各种无机培养基配方

1、毕赤酵母表达硒代重组人血清白蛋白：

基础盐培养基BSM :硫酸钙0. 93 g/ L ,硫酸钾18.2 g/ L ,七水硫酸镁14.9 g/ L ,柠檬酸三钠1.47 g/ L ,微量元素2mL/ L ,甘油40 g/ L ,硫酸铵10 g/ L ,磷酸钾缓冲液(pH 6.0) 0.1 mol/ L 。

微量元素主要成分: 五水硫酸铜6.0 g/ L ,碘化钾0.08 g/ L ,一水硫酸锰3.0 g/ L ,二水钼酸钠0.2 g/ L ,硼酸0.02 g/ L ,硫酸钙0.5 g/ L ,氯化钴0.5 g/ L ,氯化锌20.0 g/ L , 七水硫酸亚铁65.0 g/ L , 硫酸5.0 mL/ L ,生物素0.2 g/ L 。试剂均为国产生化试剂纯或分析纯。

发酵将50μL 种子液接种于5 mL 的YPG 培养基中,30 ℃振荡培养18222 h ,转接到装有100mL 基础盐培养基的500 mL 带挡板的摇瓶中。转速180 r/ min ,温度30 ℃培养, 每8 小时用浓氨水调节发酵液pH 值至610 。约48 h 时, 取样检测甘油浓度, 待甘油耗尽后加入甲醇开始诱导。诱导期培养温度为28 ℃,pH 值调节至710[526 ] ,每12 h 补加体积分数015 %的纯甲醇和10 mg/ L 的亚硒酸钠, 对照发酵液不添加亚硒酸钠。诱导96 h 后停止发酵。

2、重组人血清白蛋白在毕赤酵母表达中的降解控制

PBM ：甘油40g/L，磷酸（85%）26.7 g/L，二水硫酸钙0.6 g/L，硫酸钾9.5 g/L，七水硫酸镁7.8 g/L，氢氧化钾2.6 g/L，PTM 1 2ml/L，生物素0.00004 g/L，硫胺0.00019 g/L，浓氨水调节为所需pH ，试剂均为国产生化试剂纯或分析纯。 PTM1：Invitrogen 公司提供的标准配方。

发酵：生长期温度为30℃，pH 用浓氨水调节，培养期间每4h 调节一次维持原pH 值，甘油耗尽后甲醇诱导，诱导过程中每12h 补加体积分数0.5的纯甲醇，摇床转速180r/min，摇瓶为500ml 的底部有挡板的三角瓶，装液量50mml 。

3、High-Level Expression of Recombinant Human Serum Albumin from the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris with Minimal Protease Production and Activation

Basal Batch Medium

PBM medium

发酵：3L 发酵罐装1L Basal Batch Medium或 PBM medium，30℃，调节转速保持溶氧大于10%，甘油耗尽后流加PFM （每升含有2ml PTM1-不含生物素的甲醇），手动控制甲醇浓度低于1%（w/w），28%的氨水调节pH 为5.85。

4、提高重组毕赤酵母表达hIFN β-HSA 的碳源控制策略

发酵培养基(BSM, g/L)：Glycerol 20.0， (NH4) 2SO 4 5.0，KH 2PO 4 42.9，CaSO 4

⋅2H 2O 1.0，K 2SO 4 14.3, MgSO4⋅7H 2O 11.7及1mL/L PTM4 微量元素溶液.

PTM4 微量元素溶液(g/L): CuSO4⋅5H 2O 2.0， NaI 0.08， MnSO 4⋅H 2O 3.0，

Na 2MoO 4⋅2H 2O 0.2， H 3BO 3 0.02， CaSO 4⋅2H 2O 0.5， CoCl 2 0.5，ZnCl 2 7.0， FeSO 4⋅7H 2O 22.0，生物素0.2，H 2SO 4 1.0 mL/L.

诱导培养基(g/L)：(NH4) 2SO 4 5.0， KH 2PO 4 42.9，CaSO 4⋅2H 2O 1.0，K 2SO 4 14.3，

MgSO 4⋅7H 2O 11.7 及甲醇20 mL/L， PTM4 微量元素溶液1 mL/L.

甘油补料培养基：甘油500 g/L，4 mL/L PTM4 微量元素溶液. 甲醇补料培养基：甲醇100%， 4 mL/L PTM4 微量元素溶液.