医药法规微生物检测方法
１．１ 革兰氏染色法
１．１．１ 染液配制
（１）结晶紫染液：
结晶紫（Ｃｙｓｔａｌ ｖｉｏｌｅｔ） １．０ｇ ９５％乙醇 ２０ｍｌ １％草酸铵［（ＮＨ4）2Ｃ2Ｏ4］水溶液 ８０ｍｌ 将结晶紫溶解于９５％乙醇中后，与草酸铵溶液相混合，静置４８ 小时使用。此染液稳定，置密闭的棕色瓶中可储存数月。
（２）革兰氏碘液：
碘片［Ｉ2］ １．０ｇ 碘化钾［ＫＩ］ ２．０ｇ 蒸馏水 ３００ｍｌ
先用３～５ｍｌ蒸馏水溶解碘化钾，再加入碘片，待全部溶解后，加蒸馏水稀释至３００ｍｌ。置密闭棕色瓶中，备用。
（３）脱色液：９５％乙醇
（４）沙黄（番红）染液
沙黄（Ｓａｆｒａｍｉｎｅ Ｏ） ０．２５ｇ
９５％乙醇 １０ｍｌ
蒸馏水 适量
将沙黄溶解于９５％乙醇中，待完全溶解再加蒸馏水至１００ｍｌ。 １．１．２ 染色法
（１）用接种环沾取无菌水，置于洁净载玻片上，再挑取少许菌苔，轻轻研开，使均匀。
（２）涂片自然风干或微热烤干，而后通过火焰２～３次以固定涂片。 （３）滴加结晶柴染液，染色１分钟，水洗 。
（４）滴加碘液、媒染１分钟，水洗、甩干余水。
（５）滴加９５％乙醇脱色，约２０～３０秒，或将９５％乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满涂片脱色１０秒钟，水洗、吸干。 （６）滴加沙黄复染液，染１分钟，水洗，待干。
（７）镜检
１．１．３ 染色结果
革兰氏阳性菌呈蓝紫色
革兰氏阴性菌呈红色
１．１．４ 注意事项
（１）玻片必须洁净，涂片宜薄而匀，菌量不可浓，否则，看不清单个菌体形态。
（２）待检菌菌龄以１８～２４小时为宜，革兰氏阳性茵易受菌龄影响，老化细胞易呈阴性。
（３）脱色是本法的关键步骤，脱色不足易染成阳性，脱色过度易染成阴性。
医药法规微生物检测方法
１．１ 革兰氏染色法
１．１．１ 染液配制
（１）结晶紫染液：
结晶紫（Ｃｙｓｔａｌ ｖｉｏｌｅｔ） １．０ｇ ９５％乙醇 ２０ｍｌ １％草酸铵［（ＮＨ4）2Ｃ2Ｏ4］水溶液 ８０ｍｌ 将结晶紫溶解于９５％乙醇中后，与草酸铵溶液相混合，静置４８ 小时使用。此染液稳定，置密闭的棕色瓶中可储存数月。
（２）革兰氏碘液：
碘片［Ｉ2］ １．０ｇ 碘化钾［ＫＩ］ ２．０ｇ 蒸馏水 ３００ｍｌ
先用３～５ｍｌ蒸馏水溶解碘化钾，再加入碘片，待全部溶解后，加蒸馏水稀释至３００ｍｌ。置密闭棕色瓶中，备用。
（３）脱色液：９５％乙醇
（４）沙黄（番红）染液
沙黄（Ｓａｆｒａｍｉｎｅ Ｏ） ０．２５ｇ
９５％乙醇 １０ｍｌ
蒸馏水 适量
将沙黄溶解于９５％乙醇中，待完全溶解再加蒸馏水至１００ｍｌ。 １．１．２ 染色法
（１）用接种环沾取无菌水，置于洁净载玻片上，再挑取少许菌苔，轻轻研开，使均匀。
（２）涂片自然风干或微热烤干，而后通过火焰２～３次以固定涂片。 （３）滴加结晶柴染液，染色１分钟，水洗 。
（４）滴加碘液、媒染１分钟，水洗、甩干余水。
（５）滴加９５％乙醇脱色，约２０～３０秒，或将９５％乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满涂片脱色１０秒钟，水洗、吸干。 （６）滴加沙黄复染液，染１分钟，水洗，待干。
（７）镜检
１．１．３ 染色结果
革兰氏阳性菌呈蓝紫色
革兰氏阴性菌呈红色
１．１．４ 注意事项
（１）玻片必须洁净，涂片宜薄而匀，菌量不可浓，否则，看不清单个菌体形态。
（２）待检菌菌龄以１８～２４小时为宜，革兰氏阳性茵易受菌龄影响，老化细胞易呈阴性。
（３）脱色是本法的关键步骤，脱色不足易染成阳性，脱色过度易染成阴性。