实验四 甲硝唑片的含量测定
一、目的要求
1．掌握紫外分光光度法测定甲硝唑片的原理及操作，并能进行有关计算。
2．熟练使用紫外分光光度计。
3．了解排除片剂中常用辅料干扰的操作。
二、实验原理
根据甲硝唑能产生紫外吸收的性质，将本品用盐酸溶液配成稀溶液，在甲硝唑的最大吸收波长处测定吸收度，根据朗伯－比尔定律，用吸收系数法计算含量。
三、实验步骤
1. 操作 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于甲硝唑50mg），置100mL量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约80mL，，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5mL，置200mL量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀。取该溶液置1cm厚石英吸收池中，以相同盐酸溶液为空白，在277nm波长处测定吸收度，按C6H9N3O3的吸收系数为377计算，即得。《中国药典》（2005）规定本品含甲硝唑（C6H9N3O3）应为标示量的93.0%~107.0%。
2. 计算 根据朗伯－比尔定律：A=ECL
则：CAA EL377L
A1VD平均片重 故：每片甲硝唑的量（g）w
式中，V：供试品溶液原始体积；
D：稀释倍数；
W：称取供试品的量（g）
甲硝唑片占标识量的百分含量可按下式求得：
A1VD平均片重标示量%100%w标示量
四、注意事项
1. 本次实验是用紫外分光法进行含量测定，故应选择可见—紫外分光光度计中的氢灯为光源，采用石英吸收池进行测定。
2. 测定步骤一般须经仪器预热、并调节各种开关至工作处；调拨测定所需波长；经校正仪器后，用与供试液相同的溶剂作空白测试，调其透光率为100%（吸收度为零）；再测定供试液的吸收度；关闭电路；计算（仪器的具体操作可详见各型号的说明书）。
3. 在仪器使用中，暂停测试时，应尽可能关闭光路闸门，以保护光电管，勿使受光过久而遭损坏。
4. 吸收池在测定前，应用被测试液冲洗2~3次，以保证溶液的浓度不变。
5. 石英吸收池的透光应保持光洁，拿取吸收池时，只能拿粗糙面，切不可拿透光面，使用及放置过程中应防止透光面与硬物接触，以免磨损。洗涤时，切不可用毛刷擦洗，一般以水冲洗，内壁沾污时，也可用绸布醮酒精液轻轻擦洗，必要时，可用重铬酸钾洗液浸泡，再用水洗净。吸收池外表需拭擦时，只能用擦镜纸或白绸布擦。实验结束后吸收池应用水冲净干净，晾干即可。
五、思考题
1．片剂中常用辅料的干扰对象是什么？如何排除？
2．用紫外可见分光光度法测物质含量时如何保证测定结果的准确？
实验五 磺胺甲噁唑片的含量测定一、目的要求
1．掌握亚硝酸钠滴定法的基本原理。
2. 熟悉永停滴定法指示滴定终点的原理
3. 掌握永停滴定法的操作。
二、基本原理
磺胺甲噁唑分子结构中具有芳伯胺，在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐，反应终点用永停滴定法指示。
H2NSO2NH
NOCH3
永停滴定法采用铂-铂电极系统。测定时，先将电极插入供试品的盐酸溶液中，当在电极间加一低电压（约为50mV）时，若电极在溶液中极化，则在滴定终点前，溶液中无亚硝酸，线路仅有很小或无电流通过，电流计指针不发生偏转或偏转后即回复到初始位置；当到达滴定终点时溶液中有微量亚硝酸存在，使电极去极化，发生氧化还原反应：
阳极 NO + H2O——HNO2 + H + + e
阴极 HNO2＋H+＋e——NO +H2O
此时线路中即有电流通过，电流计指针突然偏转，并不再回零，即为滴定终点。
三、实验步骤
取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于磺胺甲噁唑0.5g）加盐酸溶液(1→2)25ml溶解后,再加水25ml，照永停滴定法（附录Ⅶ A），用亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于25.33mg的C10H11N3O3S。本品含磺胺甲噁唑(C10H11N3O3S)应为标示量的95.0％～105.0％。
TVF平均片重百分含量100% W1000标示量
四、注意事项
1. 重氮化反应为分子反应，反应速度较慢，滴定过程中应充分搅拌，近滴定终点时，磺胺甲噁唑的浓度极小，反应速度减慢，应缓缓滴定，并不断搅拌。2．滴定前应根据磺胺甲噁唑取样量与亚硝酸钠滴定液的浓度，大致计算出应消耗亚硝酸钠滴定液的量（mL），以便在滴定操作中掌握何时为近终点，以提出滴定管尖端，经冲洗后，再缓慢滴定至准确的终点。
3．铂电极易钝化，每次用前应用新鲜配制的含少量三氯化铁的硝酸（加1～2滴三氯化铁试液）或重铬酸钾-硫酸清洁浸洗活化。4．滴定时电磁搅拌的速度不宜过快，以不产生空气旋涡为宜。
[附]：ZYT-2型自动永停滴定仪的使用方法
1．开机
开启电源，三通转换阀置吸液位（阀体调节帽顺时针旋到底，吸液指示灯亮），按吸液键，泵管活塞下移，滴定液被吸人泵体，下移到极限位时自动停止，再转三通阀到注液位（逆时针旋到底，注液指示灯亮），按注液键，泵管活塞上移，先赶走泵体内的气泡，活塞上移到上限位时，自动停止，随后再在吸液位按吸液键，如此反复2～3次，即可赶走泵体和液路管道中的所有气泡，同时在整个液路中充满滴定液。
2．准备
把电极和滴定管下移，浸入被滴定溶液的烧杯中，三通阀置注液位，灵敏度按《中国药典》（2005）要求，根据被滴定溶液不同，置10-8A或10-9A，极化电压如是10-8A，即为－100mV，10-9A即为－50mV 。
在被滴定溶液的烧杯中放人搅拌棒，打开搅拌开关，调节搅拌速度电位器，使搅拌速度适中。
3．滴定
将三通阀置注液位按“滴定开始”键，仪器就开始自动滴定，先快后慢，仪器出现假终点后，指针返回门限值以下后又开始快滴后慢滴，反复多次，直到终点指针不再返回，约80s后，终点指示灯亮，同时蜂鸣器响，滴定结束，此时数字显示器显示的数字就是实际消耗的滴定液的毫升数。
4．注意
(1)该仪器设有门限值电位器，可以从60～80的范围内连续调节。根据使用过程中出现的具体情况，如被滴定溶液电位的高低、滴定过程中表头指针摆动幅度的大小等情况自行决定（顺时针旋转，门限值升高；逆时针旋转，门限值下降）。一般情况下，在正常使用时门限值电位器置中间位置即可。(2)在使用过程中，泵管活塞接近上限位时，要及时在吸液位吸液，如在“滴定开始”键工作状态下，活塞到达上限位自动停止滴定后，应先按“复零”键，再在吸液位按吸液键吸液。
(3)在滴定过程中，表头指针出现倒打现象，应转动一下电极角度，尽量避免出现指针倒打。(4)该仪器设有“复零”键，在吸液、注液或滴定过程中按“复零”键，仪器的任何动作都立即停止，数字显示器也同时显示00.00mL。滴定到达终点，经延时后，终点指示灯亮，蜂鸣器响，记录实际消耗滴定液的毫升数后，按“复零”键，仪器即退出终点锁定状态，同时数字也复零。(5)玻璃泵管与活塞连接紧密，一般不宜分离，以免损坏玻璃泵管，若确实污染严重，则必须分离后清洗，但严禁活塞装在玻璃泵管内加热。(6)仪器若长期不用或发生意外要拆卸泵体时，首先要将吸液管和注液管都提起高出液面，在注液位按注液键，排完泵管内的溶液，然后三通阀置吸液位，按吸液键，先吸掉吸液管道内的溶液到泵体中，然后迅速转动三通阀到注液位（不按任何键），此时仍在吸液，把注液管道中的溶液也吸人泵体中，待泵体活塞接近下限时按“复零”键，使电机停转，先拧下泵体接头的聚乙烯旋钮，再旋下红色有机玻璃外套，双手握住玻璃泵体用力小心上移，使活塞螺杆外露时，从泵体推杆凹槽内取出，倒掉残液并用水冲洗。
实验四 甲硝唑片的含量测定
一、目的要求
1．掌握紫外分光光度法测定甲硝唑片的原理及操作，并能进行有关计算。
2．熟练使用紫外分光光度计。
3．了解排除片剂中常用辅料干扰的操作。
二、实验原理
根据甲硝唑能产生紫外吸收的性质，将本品用盐酸溶液配成稀溶液，在甲硝唑的最大吸收波长处测定吸收度，根据朗伯－比尔定律，用吸收系数法计算含量。
三、实验步骤
1. 操作 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于甲硝唑50mg），置100mL量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约80mL，，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5mL，置200mL量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀。取该溶液置1cm厚石英吸收池中，以相同盐酸溶液为空白，在277nm波长处测定吸收度，按C6H9N3O3的吸收系数为377计算，即得。《中国药典》（2005）规定本品含甲硝唑（C6H9N3O3）应为标示量的93.0%~107.0%。
2. 计算 根据朗伯－比尔定律：A=ECL
则：CAA EL377L
A1VD平均片重 故：每片甲硝唑的量（g）w
式中，V：供试品溶液原始体积；
D：稀释倍数；
W：称取供试品的量（g）
甲硝唑片占标识量的百分含量可按下式求得：
A1VD平均片重标示量%100%w标示量
四、注意事项
1. 本次实验是用紫外分光法进行含量测定，故应选择可见—紫外分光光度计中的氢灯为光源，采用石英吸收池进行测定。
2. 测定步骤一般须经仪器预热、并调节各种开关至工作处；调拨测定所需波长；经校正仪器后，用与供试液相同的溶剂作空白测试，调其透光率为100%（吸收度为零）；再测定供试液的吸收度；关闭电路；计算（仪器的具体操作可详见各型号的说明书）。
3. 在仪器使用中，暂停测试时，应尽可能关闭光路闸门，以保护光电管，勿使受光过久而遭损坏。
4. 吸收池在测定前，应用被测试液冲洗2~3次，以保证溶液的浓度不变。
5. 石英吸收池的透光应保持光洁，拿取吸收池时，只能拿粗糙面，切不可拿透光面，使用及放置过程中应防止透光面与硬物接触，以免磨损。洗涤时，切不可用毛刷擦洗，一般以水冲洗，内壁沾污时，也可用绸布醮酒精液轻轻擦洗，必要时，可用重铬酸钾洗液浸泡，再用水洗净。吸收池外表需拭擦时，只能用擦镜纸或白绸布擦。实验结束后吸收池应用水冲净干净，晾干即可。
五、思考题
1．片剂中常用辅料的干扰对象是什么？如何排除？
2．用紫外可见分光光度法测物质含量时如何保证测定结果的准确？
实验五 磺胺甲噁唑片的含量测定一、目的要求
1．掌握亚硝酸钠滴定法的基本原理。
2. 熟悉永停滴定法指示滴定终点的原理
3. 掌握永停滴定法的操作。
二、基本原理
磺胺甲噁唑分子结构中具有芳伯胺，在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐，反应终点用永停滴定法指示。
H2NSO2NH
NOCH3
永停滴定法采用铂-铂电极系统。测定时，先将电极插入供试品的盐酸溶液中，当在电极间加一低电压（约为50mV）时，若电极在溶液中极化，则在滴定终点前，溶液中无亚硝酸，线路仅有很小或无电流通过，电流计指针不发生偏转或偏转后即回复到初始位置；当到达滴定终点时溶液中有微量亚硝酸存在，使电极去极化，发生氧化还原反应：
阳极 NO + H2O——HNO2 + H + + e
阴极 HNO2＋H+＋e——NO +H2O
此时线路中即有电流通过，电流计指针突然偏转，并不再回零，即为滴定终点。
三、实验步骤
取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于磺胺甲噁唑0.5g）加盐酸溶液(1→2)25ml溶解后,再加水25ml，照永停滴定法（附录Ⅶ A），用亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于25.33mg的C10H11N3O3S。本品含磺胺甲噁唑(C10H11N3O3S)应为标示量的95.0％～105.0％。
TVF平均片重百分含量100% W1000标示量
四、注意事项
1. 重氮化反应为分子反应，反应速度较慢，滴定过程中应充分搅拌，近滴定终点时，磺胺甲噁唑的浓度极小，反应速度减慢，应缓缓滴定，并不断搅拌。2．滴定前应根据磺胺甲噁唑取样量与亚硝酸钠滴定液的浓度，大致计算出应消耗亚硝酸钠滴定液的量（mL），以便在滴定操作中掌握何时为近终点，以提出滴定管尖端，经冲洗后，再缓慢滴定至准确的终点。
3．铂电极易钝化，每次用前应用新鲜配制的含少量三氯化铁的硝酸（加1～2滴三氯化铁试液）或重铬酸钾-硫酸清洁浸洗活化。4．滴定时电磁搅拌的速度不宜过快，以不产生空气旋涡为宜。
[附]：ZYT-2型自动永停滴定仪的使用方法
1．开机
开启电源，三通转换阀置吸液位（阀体调节帽顺时针旋到底，吸液指示灯亮），按吸液键，泵管活塞下移，滴定液被吸人泵体，下移到极限位时自动停止，再转三通阀到注液位（逆时针旋到底，注液指示灯亮），按注液键，泵管活塞上移，先赶走泵体内的气泡，活塞上移到上限位时，自动停止，随后再在吸液位按吸液键，如此反复2～3次，即可赶走泵体和液路管道中的所有气泡，同时在整个液路中充满滴定液。
2．准备
把电极和滴定管下移，浸入被滴定溶液的烧杯中，三通阀置注液位，灵敏度按《中国药典》（2005）要求，根据被滴定溶液不同，置10-8A或10-9A，极化电压如是10-8A，即为－100mV，10-9A即为－50mV 。
在被滴定溶液的烧杯中放人搅拌棒，打开搅拌开关，调节搅拌速度电位器，使搅拌速度适中。
3．滴定
将三通阀置注液位按“滴定开始”键，仪器就开始自动滴定，先快后慢，仪器出现假终点后，指针返回门限值以下后又开始快滴后慢滴，反复多次，直到终点指针不再返回，约80s后，终点指示灯亮，同时蜂鸣器响，滴定结束，此时数字显示器显示的数字就是实际消耗的滴定液的毫升数。
4．注意
(1)该仪器设有门限值电位器，可以从60～80的范围内连续调节。根据使用过程中出现的具体情况，如被滴定溶液电位的高低、滴定过程中表头指针摆动幅度的大小等情况自行决定（顺时针旋转，门限值升高；逆时针旋转，门限值下降）。一般情况下，在正常使用时门限值电位器置中间位置即可。(2)在使用过程中，泵管活塞接近上限位时，要及时在吸液位吸液，如在“滴定开始”键工作状态下，活塞到达上限位自动停止滴定后，应先按“复零”键，再在吸液位按吸液键吸液。
(3)在滴定过程中，表头指针出现倒打现象，应转动一下电极角度，尽量避免出现指针倒打。(4)该仪器设有“复零”键，在吸液、注液或滴定过程中按“复零”键，仪器的任何动作都立即停止，数字显示器也同时显示00.00mL。滴定到达终点，经延时后，终点指示灯亮，蜂鸣器响，记录实际消耗滴定液的毫升数后，按“复零”键，仪器即退出终点锁定状态，同时数字也复零。(5)玻璃泵管与活塞连接紧密，一般不宜分离，以免损坏玻璃泵管，若确实污染严重，则必须分离后清洗，但严禁活塞装在玻璃泵管内加热。(6)仪器若长期不用或发生意外要拆卸泵体时，首先要将吸液管和注液管都提起高出液面，在注液位按注液键，排完泵管内的溶液，然后三通阀置吸液位，按吸液键，先吸掉吸液管道内的溶液到泵体中，然后迅速转动三通阀到注液位（不按任何键），此时仍在吸液，把注液管道中的溶液也吸人泵体中，待泵体活塞接近下限时按“复零”键，使电机停转，先拧下泵体接头的聚乙烯旋钮，再旋下红色有机玻璃外套，双手握住玻璃泵体用力小心上移，使活塞螺杆外露时，从泵体推杆凹槽内取出，倒掉残液并用水冲洗。