五、实验室常用培养基的配制方法
Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)
组份浓度 100 mg/ml Ampicillin
配制量 50 ml
配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3.用0.22 µm过滤膜过滤除菌。
4.小份分装(1 ml/份)后，-20℃保存。
IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)
组份浓度 24 mg/mL IPTG
配制量 50 mL
配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3.用0 22 µm过滤膜过滤除菌。
4小份分装(1 ml，份)后，-20℃保存。
X-Gal (20 mg/ml)
组份浓度 20 mg/ml X-Gal
配制量 50 ml
配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3.小份分装(1 ml/份)后，-20℃避光保存。
LB培养基
组份浓度 1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨)，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物)，
1%(W/V)NaCl
配制量 1 L
配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。
3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L。
5高温高压灭菌后，4。C保存。
LB/Amp培养基
组份浓度
配制量 配制方法
3.滴加5 N NaOH(约0.2 mL)。调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，冷却至室温。
6.加入1 ml Ampicillin(100 mg/ml)后均匀混合。
7.4℃保存。
TB培养基
组份浓度
配制量 1.L
配制方法 1.配制磷酸盐缓；中液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml。
溶解2.31 g KH2PO4和l2.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅
拌溶解 后，加去离子水定容至100 ml，高温高压灭菌。
4.加去离子水将培养基定容至1 L后，高温高压灭菌。
5.待溶液冷却至60℃以下时，；加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
6.4℃保存。
TB/Amp培养基
组份浓度
配制量 配制方法 1.配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml。 溶解2.31 g KH2PO4,和12.54g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅
拌溶解后，加去离子水定容至100 ml，高温高压灭菌。
4.加去离子水将培养基定容至l L后，高温高压灭菌。
5.待溶液冷却至60℃以下时， 加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲
液。
6.均匀混合后4℃保存。
SOB培养基
组份浓度
配制量 配制方法 1.配制250 mM KCl溶液。
在90 ml的去离子水中溶解l.86 g KCl后，定容至100 ml。
2.配制2 M MgCl2溶液。
在90 ml去离子水中溶解19 g MgCl2后，定容至
100 ml，高温高压灭菌。
5.量取10 m1 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。
6.滴加5 N NaOH溶液(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。
7.加入去离子水将培养基定容至l L。
8.高温高压灭菌后，4℃保存。
9.使用前加入5 ml灭菌的2 M MgCl2溶液。
SOC培养基
组份浓度
配制量 配制方法 1.配制l M Glucose溶液。
将18 g Glucose溶于90 ml去离子水中，充分溶解后定容至100 ml。
用0.22 µm滤膜过滤除菌。
2.向l 00 ml SOB培养基中加入除菌的1 M Glucose溶液2 ml，均匀混合。
3.4℃保存。
2×YT培养基
组份浓度 1.6%(WV)Tryptone，1%(W/V)Yeast Extract，0.5%(W/V)NaCl
配制量 1 L
配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。
3.滴加5 N NaOH，调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，4℃保存。
Фb×broth
组份浓度
2%(W/V)Tryptone，0.5%(W/V)Yeast
5%(W/V)MgSO4·7H2O
配制量 1 L
配制方法 3.滴加1 N KOH。调节pH值至7.5。
4.加去离子水将培养基定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，4℃保存。
NZCYM培养基
Extract，o
组份浓度
配制量 配制方法
3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L。
5.
高温高压灭菌后，4℃保存。
NZYM培养基
组份浓度
配制方法 培养
基相同。
NZM培养基
组份浓度
配制方法 NZYM
培养基相同。
一般固体培养基的配制
配制方法 1.按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加
糖充分混匀(此时培养基温度很高，小心烫伤)。
3.待培养基冷却至50~60℃时，加入热不稳定物质(如抗生素等)，
摇动容器充分混匀。
4.铺制平板(30~35 ml培养基/90 mm培养皿)。
LB/Amp/X-Gal/LPTG平板培养基
组份浓度
配制量 配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。
3.滴加5 N NaOH(约0.2 mL)，调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L后，加入15 g Agar。
5.高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。
6.加入1 ml Ampicillin(100 mg/ml)、1 ml IPTG(24 mg/ml)、2 ml
X-Gal(20 mg/mL)后均匀混合。
7.铺制平板(30~35 ml培养基/90 mm培养皿)。
8.4℃避光保存。
TB/Amp/X-Gal/LPTG平板培养基
组份浓度
配制量 配制方法 1.配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml。 溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅
拌溶解后，加去离子水定容至100 ml，高温高压灭菌。
4.加去离子水将培养基定容至1 L后。加入l 5 g Agar。
5.高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。
6.加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液、l ml Ampicillin (100mg/ml)、
1 ml IPTG(24mg/mL)、2 ml X-Gal(20 mg/ml)后均匀混合。
7.铺制平板(30~35 ml培养基/90 mm培养皿)。
8 4℃避光保存。
六、抗生素的贮存溶液及其工作浓度
生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应保存于不透光的容器中。
*2镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基(如LB培养基)。
七、SDS-PAGE浓缩胶(5%Acrylamide)配方表
八、SDS-PAGE分离胶配方表
五、实验室常用培养基的配制方法
Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)
组份浓度 100 mg/ml Ampicillin
配制量 50 ml
配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3.用0.22 µm过滤膜过滤除菌。
4.小份分装(1 ml/份)后，-20℃保存。
IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)
组份浓度 24 mg/mL IPTG
配制量 50 mL
配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3.用0 22 µm过滤膜过滤除菌。
4小份分装(1 ml，份)后，-20℃保存。
X-Gal (20 mg/ml)
组份浓度 20 mg/ml X-Gal
配制量 50 ml
配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50 ml。
3.小份分装(1 ml/份)后，-20℃避光保存。
LB培养基
组份浓度 1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨)，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物)，
1%(W/V)NaCl
配制量 1 L
配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。
3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L。
5高温高压灭菌后，4。C保存。
LB/Amp培养基
组份浓度
配制量 配制方法
3.滴加5 N NaOH(约0.2 mL)。调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，冷却至室温。
6.加入1 ml Ampicillin(100 mg/ml)后均匀混合。
7.4℃保存。
TB培养基
组份浓度
配制量 1.L
配制方法 1.配制磷酸盐缓；中液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml。
溶解2.31 g KH2PO4和l2.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅
拌溶解 后，加去离子水定容至100 ml，高温高压灭菌。
4.加去离子水将培养基定容至1 L后，高温高压灭菌。
5.待溶液冷却至60℃以下时，；加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
6.4℃保存。
TB/Amp培养基
组份浓度
配制量 配制方法 1.配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml。 溶解2.31 g KH2PO4,和12.54g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅
拌溶解后，加去离子水定容至100 ml，高温高压灭菌。
4.加去离子水将培养基定容至l L后，高温高压灭菌。
5.待溶液冷却至60℃以下时， 加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲
液。
6.均匀混合后4℃保存。
SOB培养基
组份浓度
配制量 配制方法 1.配制250 mM KCl溶液。
在90 ml的去离子水中溶解l.86 g KCl后，定容至100 ml。
2.配制2 M MgCl2溶液。
在90 ml去离子水中溶解19 g MgCl2后，定容至
100 ml，高温高压灭菌。
5.量取10 m1 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。
6.滴加5 N NaOH溶液(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。
7.加入去离子水将培养基定容至l L。
8.高温高压灭菌后，4℃保存。
9.使用前加入5 ml灭菌的2 M MgCl2溶液。
SOC培养基
组份浓度
配制量 配制方法 1.配制l M Glucose溶液。
将18 g Glucose溶于90 ml去离子水中，充分溶解后定容至100 ml。
用0.22 µm滤膜过滤除菌。
2.向l 00 ml SOB培养基中加入除菌的1 M Glucose溶液2 ml，均匀混合。
3.4℃保存。
2×YT培养基
组份浓度 1.6%(WV)Tryptone，1%(W/V)Yeast Extract，0.5%(W/V)NaCl
配制量 1 L
配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。
3.滴加5 N NaOH，调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，4℃保存。
Фb×broth
组份浓度
2%(W/V)Tryptone，0.5%(W/V)Yeast
5%(W/V)MgSO4·7H2O
配制量 1 L
配制方法 3.滴加1 N KOH。调节pH值至7.5。
4.加去离子水将培养基定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，4℃保存。
NZCYM培养基
Extract，o
组份浓度
配制量 配制方法
3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L。
5.
高温高压灭菌后，4℃保存。
NZYM培养基
组份浓度
配制方法 培养
基相同。
NZM培养基
组份浓度
配制方法 NZYM
培养基相同。
一般固体培养基的配制
配制方法 1.按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加
糖充分混匀(此时培养基温度很高，小心烫伤)。
3.待培养基冷却至50~60℃时，加入热不稳定物质(如抗生素等)，
摇动容器充分混匀。
4.铺制平板(30~35 ml培养基/90 mm培养皿)。
LB/Amp/X-Gal/LPTG平板培养基
组份浓度
配制量 配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。
3.滴加5 N NaOH(约0.2 mL)，调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L后，加入15 g Agar。
5.高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。
6.加入1 ml Ampicillin(100 mg/ml)、1 ml IPTG(24 mg/ml)、2 ml
X-Gal(20 mg/mL)后均匀混合。
7.铺制平板(30~35 ml培养基/90 mm培养皿)。
8.4℃避光保存。
TB/Amp/X-Gal/LPTG平板培养基
组份浓度
配制量 配制方法 1.配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml。 溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅
拌溶解后，加去离子水定容至100 ml，高温高压灭菌。
4.加去离子水将培养基定容至1 L后。加入l 5 g Agar。
5.高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。
6.加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液、l ml Ampicillin (100mg/ml)、
1 ml IPTG(24mg/mL)、2 ml X-Gal(20 mg/ml)后均匀混合。
7.铺制平板(30~35 ml培养基/90 mm培养皿)。
8 4℃避光保存。
六、抗生素的贮存溶液及其工作浓度
生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应保存于不透光的容器中。
*2镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基(如LB培养基)。
七、SDS-PAGE浓缩胶(5%Acrylamide)配方表
八、SDS-PAGE分离胶配方表