蛋白浓缩方法

蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段,现介绍几种常用的浓缩技术。

(一)透析袋浓缩法

利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用。

(二)冷冻干燥浓缩法

这是浓缩蛋白质的一种较好的办法,它既使蛋白质不易变性,又保持蛋白质中固有的成分。它是在冰冻状态下直接升华去除水分。具体做法是将蛋白液在低温下冰冻,然后移置干燥器内(干燥器内装有干燥剂,如NaOH、CaCl2和硅胶等)。密闭,迅速抽空,并维持在抽空状态。数小时后即可获得含有蛋白的干燥粉末。干燥后的蛋白质保存方便,应用时可配成任意浓度使用。也可采用冻干机进行冷冻干燥。

(三)吹干浓缩法

将蛋白溶液装入透析袋内,放在电风扇下吹。此法简单,但速度慢,且温度不能过高,最好不要超过15℃。

(四)超滤膜浓缩法

此法是利用微孔纤维素膜通过高压将水分滤出,而蛋白质存留于膜上达到浓缩目的。有两种方法进行浓缩:一种是用醋酸纤维素膜装入高

压过滤器内,在不断搅拌之下过滤;另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空干燥器的通风口上,负压抽气,而使袋内液体渗出。

(五)凝胶浓缩法

选用孔径较小的凝胶,如SephadexG25或G50,将凝胶直接加入蛋白溶液中。根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量。放入冰箱内,凝胶粒子吸水后,通过离心除去。

(六)浓缩胶浓缩法

浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物,具有很强的吸水性能。每克干胶可吸水120ml~150ml。它能吸收低分子量的物质,如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等,适宜浓缩10 000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后,蛋白质的回收率可达80%~90%。比浓缩胶应用方便,直接加入被浓缩的溶液中即可。必须注意,浓缩溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点,否则在浓缩胶表面产生阳离子交换,影响浓缩物质的回收率。

蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段,现介绍几种常用的浓缩技术。

(一)透析袋浓缩法

利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用。

(二)冷冻干燥浓缩法

这是浓缩蛋白质的一种较好的办法,它既使蛋白质不易变性,又保持蛋白质中固有的成分。它是在冰冻状态下直接升华去除水分。具体做法是将蛋白液在低温下冰冻,然后移置干燥器内(干燥器内装有干燥剂,如NaOH、CaCl2和硅胶等)。密闭,迅速抽空,并维持在抽空状态。数小时后即可获得含有蛋白的干燥粉末。干燥后的蛋白质保存方便,应用时可配成任意浓度使用。也可采用冻干机进行冷冻干燥。

(三)吹干浓缩法

将蛋白溶液装入透析袋内,放在电风扇下吹。此法简单,但速度慢,且温度不能过高,最好不要超过15℃。

(四)超滤膜浓缩法

此法是利用微孔纤维素膜通过高压将水分滤出,而蛋白质存留于膜上达到浓缩目的。有两种方法进行浓缩:一种是用醋酸纤维素膜装入高

压过滤器内,在不断搅拌之下过滤;另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空干燥器的通风口上,负压抽气,而使袋内液体渗出。

(五)凝胶浓缩法

选用孔径较小的凝胶,如SephadexG25或G50,将凝胶直接加入蛋白溶液中。根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量。放入冰箱内,凝胶粒子吸水后,通过离心除去。

(六)浓缩胶浓缩法

浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物,具有很强的吸水性能。每克干胶可吸水120ml~150ml。它能吸收低分子量的物质,如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等,适宜浓缩10 000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后,蛋白质的回收率可达80%~90%。比浓缩胶应用方便,直接加入被浓缩的溶液中即可。必须注意,浓缩溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点,否则在浓缩胶表面产生阳离子交换,影响浓缩物质的回收率。


相关内容

  • 蛋白质浓缩技术
  • 蛋白质浓缩技术 ?(2007-05-29 19:34:23) 转载 ?蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段,现介绍几种常用的浓缩技术.(一)透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种.将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚 ...

  • 我国大豆蛋白在食品加工中的应用及展望
  • 2010年第35卷第l期 辕食加工 83 我国大豆蛋白在食品加工中的应用及展望米 李默馨1,王 玉1,李振岚,王俊国2,于殿宇1 (1.东北农业大学食品学院,哈尔滨150030:2.吉林工商学院,长春130062) 摘要:论述了我国大豆蛋白粉.大豆浓缩蛋白和大豆分离蛋白的生产方法.产品质量及产品特点 ...

  • 不同截留分子量超滤膜包浓缩狂犬病病毒的效果_赵永强
  • ·1848· 中国生物制品学杂志2013年12月第26卷第12期Chin J Biologicals December 2013,Vol. 26No. 12 ·技术方法· 不同截留分子量超滤膜包浓缩狂犬病病毒的效果 赵永强1,杨丽2,白春杰1,刘瑞1 1. 北京祥瑞生物制品有限公司,北京101407 ...

  • 猪血提取加工制造工艺技术及配方
  • 一种猪血蛋白肽的提取方法 技术领域 本发明方法涉及猪血的深加工技术领域,具体涉及一种猪血蛋白肽的提取方法,是一种以新鲜猪血为原料,利用纯生物手段获取猪血蛋白肽的方法. 背景技术 猪血是生猪屠宰过程中的一种副产品,其中含有大量蛋白质.血红素.人体生长因子和其他微量元素,营养价值十分可观.普通的食用方法 ...

  • SDS-PAGE电泳的原理 - 陌上花开
  • SDS-PAGE电泳的原理及浓缩胶浓缩样品的原理(甘氨酸的作用) @ 8/14/2009 实验台 这是以前从网上下到的关于SDS-PAGE电泳的讲解,个人觉得非常好,正好这几天有人问到这个东东,所以就拿出来贴到实验台里.在此声明该内容为转载. SDS-PAGE电泳的原理及浓缩胶浓缩样品的原理(甘氨酸 ...

  • 牛奶产品制备过程中常用的分离提取技术
  • 牛奶产品制备过程中常用的分离提取技术 摘要:本文从牛奶的主要成分及乳制品工业方面,概括介绍了乳制品制作过程中常用的分离制备方法:膜分离.色谱分离及等电点分离技术的原理及在制作过程中的相关应用.并总结了:只有几种技术互相配合相辅相成,才能发挥各自最好的作用. 关键词:牛奶组成:膜分离:吸附分离:等电点 ...

  • 蛋白质电泳2
  • 一. 蛋白质电泳的原理 蛋白质是由一条或几条多肽链按各自特殊的组合方式形成具有完整生物活性的分子.蛋白质是两性电解质,当处于等电点pI时,蛋白质分子本身静电荷为零,通常在偏酸性的溶液中带正电,在偏碱性的溶液中带负电.温度,pH,化学因子等因素易引起蛋白质变性. 通常使用电泳的方法对其进行分离纯化.因 ...

  • 4SDS-PAGE检测分析及分子量测定
  • 实验报告 课程名称:生物化学实验(甲) 指导老师:杨劲树 成绩: 同组学生姓名: 一.实验目的和要求 二.实验内容和原理 三.实验材料和主要仪器 四.实验方法和步骤 五.实验数据记录和处理 六.实验结果和分析 七.实验讨论和心得 一.实验目的和要求 1.学习SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE ) ...

  • SDS-PAGE蛋白质电泳常见问题分析
  • SDS-PAGE 蛋白质电泳常见问题分析 日期:2012-05-25 来源:互联网 作者:青岚 点击:2218次 摘要: SDS-PAGE 电泳主要利用聚丙烯酰胺的分子筛效应分离蛋白质和核酸,SDS-PAG 蛋白质电泳分析可从蛋白质亚基分子量的大小就分离蛋白质. 找产品,上生物帮>> & ...