[摘要]目的建立妇康胶囊中水苏碱的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,EC 250/4.6 NUCLEOSTL,100-5 SA柱,以0.05 mol.L-1磷酸二氢钾-乙晴-三乙胺(100∶2:0.1)(以磷酸调pH值至2.3)为流动相。结果 水苏碱在0.344～5.500μg范围内呈良好的线性关系。R=0.9999,回收率为99.2%。结论 该方法简单、灵敏、准确。 [关键词]妇康胶囊; 益母草; 盐酸水苏碱; 高效液相色谱法 [中图分类号]R927.1[文献标识码]A [文章编号] 1005-0515(2010)-8-020-01 Determination ofStachydrine in Fukang Capsule by HPLC HUANG LiangXu Jin Li Lei ( Chengdu Shenghong Pharmacetical Co..Ltd. Chengdu 610072 ) [Abstract]ObjectiveTo establish a HPLC method for the separation and determination of Stachydrine in Fukang Capsule.MethodsStachydrine in the capsule were separated by HPLC on EC 250/4.6 NUCLEOSTL,100-5 SA column with a 0.05mol/L KH2PO4-CH3CN-C6H15N(100:2:0.1)(H3PO4 PH=2.3)as a mobile phase. ResultsThere was a good linear relationship in a range of 0.344～5.500μg for Stachydrine The recoveries were 99.2%,R=0.9999.ConclusionThe method is simple rapid and accurate. [Keywords]Fukang Capsule; Herba Leonurus; Stachydrine; HPLC 妇康片为卫生部药品标准12册所收载的品种(标准号:WS3-B-2319-97);由益母草、延胡索(醋制)、阿胶、当归、人参、川芎、白芍(酒制)、白术(炒)、茯苓、甘草(蜜炙)、熟地黄等十一味药组成的复方制剂。妇康胶囊为妇康片的剂改品,为中药8类新药。具有补气,养血,调经。用于气血两亏,体虚无力,月经不调,经期,腹痛等。原标准中只收载了延胡索的薄层色谱鉴别,无含量测定指标,剂改为胶囊后,在原标准中添加了相应的含量控制指标。益母草为处方君药,结合新药开发的具体要求,对益母草中的水苏碱含量加以控制[1],对本品的质量控制具有很好的意义。 1仪器、试剂与药品 1.1SSI液相色谱仪,分析之星色谱工作站;sartoriusBP211D电子天平(感量0.1mg ;0.01mg。载量210g;80g);JL-180DTH超声波清洗器。 1.2盐酸水苏碱对照品为中国药品生物制品检定所提供(批号712-200105供含量测定用);妇康胶囊(成都圣洪生物科技有限公司);缺益母草阴性对照品(由成都圣洪生物科技有限公司提供);甲醇为色谱醇;水为重蒸馏水;其余试剂为分析纯。 2试验方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱为EC 250/4.6 NUCLEOSTL,100-5 SA柱,0.05mol.L-1磷酸二氢钾-乙晴-三乙胺(100∶2:0.1)(以磷酸调pH值至2.3)为流动相;流速为0.8ml/min;检测波长为192nm。 2.2试验用溶液的制备 对照品溶液的制备精密称取盐酸水苏碱对照品适量,置容量瓶中,加30%的甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得。 供试品溶液的制备取本品装量差异检查项下的内容物,研细,取约2.0g,精密称定,置烧瓶中,精密加乙醇50ml,称定重量,回流提取1小时,取出放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液25ml,通过氧化铝-活性碳柱(中性氧化铝3g,湿法装柱,上层用活性碳1g,乙醇预洗),用乙醇90ml洗脱,洗脱液蒸干,残渣用30%的甲醇溶解定容于10ml容量瓶中,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。 2.3阴性样品溶液的制备 取不含益母草的样品,同供试品溶液制备方法项下制备。 2.4阴性干扰性试验在选定的色谱条件下,分别精密吸取对照品溶液、样品溶液和缺益母草阴性样品溶液各10ul注入液相色谱仪,理论塔板数(N)按水苏碱峰计算在5000以上。水苏碱的保留时间约为7min,阴性样品在对照品位置无干扰峰,色谱图分别见A、B、C。 A.对照品 B.供试品 C.阴性样品 2.5标准曲线的绘制精密称取盐酸水苏碱对照品适量,加30%甲醇制成不同浓度的对照品溶液,摇匀,作为对照品溶液,分别精密进样10μl,其进样量为0.344μg、0.688μg、1.375μg、2.75μg、4.125μg、5.5μg,按色谱条件进行分析,测定峰面积,并以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归,得标准曲线方程为:A=1.3456×105 C +1.8752×103,r=0.9999。以峰面积值(A)对进样量(C)作图,得一直线,结果表明在0.344～5.50μg范围内与峰面积呈很好的线性关系。 2.6 精密度试验精密吸取盐酸水苏碱对照品溶液(0.1375mg/ml)10μl,连续进样5次,测得盐酸水苏碱对照品峰面积RSD%为0.85%。 2.7稳定性试验取样品(批号051001),制备供试品溶液,分别于不同时间进样,结果表明样品在16小时内测定较稳定。 2.8重复性试验 取样品(批号051001),分别制备5份供试品溶液,按上述色谱条件进行测定,盐酸水苏碱的平均含量为1.66mg/g,其RSD%=1.17%,方法重复性较好。 2.9回收率试验 精密称取样品(样品批号为051001,含量平均值为1.66mg/g)适量,6份,分别精密加入盐酸水苏碱对照品溶液,按上述色谱条件进行测定,平均回收率为99.2%,RSD= 0.61%,表明回收率的试验较好。 2.10样品的含量测定 取3批样品,依法制成供试品溶液10ul,随行对照溶液10进样,分别测定吸收峰面积,按外标法计算样品的含量。结果见表2 3讨论 3.1流动相的选择 依据文献,本实验曾试用了多种流动相[2、3],并比较了0.05mol.L-1磷酸二氢钾-三乙胺、0.05 mol.L-1磷酸二氢钾-乙晴-三乙胺、0.1 mol.L-1磷酸盐溶液(1.0 mol.L-1磷酸二氢钠溶液用0.1 mol.L-1用磷酸氢二钠溶液调节Ph至5.5)等流动相,结果显示,以0.05 mol.L-1磷酸二氢钾-乙晴-三乙胺(100∶2:0.1)(以磷酸调pH值至2.3)为流动相效果较佳,故选择其为流动相。 3.2水苏碱峰形影响因素 样品的进样量越大,其峰形拖尾较为严重,样品的分离较差,流动相中加入三乙胺可以改变峰形的对称性,而加入磷酸调PH值对峰形有较大的影响。PH大于2即可,试验中选择PH为2.3即可。 3.3样品的提取净化 高效液相测定样品中的水苏碱成分,关键问题在于样品的纯化处理,试验中虽有不同的关于盐酸水苏碱的样品纯化处理,如有的采用雷氏盐沉淀法,其方法较繁琐,不利于样品操作,试验重复性较差,也有采用过强酸性阳离子交换树脂吸附,但样品不纯,也不利于盐酸水苏碱的检测,试验中以过氧化铝-活性碳柱能很好的解决以上问题,所制得的样品较纯,杂质峰较少,在紫外末端能很好的检测到。 参考文献 [1] 国家药典委员会编中国药典[S].北京:化学工业出版社2000,一部:237. [2] 贺东兵.HPLC法测定前列康胶囊的含量[J].安徽医药,2005,9(1):46-47. [3] 徐优晓,朱晓燕,蔡进章.HPLC法测定益母草颗粒中水苏碱的含量[J].海峡药学,2005,17(2):73-74.
[摘要]目的建立妇康胶囊中水苏碱的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,EC 250/4.6 NUCLEOSTL,100-5 SA柱,以0.05 mol.L-1磷酸二氢钾-乙晴-三乙胺(100∶2:0.1)(以磷酸调pH值至2.3)为流动相。结果 水苏碱在0.344～5.500μg范围内呈良好的线性关系。R=0.9999,回收率为99.2%。结论 该方法简单、灵敏、准确。 [关键词]妇康胶囊; 益母草; 盐酸水苏碱; 高效液相色谱法 [中图分类号]R927.1[文献标识码]A [文章编号] 1005-0515(2010)-8-020-01 Determination ofStachydrine in Fukang Capsule by HPLC HUANG LiangXu Jin Li Lei ( Chengdu Shenghong Pharmacetical Co..Ltd. Chengdu 610072 ) [Abstract]ObjectiveTo establish a HPLC method for the separation and determination of Stachydrine in Fukang Capsule.MethodsStachydrine in the capsule were separated by HPLC on EC 250/4.6 NUCLEOSTL,100-5 SA column with a 0.05mol/L KH2PO4-CH3CN-C6H15N(100:2:0.1)(H3PO4 PH=2.3)as a mobile phase. ResultsThere was a good linear relationship in a range of 0.344～5.500μg for Stachydrine The recoveries were 99.2%,R=0.9999.ConclusionThe method is simple rapid and accurate. [Keywords]Fukang Capsule; Herba Leonurus; Stachydrine; HPLC 妇康片为卫生部药品标准12册所收载的品种(标准号:WS3-B-2319-97);由益母草、延胡索(醋制)、阿胶、当归、人参、川芎、白芍(酒制)、白术(炒)、茯苓、甘草(蜜炙)、熟地黄等十一味药组成的复方制剂。妇康胶囊为妇康片的剂改品,为中药8类新药。具有补气,养血,调经。用于气血两亏,体虚无力,月经不调,经期,腹痛等。原标准中只收载了延胡索的薄层色谱鉴别,无含量测定指标,剂改为胶囊后,在原标准中添加了相应的含量控制指标。益母草为处方君药,结合新药开发的具体要求,对益母草中的水苏碱含量加以控制[1],对本品的质量控制具有很好的意义。 1仪器、试剂与药品 1.1SSI液相色谱仪,分析之星色谱工作站;sartoriusBP211D电子天平(感量0.1mg ;0.01mg。载量210g;80g);JL-180DTH超声波清洗器。 1.2盐酸水苏碱对照品为中国药品生物制品检定所提供(批号712-200105供含量测定用);妇康胶囊(成都圣洪生物科技有限公司);缺益母草阴性对照品(由成都圣洪生物科技有限公司提供);甲醇为色谱醇;水为重蒸馏水;其余试剂为分析纯。 2试验方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱为EC 250/4.6 NUCLEOSTL,100-5 SA柱,0.05mol.L-1磷酸二氢钾-乙晴-三乙胺(100∶2:0.1)(以磷酸调pH值至2.3)为流动相;流速为0.8ml/min;检测波长为192nm。 2.2试验用溶液的制备 对照品溶液的制备精密称取盐酸水苏碱对照品适量,置容量瓶中,加30%的甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得。 供试品溶液的制备取本品装量差异检查项下的内容物,研细,取约2.0g,精密称定,置烧瓶中,精密加乙醇50ml,称定重量,回流提取1小时,取出放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液25ml,通过氧化铝-活性碳柱(中性氧化铝3g,湿法装柱,上层用活性碳1g,乙醇预洗),用乙醇90ml洗脱,洗脱液蒸干,残渣用30%的甲醇溶解定容于10ml容量瓶中,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。 2.3阴性样品溶液的制备 取不含益母草的样品,同供试品溶液制备方法项下制备。 2.4阴性干扰性试验在选定的色谱条件下,分别精密吸取对照品溶液、样品溶液和缺益母草阴性样品溶液各10ul注入液相色谱仪,理论塔板数(N)按水苏碱峰计算在5000以上。水苏碱的保留时间约为7min,阴性样品在对照品位置无干扰峰,色谱图分别见A、B、C。 A.对照品 B.供试品 C.阴性样品 2.5标准曲线的绘制精密称取盐酸水苏碱对照品适量,加30%甲醇制成不同浓度的对照品溶液,摇匀,作为对照品溶液,分别精密进样10μl,其进样量为0.344μg、0.688μg、1.375μg、2.75μg、4.125μg、5.5μg,按色谱条件进行分析,测定峰面积,并以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归,得标准曲线方程为:A=1.3456×105 C +1.8752×103,r=0.9999。以峰面积值(A)对进样量(C)作图,得一直线,结果表明在0.344～5.50μg范围内与峰面积呈很好的线性关系。 2.6 精密度试验精密吸取盐酸水苏碱对照品溶液(0.1375mg/ml)10μl,连续进样5次,测得盐酸水苏碱对照品峰面积RSD%为0.85%。 2.7稳定性试验取样品(批号051001),制备供试品溶液,分别于不同时间进样,结果表明样品在16小时内测定较稳定。 2.8重复性试验 取样品(批号051001),分别制备5份供试品溶液,按上述色谱条件进行测定,盐酸水苏碱的平均含量为1.66mg/g,其RSD%=1.17%,方法重复性较好。 2.9回收率试验 精密称取样品(样品批号为051001,含量平均值为1.66mg/g)适量,6份,分别精密加入盐酸水苏碱对照品溶液,按上述色谱条件进行测定,平均回收率为99.2%,RSD= 0.61%,表明回收率的试验较好。 2.10样品的含量测定 取3批样品,依法制成供试品溶液10ul,随行对照溶液10进样,分别测定吸收峰面积,按外标法计算样品的含量。结果见表2 3讨论 3.1流动相的选择 依据文献,本实验曾试用了多种流动相[2、3],并比较了0.05mol.L-1磷酸二氢钾-三乙胺、0.05 mol.L-1磷酸二氢钾-乙晴-三乙胺、0.1 mol.L-1磷酸盐溶液(1.0 mol.L-1磷酸二氢钠溶液用0.1 mol.L-1用磷酸氢二钠溶液调节Ph至5.5)等流动相,结果显示,以0.05 mol.L-1磷酸二氢钾-乙晴-三乙胺(100∶2:0.1)(以磷酸调pH值至2.3)为流动相效果较佳,故选择其为流动相。 3.2水苏碱峰形影响因素 样品的进样量越大,其峰形拖尾较为严重,样品的分离较差,流动相中加入三乙胺可以改变峰形的对称性,而加入磷酸调PH值对峰形有较大的影响。PH大于2即可,试验中选择PH为2.3即可。 3.3样品的提取净化 高效液相测定样品中的水苏碱成分,关键问题在于样品的纯化处理,试验中虽有不同的关于盐酸水苏碱的样品纯化处理,如有的采用雷氏盐沉淀法,其方法较繁琐,不利于样品操作,试验重复性较差,也有采用过强酸性阳离子交换树脂吸附,但样品不纯,也不利于盐酸水苏碱的检测,试验中以过氧化铝-活性碳柱能很好的解决以上问题,所制得的样品较纯,杂质峰较少,在紫外末端能很好的检测到。 参考文献 [1] 国家药典委员会编中国药典[S].北京:化学工业出版社2000,一部:237. [2] 贺东兵.HPLC法测定前列康胶囊的含量[J].安徽医药,2005,9(1):46-47. [3] 徐优晓,朱晓燕,蔡进章.HPLC法测定益母草颗粒中水苏碱的含量[J].海峡药学,2005,17(2):73-74.