粗蛋白测定GB-1

中华人民共和国专业标准 中华人民共和国专业标准

全氮和粗蛋白测定法

Determination of total nitrogen and ZB X 66026-87

crude protein

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本方法适用于酿造酱油的原料、半成品、副产品的全氮、粗蛋白测定。

1 仪器

a. 分析天平:感量0.1mg;

b. 凯氏烧瓶;

c. 铁架、铁圈、石棉网;

d. 煤气灯(或电炉);

e. 干燥管、抽气管、橡皮管;

f. 氮气球、冷凝管、锥形瓶;

g. 粉碎机等。

2 试剂与溶液

2.1 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂

甲基红40mg, 溴甲酚绿1g, 溶于60mL95%乙醇中。

2.2 硫酸铜-硫酸钾混合试剂

硫酸铜 : 硫酸钾 = 6∶100 (硫酸铜和硫酸钾都为分析纯) 。

2.3 玻璃珠(φ3mm)或锌粒。

2.4 4%硼酸溶液

称取化学纯硼酸4g, 用蒸馏水溶解后定容至100mL 。

2.5 浓硫酸 (分析纯)

2.6 40%氢氧化钠溶液

称取化学纯氢氧化钠40g, 加蒸馏水溶解, 定容至100mL 。

2.7 0.1N盐酸标准溶液

量取分析纯盐酸9mL, 加蒸馏水稀释至1000mL 。

2.7.1 用无水碳酸钠标定:准确称取无水碳酸钠(预先在180℃的烘箱中烘至恒重)3份,

每份重约0.17g, 称准至0.0002g 。分别置于150mL 锥形瓶中, 各加已煮沸过蒸馏水30mL, 温热摇动, 使之溶解。再各加甲基红-溴甲酚绿混合指示剂 2 滴, 然后用待标定的盐酸 溶液滴定, 直至溶液刚呈暗红色为终点, 记下耗用毫升数(V)。

计算:盐酸标准溶液的当量浓度N 按下式计算

G

N = ━━━━━━ …………………………………… (3)

V ×0.05299

式中:N——盐酸标准溶液的当量浓度;

G ——无水碳酸钠之重量,g;

V ——盐酸溶液之用量,mL;

0.05299——每毫克当量Na2CO3之重量,g 。

2.7.2 用已知当量浓度的氢氧化钠标定:准确吸取25mL 需要标定的盐酸溶液于150mL 锥 形瓶中, 加酚酞指示剂2滴, 用0.1N 氢氧化钠标准溶液滴至微红色, 在30s 内不退色为终点。 记下耗用mL 数。

计算:

N NaOH×V NaOH

盐酸当量 = ━━━━━━━━ …………………………………(2)

25

式中:N NaOH——已知浓度的氢氧化钠溶液的当量浓度;

V NaOH——氢氧化钠溶液的滴定量,mL;

25——待标定盐酸吸取量,mL 。

2.7.3 标定程序:若要使盐酸标准溶液的当量浓度尽可能接近0.1000N, 可根据初标定浓 度加水或盐酸, 多次标定后最终达到。为操作简便, 可使用2.7.2法, 最后用2.7.1法标定。

3 操作方法

3.1 消化

准确吸取原样 2mL(或称取固体样品0.5g, 称准至0.0002g) 。置于干燥的500mL 凯氏 烧瓶中, 加入硫酸铜—硫酸钾混合试剂 5g, 浓硫酸 8mL, 然后放入通风橱内 (烧瓶口上放 置小漏斗), 加热消化至烧瓶内碳化颗粒完全消失, 消化液呈浅绿色后, 再继续加热10min 左右, 一般消化时间不超过30min 。也可于瓶颈口上插一支干燥管用橡皮管连接玻璃水泵, 借以将腐蚀性气体抽去。

3.2 蒸馏

冷却后, 缓慢加入蒸馏水120mL, 使其全部溶解, 冷凝管下端的导管插入盛有4%硼酸溶

液35mL 及混合指示剂 2滴的250mL 锥形瓶中的液面下, 然后, 沿凯氏烧瓶瓶壁加入40%氢氧 化钠溶液40mL, 玻璃珠 4～5粒或锌粒 1～2粒, 迅速连接蒸馏装置, 以防氨气逸出。连接 好后, 检查是否漏气, 缓缓摇匀, 接通冷却水, 加热、蒸馏, 使瓶内液体蒸去三分之二停止 蒸馏。

3.3 滴定

将锥形瓶内接收液用0.1N 盐酸标准溶液滴定至暗红色为终点。记下耗用mL 数。平行 试验允许误差为0.2mL 。

同时做试剂空白试验。

4 计算

4.1 全氮TN 含量计算如下:

(V -Vo)×N×0.014

TN = ━━━━━━━━━━×100……………………… (3)

W

式中:V——样品滴定时耗用盐酸标准溶液数,mL;

Vo ——试剂空白滴定耗用盐酸标准溶液数,mL;

N ——盐酸标准溶液当量浓度;

0.014——氮的毫克当量;

W ——样品mL 数或g 数;

TN ——样品全氮含量,g/100mL或g 。

4.2 原料粗蛋白P 计算如下:

P =6.25TN ………………………………………………(4)

式中:P——原料粗蛋白含量,g/100mL或g;

6.25——蛋白质中含氮系数;

TN ——全氮含量,g/100mL或g 。

━━━━━━━━━━

附加说明:

本标准由商业部副食品局提出。

本标准由上海市酿造科学研究所起草。

本标准主要起草人须凤高。

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中华人民共和国商业部1987-11-20批准 1988-07-01实施

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全氮和粗蛋白测定法

Determination of total nitrogen and ZB X 66026-87

crude protein

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本方法适用于酿造酱油的原料、半成品、副产品的全氮、粗蛋白测定。

1 仪器

a. 分析天平:感量0.1mg;

b. 凯氏烧瓶;

c. 铁架、铁圈、石棉网;

d. 煤气灯(或电炉);

e. 干燥管、抽气管、橡皮管;

f. 氮气球、冷凝管、锥形瓶;

g. 粉碎机等。

2 试剂与溶液

2.1 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂

甲基红40mg, 溴甲酚绿1g, 溶于60mL95%乙醇中。

2.2 硫酸铜-硫酸钾混合试剂

硫酸铜 : 硫酸钾 = 6∶100 (硫酸铜和硫酸钾都为分析纯) 。

2.3 玻璃珠(φ3mm)或锌粒。

2.4 4%硼酸溶液

称取化学纯硼酸4g, 用蒸馏水溶解后定容至100mL 。

2.5 浓硫酸 (分析纯)

2.6 40%氢氧化钠溶液

称取化学纯氢氧化钠40g, 加蒸馏水溶解, 定容至100mL 。

2.7 0.1N盐酸标准溶液

量取分析纯盐酸9mL, 加蒸馏水稀释至1000mL 。

2.7.1 用无水碳酸钠标定:准确称取无水碳酸钠(预先在180℃的烘箱中烘至恒重)3份,

每份重约0.17g, 称准至0.0002g 。分别置于150mL 锥形瓶中, 各加已煮沸过蒸馏水30mL, 温热摇动, 使之溶解。再各加甲基红-溴甲酚绿混合指示剂 2 滴, 然后用待标定的盐酸 溶液滴定, 直至溶液刚呈暗红色为终点, 记下耗用毫升数(V)。

计算:盐酸标准溶液的当量浓度N 按下式计算

G

N = ━━━━━━ …………………………………… (3)

V ×0.05299

式中:N——盐酸标准溶液的当量浓度;

G ——无水碳酸钠之重量,g;

V ——盐酸溶液之用量,mL;

0.05299——每毫克当量Na2CO3之重量,g 。

2.7.2 用已知当量浓度的氢氧化钠标定:准确吸取25mL 需要标定的盐酸溶液于150mL 锥 形瓶中, 加酚酞指示剂2滴, 用0.1N 氢氧化钠标准溶液滴至微红色, 在30s 内不退色为终点。 记下耗用mL 数。

计算:

N NaOH×V NaOH

盐酸当量 = ━━━━━━━━ …………………………………(2)

25

式中:N NaOH——已知浓度的氢氧化钠溶液的当量浓度;

V NaOH——氢氧化钠溶液的滴定量,mL;

25——待标定盐酸吸取量,mL 。

2.7.3 标定程序:若要使盐酸标准溶液的当量浓度尽可能接近0.1000N, 可根据初标定浓 度加水或盐酸, 多次标定后最终达到。为操作简便, 可使用2.7.2法, 最后用2.7.1法标定。

3 操作方法

3.1 消化

准确吸取原样 2mL(或称取固体样品0.5g, 称准至0.0002g) 。置于干燥的500mL 凯氏 烧瓶中, 加入硫酸铜—硫酸钾混合试剂 5g, 浓硫酸 8mL, 然后放入通风橱内 (烧瓶口上放 置小漏斗), 加热消化至烧瓶内碳化颗粒完全消失, 消化液呈浅绿色后, 再继续加热10min 左右, 一般消化时间不超过30min 。也可于瓶颈口上插一支干燥管用橡皮管连接玻璃水泵, 借以将腐蚀性气体抽去。

3.2 蒸馏

冷却后, 缓慢加入蒸馏水120mL, 使其全部溶解, 冷凝管下端的导管插入盛有4%硼酸溶

液35mL 及混合指示剂 2滴的250mL 锥形瓶中的液面下, 然后, 沿凯氏烧瓶瓶壁加入40%氢氧 化钠溶液40mL, 玻璃珠 4～5粒或锌粒 1～2粒, 迅速连接蒸馏装置, 以防氨气逸出。连接 好后, 检查是否漏气, 缓缓摇匀, 接通冷却水, 加热、蒸馏, 使瓶内液体蒸去三分之二停止 蒸馏。

3.3 滴定

将锥形瓶内接收液用0.1N 盐酸标准溶液滴定至暗红色为终点。记下耗用mL 数。平行 试验允许误差为0.2mL 。

同时做试剂空白试验。

4 计算

4.1 全氮TN 含量计算如下:

(V -Vo)×N×0.014

TN = ━━━━━━━━━━×100……………………… (3)

W

式中:V——样品滴定时耗用盐酸标准溶液数,mL;

Vo ——试剂空白滴定耗用盐酸标准溶液数,mL;

N ——盐酸标准溶液当量浓度;

0.014——氮的毫克当量;

W ——样品mL 数或g 数;

TN ——样品全氮含量,g/100mL或g 。

4.2 原料粗蛋白P 计算如下:

P =6.25TN ………………………………………………(4)

式中:P——原料粗蛋白含量,g/100mL或g;

6.25——蛋白质中含氮系数;

TN ——全氮含量,g/100mL或g 。

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附加说明:

本标准由商业部副食品局提出。

本标准由上海市酿造科学研究所起草。

本标准主要起草人须凤高。

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中华人民共和国商业部1987-11-20批准 1988-07-01实施