酿酒科技２００９年第ｌＯ期（总第１８４期）・ＬＩＱＵＯＲ—ＭＡＫＩＮＧ
ＳＣＩＥＮＣＥ＆ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ２００９
Ｎｏ．１０口０１．１８４）
多酚物质对啤酒风味稳定性的影响
马超，薛栋升，吴訾叶红，杨周辉
（台州学院生命科学学院，浙江台州３１７０００）
摘要：研究多酚物质对啤酒风味稳定性的影响。结果表明，啤酒的风味稳定性与啤酒的抗氧化性显著相关，啤酒
的抗氧化性与多酚含量显著相关：不同的单酚抗氧化能力差异较大；抗氧化性随单酚含量的增加而增加；酒体中的单酚抗氧化性随酒体保存的时间延长而减小；不同来源的多酚抗氧化性不同；不同辅料生产的啤酒抗氧化能力不同。多酚含量和组成影响啤酒的风味稳定性，多酚适量存在可提高啤酒风味稳定性。关键词：啤酒；
多酚；风味稳定性：抗氧化性
文献标识码：Ａ
文章编号：１００１—９２８６（２００９）ｌＯ一００５ｌ－０３
中图分类号：ＴＳ２６２．５；ＴＳ２６１．４
ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＰｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ
ｏｎ
ＢｅｅｒＦｌａｖｏｒＳｔａｂｉｌｉｔｙ
ＭＡＣａｏ，ＸＵＥＤｏｎｇ・ｓｈｅｎｇ，ＷＵＺＩＹｅ—ｈｏｎｇａｎｄＹＡＮＧＺｈｏｕ－ｈｕｉ（Ｌｉｆｅ
ＳｃｉｅｎｃｅＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴａｉｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ｔａｉｚｈｏｕ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ，３１７０００
ｏｎ
Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ
ｔｏ
ｂｅｅｒｆｌａｖｏｒ
ｓｔａｂｉｌｉｔｙｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｂｅｅｒｆｌａｖｏｒｓｔａｂｉｌｉｔｙｗａｇｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｌｅｖａｎｔ
ｔｏ
ｂｅｅｒａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎａｎｄｂｅｅｒ
ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ
ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｌｅｖａｎｔｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓｃｏｎｔｅｎｔ，ｔｈｅｒｅＷａＳｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ
ｉｎａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎｆｏｒ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｏｎｏｐｈｅｎｏｌ，ｔｈｅａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｍｏｎｏｐｈｅｎｏｉｐｒｏｍｏｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｍｏｎｏｐｈｅｎｏｌｃｏｎｔｅｎｔ，ａｎｄｍｏｎｏｐｈｅｎｏｌａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎｉｎｂｅｅｒ
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ｃｏｎｔｅｎｔ
ｓｏｕｒｃｅ
ｈａｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ，ａｎｄｂｅｅｒｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｄｉｆ－
ｆｅｒｅｎｔａｕｘｉｌｌｉａｒｙｍａｔｅｒｉａｌｓｈａｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｏｘｉｄａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｑｕａｔｅｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ
ｃｏｎｔｅｎｔ
ａｎｄｔｈｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓｏｆｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓｗｏｕｌｄｉｎｆｌｕｅｎｃｅｂｅｅｒｆｌａｖｏｒ
ｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄａｄｅ－
ｃｏｕｌｄｉｍｐｒｏｖｅｂｅｅｒｆｌａｖｏｒｓｔａｂｉｌｉｔｙ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｂｅｅｒ；ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ；ｆｌａｖｏｒｓｔａｂｉｌｉｔｙ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ
随着人们生活水平的不断提高，消费者对食品的质量要求也不只是停留在安全层面上，已经提升到了一个更高的层次，对啤酒的质量要求也提升到口感和风味上来。要求啤酒不仅口感要好，更要有良好的风味，并且要求风味稳定性较好。瓶装啤酒进入市场后，在贮存过程中会形成一些会影响其原有的新鲜风味的产物，啤酒灌装后，在保存过程中，风味是不断变化的。开始时出现黑栗子味，随即消失，而后出现甜味、面包味、焦糖味、奶酪味，严重时则出现纸板味和金属腥味等【Ｉｌ。
近年来，多酚物质对啤酒风味稳定性的贡献逐渐受到重视ｆ２＿３】。研究认为，啤酒多酚物质能吸附６５％的瓶颈中的氧气（４】，在麦汁煮沸时多酚物质能改善还原活性及啤酒羰基化合物的浓度【８】。本文研究多酚物质与啤酒抗氧化性的关系，为提高啤酒的风味稳定性提供一定借鉴。ｌ材料与方法１．１材料
麦芽：进口澳麦芽；单酚：购买于Ｓｉｇｍａ；
收稿日期：２００９－０６—３０
绿色柠檬酸铁铵（含Ｆｅ１６％）：进口Ｆｌｕｋｕ分装；硫代巴比妥酸：上海生化试剂公司。１．２仪器
１００
；
Ｌ啤酒生产设备：上海保兴生物仪器设备有限
公司。
１．３
方法
１．３．１麦汁液体培养基
麦芽粉碎，在５２℃、６２℃、６８℃和７２℃分别保温，纱布过滤。
１．３．２麦汁固体培养基
麦汁液体培养基中加入２％琼脂。１．３．３啤酒酵母活化
菌种接种于麦汁固体，于２８℃培养２４１．３．４啤酒酵母液体菌种制备
接种于液体试管，２８℃培养４８ｈ，以１０％接种量接种于三角瓶，２０℃培养３ｄ，降温到１５℃，培养４ｄ，继续降温到１０℃，培养５ｄ。１．３．５设备清洗
ｈ。
酿酒科技２００９年第１０期（总第１８４期）・ＬＩＱＵＯＲ－ＭＡＫＩＮＧ
ＳＣＩＥＮＣＥ缈ＣＨＮＯＬ（）ＧＹ
２００９
Ｎｏ．ＩＯ（Ｔ０１．１８４）
设备用２％的碱液于８０℃清洗２０ｍｉｎ，用９０℃热水清洗后再用醋酸溶液清洗，最后用９０℃热水清洗。１．３．６麦汁生产
麦芽粉碎，以麦皮破裂为１／３大小的碎片为粉碎度，大米粉碎度为３０目，大米的比例为３８％，经过糊化、糖化、过滤，煮沸添加酒花，然后沉淀冷却。１．３．７有机溶剂法提取酚类物质
用７０％丙酮溶液２００ｍＬ浸泡２１
ｈ，３０００
后经过品酒师品定酒的风味。风味值最大的计为１０分．该风味值能最大限度地保存原酒风味。风味值越小，说明该酒的风味变化大，因此稳定性就越差。抗氧化性与啤酒风味稳定性的相关性见图ｌ。
８
１
ｒ／ｍｉｎ离
６
４
９８７
焱盎碴
口
２ｌ
６５４３２
心１０ｍｉｎ，取上清液，４０℃旋转蒸发，去除有机溶剂，加蒸馏水补足蒸发量，测定。１．３．８啤酒总多酚检测
总多酚的检测采用文献【２】的方法。１．３．９啤酒ＴＢＡ值检测［２１
０．８Ｏ．８
原酒充Ｃ０２原酒
１００ｍＬ５０ｍＬ
酒样处理方式
图ｌ抗氧化性与啤酒风味稳定性的关系
①取１０ｍＬ啤酒于１００００ｒ／ｒａｉｎ高速下离心。②取上清液５ｍＬ与２ｍＬ含０．３３％ＴＢＡ的５０％
乙酸溶液混合均匀，在６０℃水浴中精确加热６０ｍｉｎ，然后迅速冷却，于５３０ｎｎｌ处比色。
从图ｌ中可以看出，啤酒的风味稳定性随啤酒的抗氧化性增强而增强，随啤酒的抗氧化性下降而下降。影响啤酒风味稳定性的因素为影响啤酒抗氧化性。２．２多酚物质含量与啤酒抗氧化性的关系
对多酚物质含量与啤酒的抗氧化性进行测定，结果见图２。
ｏ
０．７２
③取５ｍＬ啤酒加２ｍＬ蒸馏水，以上面同样的方式
处理后作为比色的空白。
④检验啤酒是否离心到澄清效果的方法：取离心后
的啤酒在４３０ａｍ与７００ｎｍ波长下，以蒸馏水为空白，测定其吸光度，分别以ＯＤ４３０与ＯＤ彻表示。当ＯＤ４３０ｘ０．０３９＞ＯＤ瑚，则表示样品是透明的，否则需再次离心重新测定。
１．３．１０
要０．７
首０．６８
高０．６６茬０．６４
盏０．６２
。０．６
Ｏ．５８Ｏ．５６０．５４
Ｔ凡心值测定
步骤：将含有７５
ｉｔｍｏ儿ＡＴＢＳ即２，２一连氮（３一苯乙
基噻唑啉一６一磺酸盐）和２ｍｍｏｌ／ＬＡＡＰＨ即２，２一偶氮（２一脒基丙烷）二氢化物的５０ｍｍｏｌ／Ｌ醋酸盐缓冲液（ｐＨ４．３）反应混合液，在４５℃水浴反应６０ｒａｉｎ，然后冷却至室温备用。取４０斗Ｌ样品加入到５ｍＬ上述反应混合液中，在２５℃水浴保温１５ｍｉｎ，比色；另取４０斗Ｌ的５０ｍｍｏｌ／Ｌ醋酸缓冲液（ｐＨ４．３）代替样品作空白，其他操作条件相同；然后取４０肛Ｌ的ｌｎａｎｏｌ／Ｌ抗坏血酸盐溶液作标准参照，实验操作条件相同。
图２多酚类物质与抗氧化性的关系
从图２可以看出，多酚物质的含量越多，啤酒的抗氧化性越强，在６５＂－＇７５ｍｇ／Ｌ之间时，啤酒的抗氧化性几乎和多酚含量成线性关系；在７５－－－８０ｍｇ／Ｌ之间，随多酚含量的增加，啤酒的抗氧化性增加的速度变慢。结合图１的结果，可以得出啤酒的风味稳定性与啤酒多酚的含量成正相关。
２．３单酚对啤酒抗氧化性的影响
对单酚影响啤酒抗氧化性的结果进行测定，结果见图３。
从图３可以看出，不同的单酚类物质，抗氧化的能力是不同的。槲皮素抗氧化性的能力最好，其余依次为儿茶素、阿魏酸、表儿茶素、香草酸。２．４单酚含量对啤酒抗氧化性的影响
对单酚含量对啤酒抗氧化性的影响进行实验，结果见图４。
从图４可以看出，随单酚含量的增减，ＴＢＡ值下降，
计算：ＴＲＡＰ／ｉ直（ｒｅｔｏｏｌ／Ｌ）。铡舭Ｃ
口感评分
式中：Ｃ为抗坏血酸盐浓度；Ａ为吸光值；ＴＲＡＰ表示相当于抗坏血酸盐的ｍｍｏｌ／Ｌ。
１．３．１ｌ
由２０人品尝，给予打分，满分１０分，去掉４个最高分和４个最低分，平均值即为口感得分。２结果与分析
２．１抗氧化性与啤酒风味稳定性的相关性
将不同处理方式处理的酒样，在３０℃放置１５ｄ，然
马超，薛栋升，昊訾叶红，杨周辉・多酚物质对啤酒风味稳定性的影响
拿２
石
Ｏ４
量１．５
ｊ型
靼矗卜
０．３５．Ｏ３Ｏ．２５．Ｏ２
量＿
ｌ
０・５
Ｏ．１５
Ｏ
．Ｏ
１
表儿茶素阿魏酸香草酸儿茶素
单酚物质种类
Ｏ．Ｏ５
．
Ｏ
全麦
图３单酚对啤酒抗氧化性的影响
０．４５０．４０．３５０．３０．２５０．２Ｏ．１５Ｏ．１０．０５
Ｏ
董０．６
一
ｌ
２
３
全麦＋酒花３０％辅料３０９６辅料＋酒花
多酚来源
—
４
１
ｉ厅
一
４
—一
ｌ
２
３
—
４
——
—
４
图６不同来源多酚对抗氧化性的影响
一
ｌ
可３４
ｌ
３２
ｏ０．８
趔
墨０．４
儿茶素
香草酸表儿条素
阿魏酸
槲皮素
单酚物质种类
Ｏ．２
图４单酚含量对抗氧化性的影响
Ｏ
全麦
４０９６大米４０％：Ｋ米４０％ｄ，麦
不同辅料
说明单酚含量越多，越有利于提高啤酒的抗氧化性。２．５添加酚类物质对啤酒抗氧化性的影响
对添加酚类物质后啤酒抗氧化性随时间的变化进行测定，结果见图５。
３结论
乏１－
名１．
图７不同多酚含量的麦汁对抗氧化性的影响
化性较好，风味稳定性也较好。
曼
趔
从抗氧化性方面研究啤酒的风味稳定性。啤酒的风味稳定主要取决于抗氧化能力，经过研究得出以下结论：
３．１
室０．
。０．
啤酒的风味稳定与啤酒的抗氧化能力密切相关，抗
０．
氧化能力越强，风味越稳定。啤酒的抗氧化能力与啤酒中
单酚物质种类
多酚的含量密切相关，多酚含量越高，抗氧化性越强，啤酒风味稳定性越好。
３．２不同的单酚抗氧化能力不同，不同来源的多酚，抗氧化能力也有差异。随保存时间的延长，啤酒中单酚的抗氧化能力下降。不同辅料会影响啤酒的抗氧化性，进而影响啤酒的风味稳定性。啤酒的风味稳定性与啤酒中的多酚含量和多酚组成密切相关。凡是能影响到酒体中多酚含量和组成的因素都会对啤酒的风味稳定性产生影响。适量的多酚存在于酒体中，能提高酒体的风味稳定性。
３．３
图５单酚对啤酒抗氧化性的影响随时间变化
从图５可以看出，啤酒的抗氧化性随保存时间的增加而下降。各种单酚对啤酒抗氧化性影响规律随时间的增加依然保持不变。
２．６不同多酚对啤酒抗氧化性的影响
对不同来源的多酚对啤酒的抗氧化性影响结果进行测定，结果见图６。
从图６可以看出，不同的多酚对啤酒抗氧化性的影响是不一样的。全麦加酒花的抗氧化性最强，用全麦酿造的啤酒其风味稳定性较添加辅料的啤酒风味稳定性好。２．７不同多酚含量对啤酒抗氧化性的影响
用不同的原料和不同的原料配比，所生产的麦汁含有的多酚含量是不一样的，对含不同多酚含量的麦汁发酵生产的啤酒的抗氧化性进行实验，结果见图７。
从图７可发现，用玉米做辅料酿造的啤酒抗氧化性差，风味稳定性差。用大米和小麦做辅料酿造的啤酒抗氧
由于多酚物质的组成和含量在生产的每一步骤都
受影响，因此提高啤酒的风味稳定性从原料的生产一直到啤酒的灌装都应该严格控制，同时啤酒的风味稳定性还与其他物质紧密相关，应予以重视１６１。参考文献：
【１】王亚楠，肖冬光．提高啤酒风味稳定性的方法【Ｊ】．酿酒科技，
２００２，１２（４）：６０－６２．
【２】Ｓｈｉｇｅｋｉ气ＴａｒｓｉＫＣｈｉｋａｋｏＳ，ｅｔａ１．Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａ－
ｆｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ
ｔｏ
ｂｅｅｒｆｌａｖｏｒ
ｓｔａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．（下转第５６页）
苎良夔科技２００９年第１０期（肇翟！单塑！：Ｌｌ坠！坠坐型鱼堕型堡苎里型坠壁坚！翌翌！：！蜓０１．１８４）
控对象不含纯滞后的部分ｑ（ｓ）组成，则：
ｐ
、＿，
ｎｒ（沪甜２丧黯特ｅ１
其中，Ｈ，（ｓ）为设定值响应传递函数。
㈣｛醚赠
应用直接综合法，对于一阶加纯滞后过程模型，设
／＇Ｌ（ｓ）的期望值矾０）为一阶加纯滞后，即：
巩㈤２南
出ＰＩ跟踪控制器Ｇｃ。（ｓ）的参数为：
（６）
时间（ｓ）
其中，Ｚ为期望时间常数，令珥（ｓ）＝巩（ｓ），可以导
图２
，、
当模型准确时双控制器系统仿真结果图
ｇｃｌ＝斋禹矶
Ｌ不宜太小嘲。
控制参数为疋。＝ｌ，￡，＝１０。２．３．２扰动控制器的设计
：‘
（７）
一世赠
ｐ
本设计中，被控对象模型参数∥＝ｌ，ｒ＝１０，，＝１８０
闭。在仿真中进行调试后，取疋＝１０，因而控制器Ｇ。ｔ（ｓ）各
当模型准确时，负载扰动控制回路由被控对象Ｇ。（ｓ）ｅ１和扰动控制器Ｇ０２（ｓ）组成。扰动控制器采用ＰＩ控制，利用修正Ｈａａｌｍａｎ整定方法来确定Ｇ。２的参数，对于在啤酒发酵过程中被控对象模型是一阶惯性环节加纯滞后环节近似描述过程，按下列公式整定ＰＩ扰动控制器Ｇｃ２的参数：
＾＿
时间（ｓ）
图３，ｒ＝１７０时双控制器系统仿真结果图
４结论
在系统硬件的控制方案中采用基于删处理器
如＝｛等下，Ｌ２＝口７－ｊＡ丁
其中，ｏ≥ｌ为公共修正系数【４１。
（８）
ＬＰＣ２２００的嵌入式系统是为了精简系统的外设结构，提高精度。双控制器方案使得跟踪控制器和扰动控制器独立设计，同时获得了良好的设定值、跟踪特性和扰动抑制能力，被控对象发生改变时，仍保持稳定，系统表现出良好的鲁棒性。参考文献：
【１】周立功．ＡＲＭ嵌入式系统基础教程【Ｍ】．北京：北京航空航天
大学出版社，２００５．
【２】林英芸。杨煜普．在ＷｉｎＣＣ中实现串行通信的两种方法叨．电
子测量技术，２００６，２９（２）：１１５－１
１６．
通过对被控对象的仿真，取ａ＝６时，系统性能较好，相应的Ｇｃ２的参数为Ｋｃ２＝６／２７，Ｔｃ２＝６０。３仿真结果
仿真所用的信号为ｔ－－０时引入的，ｔ＝２００时引入了负单位阶跃扰动。当模型准确时，双控制器系统仿真结果见图２，图３为＇ｒ＝１７０时双控制器系统仿真结果图。
从图２、图３的对比中可以看出，当被控对象纯滞后时间下发生改变时，系统依然保持稳定，表现出较强的鲁棒性，对模型不敏感。
【３】陈艾华，尹利霞，胡耀斌，等．模糊ＰＩＤ控制在啤酒发酵过程中
的应用【Ｊ】．机电工程，２００７，２４（１）：５６－５７．
【４】田玉楚．大时滞工业过程的双控制器结构【Ｊ】．自动化学报，
１９９９，２５（６）：８２５－８２７．
・－１－＂－＋－＇－－４－－－－４－－－１－－－－１－．－－１－．．－ｔ－－－／－－－—卜，—卜－＇－４－－－－４－－－＂４＇－－＋－＋－－ｔ＂－－＋－＋—＋－＋・＋——●—＋・－．——＋－＋・—卜・＋－—卜——＋—斗・＋呻・－卜＿—卜—＋－＋－＋呻——卜—＋－—卜－・．．一－＋・・＋．・—卜哺—卜・■－・
（上接第５３页）
Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅ
ＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅｔｙｏｆＢｒｅｗｉｎｇＣｈｅｍｉｓｔｓ，１９９９，ａｕｔｏｓａｍｐｌｃｒ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＣｈｅｍｉｓｔｓ，１９９５，５３（１）：２９－３２．
ＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅｔｙｏｆＢｒｅｗｉｎｇ
５７（１）：３４—３７．
・【３】ＡｎｄｅｒｓｅｎＭＬ’Ｈｅｎｒｉｋ
Ｏ，ＳｋｉｂｓｔｅｄＬＨ．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆｔｈｅｌｅ—
【５】管敦仪．啤酒工业手册（修订版）【Ｍ】．北京：中国轻工业出版社，
２００７．
ｖｅｌｓｏｆｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓｉｎｗｏｒｔａｎｄｂｅｅｒｂｙａｄｄｉｔｉｏｎｏｆｈｅｘａｍｅｔｈｙ
ｌｅｎｅｔｒａｍｉｎｅ
ａｎｄＦｏｏｄ
ｏｒ
ｓｕｌｆｉｔｅｄｕｒｉｎｇｍａｓｈｉｎｇ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
【６】ＷａｉｔｅｒｓＭＴ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏ重【＋）－ｃａｔｅ圮ｈｉｎ
ｔｕｒａｌ
ａｎｄｆｃｒｕｌｉｃａｃｉｄ勰Ｂａ・
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００ｌ，４９：５２３２—５２３７．
Ｃ，ＫｏｗａｋａＭ．Ａｕｔｏｍａｔｅｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅ・
ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａａｎｄｔｈｅｉｒｉｍｐａｃｔ
０１１
ｂｅｅｒｆｌａｖｏｒｓｔａｂｉｌｉｔｙ．Ｐａｒｔ
【４】ＳａｋｕｍａＳ，Ｋｉｋｕｃｈｉ
１：Ｆｏｒｃｅｄ－ａｇｉｎｇ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅ
Ｃｈｅｍｉｓｔｓ，ｌ９９７，５５（２）：８３－９８．
ＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅｔｙｏｆＢｒｅｗｉｎｇ
ｔｏｔａｌｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓｃｏｎｔｅｎｔｏｆｂｅｅｒ
ａｎｄｗｏｒｔ
ｕｓｉｎｇａｎｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ
酿酒科技２００９年第ｌＯ期（总第１８４期）・ＬＩＱＵＯＲ—ＭＡＫＩＮＧ
ＳＣＩＥＮＣＥ＆ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ２００９
Ｎｏ．１０口０１．１８４）
多酚物质对啤酒风味稳定性的影响
马超，薛栋升，吴訾叶红，杨周辉
（台州学院生命科学学院，浙江台州３１７０００）
摘要：研究多酚物质对啤酒风味稳定性的影响。结果表明，啤酒的风味稳定性与啤酒的抗氧化性显著相关，啤酒
的抗氧化性与多酚含量显著相关：不同的单酚抗氧化能力差异较大；抗氧化性随单酚含量的增加而增加；酒体中的单酚抗氧化性随酒体保存的时间延长而减小；不同来源的多酚抗氧化性不同；不同辅料生产的啤酒抗氧化能力不同。多酚含量和组成影响啤酒的风味稳定性，多酚适量存在可提高啤酒风味稳定性。关键词：啤酒；
多酚；风味稳定性：抗氧化性
文献标识码：Ａ
文章编号：１００１—９２８６（２００９）ｌＯ一００５ｌ－０３
中图分类号：ＴＳ２６２．５；ＴＳ２６１．４
ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＰｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ
ｏｎ
ＢｅｅｒＦｌａｖｏｒＳｔａｂｉｌｉｔｙ
ＭＡＣａｏ，ＸＵＥＤｏｎｇ・ｓｈｅｎｇ，ＷＵＺＩＹｅ—ｈｏｎｇａｎｄＹＡＮＧＺｈｏｕ－ｈｕｉ（Ｌｉｆｅ
ＳｃｉｅｎｃｅＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴａｉｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ｔａｉｚｈｏｕ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ，３１７０００
ｏｎ
Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ
ｔｏ
ｂｅｅｒｆｌａｖｏｒ
ｓｔａｂｉｌｉｔｙｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｂｅｅｒｆｌａｖｏｒｓｔａｂｉｌｉｔｙｗａｇｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｌｅｖａｎｔ
ｔｏ
ｂｅｅｒａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎａｎｄｂｅｅｒ
ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ
ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｌｅｖａｎｔｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓｃｏｎｔｅｎｔ，ｔｈｅｒｅＷａＳｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ
ｉｎａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎｆｏｒ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｏｎｏｐｈｅｎｏｌ，ｔｈｅａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｍｏｎｏｐｈｅｎｏｉｐｒｏｍｏｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｍｏｎｏｐｈｅｎｏｌｃｏｎｔｅｎｔ，ａｎｄｍｏｎｏｐｈｅｎｏｌａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎｉｎｂｅｅｒ
ｂｏａｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｅｘｔｅｎｓｉｏｎｏｆｂｅｅｒｓｔｏｒａｇｅｔｉｍｅ，ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｃｏｎｔｅｎｔ
ｓｏｕｒｃｅ
ｈａｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ，ａｎｄｂｅｅｒｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｄｉｆ－
ｆｅｒｅｎｔａｕｘｉｌｌｉａｒｙｍａｔｅｒｉａｌｓｈａｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｏｘｉｄａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｑｕａｔｅｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ
ｃｏｎｔｅｎｔ
ａｎｄｔｈｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓｏｆｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓｗｏｕｌｄｉｎｆｌｕｅｎｃｅｂｅｅｒｆｌａｖｏｒ
ｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄａｄｅ－
ｃｏｕｌｄｉｍｐｒｏｖｅｂｅｅｒｆｌａｖｏｒｓｔａｂｉｌｉｔｙ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｂｅｅｒ；ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ；ｆｌａｖｏｒｓｔａｂｉｌｉｔｙ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ
随着人们生活水平的不断提高，消费者对食品的质量要求也不只是停留在安全层面上，已经提升到了一个更高的层次，对啤酒的质量要求也提升到口感和风味上来。要求啤酒不仅口感要好，更要有良好的风味，并且要求风味稳定性较好。瓶装啤酒进入市场后，在贮存过程中会形成一些会影响其原有的新鲜风味的产物，啤酒灌装后，在保存过程中，风味是不断变化的。开始时出现黑栗子味，随即消失，而后出现甜味、面包味、焦糖味、奶酪味，严重时则出现纸板味和金属腥味等【Ｉｌ。
近年来，多酚物质对啤酒风味稳定性的贡献逐渐受到重视ｆ２＿３】。研究认为，啤酒多酚物质能吸附６５％的瓶颈中的氧气（４】，在麦汁煮沸时多酚物质能改善还原活性及啤酒羰基化合物的浓度【８】。本文研究多酚物质与啤酒抗氧化性的关系，为提高啤酒的风味稳定性提供一定借鉴。ｌ材料与方法１．１材料
麦芽：进口澳麦芽；单酚：购买于Ｓｉｇｍａ；
收稿日期：２００９－０６—３０
绿色柠檬酸铁铵（含Ｆｅ１６％）：进口Ｆｌｕｋｕ分装；硫代巴比妥酸：上海生化试剂公司。１．２仪器
１００
；
Ｌ啤酒生产设备：上海保兴生物仪器设备有限
公司。
１．３
方法
１．３．１麦汁液体培养基
麦芽粉碎，在５２℃、６２℃、６８℃和７２℃分别保温，纱布过滤。
１．３．２麦汁固体培养基
麦汁液体培养基中加入２％琼脂。１．３．３啤酒酵母活化
菌种接种于麦汁固体，于２８℃培养２４１．３．４啤酒酵母液体菌种制备
接种于液体试管，２８℃培养４８ｈ，以１０％接种量接种于三角瓶，２０℃培养３ｄ，降温到１５℃，培养４ｄ，继续降温到１０℃，培养５ｄ。１．３．５设备清洗
ｈ。
酿酒科技２００９年第１０期（总第１８４期）・ＬＩＱＵＯＲ－ＭＡＫＩＮＧ
ＳＣＩＥＮＣＥ缈ＣＨＮＯＬ（）ＧＹ
２００９
Ｎｏ．ＩＯ（Ｔ０１．１８４）
设备用２％的碱液于８０℃清洗２０ｍｉｎ，用９０℃热水清洗后再用醋酸溶液清洗，最后用９０℃热水清洗。１．３．６麦汁生产
麦芽粉碎，以麦皮破裂为１／３大小的碎片为粉碎度，大米粉碎度为３０目，大米的比例为３８％，经过糊化、糖化、过滤，煮沸添加酒花，然后沉淀冷却。１．３．７有机溶剂法提取酚类物质
用７０％丙酮溶液２００ｍＬ浸泡２１
ｈ，３０００
后经过品酒师品定酒的风味。风味值最大的计为１０分．该风味值能最大限度地保存原酒风味。风味值越小，说明该酒的风味变化大，因此稳定性就越差。抗氧化性与啤酒风味稳定性的相关性见图ｌ。
８
１
ｒ／ｍｉｎ离
６
４
９８７
焱盎碴
口
２ｌ
６５４３２
心１０ｍｉｎ，取上清液，４０℃旋转蒸发，去除有机溶剂，加蒸馏水补足蒸发量，测定。１．３．８啤酒总多酚检测
总多酚的检测采用文献【２】的方法。１．３．９啤酒ＴＢＡ值检测［２１
０．８Ｏ．８
原酒充Ｃ０２原酒
１００ｍＬ５０ｍＬ
酒样处理方式
图ｌ抗氧化性与啤酒风味稳定性的关系
①取１０ｍＬ啤酒于１００００ｒ／ｒａｉｎ高速下离心。②取上清液５ｍＬ与２ｍＬ含０．３３％ＴＢＡ的５０％
乙酸溶液混合均匀，在６０℃水浴中精确加热６０ｍｉｎ，然后迅速冷却，于５３０ｎｎｌ处比色。
从图ｌ中可以看出，啤酒的风味稳定性随啤酒的抗氧化性增强而增强，随啤酒的抗氧化性下降而下降。影响啤酒风味稳定性的因素为影响啤酒抗氧化性。２．２多酚物质含量与啤酒抗氧化性的关系
对多酚物质含量与啤酒的抗氧化性进行测定，结果见图２。
ｏ
０．７２
③取５ｍＬ啤酒加２ｍＬ蒸馏水，以上面同样的方式
处理后作为比色的空白。
④检验啤酒是否离心到澄清效果的方法：取离心后
的啤酒在４３０ａｍ与７００ｎｍ波长下，以蒸馏水为空白，测定其吸光度，分别以ＯＤ４３０与ＯＤ彻表示。当ＯＤ４３０ｘ０．０３９＞ＯＤ瑚，则表示样品是透明的，否则需再次离心重新测定。
１．３．１０
要０．７
首０．６８
高０．６６茬０．６４
盏０．６２
。０．６
Ｏ．５８Ｏ．５６０．５４
Ｔ凡心值测定
步骤：将含有７５
ｉｔｍｏ儿ＡＴＢＳ即２，２一连氮（３一苯乙
基噻唑啉一６一磺酸盐）和２ｍｍｏｌ／ＬＡＡＰＨ即２，２一偶氮（２一脒基丙烷）二氢化物的５０ｍｍｏｌ／Ｌ醋酸盐缓冲液（ｐＨ４．３）反应混合液，在４５℃水浴反应６０ｒａｉｎ，然后冷却至室温备用。取４０斗Ｌ样品加入到５ｍＬ上述反应混合液中，在２５℃水浴保温１５ｍｉｎ，比色；另取４０斗Ｌ的５０ｍｍｏｌ／Ｌ醋酸缓冲液（ｐＨ４．３）代替样品作空白，其他操作条件相同；然后取４０肛Ｌ的ｌｎａｎｏｌ／Ｌ抗坏血酸盐溶液作标准参照，实验操作条件相同。
图２多酚类物质与抗氧化性的关系
从图２可以看出，多酚物质的含量越多，啤酒的抗氧化性越强，在６５＂－＇７５ｍｇ／Ｌ之间时，啤酒的抗氧化性几乎和多酚含量成线性关系；在７５－－－８０ｍｇ／Ｌ之间，随多酚含量的增加，啤酒的抗氧化性增加的速度变慢。结合图１的结果，可以得出啤酒的风味稳定性与啤酒多酚的含量成正相关。
２．３单酚对啤酒抗氧化性的影响
对单酚影响啤酒抗氧化性的结果进行测定，结果见图３。
从图３可以看出，不同的单酚类物质，抗氧化的能力是不同的。槲皮素抗氧化性的能力最好，其余依次为儿茶素、阿魏酸、表儿茶素、香草酸。２．４单酚含量对啤酒抗氧化性的影响
对单酚含量对啤酒抗氧化性的影响进行实验，结果见图４。
从图４可以看出，随单酚含量的增减，ＴＢＡ值下降，
计算：ＴＲＡＰ／ｉ直（ｒｅｔｏｏｌ／Ｌ）。铡舭Ｃ
口感评分
式中：Ｃ为抗坏血酸盐浓度；Ａ为吸光值；ＴＲＡＰ表示相当于抗坏血酸盐的ｍｍｏｌ／Ｌ。
１．３．１ｌ
由２０人品尝，给予打分，满分１０分，去掉４个最高分和４个最低分，平均值即为口感得分。２结果与分析
２．１抗氧化性与啤酒风味稳定性的相关性
将不同处理方式处理的酒样，在３０℃放置１５ｄ，然
马超，薛栋升，昊訾叶红，杨周辉・多酚物质对啤酒风味稳定性的影响
拿２
石
Ｏ４
量１．５
ｊ型
靼矗卜
０．３５．Ｏ３Ｏ．２５．Ｏ２
量＿
ｌ
０・５
Ｏ．１５
Ｏ
．Ｏ
１
表儿茶素阿魏酸香草酸儿茶素
单酚物质种类
Ｏ．Ｏ５
．
Ｏ
全麦
图３单酚对啤酒抗氧化性的影响
０．４５０．４０．３５０．３０．２５０．２Ｏ．１５Ｏ．１０．０５
Ｏ
董０．６
一
ｌ
２
３
全麦＋酒花３０％辅料３０９６辅料＋酒花
多酚来源
—
４
１
ｉ厅
一
４
—一
ｌ
２
３
—
４
——
—
４
图６不同来源多酚对抗氧化性的影响
一
ｌ
可３４
ｌ
３２
ｏ０．８
趔
墨０．４
儿茶素
香草酸表儿条素
阿魏酸
槲皮素
单酚物质种类
Ｏ．２
图４单酚含量对抗氧化性的影响
Ｏ
全麦
４０９６大米４０％：Ｋ米４０％ｄ，麦
不同辅料
说明单酚含量越多，越有利于提高啤酒的抗氧化性。２．５添加酚类物质对啤酒抗氧化性的影响
对添加酚类物质后啤酒抗氧化性随时间的变化进行测定，结果见图５。
３结论
乏１－
名１．
图７不同多酚含量的麦汁对抗氧化性的影响
化性较好，风味稳定性也较好。
曼
趔
从抗氧化性方面研究啤酒的风味稳定性。啤酒的风味稳定主要取决于抗氧化能力，经过研究得出以下结论：
３．１
室０．
。０．
啤酒的风味稳定与啤酒的抗氧化能力密切相关，抗
０．
氧化能力越强，风味越稳定。啤酒的抗氧化能力与啤酒中
单酚物质种类
多酚的含量密切相关，多酚含量越高，抗氧化性越强，啤酒风味稳定性越好。
３．２不同的单酚抗氧化能力不同，不同来源的多酚，抗氧化能力也有差异。随保存时间的延长，啤酒中单酚的抗氧化能力下降。不同辅料会影响啤酒的抗氧化性，进而影响啤酒的风味稳定性。啤酒的风味稳定性与啤酒中的多酚含量和多酚组成密切相关。凡是能影响到酒体中多酚含量和组成的因素都会对啤酒的风味稳定性产生影响。适量的多酚存在于酒体中，能提高酒体的风味稳定性。
３．３
图５单酚对啤酒抗氧化性的影响随时间变化
从图５可以看出，啤酒的抗氧化性随保存时间的增加而下降。各种单酚对啤酒抗氧化性影响规律随时间的增加依然保持不变。
２．６不同多酚对啤酒抗氧化性的影响
对不同来源的多酚对啤酒的抗氧化性影响结果进行测定，结果见图６。
从图６可以看出，不同的多酚对啤酒抗氧化性的影响是不一样的。全麦加酒花的抗氧化性最强，用全麦酿造的啤酒其风味稳定性较添加辅料的啤酒风味稳定性好。２．７不同多酚含量对啤酒抗氧化性的影响
用不同的原料和不同的原料配比，所生产的麦汁含有的多酚含量是不一样的，对含不同多酚含量的麦汁发酵生产的啤酒的抗氧化性进行实验，结果见图７。
从图７可发现，用玉米做辅料酿造的啤酒抗氧化性差，风味稳定性差。用大米和小麦做辅料酿造的啤酒抗氧
由于多酚物质的组成和含量在生产的每一步骤都
受影响，因此提高啤酒的风味稳定性从原料的生产一直到啤酒的灌装都应该严格控制，同时啤酒的风味稳定性还与其他物质紧密相关，应予以重视１６１。参考文献：
【１】王亚楠，肖冬光．提高啤酒风味稳定性的方法【Ｊ】．酿酒科技，
２００２，１２（４）：６０－６２．
【２】Ｓｈｉｇｅｋｉ气ＴａｒｓｉＫＣｈｉｋａｋｏＳ，ｅｔａ１．Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａ－
ｆｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ
ｔｏ
ｂｅｅｒｆｌａｖｏｒ
ｓｔａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．（下转第５６页）
苎良夔科技２００９年第１０期（肇翟！单塑！：Ｌｌ坠！坠坐型鱼堕型堡苎里型坠壁坚！翌翌！：！蜓０１．１８４）
控对象不含纯滞后的部分ｑ（ｓ）组成，则：
ｐ
、＿，
ｎｒ（沪甜２丧黯特ｅ１
其中，Ｈ，（ｓ）为设定值响应传递函数。
㈣｛醚赠
应用直接综合法，对于一阶加纯滞后过程模型，设
／＇Ｌ（ｓ）的期望值矾０）为一阶加纯滞后，即：
巩㈤２南
出ＰＩ跟踪控制器Ｇｃ。（ｓ）的参数为：
（６）
时间（ｓ）
其中，Ｚ为期望时间常数，令珥（ｓ）＝巩（ｓ），可以导
图２
，、
当模型准确时双控制器系统仿真结果图
ｇｃｌ＝斋禹矶
Ｌ不宜太小嘲。
控制参数为疋。＝ｌ，￡，＝１０。２．３．２扰动控制器的设计
：‘
（７）
一世赠
ｐ
本设计中，被控对象模型参数∥＝ｌ，ｒ＝１０，，＝１８０
闭。在仿真中进行调试后，取疋＝１０，因而控制器Ｇ。ｔ（ｓ）各
当模型准确时，负载扰动控制回路由被控对象Ｇ。（ｓ）ｅ１和扰动控制器Ｇ０２（ｓ）组成。扰动控制器采用ＰＩ控制，利用修正Ｈａａｌｍａｎ整定方法来确定Ｇ。２的参数，对于在啤酒发酵过程中被控对象模型是一阶惯性环节加纯滞后环节近似描述过程，按下列公式整定ＰＩ扰动控制器Ｇｃ２的参数：
＾＿
时间（ｓ）
图３，ｒ＝１７０时双控制器系统仿真结果图
４结论
在系统硬件的控制方案中采用基于删处理器
如＝｛等下，Ｌ２＝口７－ｊＡ丁
其中，ｏ≥ｌ为公共修正系数【４１。
（８）
ＬＰＣ２２００的嵌入式系统是为了精简系统的外设结构，提高精度。双控制器方案使得跟踪控制器和扰动控制器独立设计，同时获得了良好的设定值、跟踪特性和扰动抑制能力，被控对象发生改变时，仍保持稳定，系统表现出良好的鲁棒性。参考文献：
【１】周立功．ＡＲＭ嵌入式系统基础教程【Ｍ】．北京：北京航空航天
大学出版社，２００５．
【２】林英芸。杨煜普．在ＷｉｎＣＣ中实现串行通信的两种方法叨．电
子测量技术，２００６，２９（２）：１１５－１
１６．
通过对被控对象的仿真，取ａ＝６时，系统性能较好，相应的Ｇｃ２的参数为Ｋｃ２＝６／２７，Ｔｃ２＝６０。３仿真结果
仿真所用的信号为ｔ－－０时引入的，ｔ＝２００时引入了负单位阶跃扰动。当模型准确时，双控制器系统仿真结果见图２，图３为＇ｒ＝１７０时双控制器系统仿真结果图。
从图２、图３的对比中可以看出，当被控对象纯滞后时间下发生改变时，系统依然保持稳定，表现出较强的鲁棒性，对模型不敏感。
【３】陈艾华，尹利霞，胡耀斌，等．模糊ＰＩＤ控制在啤酒发酵过程中
的应用【Ｊ】．机电工程，２００７，２４（１）：５６－５７．
【４】田玉楚．大时滞工业过程的双控制器结构【Ｊ】．自动化学报，
１９９９，２５（６）：８２５－８２７．
・－１－＂－＋－＇－－４－－－－４－－－１－－－－１－．－－１－．．－ｔ－－－／－－－—卜，—卜－＇－４－－－－４－－－＂４＇－－＋－＋－－ｔ＂－－＋－＋—＋－＋・＋——●—＋・－．——＋－＋・—卜・＋－—卜——＋—斗・＋呻・－卜＿—卜—＋－＋－＋呻——卜—＋－—卜－・．．一－＋・・＋．・—卜哺—卜・■－・
（上接第５３页）
Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅ
ＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅｔｙｏｆＢｒｅｗｉｎｇＣｈｅｍｉｓｔｓ，１９９９，ａｕｔｏｓａｍｐｌｃｒ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＣｈｅｍｉｓｔｓ，１９９５，５３（１）：２９－３２．
ＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅｔｙｏｆＢｒｅｗｉｎｇ
５７（１）：３４—３７．
・【３】ＡｎｄｅｒｓｅｎＭＬ’Ｈｅｎｒｉｋ
Ｏ，ＳｋｉｂｓｔｅｄＬＨ．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆｔｈｅｌｅ—
【５】管敦仪．啤酒工业手册（修订版）【Ｍ】．北京：中国轻工业出版社，
２００７．
ｖｅｌｓｏｆｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓｉｎｗｏｒｔａｎｄｂｅｅｒｂｙａｄｄｉｔｉｏｎｏｆｈｅｘａｍｅｔｈｙ
ｌｅｎｅｔｒａｍｉｎｅ
ａｎｄＦｏｏｄ
ｏｒ
ｓｕｌｆｉｔｅｄｕｒｉｎｇｍａｓｈｉｎｇ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
【６】ＷａｉｔｅｒｓＭＴ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏ重【＋）－ｃａｔｅ圮ｈｉｎ
ｔｕｒａｌ
ａｎｄｆｃｒｕｌｉｃａｃｉｄ勰Ｂａ・
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００ｌ，４９：５２３２—５２３７．
Ｃ，ＫｏｗａｋａＭ．Ａｕｔｏｍａｔｅｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅ・
ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａａｎｄｔｈｅｉｒｉｍｐａｃｔ
０１１
ｂｅｅｒｆｌａｖｏｒｓｔａｂｉｌｉｔｙ．Ｐａｒｔ
【４】ＳａｋｕｍａＳ，Ｋｉｋｕｃｈｉ
１：Ｆｏｒｃｅｄ－ａｇｉｎｇ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅ
Ｃｈｅｍｉｓｔｓ，ｌ９９７，５５（２）：８３－９８．
ＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅｔｙｏｆＢｒｅｗｉｎｇ
ｔｏｔａｌｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓｃｏｎｔｅｎｔｏｆｂｅｅｒ
ａｎｄｗｏｒｔ
ｕｓｉｎｇａｎｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ