实验一 尿蛋白的测定（双缩脲法）
尿蛋白是指尿中蛋白质而言，尿蛋白的主要成分是白蛋白。正常人尿内含有微量蛋白质，成年人每天约排出50-100mg ，偶尔达150mg 。在体育运动或训练后，尿中蛋白质的排出量可能达到250mg 以上，白天任意尿所含蛋白质可少于10mg/100ml，夜间混合尿可达20mg/100ml。
由于运动而出现尿中蛋白质增加的现象称为运动性蛋白尿。研究证明，运动后尿蛋白数量的多少与运动量尤其运动强度有关；与运动员身体机能状态有关；与运动员的情绪有关；与不同体育项目有关……。因此，测定运动员运动后尿中蛋白质的含量，可作为一个简易的生化指标来评定运动员的身体机能状态、运动强度和运动量等。
一、实验目的
1、学会使用移液管，掌握双缩脲法测定尿蛋白的原理和操作方法。 2、初步掌握分光光度计的使用，了解比色法的基本原理。 二、实验原理
蛋白质是含氮的有机高分子化合物，分子中含有多个与双缩脲分子相似的结构（肽键），碱性硫酸铜溶液中，蛋白质与硫酸铜的Cu 离子等络合物生成紫色络合物。经光电比色可求出尿中蛋白质的含量。反应如下：
2+
三、实验试剂及仪器 1、实验试剂 1）、0.15N 硫酸 2）、0.15%钨酸钠溶液
3）、双缩脲试剂：称取硫酸铜(CuSO4∙5H 2O,A ∙R 或CP)1.5克、酒石酸钾钠或（NaKC 4H 2O,4H 2O 6 A∙R 或CP ）6克，分别用蒸馏水约250ml 溶解后，全部转移入1升容量瓶中，混合。再加入10%氢氧化钠溶液约300ml ，随加随摇匀。最后用蒸馏水稀释至1升。保存于塑料试剂瓶中或内壁涂有一层纯净石蜡的普通试剂瓶中。如无红色或和黑色沉淀出现，此试剂可长期使用。
4）、0.9%生理盐水
5）、标准蛋白溶液（500mg/100ml） 2、实验仪器
分光光度计、离心机、移液管、离心管、洗耳球 四、实验操作步骤
测定管（离心管）
5ml尿液 b1
0.15N硫酸2.5ml b2
1.5%钨酸钠2.5ml b3
混匀后离心5分钟(3000转/分)
倾去上清液, 加生理盐水1ml, 搅拌 b4
加双缩脲试剂4ml b5
混合后放置20-30分钟
540nm 比色, 空白调零读取测定管光密度值(OD测)
五、计算尿蛋白含量
计算公式：尿蛋白（mg%）=（ OD测/OD标）χ50 其中测得OD 标为0.131 六、注意事项
1、如果尿液比较混浊，可能是尿液中的无机盐含量过高造成，会影响测定结果，可通过加热消除。
2、在用玻棒搅拌助溶时，注意不或垂直用力，否则容易造成离心管底破裂而终止实验。
实验一 尿蛋白的测定（双缩脲法）
尿蛋白是指尿中蛋白质而言，尿蛋白的主要成分是白蛋白。正常人尿内含有微量蛋白质，成年人每天约排出50-100mg ，偶尔达150mg 。在体育运动或训练后，尿中蛋白质的排出量可能达到250mg 以上，白天任意尿所含蛋白质可少于10mg/100ml，夜间混合尿可达20mg/100ml。
由于运动而出现尿中蛋白质增加的现象称为运动性蛋白尿。研究证明，运动后尿蛋白数量的多少与运动量尤其运动强度有关；与运动员身体机能状态有关；与运动员的情绪有关；与不同体育项目有关……。因此，测定运动员运动后尿中蛋白质的含量，可作为一个简易的生化指标来评定运动员的身体机能状态、运动强度和运动量等。
一、实验目的
1、学会使用移液管，掌握双缩脲法测定尿蛋白的原理和操作方法。 2、初步掌握分光光度计的使用，了解比色法的基本原理。 二、实验原理
蛋白质是含氮的有机高分子化合物，分子中含有多个与双缩脲分子相似的结构（肽键），碱性硫酸铜溶液中，蛋白质与硫酸铜的Cu 离子等络合物生成紫色络合物。经光电比色可求出尿中蛋白质的含量。反应如下：
2+
三、实验试剂及仪器 1、实验试剂 1）、0.15N 硫酸 2）、0.15%钨酸钠溶液
3）、双缩脲试剂：称取硫酸铜(CuSO4∙5H 2O,A ∙R 或CP)1.5克、酒石酸钾钠或（NaKC 4H 2O,4H 2O 6 A∙R 或CP ）6克，分别用蒸馏水约250ml 溶解后，全部转移入1升容量瓶中，混合。再加入10%氢氧化钠溶液约300ml ，随加随摇匀。最后用蒸馏水稀释至1升。保存于塑料试剂瓶中或内壁涂有一层纯净石蜡的普通试剂瓶中。如无红色或和黑色沉淀出现，此试剂可长期使用。
4）、0.9%生理盐水
5）、标准蛋白溶液（500mg/100ml） 2、实验仪器
分光光度计、离心机、移液管、离心管、洗耳球 四、实验操作步骤
测定管（离心管）
5ml尿液 b1
0.15N硫酸2.5ml b2
1.5%钨酸钠2.5ml b3
混匀后离心5分钟(3000转/分)
倾去上清液, 加生理盐水1ml, 搅拌 b4
加双缩脲试剂4ml b5
混合后放置20-30分钟
540nm 比色, 空白调零读取测定管光密度值(OD测)
五、计算尿蛋白含量
计算公式：尿蛋白（mg%）=（ OD测/OD标）χ50 其中测得OD 标为0.131 六、注意事项
1、如果尿液比较混浊，可能是尿液中的无机盐含量过高造成，会影响测定结果，可通过加热消除。
2、在用玻棒搅拌助溶时，注意不或垂直用力，否则容易造成离心管底破裂而终止实验。