第一部分：实验内容问题
一、 建库前
1. 分离时我们需要注意什么吗？
回答：分离时我们要小心吸取上清不能吸到中间的白细胞。移液枪不要碰到采血管。
2. 我们提取的DNA 浓度过高是什么原因导致的？
回答：正常提取的DNA 的浓度为0.1到0.3ng/ul，如果浓度太高可能是DNA 含有杂质可能是漂洗的时候没洗好，也有可能是样品问题，血浆分离时浆白细胞吸到血清中，细胞经高速离心时破裂细胞中的DNA 游离到血浆中导致DNA 浓度过高。
二、 建库及定量
1. 我们文库构建后浓度很低？
回答：文库构建浓度过低的因素很多，试剂没混匀、温度、操作问题、PCR 扩增前的晾干步骤没晾干或管壁含有酒精抑制PCR 的扩增等。解决：办法规范操作，晾干前观察管壁是否有酒精，控制温度在25度。
2. 接头污染了怎么办？
回答：接头污染可能是操作当造成的，我们要及时消毒台面，加接头是要注意换手套3-4 个换一次手套。
3. Qubit 定量不准确？
回答：仪器本身有一个精确度会产生一定差异，但这是可以在接受范围内的。但要注意每次测试样品前要校准曲线用同一次配的染色液。
4. 稀释方法的选择？
回答：我们先有两种混样方法，一种是先稀释后混样，另一种是先混样后稀释，对于Qubit 测出来的浓度采用后一种方法结果较好。
5. 样品的数据量不均一怎么办？
回答:样品结果的不均一是由于混样量不均一导致的，原因是浓度测的不准确，混样时没有将样品充分混匀导致的。解决办法：放置太久的样品重新定量，用震荡器或移液枪充分混匀。
三、 上机
1. 怎么知道ot 仪是否正常运行？
回答：ot 每次运行完后仪器会有一份这次试验ot 运行参数的文件（文件在关机后自动删除），通过查看运行的参数和图表对比正常运行的参数查看ot 是否正常运行。
2.ot 仪器程序不能正常运行？
回答：ot 仪器不能正常运行有可能是实验室温度太高了，导致ot 不能正常运行，要确室温保温度在20-25度。
3. 仪器清洗的时间有什么要求？
回答：仪器每天要水洗一次，一周氯洗一次，超过72小时未使用也要氯洗一次。
4. 清洗的芯片可以用固体配置的NaOH 吗？
回答：可以但要在配好后用o.45um 滤膜过滤才能使用，我们推荐用 sigma 的液态分子生物级的氢氧化钠。出事我们不负责。
5. 移液枪打汽泡不够细腻？
回答：打汽泡不够细腻是由于移液枪本身的冲击力不足导致的，没有什么解决的办法唯一的办法就是换枪，但枪头放置在液体的中心正对ep 管管低较好打出汽包。
6. Loading芯片时不小心打进气泡怎么办？
回答：打进气泡没有什么好的办法，只有重新加入试剂将气泡赶出来。
四、结果及数据分析
1. Loading 率很低怎么办?
回答：loading 率原因有很多，上样量不足，操作不当，ot 仪器运行不正常，文库定量不准，保存不当等，解决方法：重新定量文库，调整上样量和混样方法。监控实验室温度和ot 仪的温度，操作时注意不要把磁珠震起来或吸到磁珠，ot 完成后15分钟没有操作要重新离心。
2. 片段结果片段很短小于正常值150bp 左右？
回答：样品可能被污染了DNA 酶，导致DNA 样品降解了，解决办法：重新提取DNA 。
3.Loading 率高但有用的数据量不足？
回答：（1）首先观察芯片是否有异常，如果是芯片信号有缺损，形状边缘整齐形
状，颜色较蓝，怀疑芯片问题。
（2）芯片整块比较篮，颜色基本一致，颜色为浅蓝，这个可能是没用加酶或没加引物。
也可能是ot 模板制备失败。
4. 跟华大的数据分析比，优劣如何？
5. 是否可检测其它染色体异常？准确率如何？
回答：按照原理我们是可以得到所有染色体DNA 序列，但是由于其他染色体异常极其罕见，没有足够的样本来证明结果的可靠性，性染色体异常较常见但准确率达不到13、18、21三体的准确率。
6. 插件分析的原理和具体过程如何？
回答：三体原理：每一条染色体上的碱基数占整个基因组碱基数比值是一个定值，如果是三体则它占整个染色体的比值会上升。通过Z 值检验来确定三体准确性，我们首先将测序得到的数据（文件类型fastq ）通过bowtie 序列比对软件将测序得到的序列比对到人类基因组上，找到每条序列的确切位置。计算每条常染色体占整个染色体的比值（这两个都是测序的来的数据，由于文库构建存在一定的GC 测序偏好性我们还要进行进行一个GC 校准），通过
7. 灰区的意义是什么？两次都在灰区如何处理？
灰度区划分是为了减少假阴性假阳性提高准确率。一次测序得到的数据量是一定的，经过数据分析的Z 值也是一定的，唯一解决的方法就是从头重做, 重新得到新的数据。
8. 如何减少灰区出现频率？
答：首先灰度区和实验操作无关，是随机出现的，一般一套试剂会出现5~10个。
9. 如果实验情况不好，能否从最后结果中分析出可能原因？如何分析？
实验结果我们一般关注的参数有loading 率、多克隆、read 的数量、read 数据均一性、低质量、片段长度….. 等信息。
10. 如何分析sn/tn的report 文件，以及下载的tn 版本的archive 压缩包里的文件。
11. 如果出现样本间的相互污染，如何从结果中发现？怎么解决？
答：样本之间的污染是无法从结果发现的，解决办法：严格按照SOP 操作，尽量避免出现污染。
第二部分：实验相关问题
一、 场地环境
1. 实验室分区？是否可以减少或增加？
回答：
（1） 我们一般要求为4个实验区，分别是试剂准备间、样本准备与文库制备区、
扩增与产物分析区，测序区。
（2） 如果要减少，可以去掉试剂准备间。
（3） 如果条件允许，可以增加样品接收和登记房间。
2. 实验室洁净度、通风、气压要求？
回答：
（1） PCR 实验室的洁净度要求。
（2） 各房间独立通风。
（3） 缓冲间为正压。样本提取房间为正压，扩增与产物分析区为负压，测序区
为负压。
3. 房间温湿度要求？达不到要求有什么影响，如何处理？
回答：
（1） 温度20~25度，湿度40%-60%。
（2） 温度过高影响仪器运行和实验结果。湿度过高影响仪器寿命。
（3） 温度过高增加降温措施，湿度过高增加干燥措施。
4. 房间及设备清洁和消毒？
回答：参考实验室实验室卫生管理规程。
5. 人员服装要求？
回答：参考实验室实验室卫生管理规程。
二、实验仪器和软件
1. 仪器是否有注册证?
DA8600仪器已通过CFDA 认证，注册时间为2014年。产品技术要求编号：国械注准[1**********]。产品注册编号： 国械注准[1**********]。生产许可证号: 粤食药监械生产许20040999号。
2. 系统和软件是否定时升级更新？如何更新？
并无定时更新。系统升级由试剂的更新决定。软件的更新升级有两种情况，一种是在系统升级后进行软件升级；另一种是生物信息部门推出了进一步优化，或者增加功能的软件版本后进行更新升级。系统和软件升级的完成参照操作文档来做。
3. 仪器的保修期多长，如何计算？
从装机完成之日开始计算，一年时间。
4. 在培训完成后，仪器出问题如何处理？
答：仪器出现问题，客户首先联系我们公司相应的负责人，然后由我们公司联系相应的厂家，由我们公司和原厂家一起处理好相关的仪器售后问题。
三、实验试剂和耗材
1. 试剂是否已注册？
答：我们的NIPT 试剂已在CFDA 注册，试剂注册证：[1**********]。
2. 是否有其它包装的试剂？
3. 耗材包是否可单独购买？
4.qubit 试剂与无创试剂的人份比例是多少？
5. 当出现试剂问题时，如何确认？赔偿方案如何？
第三部分：其它问题
一、 人员
1. 驻点人员的水平如何?
回答：驻点人员出来之前，至少经过三个月的培训，加上在广州达瑞实验室的三个月实操经验。组长具有更多的经验。
2. 培训时长需要多久？
集中培训下，培训完成一般需要1-2个月时间。
3. 是否可以派人到达瑞学习？是否收费？
回答：如果已签订合同，在提前预约好之后，可以派人到广州达瑞NIPT 实验室进行1周到2个月时长的学习，并不收取培训费用。旅费自行解决。在达瑞实习
生宿舍有空位的情况下，可提供1-2个住宿位（类似大学集体宿舍）。
4. 实验出现问题时，技术支持人员能否到现场解决问题？是否收费？
二、报告
1. 填写无创申请单和保险单要注意些什么？
回答：申请单和保险书写要规范字迹清晰信息真实可靠，必填的项目一定要勾选或填写。孕周大于26周的需填写知情同意。
2. 如果有异体输血干细胞治疗…等不能做吗？
回答：是的，不过离治疗有一定的时间也是可以做的，具体时间查看申请单，如果符合对结果无影响。
3. 我们需要采多少血？
回答：我们需要7-10ml 的全血，用EDTA 抗凝管或专业用采血管。
4. 溶血了怎么办？
回答：将溶血的样品等记，通知孕妇重新采血。
5. 收样的注意事项：
（1）样本采集要求：
由医院医生或护士按照外周采血标准采集8-10 mL（使用Streck Cell-Free DNA BCT 采血管或Ardent 采血管）孕妇的外周血；EDTA 抗凝管采集完后，轻微颠倒采血管10次，立即分离或将采血管放入4℃冰箱中暂存（不超过8h ，EDTA 抗凝管不适合用于运输）；Streck Cell-Free DNA BCT 采血管和Ardent 管采血后立即缓慢的颠倒10 次使血液与管内成分混匀，15-30℃保存。
（2）样本保存要求：
EDTA 抗凝管采血后立即分离或将采血管放入4℃-8℃冰箱中暂存（不超过8h ）并及时送检，分离后血浆-25℃至-15℃保存送检（或干冰条件下运输）；Streck Cell-Free DNA BCT 采血管和Ardent 管采血后常温（15-30℃）保存，及时送检，或72小时内完成血浆分离，分离后血浆-25℃至-15℃保存送检（或干冰条件下运输）。
（3）接收后编号，严格核对样本编号、确保编号唯一，勿搞混样品。
（4）注意不同采血管血浆分离的时间要求，避免样品过期导致溶血。
（5）全血样本检查是否溶血或凝血：
6. 出报告对人员资质有什么要求？对医院实验室资质有什么要求？
答：
7. 如果医院没有试点资质，应该如何处理报告、保险单、知情同意书问题？ 答：一、以达安临检的名义发报告；
二、公司和医院以科研服务的形式，出具科研报告；
三、公司、其它产品、其它部门
1. 跟优生优育相关的产品有哪些？
答：NIPT 、PGS 、PGD 、STR 、产新筛。
2. 哪些产品你们公司是做得比较完善的？哪些是在国内市场中比较新的？ 答：
3. 你们公司成立多长时间？发展如何？在各地业务分布情况如何？
答：
4. 你们部门主要负责什么？跟科研部门有什么关系？
答：主要负责NGS 平台项目售后技术培训服务，科研部门负责我们技术部门新产品和现有产品更新优化的技术培训。
第一部分：实验内容问题
一、 建库前
1. 分离时我们需要注意什么吗？
回答：分离时我们要小心吸取上清不能吸到中间的白细胞。移液枪不要碰到采血管。
2. 我们提取的DNA 浓度过高是什么原因导致的？
回答：正常提取的DNA 的浓度为0.1到0.3ng/ul，如果浓度太高可能是DNA 含有杂质可能是漂洗的时候没洗好，也有可能是样品问题，血浆分离时浆白细胞吸到血清中，细胞经高速离心时破裂细胞中的DNA 游离到血浆中导致DNA 浓度过高。
二、 建库及定量
1. 我们文库构建后浓度很低？
回答：文库构建浓度过低的因素很多，试剂没混匀、温度、操作问题、PCR 扩增前的晾干步骤没晾干或管壁含有酒精抑制PCR 的扩增等。解决：办法规范操作，晾干前观察管壁是否有酒精，控制温度在25度。
2. 接头污染了怎么办？
回答：接头污染可能是操作当造成的，我们要及时消毒台面，加接头是要注意换手套3-4 个换一次手套。
3. Qubit 定量不准确？
回答：仪器本身有一个精确度会产生一定差异，但这是可以在接受范围内的。但要注意每次测试样品前要校准曲线用同一次配的染色液。
4. 稀释方法的选择？
回答：我们先有两种混样方法，一种是先稀释后混样，另一种是先混样后稀释，对于Qubit 测出来的浓度采用后一种方法结果较好。
5. 样品的数据量不均一怎么办？
回答:样品结果的不均一是由于混样量不均一导致的，原因是浓度测的不准确，混样时没有将样品充分混匀导致的。解决办法：放置太久的样品重新定量，用震荡器或移液枪充分混匀。
三、 上机
1. 怎么知道ot 仪是否正常运行？
回答：ot 每次运行完后仪器会有一份这次试验ot 运行参数的文件（文件在关机后自动删除），通过查看运行的参数和图表对比正常运行的参数查看ot 是否正常运行。
2.ot 仪器程序不能正常运行？
回答：ot 仪器不能正常运行有可能是实验室温度太高了，导致ot 不能正常运行，要确室温保温度在20-25度。
3. 仪器清洗的时间有什么要求？
回答：仪器每天要水洗一次，一周氯洗一次，超过72小时未使用也要氯洗一次。
4. 清洗的芯片可以用固体配置的NaOH 吗？
回答：可以但要在配好后用o.45um 滤膜过滤才能使用，我们推荐用 sigma 的液态分子生物级的氢氧化钠。出事我们不负责。
5. 移液枪打汽泡不够细腻？
回答：打汽泡不够细腻是由于移液枪本身的冲击力不足导致的，没有什么解决的办法唯一的办法就是换枪，但枪头放置在液体的中心正对ep 管管低较好打出汽包。
6. Loading芯片时不小心打进气泡怎么办？
回答：打进气泡没有什么好的办法，只有重新加入试剂将气泡赶出来。
四、结果及数据分析
1. Loading 率很低怎么办?
回答：loading 率原因有很多，上样量不足，操作不当，ot 仪器运行不正常，文库定量不准，保存不当等，解决方法：重新定量文库，调整上样量和混样方法。监控实验室温度和ot 仪的温度，操作时注意不要把磁珠震起来或吸到磁珠，ot 完成后15分钟没有操作要重新离心。
2. 片段结果片段很短小于正常值150bp 左右？
回答：样品可能被污染了DNA 酶，导致DNA 样品降解了，解决办法：重新提取DNA 。
3.Loading 率高但有用的数据量不足？
回答：（1）首先观察芯片是否有异常，如果是芯片信号有缺损，形状边缘整齐形
状，颜色较蓝，怀疑芯片问题。
（2）芯片整块比较篮，颜色基本一致，颜色为浅蓝，这个可能是没用加酶或没加引物。
也可能是ot 模板制备失败。
4. 跟华大的数据分析比，优劣如何？
5. 是否可检测其它染色体异常？准确率如何？
回答：按照原理我们是可以得到所有染色体DNA 序列，但是由于其他染色体异常极其罕见，没有足够的样本来证明结果的可靠性，性染色体异常较常见但准确率达不到13、18、21三体的准确率。
6. 插件分析的原理和具体过程如何？
回答：三体原理：每一条染色体上的碱基数占整个基因组碱基数比值是一个定值，如果是三体则它占整个染色体的比值会上升。通过Z 值检验来确定三体准确性，我们首先将测序得到的数据（文件类型fastq ）通过bowtie 序列比对软件将测序得到的序列比对到人类基因组上，找到每条序列的确切位置。计算每条常染色体占整个染色体的比值（这两个都是测序的来的数据，由于文库构建存在一定的GC 测序偏好性我们还要进行进行一个GC 校准），通过
7. 灰区的意义是什么？两次都在灰区如何处理？
灰度区划分是为了减少假阴性假阳性提高准确率。一次测序得到的数据量是一定的，经过数据分析的Z 值也是一定的，唯一解决的方法就是从头重做, 重新得到新的数据。
8. 如何减少灰区出现频率？
答：首先灰度区和实验操作无关，是随机出现的，一般一套试剂会出现5~10个。
9. 如果实验情况不好，能否从最后结果中分析出可能原因？如何分析？
实验结果我们一般关注的参数有loading 率、多克隆、read 的数量、read 数据均一性、低质量、片段长度….. 等信息。
10. 如何分析sn/tn的report 文件，以及下载的tn 版本的archive 压缩包里的文件。
11. 如果出现样本间的相互污染，如何从结果中发现？怎么解决？
答：样本之间的污染是无法从结果发现的，解决办法：严格按照SOP 操作，尽量避免出现污染。
第二部分：实验相关问题
一、 场地环境
1. 实验室分区？是否可以减少或增加？
回答：
（1） 我们一般要求为4个实验区，分别是试剂准备间、样本准备与文库制备区、
扩增与产物分析区，测序区。
（2） 如果要减少，可以去掉试剂准备间。
（3） 如果条件允许，可以增加样品接收和登记房间。
2. 实验室洁净度、通风、气压要求？
回答：
（1） PCR 实验室的洁净度要求。
（2） 各房间独立通风。
（3） 缓冲间为正压。样本提取房间为正压，扩增与产物分析区为负压，测序区
为负压。
3. 房间温湿度要求？达不到要求有什么影响，如何处理？
回答：
（1） 温度20~25度，湿度40%-60%。
（2） 温度过高影响仪器运行和实验结果。湿度过高影响仪器寿命。
（3） 温度过高增加降温措施，湿度过高增加干燥措施。
4. 房间及设备清洁和消毒？
回答：参考实验室实验室卫生管理规程。
5. 人员服装要求？
回答：参考实验室实验室卫生管理规程。
二、实验仪器和软件
1. 仪器是否有注册证?
DA8600仪器已通过CFDA 认证，注册时间为2014年。产品技术要求编号：国械注准[1**********]。产品注册编号： 国械注准[1**********]。生产许可证号: 粤食药监械生产许20040999号。
2. 系统和软件是否定时升级更新？如何更新？
并无定时更新。系统升级由试剂的更新决定。软件的更新升级有两种情况，一种是在系统升级后进行软件升级；另一种是生物信息部门推出了进一步优化，或者增加功能的软件版本后进行更新升级。系统和软件升级的完成参照操作文档来做。
3. 仪器的保修期多长，如何计算？
从装机完成之日开始计算，一年时间。
4. 在培训完成后，仪器出问题如何处理？
答：仪器出现问题，客户首先联系我们公司相应的负责人，然后由我们公司联系相应的厂家，由我们公司和原厂家一起处理好相关的仪器售后问题。
三、实验试剂和耗材
1. 试剂是否已注册？
答：我们的NIPT 试剂已在CFDA 注册，试剂注册证：[1**********]。
2. 是否有其它包装的试剂？
3. 耗材包是否可单独购买？
4.qubit 试剂与无创试剂的人份比例是多少？
5. 当出现试剂问题时，如何确认？赔偿方案如何？
第三部分：其它问题
一、 人员
1. 驻点人员的水平如何?
回答：驻点人员出来之前，至少经过三个月的培训，加上在广州达瑞实验室的三个月实操经验。组长具有更多的经验。
2. 培训时长需要多久？
集中培训下，培训完成一般需要1-2个月时间。
3. 是否可以派人到达瑞学习？是否收费？
回答：如果已签订合同，在提前预约好之后，可以派人到广州达瑞NIPT 实验室进行1周到2个月时长的学习，并不收取培训费用。旅费自行解决。在达瑞实习
生宿舍有空位的情况下，可提供1-2个住宿位（类似大学集体宿舍）。
4. 实验出现问题时，技术支持人员能否到现场解决问题？是否收费？
二、报告
1. 填写无创申请单和保险单要注意些什么？
回答：申请单和保险书写要规范字迹清晰信息真实可靠，必填的项目一定要勾选或填写。孕周大于26周的需填写知情同意。
2. 如果有异体输血干细胞治疗…等不能做吗？
回答：是的，不过离治疗有一定的时间也是可以做的，具体时间查看申请单，如果符合对结果无影响。
3. 我们需要采多少血？
回答：我们需要7-10ml 的全血，用EDTA 抗凝管或专业用采血管。
4. 溶血了怎么办？
回答：将溶血的样品等记，通知孕妇重新采血。
5. 收样的注意事项：
（1）样本采集要求：
由医院医生或护士按照外周采血标准采集8-10 mL（使用Streck Cell-Free DNA BCT 采血管或Ardent 采血管）孕妇的外周血；EDTA 抗凝管采集完后，轻微颠倒采血管10次，立即分离或将采血管放入4℃冰箱中暂存（不超过8h ，EDTA 抗凝管不适合用于运输）；Streck Cell-Free DNA BCT 采血管和Ardent 管采血后立即缓慢的颠倒10 次使血液与管内成分混匀，15-30℃保存。
（2）样本保存要求：
EDTA 抗凝管采血后立即分离或将采血管放入4℃-8℃冰箱中暂存（不超过8h ）并及时送检，分离后血浆-25℃至-15℃保存送检（或干冰条件下运输）；Streck Cell-Free DNA BCT 采血管和Ardent 管采血后常温（15-30℃）保存，及时送检，或72小时内完成血浆分离，分离后血浆-25℃至-15℃保存送检（或干冰条件下运输）。
（3）接收后编号，严格核对样本编号、确保编号唯一，勿搞混样品。
（4）注意不同采血管血浆分离的时间要求，避免样品过期导致溶血。
（5）全血样本检查是否溶血或凝血：
6. 出报告对人员资质有什么要求？对医院实验室资质有什么要求？
答：
7. 如果医院没有试点资质，应该如何处理报告、保险单、知情同意书问题？ 答：一、以达安临检的名义发报告；
二、公司和医院以科研服务的形式，出具科研报告；
三、公司、其它产品、其它部门
1. 跟优生优育相关的产品有哪些？
答：NIPT 、PGS 、PGD 、STR 、产新筛。
2. 哪些产品你们公司是做得比较完善的？哪些是在国内市场中比较新的？ 答：
3. 你们公司成立多长时间？发展如何？在各地业务分布情况如何？
答：
4. 你们部门主要负责什么？跟科研部门有什么关系？
答：主要负责NGS 平台项目售后技术培训服务，科研部门负责我们技术部门新产品和现有产品更新优化的技术培训。