外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞；病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大；病毒法的前期准备较复杂、而且可
能对于细胞有较大影响；所以现在对于很多普通细胞系，一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。
学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法—脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观
测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。
上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。
外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞；病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大；病毒法的前期准备较复杂、而且可
能对于细胞有较大影响；所以现在对于很多普通细胞系，一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。
本次实验采用的脂质体是promega公司的TransFast脂质体试剂，它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的
混合物，是对于本次实验中采用的293T细胞优化的转染试剂。
293T细胞
MyoD表达质粒和EGFP表达质粒
DMEM培养基
链霉素/青霉素（双抗）
PBS（磷酸盐缓冲溶液）
酒精灯
废液缸
血球计数板
涡旋振荡器
35mm培养皿
转染管
细胞传代
2
体积的无血清培养基。加入合适质量的 (2) 弃掉培养皿中的培养基，用(5) 用Tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。1）转染试剂的准备1：1－1：2/脂质体体积：MyoD7） 加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。第二次细胞传代24小时，观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。再次进行细胞传代，按照免疫染色合适的密度1ml的PBS DNA质量）来转染细胞。在一个转染管中加入合适EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂， 溶液洗涤两次。 细胞转染） 选择合适的混合比例（或者再次震荡。 在转染后
外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞；病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大；病毒法的前期准备较复杂、而且可
能对于细胞有较大影响；所以现在对于很多普通细胞系，一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。
学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法—脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观
测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。
上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。
外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞；病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大；病毒法的前期准备较复杂、而且可
能对于细胞有较大影响；所以现在对于很多普通细胞系，一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。
本次实验采用的脂质体是promega公司的TransFast脂质体试剂，它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的
混合物，是对于本次实验中采用的293T细胞优化的转染试剂。
293T细胞
MyoD表达质粒和EGFP表达质粒
DMEM培养基
链霉素/青霉素（双抗）
PBS（磷酸盐缓冲溶液）
酒精灯
废液缸
血球计数板
涡旋振荡器
35mm培养皿
转染管
细胞传代
2
体积的无血清培养基。加入合适质量的 (2) 弃掉培养皿中的培养基，用(5) 用Tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。1）转染试剂的准备1：1－1：2/脂质体体积：MyoD7） 加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。第二次细胞传代24小时，观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。再次进行细胞传代，按照免疫染色合适的密度1ml的PBS DNA质量）来转染细胞。在一个转染管中加入合适EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂， 溶液洗涤两次。 细胞转染） 选择合适的混合比例（或者再次震荡。 在转染后