蚓激酶注射剂的工艺中效价考察
郭燕青、贾飞飞
（北京百奥药业有限责任公司， 北京102200）
关键词 蚓激酶 注射剂 效价
蚓激酶是从新鲜赤子爱胜蚓中提取、纯化的蚯蚓纤溶酶，具有预防、治疗血栓病的功效。蚓激酶溶栓组分为多种水溶性酸性蛋白质，分子量约为20. ～40. KD 左右。为了满足临床需要, 我们对蚓激酶注射剂进行立项研究。本文介绍了蚓激酶组分筛选工作中的效价测定。 1 材料
蚓激酶注射剂样品(分子量为30KD) ，北京百奥药业有限责任公司提供；蚓激酶标准品、牛血纤维蛋白原、牛血凝血酶均系中国药品生物制品检定所产品；琼脂糖SIGMA 公司产品；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠为分析纯；游标卡尺。 2 方法和结果
2.1 琼脂糖纤维蛋白平板法测定效价
具体测定方法参照国家药品监督管理局的国家药品标准【WS 1-（X-052）-2001Z 】。 2.1.1琼脂糖平盘的配制
1支牛血纤维蛋白原，77mg/支、批号为607-200131； 1支凝血酶，200BP/支、批号为：605-0123；称取琼脂糖1.5g ；0.9%生理盐水204ml ；缓冲液12 ml；配制3小盘。 2.1.2对照品溶液的配制
蚓激酶标准品, 批号为650-200001、3万单位，加1ml 生理盐水溶解，作为标准品溶液。 2.1.3供试液的配制
称取适量的蚓激酶注射剂相关组分2.5mg, 溶解在处方溶剂中, 使蛋白含量为0.05mg/ml，冻干后作为供试品，溶解在2ml 生理盐水中作为供试液。 2.2 测定
分别精确量取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ul 的对照液各10ul 滴盘做标准曲线，在同一个盘上平行滴10ul 供试品溶液，37℃恒温箱中反应18个小时后取出, 用游标卡尺量每个溶圈的直径，计算效价。 2.3回收率的测定
用加样回收法。精密量取1ml 供试品溶液作为回收试验空白溶液(浓度为1万蚓激酶单位/ml),分别精密量取蚓激酶标准品溶液((浓度为1万蚓激酶单位/ml))1.0、1.0、2.0、2.0、3.0 ml至10ml 容量瓶中, 用供试品溶液稀释, 摇匀。按2.2方法测定，计算效价回收率，结果见表1。
表1 回收率试验测定结果
加入量
供试品含量 测得量
蚓激酶单位 1.15万 1.11万 1.21万 1.20万 1.35万 1.31万
回收率 /% 104.5 100.9 100.8 100.0 103.8 100.8
101.8
1.83
平均回收率 /%
RSD %
蚓激酶单位 蚓激酶单位 0.1万 0.1万 0.2万 0.2万 0.3万 0.3万 2.4线性范围
1万 1万 1万 1万 1万 1万
取蚓激酶标准品适量, 加生理盐水配成10000、8000、6000、4000、2000蚓激酶单位/ml的溶液，按2.2方法测定，以浓度（X ）为纵坐标，以直径对数（Y ）为横坐标，进行线性回归，回归方程为Y=0.4135X+(-)1.3339,线性范围为10mg/ml～30 mg/ml,r=0.9991。 2.5重现性
取蚓激酶标准品适量, 加0.9%生理盐水配制成为1万蚓激酶单位/ml的溶液, 共配制6份, 按2.2方法测定,RSD 值为1.92%。 2.6 检测限
取蚓激酶对照品适量, 加生理盐水制成1000蚓激酶单位/ml的溶液, 按2.2方法测定, 蚓激酶效价的最低检测限浓度为1000蚓激酶单位。 2.7 供试品中蚓激酶效价的测定
3
讨论
由于蚓激酶的不同组分分子量的不同，其效价体现有差异。但琼脂糖凝胶法具有很好的灵敏性，重现性，目前仍是检测蚓激酶效价的主要方法，所以研究蚓激酶注射剂的工艺中仍然采用此法做中间产品、终产物的效价监测是非常合理的。
参考文献：
1 新药转正标准第二十七册 标准文号：【WS 1-（X-052）-2001Z 】 国家食品药品监督管理局
2 李建武等合编 生物化学实验原理和方法 北京大学出版社 P361
蚓激酶注射剂的工艺中效价考察
郭燕青、贾飞飞
（北京百奥药业有限责任公司， 北京102200）
关键词 蚓激酶 注射剂 效价
蚓激酶是从新鲜赤子爱胜蚓中提取、纯化的蚯蚓纤溶酶，具有预防、治疗血栓病的功效。蚓激酶溶栓组分为多种水溶性酸性蛋白质，分子量约为20. ～40. KD 左右。为了满足临床需要, 我们对蚓激酶注射剂进行立项研究。本文介绍了蚓激酶组分筛选工作中的效价测定。 1 材料
蚓激酶注射剂样品(分子量为30KD) ，北京百奥药业有限责任公司提供；蚓激酶标准品、牛血纤维蛋白原、牛血凝血酶均系中国药品生物制品检定所产品；琼脂糖SIGMA 公司产品；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠为分析纯；游标卡尺。 2 方法和结果
2.1 琼脂糖纤维蛋白平板法测定效价
具体测定方法参照国家药品监督管理局的国家药品标准【WS 1-（X-052）-2001Z 】。 2.1.1琼脂糖平盘的配制
1支牛血纤维蛋白原，77mg/支、批号为607-200131； 1支凝血酶，200BP/支、批号为：605-0123；称取琼脂糖1.5g ；0.9%生理盐水204ml ；缓冲液12 ml；配制3小盘。 2.1.2对照品溶液的配制
蚓激酶标准品, 批号为650-200001、3万单位，加1ml 生理盐水溶解，作为标准品溶液。 2.1.3供试液的配制
称取适量的蚓激酶注射剂相关组分2.5mg, 溶解在处方溶剂中, 使蛋白含量为0.05mg/ml，冻干后作为供试品，溶解在2ml 生理盐水中作为供试液。 2.2 测定
分别精确量取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ul 的对照液各10ul 滴盘做标准曲线，在同一个盘上平行滴10ul 供试品溶液，37℃恒温箱中反应18个小时后取出, 用游标卡尺量每个溶圈的直径，计算效价。 2.3回收率的测定
用加样回收法。精密量取1ml 供试品溶液作为回收试验空白溶液(浓度为1万蚓激酶单位/ml),分别精密量取蚓激酶标准品溶液((浓度为1万蚓激酶单位/ml))1.0、1.0、2.0、2.0、3.0 ml至10ml 容量瓶中, 用供试品溶液稀释, 摇匀。按2.2方法测定，计算效价回收率，结果见表1。
表1 回收率试验测定结果
加入量
供试品含量 测得量
蚓激酶单位 1.15万 1.11万 1.21万 1.20万 1.35万 1.31万
回收率 /% 104.5 100.9 100.8 100.0 103.8 100.8
101.8
1.83
平均回收率 /%
RSD %
蚓激酶单位 蚓激酶单位 0.1万 0.1万 0.2万 0.2万 0.3万 0.3万 2.4线性范围
1万 1万 1万 1万 1万 1万
取蚓激酶标准品适量, 加生理盐水配成10000、8000、6000、4000、2000蚓激酶单位/ml的溶液，按2.2方法测定，以浓度（X ）为纵坐标，以直径对数（Y ）为横坐标，进行线性回归，回归方程为Y=0.4135X+(-)1.3339,线性范围为10mg/ml～30 mg/ml,r=0.9991。 2.5重现性
取蚓激酶标准品适量, 加0.9%生理盐水配制成为1万蚓激酶单位/ml的溶液, 共配制6份, 按2.2方法测定,RSD 值为1.92%。 2.6 检测限
取蚓激酶对照品适量, 加生理盐水制成1000蚓激酶单位/ml的溶液, 按2.2方法测定, 蚓激酶效价的最低检测限浓度为1000蚓激酶单位。 2.7 供试品中蚓激酶效价的测定
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讨论
由于蚓激酶的不同组分分子量的不同，其效价体现有差异。但琼脂糖凝胶法具有很好的灵敏性，重现性，目前仍是检测蚓激酶效价的主要方法，所以研究蚓激酶注射剂的工艺中仍然采用此法做中间产品、终产物的效价监测是非常合理的。
参考文献：
1 新药转正标准第二十七册 标准文号：【WS 1-（X-052）-2001Z 】 国家食品药品监督管理局
2 李建武等合编 生物化学实验原理和方法 北京大学出版社 P361