植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法)
简介:
植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质形状,常以糖含量作为重要指标,植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法)检测原理是还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸,3,5-二硝基水杨酸被还原为棕红色的氨基化合物。
在540nm处测定棕红色物质的吸光度,该吸光度值与还原糖含量呈线性关系,利用比色法和标准曲线测得样品中的还原糖和总糖的含量。本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
操作步骤(仅供参考):
1、 还原糖的提取:
①称取植物样品剪碎,加入蒸馏水约匀浆,转移至烧杯或三角瓶中,用12ml蒸馏水冲洗研磨器2-3次,洗出液也转移至该容器。 ②50℃水浴,并不时搅拌,以便还原糖彻底浸出。 将沉淀和浸出液转移至50ml离心管,离心。
④留取上清液,向沉淀中加入20ml蒸馏水,混匀,再次离心。
⑤留取上清液,将2次获得的上清液合并,用蒸馏水定容至100ml(提取液),混匀,作为还原糖待测液。 2、 总糖的水解和提取:
①称取植物样品,剪碎,加入蒸馏水约匀浆,转移至烧杯或三角瓶中,用蒸馏水冲洗研磨器2-3次,洗出液也转移至该容器。
②向容器中加入盐酸溶液,搅拌均匀,煮沸,并不时搅拌。
取2滴滴加于载玻片上,滴加1滴显色液,检查水解是否完全,如已经水解完全,则不显示蓝色。
④水解完毕后,冷却至室温,加入溶液,使溶液pH至7.4,用蒸馏水定容至100ml,混匀,离心或过滤。
⑤取上清或滤液,用蒸馏水定容至100ml,成稀释1000倍的总糖水解液(提取液),取总糖
水解液,测定其还原糖的含量。
3、 制作葡萄糖标准曲线:取干净离心管或试管,按下表进行操作,以0号调零,检测540nm
4、还原糖测定:取制备好的还原糖提取液或者总糖水解液2ml,分别加入DNS检测液2ml,其余操作同标准曲线的操作,540nm处测定各管的吸光度。
计算公式:
还原糖的百分含量:
还原糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100 总糖的百分含量:
总糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100×10×0.9
注意事项:
1、 上述低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降。
2、 待测样本如不能及时测定,应置于2~8℃保存,3天内稳定。
3、 如果样品还原糖浓度过高,应用蒸馏水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。
4、 总糖计算公式在测定干扰杂质很少、还原糖含量相对总糖含量很少时使用,×0.9是为
了从测定出的总糖水解成单糖中,扣除水解时所消耗的水量。
植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法)
简介:
植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质形状,常以糖含量作为重要指标,植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法)检测原理是还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸,3,5-二硝基水杨酸被还原为棕红色的氨基化合物。
在540nm处测定棕红色物质的吸光度,该吸光度值与还原糖含量呈线性关系,利用比色法和标准曲线测得样品中的还原糖和总糖的含量。本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
操作步骤(仅供参考):
1、 还原糖的提取:
①称取植物样品剪碎,加入蒸馏水约匀浆,转移至烧杯或三角瓶中,用12ml蒸馏水冲洗研磨器2-3次,洗出液也转移至该容器。 ②50℃水浴,并不时搅拌,以便还原糖彻底浸出。 将沉淀和浸出液转移至50ml离心管,离心。
④留取上清液,向沉淀中加入20ml蒸馏水,混匀,再次离心。
⑤留取上清液,将2次获得的上清液合并,用蒸馏水定容至100ml(提取液),混匀,作为还原糖待测液。 2、 总糖的水解和提取:
①称取植物样品,剪碎,加入蒸馏水约匀浆,转移至烧杯或三角瓶中,用蒸馏水冲洗研磨器2-3次,洗出液也转移至该容器。
②向容器中加入盐酸溶液,搅拌均匀,煮沸,并不时搅拌。
取2滴滴加于载玻片上,滴加1滴显色液,检查水解是否完全,如已经水解完全,则不显示蓝色。
④水解完毕后,冷却至室温,加入溶液,使溶液pH至7.4,用蒸馏水定容至100ml,混匀,离心或过滤。
⑤取上清或滤液,用蒸馏水定容至100ml,成稀释1000倍的总糖水解液(提取液),取总糖
水解液,测定其还原糖的含量。
3、 制作葡萄糖标准曲线:取干净离心管或试管,按下表进行操作,以0号调零,检测540nm
4、还原糖测定:取制备好的还原糖提取液或者总糖水解液2ml,分别加入DNS检测液2ml,其余操作同标准曲线的操作,540nm处测定各管的吸光度。
计算公式:
还原糖的百分含量:
还原糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100 总糖的百分含量:
总糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100×10×0.9
注意事项:
1、 上述低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降。
2、 待测样本如不能及时测定,应置于2~8℃保存,3天内稳定。
3、 如果样品还原糖浓度过高,应用蒸馏水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。
4、 总糖计算公式在测定干扰杂质很少、还原糖含量相对总糖含量很少时使用,×0.9是为
了从测定出的总糖水解成单糖中,扣除水解时所消耗的水量。