅｉｄ．的干燥树皮。黄柏含

有多种生物碱，主要为小檗碱，其它生物碱有巴马丁、药根碱、黄柏碱、蝙蝠葛任碱、白瓜蒌碱、木兰花碱等¨。。资料表明黄柏总生物碱具有抗溃疡及抗腹泻

［通讯作者］｝刘风华，Ｔｅｌ：（０１０）８０７９９１４７；Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｕｌｉｍｅｉｈｒｂ

＠ｓｉｎａ．ｔｏｍ

成分含量无显著影响（Ｐ＞０．１），直观分析Ａ，＞Ａ：＞Ａ。；因素Ｂ即乙醇浓度有一定影响（Ｐ＜０．１），Ｂ：＞Ｂ，＞Ｂ．；因素ｃ即提取时间无显著影响（Ｐ＞０．１），直观分析Ｃ。＞Ｃ２＞Ｃ３；最佳工艺条件为Ａ３Ｂ：ｃ。，即１０倍量７０％乙醇回流提取２次，每次０．５

ｈ。

必要对中药提取过程中的沉降物进一步的研究。［参考文献］

［１］

国家中医药管理局编委会．中华本草［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９９９：８７４．

［２］

蔡逸平，曹岚，范崔生．枳壳类药材化学成分研究简报［Ｊ］．江西中医药，１９９８，１９（６）：４６．

［３］

刘振丽，宋志前，季燕燕，等．枳实饮片中有效成分含量测定．全国中药标准研究学术讨论会论文集．珠海，

２００５．

实验结果显示（表４），甜橙枳实乙醇提取液静置后产生的沉降物中含有大量的黄酮类成分，由表５可以看出，沉降物中橙皮苷和柚皮芸香苷总量占饮片中两种成分总量的２０．１％，提取液占４０．６％，在提取后应该将它们合并。

很多中药提取液在冷藏放置时都会产生沉降物‘川。对于含有在冷水中溶解度小的有效成分的中药，在制剂工艺提取后，提取液静置出现的沉降物不应轻易作为杂质弃去，应在研究后再确定具体方案。沉降物的产生除了因为温度变化的原因外，由于醇提液与蒸馏后的水溶液合并，造成了乙醇浓度变化，而不同化学成分在不同乙醇浓度中有差异，因此有

［７］［５］［４］

王淳．不同品种产地枳实有效成分的对比分析［Ｄ］．中国中医科学院２００９硕士博士论文．

王淳，刘振丽，宋志前，等．中药枳实提取工艺研究［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２００８，１４（９）：２３．

［６］王青，袁丹．不同产地枳实与枳壳中黄酮类成分的含量测定［Ｊ］，黑龙江医药，２００８，２１（３）：１．

任秀莲，魏琦峰，周春山，等．沉淀吸附法提取苦丁茶中的熊果酸［Ｊ］．中南大学学报（自然科学版），２００４，３５

（４）：５９９．

万方数据

・３・

第１６卷第２期２０１０年２月

Ｃｈｉｎｅｓｅ

中国实验方剂学杂志

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃａｌＦｏｒｍｕｌａｅ

Ｖ０１．１６，Ｎｏ．２Ｆｅｂ．，２０１０

作用，对免疫功能具有调节作用¨ｏ，是本课题提取的有效部位，课题以黄柏总生物碱提取率为考察指标，对资料报道的黄柏总生物碱４种提取方法：酸提法、碱提法、醇提法、酸醇提法旧。４ｏ进行试验对比，确定乙醇提取法，并对乙醇提取方法的工艺参数进行优选。１仪器与试药

ＳＰＳ２０２

ＯＨＡＵＳ电子天平（梅特勒－托利多（常

州）称重设备系统有限公司），ＲＲ－１８２电磁炉（尚朋堂（广州）电器有限公司），ＺＤＨＷ电热套（北京中星伟业仪器有限公司），ＲＥ－５２０５旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），Ｔ６紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器设备有限公司），Ａｇｉｌｅｎｔ１

１００高效液相

色谱仪（美国）。

硫酸，生石灰，乙醇均为分析纯。

黄柏药材购自河北安国，经中国中医科学院中药研究所冯学峰副研究员鉴定为芸香科植物黄皮树

Ｐｂｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎｃｈｉｎｅｎｓｅ

Ｓｃｈｎｅｉｄ．的干燥树皮，其盐酸

小檗碱的含量为３．６５％。２方法与结果

２．１盐酸小檗碱含量测定方法

２．１．１色谱条件仪器：ＷＡＴＥＲＳ－＇／１７－２４８７高效液相色谱仪；色谱柱：ＷＡＴＥＲＳ－Ｃ１Ｂ（２５０

ｍｍ×４．６ｍｍ，

５恤ｍ）；流动相：乙腈－０．１％磷酸溶液（５０：５０），每

１００

ｍＬ加十二烷基磺酸钠０．１ｇ；波长：２６５ｒｉｍ；流

速：１．０ｍＬ・ｍｉｎ‘。；柱温：３５ｏＣ。

２．１．２标准曲线的制备

取干燥至恒重的盐酸小

檗酸对照品适量，精密称定，加乙醇制成每１ｍＬ含

０．１４

ｍｇ的溶液。分别精密吸取２，４，６，８，１０斗Ｌ注

入液相色谱仪，连续进样３次，测定峰面积，以对照品进样量为横坐标，对照品峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，盐酸小檗碱在０．２８～１．４０ｔｘｇ范围内线性良好。其回归方程为Ｙ＝４．５７×１０６Ｘ一

１．５７×１０５．ｒ＝０．９９９８。

２．１．３供试品溶液的制备取上述样品约５０

ｍｇ，

精密称定，置１００ｍＬ量瓶中，加乙醇８０ｍＬ，超声处理３０ｍｉｎ，加乙醇至刻度，摇匀，过０．２｝ｘｍ滤膜，即得。

２．１．４对照品溶液的制备

精密称取盐酸小檗碱

１．５

ｍｇ，置１０ｍＬ量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻

度，摇匀，即得。

２．２黄柏总生物碱含量测定方法

２．２．１仪器Ｔ６新世纪紫外分光光度计，方法：比

．４・

万方数据

色法：精密量取上述溶液１ｍＬ，置５０ｍＬ量瓶中，加

０．０５

ｍｏｌ・Ｌ’１硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，另取乙

醇１ｍＬ，置５０ｍＬ量瓶中，加０．０５ｍｏｌ・Ｌ“硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为空白对照溶液，检测波长：

３４５ｒｉｍ。２．３

黄柏总生物碱提取方法的考察取黄柏药材

粉碎成最粗粉，共４份，每份１００ｇ，按文献旧“。工艺进行提取。采用紫外分光光度法测定提取物中总生物碱百分含量。提取物总生物碱含量、总生物碱收得率结果见表１。

表１黄柏药材不同提取方法样品含量、

总生物碱收得率测定（％）

实验结果表明，４种提取方法中乙醇提取法黄柏总生物碱提取率最高，故本研究采用乙醇提取黄柏总生物碱。

２．４黄柏总生物碱提取工艺的正交优选

根据对

黄柏提取可能有影响的因素：乙醇浓度、乙醇用量、提取次数、提取时间４个因素，采用Ｌ。（３）４正交表进行正交设计。取同一批黄柏药材粉碎成最粗粉，均匀称取９份，每份１００ｇ，按表２条件进行试验，提取、浓缩、干燥得提取物。采用紫外可见分光光度法测定提取物中黄柏总生物碱含量，计算总生物碱提取率。试验设计的因素水平表、正交试验表、方差分析表见表２—４。

裹２因蠢水平裹

因素

水平Ａ（乙醇浓度）Ｂ（乙醇用量）ｃ（提取次数）

Ｄ（提取时间）

（％）

（倍）

（ｈ）

（ｈ）

６

１．０８１．５ｌＯ

２．Ｏ

由方差分析可以看出，提取次数ｃ对黄柏总生物碱提取率有显著性影响，其它３个因素对黄柏总

生物碱提取率没有显著性影响。根据直观分析，乙醇浓度选Ａ：、乙醇用量选Ｂ，、提取时间选Ｄ：。由于提取次数对黄柏总生物碱提取率有显著性影响，在筛选出的其它参数不变的情况下，对提取次数继续进行考察，结果见表５。

第１６卷第２期

２０１０年２月

Ｃｈｉｎｅｓｅ

中国实验方剂学杂志

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃａｌＦｏｒｍｕｌａｅ

Ｖ０１．１６，Ｎｏ．２Ｆｅｂ．，２０１０

表３黄柏提取正交实验

实验号

Ａ

ＢＣＤ总碱提取率（％）

ｌｉ

１ｌ１３２２２２

５３３３３

５４２１２

３４弛∞坫弛

５２２１Ｊ

ｌ５６２３ｌ

２４７３１１Ｊ

２５８３２

ｌ３３

铊”扒酪

９

３

３２

ｌ

５．２４

表４黄柏提取总生物碱方差分析表

表５黄柏提取次数考察（％）

实验结果表明，黄柏提取３次、４次样品中总生物碱百分含量没有差别，总生物碱提取率相差不大，从生产周期和成本角度考虑，黄柏提取次数定为３次。

２．５黄柏总生物碱提取粉碎粒度的考察

取同一

批黄柏分别炮制成最粗粉（１０目）、细丝（２～３ｍｍ）、块（１０～２０ｍｍ），每份各１００ｇ，按上述优选的工艺参数Ａ：Ｂ，ｃ。Ｄ：提取，以干膏总生物碱提取率为考察指标，优选黄柏总生物碱提取的最佳粉碎粒度。实验条件及结果见表６。

表６黄柏总生物碱提取粉碎粒度的考察条件及结果（％）

实验结果表明，黄柏药材粉炮制成最粗粉和细丝，其总生物碱提取率优于炮制成块，而且此时二者

万方数据

总生物碱提取率几乎没有差别。从生产实际情况考

虑，细丝便于加工和提取，故黄柏药材宜制成细丝进行提取。黄柏提取的最佳工艺为黄柏细丝（２～３）ｍｍ，用生药１０倍量７５％乙醇回流提取３次，每次提

取１．５

ｈ。

２．６黄柏药材提取工艺的验证实验取同一批黄

柏药材，称取３份各１００ｇ，按优选的最佳工艺进行提取，样品减压干燥。采用高效液相色谱法测定样

品中盐酸小檗碱含量，采用紫外分光光度法测定总生物碱百分含量，计算出膏率、盐酸小檗碱转移率、总生物碱提取率。实验结果见表７。

表７黄柏药材提取工艺的验证实验（％）

结果表明黄柏总生物碱提取工艺稳定，出膏率

平均为３０．１０％，盐酸小檗碱转移率平均为９８．９５％，总生物碱含量平均为１５．２４％，总生物碱提取率平均为４．６０％。

３

讨论

在文献。２。ｏ报道的黄柏总生物碱４种提取方法

中，传统工业生产中常用酸水提取法提取小檗碱。本研究结果表明该方法虽然提取收率高，但总生物碱的含量较低。本研究采用乙醇提取法提取物总生物碱含量、提取率均很高，但相比之下成本要更高些，采用该方法的主要原因是便于下一步纯化达到二类中兽药有效部位含量大于提取物的５０％的要求。［参考文献］

［１］

王本祥．现代中药药理与临床［Ｍ］．天津：天津科学技术出版社，２００４：１３８５．

［２］

高红旺，张文希，田济民，等．不同工艺对黄柏中黄连素提取量的影响［Ｊ］．第四军医大学吉林医学院学报，２００３，２５（１）：２９．［３］

郭书好，李素梅，张复兴，等．酸醇法从黄柏中提取黄连素［Ｊ］．暨南大学学报（自然科学版），１９９４，１５（１）：

１３０．

［４］尹蓉莉，杨军宣，李化．黄柏中盐酸小檗碱提取实验方法的改进［Ｊ］．基层中医药杂志，２０００，１４（６）：２７．

・５・

黄柏总生物碱提取方法及工艺研究

作者：作者单位：

刘丽梅， 王瑞海， 陈琳， 陈韩英， 杨立新， 刘凤华， 许剑琴

刘丽梅,王瑞海,陈琳(中国中医科学院中医基础理论研究所,北京,100700)， 陈韩英(石河子大学药学院,新疆,石河子,832000)， 杨立新(中国中医科学院中药所,北京,100700)， 刘凤华(北京农学院,北京,102206)， 许剑琴(中国农业大学动物医学院,北京,102206)中国实验方剂学杂志

CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL TRADITIONAL MEDICAL FORMULAE2010,16(2)20次

刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：

参考文献(4条)

1.王本祥 现代中药药理与临床 2004

2.高红旺,张文希,田济民,许英爱 不同工艺对黄柏中黄连素提取量的影响[期刊论文]-第四军医大学吉林军医学院学报 2003(1)

3.郭书好;李素梅;张复兴 酸醇法从黄柏中提取黄连素 1994(01)4.尹蓉莉;杨军宣;李化 黄柏中盐酸小檗碱提取实验方法的改进 2000(06)

本文读者也读过(10条)

1. 祝晨蔯.林朝展.莫建霞 HPLC法测定黄柏药材中小檗碱与黄柏碱的含量[期刊论文]-中药新药与临床药理2004,15(4)

2. 范家佑.张松竹.JIA You-fan.SONG Zhu-zhang 黄柏中总生物碱的提取工艺优化[期刊论文]-井冈山大学学报（自然科学版）2010,31(5)

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8. 陈国留.刘东辉.张琼丹.黄海珍.吴碧玉.魏刚 关黄柏提取纯化过程中生物碱转移率的考察[期刊论文]-中药新药与临床药理2009,20(6)

9. 龙凤来.唐柳.余鸽.陈胜发.LONG Feng-lai.TANG Liu.YU Ge.CHEN Sheng-fa 黄柏提取工艺研究[期刊论文]-杨凌职业技术学院学报2009,8(2)

10. 牟宏晶.丁为民.MU Hong-jing.DING Wei-min 大孔吸附树脂选择性提取黄柏生物碱工艺研究[期刊论文]-哈尔滨理工大学学报2009,14(3)

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3.刘丽梅,陈琳,王瑞海,陈韩英,杨立新,牛燕梅,刘凤华,许剑琴 黄柏生物碱大孔树脂纯化工艺研究[期刊论文]-中草药 2010(12)

4.董旭俊,代路豪,耿会玲,高锦明 关黄柏中小檗碱提取工艺研究[期刊论文]-科技信息 2013(25)5.梁慧超,孟江,卢国勇,李雪英 鱼腥草总生物碱提取工艺的研究[期刊论文]-成都医学院学报 2010(04)

6.廉莲,咸晓燕,楚冬海,贾伟利,高慧媛 川黄柏的化学成分研究[期刊论文]-中国实验方剂学杂志 2013(19)7.冯光富,郭宏彦,张嵩,涂禾 正交实验优选化瘀止痛涂膜剂的渗漉法提取工艺[期刊论文]-内蒙古中医药 2012(22)8.刘颖,李世颂,刘娟 HPLC测定关黄柏中生物碱的含量[期刊论文]-中国实验方剂学杂志 2013(16)

9.王玥,杜守颖,戴俊东,吴清,肖瑶,袁航,戎堃,李慧云,赵静宜 黄柏中盐酸小檗碱的闪式提取工艺研究[期刊论文]-中国药业 2013(06)

10.薛佳津,杨瑞云,韦波,刘静,梁敏,罗艳 中药血散薯中总生物碱提取工艺优选[期刊论文]-中国实验方剂学杂志2012(14)

11.谭尔,罗尚华,林升得,谭荣,王宇,张艺,张静 HPLC测定秃叶黄皮树和黄皮树中5种有效成分的含量[期刊论文]-中国实验方剂学杂志 2013(23)

12.林静,高卫真,李卓燕,李佩孚,周晶 酶解辅助提取关黄柏生物碱的工艺研究[期刊论文]-天津医科大学学报2012(03)

13.代如意,李莉,殷中琼,程安春,贾仁勇,蔡红,李曼,康帅,彭练慈 夏枯草等14味中药对金黄色葡萄球菌的体外抑菌活性[期刊论文]-中国兽医学报 2014(02)

引用本文格式：刘丽梅.王瑞海.陈琳.陈韩英.杨立新.刘凤华.许剑琴 黄柏总生物碱提取方法及工艺研究[期刊论文]-中国实验方剂学杂志 2010(2)

第１６卷第２期２０１０年２月

Ｃｈｉｎｅｓｅ

中国实验方剂学杂志

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Ｖ０１．１６，Ｎｏ．２Ｆｅｂ．，２０１０

黄柏总生物碱提取方法及工艺研究

刘丽梅１，王瑞海１，陈

琳１，陈韩英２，杨立新３，刘风华¨，许剑琴５

１００７００；２．石河子大学药学院，新疆石河子８３２０００；１００７００；４．北京农学院，北京

１０２２０６）

１０２２０６；

（１．中国中医科学院中医基础理论研究所，北京

３．中国中医科学院中药所，北京

５．中国农业大学动物医学院，北京

［摘要］目的：筛选二类中兽药畜禽抗应激颗粒中黄柏总生物碱提取工艺。方法：采用Ｌ。（３４）正交设计法对黄柏药材提

取时所用乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数进行考察；采用单因素考察法对黄柏药材提取粒度进行考察。结果：黄柏提取总生物碱最佳提取工艺为：黄柏细丝２—３ｍｍ，用药材１０倍量７５％乙醇回流提取３次，每次提取１．５ｈ。结论：该工艺稳定，质量可控，可用于产业化生产。

［关键词］

黄柏；总生物碱；提取；正交设计

Ｒ２８３．６

［中图分类号］［文献标识码］

Ｂ

［文章编号］１００５—９９０３（２０１０）０２—０００３－０３

畜禽抗应激颗粒由黄柏、苍术、藿香、石膏以不

同比例组成的二类复方中兽药。在兽医临床研究中发现，该复方可提高猪等畜禽对高热环境的适应能

［收稿日期］［基金项目】

２００８－０５．１８

力，黄柏是其中的主药。黄柏为芸香科植物黄皮树

Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎｃｈｉｎｅｎｓｅ

北京市科技计划课题（Ｙ０７０５００３０４１６３１；２００８ＢＡＤＢ４８０７）

Ｓｃｈｎｅｉｄ．的干燥树皮。黄柏含

有多种生物碱，主要为小檗碱，其它生物碱有巴马丁、药根碱、黄柏碱、蝙蝠葛任碱、白瓜蒌碱、木兰花碱等¨。。资料表明黄柏总生物碱具有抗溃疡及抗腹泻

［通讯作者］｝刘风华，Ｔｅｌ：（０１０）８０７９９１４７；Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｕｌｉｍｅｉｈｒｂ

＠ｓｉｎａ．ｔｏｍ

成分含量无显著影响（Ｐ＞０．１），直观分析Ａ，＞Ａ：＞Ａ。；因素Ｂ即乙醇浓度有一定影响（Ｐ＜０．１），Ｂ：＞Ｂ，＞Ｂ．；因素ｃ即提取时间无显著影响（Ｐ＞０．１），直观分析Ｃ。＞Ｃ２＞Ｃ３；最佳工艺条件为Ａ３Ｂ：ｃ。，即１０倍量７０％乙醇回流提取２次，每次０．５

ｈ。

必要对中药提取过程中的沉降物进一步的研究。［参考文献］

［１］

国家中医药管理局编委会．中华本草［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９９９：８７４．

［２］

蔡逸平，曹岚，范崔生．枳壳类药材化学成分研究简报［Ｊ］．江西中医药，１９９８，１９（６）：４６．

［３］

刘振丽，宋志前，季燕燕，等．枳实饮片中有效成分含量测定．全国中药标准研究学术讨论会论文集．珠海，

２００５．

实验结果显示（表４），甜橙枳实乙醇提取液静置后产生的沉降物中含有大量的黄酮类成分，由表５可以看出，沉降物中橙皮苷和柚皮芸香苷总量占饮片中两种成分总量的２０．１％，提取液占４０．６％，在提取后应该将它们合并。

很多中药提取液在冷藏放置时都会产生沉降物‘川。对于含有在冷水中溶解度小的有效成分的中药，在制剂工艺提取后，提取液静置出现的沉降物不应轻易作为杂质弃去，应在研究后再确定具体方案。沉降物的产生除了因为温度变化的原因外，由于醇提液与蒸馏后的水溶液合并，造成了乙醇浓度变化，而不同化学成分在不同乙醇浓度中有差异，因此有

［７］［５］［４］

王淳．不同品种产地枳实有效成分的对比分析［Ｄ］．中国中医科学院２００９硕士博士论文．

王淳，刘振丽，宋志前，等．中药枳实提取工艺研究［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２００８，１４（９）：２３．

［６］王青，袁丹．不同产地枳实与枳壳中黄酮类成分的含量测定［Ｊ］，黑龙江医药，２００８，２１（３）：１．

任秀莲，魏琦峰，周春山，等．沉淀吸附法提取苦丁茶中的熊果酸［Ｊ］．中南大学学报（自然科学版），２００４，３５

（４）：５９９．

万方数据

・３・

第１６卷第２期２０１０年２月

Ｃｈｉｎｅｓｅ

中国实验方剂学杂志

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃａｌＦｏｒｍｕｌａｅ

Ｖ０１．１６，Ｎｏ．２Ｆｅｂ．，２０１０

作用，对免疫功能具有调节作用¨ｏ，是本课题提取的有效部位，课题以黄柏总生物碱提取率为考察指标，对资料报道的黄柏总生物碱４种提取方法：酸提法、碱提法、醇提法、酸醇提法旧。４ｏ进行试验对比，确定乙醇提取法，并对乙醇提取方法的工艺参数进行优选。１仪器与试药

ＳＰＳ２０２

ＯＨＡＵＳ电子天平（梅特勒－托利多（常

州）称重设备系统有限公司），ＲＲ－１８２电磁炉（尚朋堂（广州）电器有限公司），ＺＤＨＷ电热套（北京中星伟业仪器有限公司），ＲＥ－５２０５旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），Ｔ６紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器设备有限公司），Ａｇｉｌｅｎｔ１

１００高效液相

色谱仪（美国）。

硫酸，生石灰，乙醇均为分析纯。

黄柏药材购自河北安国，经中国中医科学院中药研究所冯学峰副研究员鉴定为芸香科植物黄皮树

Ｐｂｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎｃｈｉｎｅｎｓｅ

Ｓｃｈｎｅｉｄ．的干燥树皮，其盐酸

小檗碱的含量为３．６５％。２方法与结果

２．１盐酸小檗碱含量测定方法

２．１．１色谱条件仪器：ＷＡＴＥＲＳ－＇／１７－２４８７高效液相色谱仪；色谱柱：ＷＡＴＥＲＳ－Ｃ１Ｂ（２５０

ｍｍ×４．６ｍｍ，

５恤ｍ）；流动相：乙腈－０．１％磷酸溶液（５０：５０），每

１００

ｍＬ加十二烷基磺酸钠０．１ｇ；波长：２６５ｒｉｍ；流

速：１．０ｍＬ・ｍｉｎ‘。；柱温：３５ｏＣ。

２．１．２标准曲线的制备

取干燥至恒重的盐酸小

檗酸对照品适量，精密称定，加乙醇制成每１ｍＬ含

０．１４

ｍｇ的溶液。分别精密吸取２，４，６，８，１０斗Ｌ注

入液相色谱仪，连续进样３次，测定峰面积，以对照品进样量为横坐标，对照品峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，盐酸小檗碱在０．２８～１．４０ｔｘｇ范围内线性良好。其回归方程为Ｙ＝４．５７×１０６Ｘ一

１．５７×１０５．ｒ＝０．９９９８。

２．１．３供试品溶液的制备取上述样品约５０

ｍｇ，

精密称定，置１００ｍＬ量瓶中，加乙醇８０ｍＬ，超声处理３０ｍｉｎ，加乙醇至刻度，摇匀，过０．２｝ｘｍ滤膜，即得。

２．１．４对照品溶液的制备

精密称取盐酸小檗碱

１．５

ｍｇ，置１０ｍＬ量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻

度，摇匀，即得。

２．２黄柏总生物碱含量测定方法

２．２．１仪器Ｔ６新世纪紫外分光光度计，方法：比

．４・

万方数据

色法：精密量取上述溶液１ｍＬ，置５０ｍＬ量瓶中，加

０．０５

ｍｏｌ・Ｌ’１硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，另取乙

醇１ｍＬ，置５０ｍＬ量瓶中，加０．０５ｍｏｌ・Ｌ“硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为空白对照溶液，检测波长：

３４５ｒｉｍ。２．３

黄柏总生物碱提取方法的考察取黄柏药材

粉碎成最粗粉，共４份，每份１００ｇ，按文献旧“。工艺进行提取。采用紫外分光光度法测定提取物中总生物碱百分含量。提取物总生物碱含量、总生物碱收得率结果见表１。

表１黄柏药材不同提取方法样品含量、

总生物碱收得率测定（％）

实验结果表明，４种提取方法中乙醇提取法黄柏总生物碱提取率最高，故本研究采用乙醇提取黄柏总生物碱。

２．４黄柏总生物碱提取工艺的正交优选

根据对

黄柏提取可能有影响的因素：乙醇浓度、乙醇用量、提取次数、提取时间４个因素，采用Ｌ。（３）４正交表进行正交设计。取同一批黄柏药材粉碎成最粗粉，均匀称取９份，每份１００ｇ，按表２条件进行试验，提取、浓缩、干燥得提取物。采用紫外可见分光光度法测定提取物中黄柏总生物碱含量，计算总生物碱提取率。试验设计的因素水平表、正交试验表、方差分析表见表２—４。

裹２因蠢水平裹

因素

水平Ａ（乙醇浓度）Ｂ（乙醇用量）ｃ（提取次数）

Ｄ（提取时间）

（％）

（倍）

（ｈ）

（ｈ）

６

１．０８１．５ｌＯ

２．Ｏ

由方差分析可以看出，提取次数ｃ对黄柏总生物碱提取率有显著性影响，其它３个因素对黄柏总

生物碱提取率没有显著性影响。根据直观分析，乙醇浓度选Ａ：、乙醇用量选Ｂ，、提取时间选Ｄ：。由于提取次数对黄柏总生物碱提取率有显著性影响，在筛选出的其它参数不变的情况下，对提取次数继续进行考察，结果见表５。

第１６卷第２期

２０１０年２月

Ｃｈｉｎｅｓｅ

中国实验方剂学杂志

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃａｌＦｏｒｍｕｌａｅ

Ｖ０１．１６，Ｎｏ．２Ｆｅｂ．，２０１０

表３黄柏提取正交实验

实验号

Ａ

ＢＣＤ总碱提取率（％）

ｌｉ

１ｌ１３２２２２

５３３３３

５４２１２

３４弛∞坫弛

５２２１Ｊ

ｌ５６２３ｌ

２４７３１１Ｊ

２５８３２

ｌ３３

铊”扒酪

９

３

３２

ｌ

５．２４

表４黄柏提取总生物碱方差分析表

表５黄柏提取次数考察（％）

实验结果表明，黄柏提取３次、４次样品中总生物碱百分含量没有差别，总生物碱提取率相差不大，从生产周期和成本角度考虑，黄柏提取次数定为３次。

２．５黄柏总生物碱提取粉碎粒度的考察

取同一

批黄柏分别炮制成最粗粉（１０目）、细丝（２～３ｍｍ）、块（１０～２０ｍｍ），每份各１００ｇ，按上述优选的工艺参数Ａ：Ｂ，ｃ。Ｄ：提取，以干膏总生物碱提取率为考察指标，优选黄柏总生物碱提取的最佳粉碎粒度。实验条件及结果见表６。

表６黄柏总生物碱提取粉碎粒度的考察条件及结果（％）

实验结果表明，黄柏药材粉炮制成最粗粉和细丝，其总生物碱提取率优于炮制成块，而且此时二者

万方数据

总生物碱提取率几乎没有差别。从生产实际情况考

虑，细丝便于加工和提取，故黄柏药材宜制成细丝进行提取。黄柏提取的最佳工艺为黄柏细丝（２～３）ｍｍ，用生药１０倍量７５％乙醇回流提取３次，每次提

取１．５

ｈ。

２．６黄柏药材提取工艺的验证实验取同一批黄

柏药材，称取３份各１００ｇ，按优选的最佳工艺进行提取，样品减压干燥。采用高效液相色谱法测定样

品中盐酸小檗碱含量，采用紫外分光光度法测定总生物碱百分含量，计算出膏率、盐酸小檗碱转移率、总生物碱提取率。实验结果见表７。

表７黄柏药材提取工艺的验证实验（％）

结果表明黄柏总生物碱提取工艺稳定，出膏率

平均为３０．１０％，盐酸小檗碱转移率平均为９８．９５％，总生物碱含量平均为１５．２４％，总生物碱提取率平均为４．６０％。

３

讨论

在文献。２。ｏ报道的黄柏总生物碱４种提取方法

中，传统工业生产中常用酸水提取法提取小檗碱。本研究结果表明该方法虽然提取收率高，但总生物碱的含量较低。本研究采用乙醇提取法提取物总生物碱含量、提取率均很高，但相比之下成本要更高些，采用该方法的主要原因是便于下一步纯化达到二类中兽药有效部位含量大于提取物的５０％的要求。［参考文献］

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・５・

黄柏总生物碱提取方法及工艺研究

作者：作者单位：

刘丽梅， 王瑞海， 陈琳， 陈韩英， 杨立新， 刘凤华， 许剑琴

刘丽梅,王瑞海,陈琳(中国中医科学院中医基础理论研究所,北京,100700)， 陈韩英(石河子大学药学院,新疆,石河子,832000)， 杨立新(中国中医科学院中药所,北京,100700)， 刘凤华(北京农学院,北京,102206)， 许剑琴(中国农业大学动物医学院,北京,102206)中国实验方剂学杂志

CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL TRADITIONAL MEDICAL FORMULAE2010,16(2)20次

刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：

参考文献(4条)

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引用本文格式：刘丽梅.王瑞海.陈琳.陈韩英.杨立新.刘凤华.许剑琴 黄柏总生物碱提取方法及工艺研究[期刊论文]-中国实验方剂学杂志 2010(2)