安徽农业科学, Journal of Anhu i Agri . Sci. 2008, 36(24):10297, 10300 责任编辑 王淼 责任校对 卢瑶
HPLC 测定甘草提取物中甘草酸的含量
徐树芸, 王海宁
(贵州省药品检验所, 贵州贵阳550004)
摘要 [目的]建立甘草提取物中甘草酸的含量测定方法。[方法]采用高效液相色谱法测定甘草提取物中甘草酸的含量。使用C 18柱, 以甲醇-0.2m ol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61B 39B 1) 为流动相, 检测波长为250nm 。[结果]线性关系良好, 平均回收率为99. 52%,R SD 为2.4%。[结论]该方法精密度高, 分离度良好, 可用甘草提取物的质量控制。关键词 甘草提取物; 甘草酸; 高效液相色谱法
中图分类号 O657. 7+2 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2008) 24-10297-01
甘草提取物为健阳胶囊处方组成之一, 制法为取甘草粉碎成粗粉, 按照流浸膏与浸膏剂项下的渗漉法, 先用水将药材均匀湿润后, 再用5%氨水浸渍24h, 用水作溶剂, 缓缓渗漉, 收集渗漉液, 渗漉液赶氨后浓缩至相对密度为1. 09~1. 11的清膏。真空干燥, 粉碎成细粉, 备用。由于原标准中仅有制法而并无甘草提取物质量控制方法, 在申报品种保护时, 国家药监局保护办提出建立甘草提取物的含量测定要求。液相色谱法操作简便、精密度好、稳定、结果可靠。因此, 笔者采用高效液相色谱法测定甘草提取物中甘草酸的含量, 旨在为提高药品质量标准, 控制甘草提取物的质量提供依据。
1 材料与方法
1. 1 材料 仪器:LC -10A 型高效液相色谱仪(日本岛津公司) ; SP D -10A 检测器; 威马龙色谱工作站。试验药品:甘草提取物样品由健兴药业提供; 甘草酸对照品由中国药品生物制品鉴定所提供; 甲醇为色谱纯; 水为二次重蒸馏水; 醋酸铵溶液、冰醋酸为分析纯。1. 2 方法
1. 2. 1 色谱条件。色谱柱为Dia monsil(钻石) C 18(250mm @4. 6mm) , 粒度5L m, 流动相:甲醇-0. 2mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61B 39B 1) , 柱温:25e , 流速:1ml/min, 检测波长:250nm 。1. 2. 2 对照品溶液的制备。精密称取甘草酸单铵盐对照品适量, 加流动相制成每1ml 含0. 2mg 的溶液(折合甘草酸为0. 1959mg) , 即得。
1. 2. 3 供试品溶液的制备。取甘草提取物样品0. 1g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入流动相25ml, 称定重量, 超声处理20min, 取出, 放冷, 再称定重量, 用流动相补足减失重量, 摇匀, 滤过, 即得。
1. 2. 4 标准曲线的制备。精密吸取甘草酸单铵盐对照品液(0. 2172mg/ml) 2、6、10、14、18L l 分别注入液相色谱仪, 记录色谱, 以峰面积(A) 对质量数(C) 进行线性回归计算。1. 2. 5 精密度试验。分别精密吸取供试品溶液10L l, 重复进样5次, 按正文所述色谱条件测定, 记录色谱, 计算。1. 2. 6 重现性试验。取样品按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液, 分别精密吸取供试品溶液10L l 进样, 记录色谱, 计算。
1. 2. 7 加样回收率试验。准确称取已知含量的样品0. 05g
作者简介 徐树芸(1954-) , 女, 贵州贵阳人, 主管药师, 从事药品检
验监督工作。
收稿日期 2008-02-19
各5份, 精密加入甘草酸单铵盐适量(约相当于样品0. 025g 所含甘草酸单铵盐的量) , 按供试品溶液制备法制备, 分别进
样10L l, 计算回收率。
图1 对照品溶液HPLC 色谱图
图2 供试品溶液HPLC 色谱图
图3 阴性样品溶液H PLC 色谱图
1. 2. 8 空白试验。按处方比例及生产制备方法, 按供试品溶液制备项下制备阴性溶液, 进样10L l, 记录色谱图。
1. 2. 9 测定法。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10L l, 注入液相色谱仪, 测定, 即得。2 结果与分析
线性回归方程:A =152054. 9033C -12271. 45, r =0. 9999。结果表明, 甘草酸在0. 4344~3. 9096L g 范围内线性关系良好。精密度试验RSD 为1. 1%。重现性试验RSD 为2. 0%。加样回收率试验中5份样品平均回收率为)
10300 安徽农业科学 2008年
腺癌tsF T210细胞的细胞周期抑制在G2/M 期, 并诱发ts -F T210细胞发生凋亡[6]。
该植物各器官的挥发油主要成分中, (Z, Z ) -9, 12-十八碳二烯酸为茎、花、根、果仁和果皮所共有, 分别占挥发油总量的4. 90%、13. 82%、12. 81%、19. 26%和9. 85%。亚油酸的摄入, 可以促进大脑发育, 抑制血栓形成, 降低血脂和胆固醇, 增强免疫力, 抑制人体肝癌细胞的生长[7-8]。
邻羟基苯甲酸甲酯具有局部刺激作用, 可促进局部血液循环, 具有消肿、消炎、镇痛、止痒的作用, 临床上用于治疗扭伤、挫伤、腰痛、肌肉痛、神经痛、皮肤搔痒等症, 其在茎挥发油中占总含量的3. 33%。蝴蝶果茎、叶挥发油还含有叶绿醇, 它是合成维生素E 和维生素K 的原料, 在人体内易代谢, 且具有降低胆固醇的作用, 能够阻碍动物性胆固醇被人体吸收[9]。四氢异喹啉类化合物具有抗真菌活性, 其在叶挥发油中也少量存在。
蝴蝶果为油料植物, 其茎的挥发油中脂肪酸酯含量较高, 达44. 15%。蝴蝶果叶和根挥发油中还含有较多的工业原料, 如含有较多的增塑剂邻苯二甲酸酯类, 叶中含量达总油量的22. 21%,根中含量达总油量的7. 87%。叶挥发油还含有二丁基羟基甲苯(B HT) , 它是常用的食品抗氧化剂, 此外还含有防腐剂苯甲酸及其酯类。
(上接第10297页)
对照品溶液HPLC 色谱图见图1, 供试品溶液HP LC 色谱图见图2, 阴性样品溶液HP LC 色谱图见图3, 图3表明阴性样品溶液在甘草酸出峰处没有干扰峰。取样品按样品溶液制备操作, 分别吸取对照品溶液与样品溶液各10L l 进样, 按上述色谱条件测定, 记录色谱, 计算, 结果见表1。结果表明, 在此色谱条件下采用高效液相色谱法测定甘草酸含量, 方法简便, 快速, 重现性好。
表1 样品含量测定结果
T a ble 1 Detectio n result o f sam ple content
批次
Batch [***********][***********][***********][***********]20061001
含量M mg/g Conten t 15. 666. 766. 126. 325. 966. 015. 675. 876. 146. 32
25. 686. 756. 146. 335. 925. 985. 675. 896. 126. 42
平均含量mg/g Average 5. 676. 766. 136. 325. 946. 005. 675. 886. 136. 37
总平均含量M mg/g T otal ave rage 6. 087
3 结论与讨论
蝴蝶果各部位的挥发油含有丰富的工业原料和活性成分, 其虽为稀有植物, 物种资源量较少, 但具有生长快、产果量高、适应性广等特点[10], 具有应用开发的潜力, 应重视对该植物其他成分进行深入研究, 以发挥稀有植物对人类的贡献。参考文献
[1]傅立国, 陈潭青, 郎楷永, 等. 中国高等植物(第8册)[M].青岛:青岛出
版社, 2001:87-88.
[2]苏秀芳, 林强, 梁振益. 蝴蝶果茎挥发油化学成分的研究[J].广西植
物, 2007, 27(5):805-807.
[3]刘学民. 棕榈酸异丙酯的合成[J].香料香精化妆品, 2004(6):14-16. [4]殷树梅, 李再峰, 岳堡泰. 棕榈酸异辛酯的合成[J].化学世界, 2001, 42
(3) :146-147.
[5]R A HU MA N A A, G OP AL AK RIS HNA N G, G HO US E B S, e t al. Ef fec t of Fe ron ia
limon ia on mosq u ito larvae[J].Fi toterapia, 2000, 71:553-555.
[6]刘睿, 顾谦群, 崔承彬. 密脉鹅掌柴的化学成分及其抗肿瘤活性[J].中
草药, 2005, 36(3):328-332.
[7]张庭延, 高留英. 必需脂肪酸的生理病理意义[J].国外医学#生理#病
理科学与临床分册, 1998, 18(2) :148-151. [8]谢丽涛, 陈家. 必需脂肪酸对B EL -7402人肝癌细胞生长和甲酯蛋白
分泌抑制的研究[J].中国肿瘤生物治疗杂志, 1998, 5(4):274-27. [9]朱俊洁, 孟祥颖, 乌垠. 稠李果、茎、叶、皮及树干挥发油化学成分的分
析[J].分析化学研究简报, 2005, 33(11):1615-1618.
[10]刘敏学, 张海林, 张祥. 蝴蝶果栽培丰产技术[J].中国林副特产, 2006
(4) :70.
3 结论与讨论
在样品溶液的制备中, 曾采用甲醇[1-2]、乙醇、甲醇-0. 2mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61B 39B 1) 提取, 结果甲醇、甲醇-0. 2mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61B 39B 1) 作为提取溶剂时, 甘草酸单铵盐的含量基本一致, 为了方便提取, 故采用甲醇-0. 2mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61B 39B 1) 作为提取溶剂。流动相曾采用甲醇-水(35B 65) 、乙腈-水(44B 56) 、乙氰-四氢呋喃-0. 05mol/L 磷酸二氢钾(140B 40B 820) 、甲醇-0. 2mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61B 39B 1) , 在其他条件相同时, 采用甲醇-0. 2mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61B 39B 1) 为流动相, 分离效果较好。在此色谱条件下采用高效液相色谱法测定甘草提取物中甘草酸的含量, 方法简便、快速、重现性好。参考文献
[1]中华人民共和国国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部) [M].
北京:化学工业出版社, 2000.
[2]苗明三. 现代实用中药质量控制技术[M].北京:人民卫生出版社,
2000.
[3]新编中药志[M].北京:化学工业出版社, 2002:259.
[3]陈德昌. 中药化学对照品工作手册[M].北京:中国医药科技出版社,
2000:67.
[3-4]
安徽农业科学, Journal of Anhu i Agri . Sci. 2008, 36(24):10297, 10300 责任编辑 王淼 责任校对 卢瑶
HPLC 测定甘草提取物中甘草酸的含量
徐树芸, 王海宁
(贵州省药品检验所, 贵州贵阳550004)
摘要 [目的]建立甘草提取物中甘草酸的含量测定方法。[方法]采用高效液相色谱法测定甘草提取物中甘草酸的含量。使用C 18柱, 以甲醇-0.2m ol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61B 39B 1) 为流动相, 检测波长为250nm 。[结果]线性关系良好, 平均回收率为99. 52%,R SD 为2.4%。[结论]该方法精密度高, 分离度良好, 可用甘草提取物的质量控制。关键词 甘草提取物; 甘草酸; 高效液相色谱法
中图分类号 O657. 7+2 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2008) 24-10297-01
甘草提取物为健阳胶囊处方组成之一, 制法为取甘草粉碎成粗粉, 按照流浸膏与浸膏剂项下的渗漉法, 先用水将药材均匀湿润后, 再用5%氨水浸渍24h, 用水作溶剂, 缓缓渗漉, 收集渗漉液, 渗漉液赶氨后浓缩至相对密度为1. 09~1. 11的清膏。真空干燥, 粉碎成细粉, 备用。由于原标准中仅有制法而并无甘草提取物质量控制方法, 在申报品种保护时, 国家药监局保护办提出建立甘草提取物的含量测定要求。液相色谱法操作简便、精密度好、稳定、结果可靠。因此, 笔者采用高效液相色谱法测定甘草提取物中甘草酸的含量, 旨在为提高药品质量标准, 控制甘草提取物的质量提供依据。
1 材料与方法
1. 1 材料 仪器:LC -10A 型高效液相色谱仪(日本岛津公司) ; SP D -10A 检测器; 威马龙色谱工作站。试验药品:甘草提取物样品由健兴药业提供; 甘草酸对照品由中国药品生物制品鉴定所提供; 甲醇为色谱纯; 水为二次重蒸馏水; 醋酸铵溶液、冰醋酸为分析纯。1. 2 方法
1. 2. 1 色谱条件。色谱柱为Dia monsil(钻石) C 18(250mm @4. 6mm) , 粒度5L m, 流动相:甲醇-0. 2mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61B 39B 1) , 柱温:25e , 流速:1ml/min, 检测波长:250nm 。1. 2. 2 对照品溶液的制备。精密称取甘草酸单铵盐对照品适量, 加流动相制成每1ml 含0. 2mg 的溶液(折合甘草酸为0. 1959mg) , 即得。
1. 2. 3 供试品溶液的制备。取甘草提取物样品0. 1g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入流动相25ml, 称定重量, 超声处理20min, 取出, 放冷, 再称定重量, 用流动相补足减失重量, 摇匀, 滤过, 即得。
1. 2. 4 标准曲线的制备。精密吸取甘草酸单铵盐对照品液(0. 2172mg/ml) 2、6、10、14、18L l 分别注入液相色谱仪, 记录色谱, 以峰面积(A) 对质量数(C) 进行线性回归计算。1. 2. 5 精密度试验。分别精密吸取供试品溶液10L l, 重复进样5次, 按正文所述色谱条件测定, 记录色谱, 计算。1. 2. 6 重现性试验。取样品按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液, 分别精密吸取供试品溶液10L l 进样, 记录色谱, 计算。
1. 2. 7 加样回收率试验。准确称取已知含量的样品0. 05g
作者简介 徐树芸(1954-) , 女, 贵州贵阳人, 主管药师, 从事药品检
验监督工作。
收稿日期 2008-02-19
各5份, 精密加入甘草酸单铵盐适量(约相当于样品0. 025g 所含甘草酸单铵盐的量) , 按供试品溶液制备法制备, 分别进
样10L l, 计算回收率。
图1 对照品溶液HPLC 色谱图
图2 供试品溶液HPLC 色谱图
图3 阴性样品溶液H PLC 色谱图
1. 2. 8 空白试验。按处方比例及生产制备方法, 按供试品溶液制备项下制备阴性溶液, 进样10L l, 记录色谱图。
1. 2. 9 测定法。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10L l, 注入液相色谱仪, 测定, 即得。2 结果与分析
线性回归方程:A =152054. 9033C -12271. 45, r =0. 9999。结果表明, 甘草酸在0. 4344~3. 9096L g 范围内线性关系良好。精密度试验RSD 为1. 1%。重现性试验RSD 为2. 0%。加样回收率试验中5份样品平均回收率为)
10300 安徽农业科学 2008年
腺癌tsF T210细胞的细胞周期抑制在G2/M 期, 并诱发ts -F T210细胞发生凋亡[6]。
该植物各器官的挥发油主要成分中, (Z, Z ) -9, 12-十八碳二烯酸为茎、花、根、果仁和果皮所共有, 分别占挥发油总量的4. 90%、13. 82%、12. 81%、19. 26%和9. 85%。亚油酸的摄入, 可以促进大脑发育, 抑制血栓形成, 降低血脂和胆固醇, 增强免疫力, 抑制人体肝癌细胞的生长[7-8]。
邻羟基苯甲酸甲酯具有局部刺激作用, 可促进局部血液循环, 具有消肿、消炎、镇痛、止痒的作用, 临床上用于治疗扭伤、挫伤、腰痛、肌肉痛、神经痛、皮肤搔痒等症, 其在茎挥发油中占总含量的3. 33%。蝴蝶果茎、叶挥发油还含有叶绿醇, 它是合成维生素E 和维生素K 的原料, 在人体内易代谢, 且具有降低胆固醇的作用, 能够阻碍动物性胆固醇被人体吸收[9]。四氢异喹啉类化合物具有抗真菌活性, 其在叶挥发油中也少量存在。
蝴蝶果为油料植物, 其茎的挥发油中脂肪酸酯含量较高, 达44. 15%。蝴蝶果叶和根挥发油中还含有较多的工业原料, 如含有较多的增塑剂邻苯二甲酸酯类, 叶中含量达总油量的22. 21%,根中含量达总油量的7. 87%。叶挥发油还含有二丁基羟基甲苯(B HT) , 它是常用的食品抗氧化剂, 此外还含有防腐剂苯甲酸及其酯类。
(上接第10297页)
对照品溶液HPLC 色谱图见图1, 供试品溶液HP LC 色谱图见图2, 阴性样品溶液HP LC 色谱图见图3, 图3表明阴性样品溶液在甘草酸出峰处没有干扰峰。取样品按样品溶液制备操作, 分别吸取对照品溶液与样品溶液各10L l 进样, 按上述色谱条件测定, 记录色谱, 计算, 结果见表1。结果表明, 在此色谱条件下采用高效液相色谱法测定甘草酸含量, 方法简便, 快速, 重现性好。
表1 样品含量测定结果
T a ble 1 Detectio n result o f sam ple content
批次
Batch [***********][***********][***********][***********]20061001
含量M mg/g Conten t 15. 666. 766. 126. 325. 966. 015. 675. 876. 146. 32
25. 686. 756. 146. 335. 925. 985. 675. 896. 126. 42
平均含量mg/g Average 5. 676. 766. 136. 325. 946. 005. 675. 886. 136. 37
总平均含量M mg/g T otal ave rage 6. 087
3 结论与讨论
蝴蝶果各部位的挥发油含有丰富的工业原料和活性成分, 其虽为稀有植物, 物种资源量较少, 但具有生长快、产果量高、适应性广等特点[10], 具有应用开发的潜力, 应重视对该植物其他成分进行深入研究, 以发挥稀有植物对人类的贡献。参考文献
[1]傅立国, 陈潭青, 郎楷永, 等. 中国高等植物(第8册)[M].青岛:青岛出
版社, 2001:87-88.
[2]苏秀芳, 林强, 梁振益. 蝴蝶果茎挥发油化学成分的研究[J].广西植
物, 2007, 27(5):805-807.
[3]刘学民. 棕榈酸异丙酯的合成[J].香料香精化妆品, 2004(6):14-16. [4]殷树梅, 李再峰, 岳堡泰. 棕榈酸异辛酯的合成[J].化学世界, 2001, 42
(3) :146-147.
[5]R A HU MA N A A, G OP AL AK RIS HNA N G, G HO US E B S, e t al. Ef fec t of Fe ron ia
limon ia on mosq u ito larvae[J].Fi toterapia, 2000, 71:553-555.
[6]刘睿, 顾谦群, 崔承彬. 密脉鹅掌柴的化学成分及其抗肿瘤活性[J].中
草药, 2005, 36(3):328-332.
[7]张庭延, 高留英. 必需脂肪酸的生理病理意义[J].国外医学#生理#病
理科学与临床分册, 1998, 18(2) :148-151. [8]谢丽涛, 陈家. 必需脂肪酸对B EL -7402人肝癌细胞生长和甲酯蛋白
分泌抑制的研究[J].中国肿瘤生物治疗杂志, 1998, 5(4):274-27. [9]朱俊洁, 孟祥颖, 乌垠. 稠李果、茎、叶、皮及树干挥发油化学成分的分
析[J].分析化学研究简报, 2005, 33(11):1615-1618.
[10]刘敏学, 张海林, 张祥. 蝴蝶果栽培丰产技术[J].中国林副特产, 2006
(4) :70.
3 结论与讨论
在样品溶液的制备中, 曾采用甲醇[1-2]、乙醇、甲醇-0. 2mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61B 39B 1) 提取, 结果甲醇、甲醇-0. 2mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61B 39B 1) 作为提取溶剂时, 甘草酸单铵盐的含量基本一致, 为了方便提取, 故采用甲醇-0. 2mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61B 39B 1) 作为提取溶剂。流动相曾采用甲醇-水(35B 65) 、乙腈-水(44B 56) 、乙氰-四氢呋喃-0. 05mol/L 磷酸二氢钾(140B 40B 820) 、甲醇-0. 2mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61B 39B 1) , 在其他条件相同时, 采用甲醇-0. 2mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(61B 39B 1) 为流动相, 分离效果较好。在此色谱条件下采用高效液相色谱法测定甘草提取物中甘草酸的含量, 方法简便、快速、重现性好。参考文献
[1]中华人民共和国国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部) [M].
北京:化学工业出版社, 2000.
[2]苗明三. 现代实用中药质量控制技术[M].北京:人民卫生出版社,
2000.
[3]新编中药志[M].北京:化学工业出版社, 2002:259.
[3]陈德昌. 中药化学对照品工作手册[M].北京:中国医药科技出版社,
2000:67.
[3-4]