编号：
中国农业大学现代远程教育
毕业论文（设计）
一例鸡传染性法氏囊病的诊断与治疗
学 生 吴荫坤
指导教师 匡存林 教授
专 业 动物医学
层 次 高起专
批 次 141
学 号
学习中心 江苏农牧科技职业学院
工作单位 海陵区畜牧兽医站
2016年 4 月
独 创 性 声 明
本人声明所呈交的毕业论文（设计）是我个人进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文（设计）中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在毕业论文（设计）中作了明确的说明并表示了谢意。
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关于论文（设计）使用授权的说明
本人完全了解《中国农业大学网络教育学院本、专科毕业论文（设计）工作条例（暂行规定）》对：“成绩为优秀毕业论文（设计），网络教育学院将有权选取部分论文（设计）全文汇编成集或者在网上公开发布。如因著作权发生纠纷，由学生本人负责”完全认可，并同意中国农业大学网络教育学院可以以不同方式在不同媒体上发表、传播毕业论文（设计）的全部或部分内容。中国农业大学网络教育学院有权保留送交论文（设计）的复印件和磁盘，允许论文（设计）被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编论文（设计）。
[保密的毕业论文（设计）在解密后应遵守此协议]
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时间： 年 月 日
摘 要
鸡传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病病毒（IBDV ）引起仔鸡的一种急性、高度传染性疾病。目前疫苗接种是预防该病的主要方法，该病容易引起雏鸡的免疫抑制，使病鸡对大肠杆菌、腺病毒、沙门氏菌、鸡球虫等病更易感，使马立克疫苗、新城疫疫苗等接种的反应能力下降，因此养殖户在养鸡过程中要特别注意诊断治疗。本文就一病例结合临床和实验室诊断进行分析，并对该病防治措施进行了总结。 关键词:鸡传染性法氏囊病 诊断 治疗
目 录
1 前言 ........................................................................................................ 1
1.1研究背景 . ....................................................................................... 1
1.2 国内外研究现状 . .......................................................................... 2
1.3 研究目的和意义 . .......................................................................... 2
2 一例鸡传染性法氏囊病的诊断与治疗 . ............................................... 3
2.1 发病情况 . ...................................................................................... 3
2.2 剖检病变 . ...................................................................................... 3
2.3 实验室诊断 . .................................................................................. 4
2.4治疗措施 . ....................................................................................... 5
3 结论与建议 ............................................................................................ 6
后记 ............................................................................................................ 7
参考文献 .................................................................................................... 8
1前言
1.1研究背景
鸡传染性法氏囊炎是雏鸡和青年鸡的一种急性、接触性传染病。各个品种的鸡均可发病，无季节性。目前主要已知的传染性法氏囊病毒有两个血清型，即血清Ⅰ型（鸡源性毒株）和血清Ⅱ型（火鸡源性毒株）。鸡对本病最易感染，潜伏期为2～3天，主要发生在2～15周龄的鸡，以3～6周龄的鸡最易感染。近年来，该病发病日龄已经大为扩展，小至10龄左右，大至136日龄鸡群均有发病的报道，成年鸡发病率低，成年鸡隐性感染较常见[1]。
本病根据临床症状可分为典型感染和（亚临床型）感染。典型病鸡早期症状是有些鸡自啄泄殖腔，病鸡表现为羽毛蓬松，采食减少，慢食或者不食，畏寒，常聚堆，精神委顿，随及出现腹泻，排出白色或黄白色样粪便，内含细石灰渣样物，干涸后呈现石灰状，肛门周围羽毛常被污染。严重者头垂地，闭眼呈昏睡状态。在后期体温低于正常，严重脱水，极度虚弱，常在发病后2天后死亡。
亚临床型主要见于1～3周龄的雏鸡，无明显临床症状。该型感染率高，发病率低，雏鸡死亡率高，表现为少数鸡精神不振，厌食，间歇性腹泻，震颤，高度虚弱，死亡率低，但病程和鸡群的整个流行期都较长，常在一个鸡群中反复发生，造成免疫抑制[2]。
病鸡和带毒鸡是最主要的传染源。病毒主要随病鸡和带毒鸡粪便排出，污染饲料、饮水和环境，使鸡群经消化道、呼吸道和眼结膜感染；各种用具、人员及昆虫也可以携带病毒，扩散传播。病毒在外界环境中极为稳定，在鸡舍内能够持续存在122天，特别耐热、耐阳光及紫外线照射。病毒耐酸不耐碱，pH12时可被灭活。3%的煤酚皂溶液、2%的次氯酸钠、5%的漂白粉、3%的福尔马林可在30 min内灭活病毒。
该病常与大肠杆菌病、新城疫、鸡毒支原体、鸡球虫病混合感染而使死亡率提高，随着养禽业的迅速发展与高度集约化饲养，鸡传染性法氏囊病已成为鸡群重要的疾病之一。
1.2国内外研究现状
快速诊断和治疗该病是防治关键。目前国内外的诊断方法多根据流行病学调查、临床症状、病理变化等多方面情况综合分析，做出初步诊断。
实验室检查可以通过病毒分离鉴定，鸡群在发病后的2～3天，法氏囊中的病毒含量最高，其次是脾和肾。取发病鸡的法氏囊和脾，经磨碎后，加灭菌生理盐水做5～10倍稀释，离心取上清液加入抗生素作用1小时左右，制成悬液，经鸡胚绒毛尿囊膜上接种于9～12日龄SPF 鸡胚。接种后3~5天后鸡胚死亡，胚胎全身水肿，头部和趾部充血和小点出血，肝有斑驳状坏死。在鸡胚中适应的IBDV 毒株也能适应于细胞培养，可用阳性血清在鸡胚上做中和试验来鉴定分离该病毒。 也可通过琼脂扩散试验，既可以检测抗原，也可以检测抗体。在制备好的琼脂平板上，用7孔打孔器准确打孔，中央的孔径约为4 mm，周边的孔径约为3 mm，中央孔距周围孔间距均为3 mm 。中间空放抗原，其余放抗体，37 ℃扩散24～48 h。通过观察被检样品孔与中心孔之间有无
沉淀线来判定结果。
将分离出的病毒经易感动物试验进行进一步的确诊，取病死鸡有典型病理变化的法氏囊磨碎制成悬液，经滴鼻和口服感染21～35日龄易感鸡，在感染后48～72 h出现临床症状，死后剖检见法氏囊有特征性病变。
IBD 已遍及世界各国，1985年以来，世界许多地方相继报道了变异株/血清亚型或超强毒株的出现[3-5]， 安徽省侯宏艳在2012年对分离到的2株AH01和AH02进行了VP2高变区序列的克隆和分析，认为这2株均为超强毒株[6]。 而VP2是宿主型特异性抗原和主要保护性抗原[7]，VP2 蛋白序列的变异使 IBD 呈现了新的流行特点，对养鸡业会造成更加严重的危害。
近年来国内外陆续报道分离出法氏囊病毒变异株，其致病特性以出现亚临床型症状为主，没有经典毒株所致的高死亡率及典型的腿肌出血等症状，最典型的病变是病鸡法氏囊迅速萎缩，导致严重的免疫抑制。当经常规法氏囊疫苗免疫的鸡群受到法氏囊病W 型（变异毒株）侵袭时，仍有较高的发病率和死亡率，这是当前某些地区鸡群发生传染性法氏囊病的突出特点[8]。
有研究发现，在使用同一疫苗的前提下，母源抗体水平低时可以进行早期疫苗接种，成功获得抗体；母源抗体水平高时早期免疫受到母源抗体的干扰，推迟免疫会收到更好的效果。另外，来源于不同种鸡群的种蛋，孵出的雏鸡母源抗体水平高低不一，严重影响免疫效果。过早接种疫苗，对有母源抗体的鸡不产生免疫应答；太迟接种，雏鸡易受野毒的侵袭。雏鸡母源抗体水平高低取决于种蛋来源、保存时间的长短及种鸡年龄等[9]。
其他因素影响免疫效果：生产过程中的免疫接种、气候骤变、营养不良、管理不善以及发生疾病等诸多因素，都可降低鸡体抵抗力，诱发免疫抑制，导致免疫失败。
1.3研究目的和意义
目前，该病在世界的许多国家和地区广泛流行，也是严重威胁我国养鸡业的重要传染病之一。 该病可使发病鸡群的死亡率和淘汰率增加，并可导致鸡只的免疫抑制，因此常给养鸡业造成巨大的经济损失。法氏囊是鸡的中枢免疫器官，鸡患传染性法氏囊病后使机体免疫机能下降，发病鸡日龄越早，免疫抑制越严重[10]。如鸡2周龄以前发生传染性法氏囊病会造成终身免疫抑制，从而降低机体对其他疾病的抵御能力，病鸡极易继发或并发其他细菌性或病毒性疾病，如大肠杆菌病、鸡新城疫等，所造成的间接损失往往超过传染性法氏囊病造成的直接损失。所以，建立快速诊断鉴别该病的方法，可以很大程度上减少养鸡业的损失。
2一例鸡传染性法氏囊病的诊断与治疗
鸡传染性法氏囊病是养禽业中重要的常见的一种疾病，鸡传染性法氏囊病（IBD ）是由双股 RNA 病毒科的传染性法氏囊病病毒（IBDV ）引起的鸡和火鸡的一种急性、高度接触性传染病。 该病主要侵害3～12周龄的幼鸡，破坏法氏囊中携带 IgM 的早期分化的B 淋巴细胞，导致鸡体体液免疫抑制，而常继发多种疫病[11]。它对养鸡生产的危害十分严重，分布很广，世界各地普遍发生，临床型主要发生于2~15周龄的雏鸡和成年鸡，各种品种的鸡均可感染，菜航鸡尤为易感，在易感鸡群中，感染率高达几乎100%，发病率7%～10%，有时达30%以上，死亡率不定。其典型特征是：早期症状是有些鸡自啄泄殖腔，病鸡表现为羽毛蓬松，采食减少，慢食或者不食，畏寒，常聚堆，震颤，高度虚弱，间歇性腹泻，排出白色或黄白色样粪便，肛门周围羽毛场被污染，肾脏有不同程度肿胀，腺胃乳头周围出血，尤以腺胃和肌胃交界处明显。2015年7月，泰州市海陵区九龙镇某鸡场散养鸡4000只疑似出现该病，经临床诊断和实验室诊断，现报告如下。
2.1. 发病情况
该鸡场从孵化厂购回雏鸡后，饲养和生长均正常，大约26日龄时，突然有25只发病，迅速将病鸡隔离，并用青霉素、链霉素治疗，饲料中拌入乳酸诺氟沙星辅助治疗，效果并不佳，死鸡仍然出现，晚上死亡15只，第2 d死亡17只，第3 d死亡70只，发病率高达50%；死亡率达20%。在调查中发现鸡舍通风不良，鸡群接种了法氏囊疫苗，但未进行带鸡消毒。病鸡主要厌食、呆立，羽毛蓬乱，畏寒战栗等，继而部分鸡有自行啄肛现象。随后病鸡排白色或黄白色水样便，肛门周围羽毛被粪便污染。通过病史及流行病学调查，临床症状，剖检病变等以及细菌学检查，琼脂扩散试验确诊该病为鸡传染性法氏囊病，迅速进行治疗组织病情扩散，现将诊疗过程介绍如下：
2.2剖检病变
2.2.1外部检查
检查鸡冠、羽毛、口腔、泄殖腔、皮肤、鸡爪等无异常。
2.2.2剖检与器官采集
剖检前用水将尸体表面及羽毛浸湿。将尸体仰卧于搪瓷盘内，用力掰开两腿，使髋关节脱位，拔掉颈、胸、腹正中部的羽毛，在胸骨嵴部纵行切开皮肤，然后向前、后延伸至嘴角和肛门，向两侧剥离颈，胸、腹部皮肤。观察皮肤下有充血、出血、水肿、坏死等病变，注胸部肌肉的丰满程度、颜色，有无出血、坏死。在脊椎两侧需找并观察胸腺的大小及颜色，有出血，坏死点。检查嗉囊内容物的数量及形状。
在后腹部，将腹壁横行切开。顺切口的两侧分别向剪断胸肋骨喙骨及锁骨，最后把整个胸壁翻向头部，显露出整个胸腔和腹腔。
体腔打开后，注意观察各脏器的位置、颜色、浆膜的状况，体腔内有无液体，各脏器间有无粘连。然后分别取出各个内脏器官。
2.2.3主要病变
法氏囊水肿、充血和出血，比正常重2倍，5天后法氏囊开始萎缩，切开后黏膜皱褶多混浊不清，黏膜表面有点状出血或弥漫性出血（图1）。严重者法氏囊内有干酪样渗出物，肾脏有不同程度肿胀，腺胃和肌胃交界处见有条状出血点（图2）。
图1 鸡法氏囊出血明显 图2 鸡腿肌条纹状出血
2.3. 实验室诊断
2.3.1材料
2.3.1.1病料来源
送检的病雏鸡6只。
2.3.1.2器材
普通光学显微镜、恒温培养箱、接种环、打孔器、酒精灯、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、洁净平皿若干。
美兰染液、优质琼脂糖、0.01 mol/L柳硫汞、pH 值为7.4磷酸盐缓冲液。
2.3.2方法
2.3.2.1细菌学检查
（1）触片镜检：取病鸡的肝脏和法氏囊无菌操作触片，经美兰染色后镜检。
（2
）细菌培养：无菌操作取病死鸡的肝脏、脾脏、法氏囊，接种于鲜血琼脂培养基、麦康
凯琼脂培养基上，置37℃恒温箱中培养，观察是否有菌落生长。
2.3.2.2琼脂扩散试验检查
（1）制板打孔：取优质琼脂糖1.0~1.2 g，放入含0.02%柳硫汞pH 值为7.4浓度为0.01 mol/L的100 ml磷酸盐缓冲盐水中。然后置水浴中加热煮沸，中间振荡数次，促其溶化均匀。取洁净平皿，放在平台上，注入已溶化的热琼脂液。室温下冷却凝固后，用7孔打孔器准确打孔，中央孔孔径约为4 mm，周边孔孔径约为3 mm，中央孔距周围孔间距均为3 mm。
（2）加样完后，将琼脂板置于湿盒中，37℃扩散24~48 h。
（3）结果判定：在被检样品孔与中心孔之间有明显的沉淀线，并与标准阳性血清孔的沉淀线互相融合者判为阳性；不出现沉淀线者判为阴性；已知抗原与阳性血清之间所产生的沉淀线末端向被检样品孔内侧偏弯时，则该被检样品判为弱阳性。有时被检材料可能出现两条以上沉淀线，其中一条与已知抗原或阳性血清的沉淀线融合者判为强阳性。
2.3.3检查结果
2.3.3.1细菌学检查结果
显微镜下镜检，未查到细菌，肝脏、脾脏接种于鲜血琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基上培养24 h后，结果无任何细菌生长。
2.3.3.2琼脂扩散试验结果
琼脂平板上被检样品孔与中心孔之间形成清晰的沉淀线，并与周边已知抗原或阳性血清孔的沉淀线互相融合者判为阳性。
根据病史流行病学调查，临床症状，剖检病变等临床诊断以及细菌分离培养、琼脂扩散试验等实验室诊断，初步诊断该鸡群发病死亡原因由鸡传染性法氏囊病毒感染所致。
2.4. 治疗措施
首先做好鸡只的隔离工作，对发病鸡舍应严格封锁，并对发病的鸡舍、鸡群、场地、用具等用0.3 %的过氧乙酸进行消毒。同时降低饲料中蛋白质含量，提高维生素含量。用口服补液盐和电多维饮水，防止鸡脱水，以保持机体水、电解质、营养的平衡，促进康复。全群肌肉注射传染性法氏囊病高免蛋黄液，同时使用特效护囊清，能有效地提高治疗效果，同时又能避免鸡传染性法氏囊病的反复发作。
通5天后回访，除症状严重的病鸡死亡外，鸡群恢复正常，该病得到有效控制。
3结论与建议
该病尚无有效治疗方法，必要时在发病早期可用传染性法氏囊病高免血清或高免卵黄液进行肌肉注射， 同时配合使用抗生素，防止继发感染。 还可在饮水中加入 0.2 %的肾肿解毒药、0.1 %的 VC 。
在防控该病时，首先要做好环境的消毒工作，特别是育雏室的消毒，尤其是种蛋入孵前必须进行严格消毒。对环境、鸡舍、用具、笼具等进行消毒，第1 次消毒结束后，进行彻底清扫和冲洗，然后再进行 2～3 次的消毒。因为雏鸡从疫苗接种到抗体的产生需要一段时间，所以必须将经过免疫接种的雏鸡，放置在彻底消毒的育雏室内，以预防 IBDV 的早期感染。如果被 IBDV 污染后的环境不采取严格、认真、彻底的消毒措施，在污染环境中饲养的雏鸡由于大量 IBDV 先于疫苗侵害法氏囊，导致疫苗接种后不能产生有效的免疫力。
同时，养鸡场也要加强管理，做好卫生消毒工作，防止从外边将病毒带入鸡场。一旦发病，应及时处理病鸡，并进行彻底消毒。消毒可选用以下药物和方法：喷洒0.2 %的过氧乙酸或2%的氯酸钠、5 %的漂白粉等。门前消毒池宜用2 %的戊二醛溶液，每2~3周更换1次。
种鸡群经疫苗免疫后，可产生高的抗体水平，并可将其传递给子代。如果种鸡在18～20周龄和 40～42鸡可获得较整齐和较高的母源抗体，在2～3周龄内得到较好的保护，能防止雏鸡早期感染和免疫抑制。但是，高母源抗体可干扰主动免疫，因此对雏鸡应选择合适的疫苗和首免日龄。 一旦发现该病，首先做好鸡只的隔离工作，对发病鸡舍应严格封锁，并对发病的鸡舍、鸡群、场地、用具等用0.3 %的过氧乙酸进行消毒。在育雏阶段如果发生该病，应注意提高育雏舍的温度。 同时降低饲料中蛋白质含量，提高维生素含量。用口服补液盐和电解多维饮水，防止鸡脱水，以保持机体水、电解质、营养的平衡，促进康复。全群肌肉注射传染性法氏囊病高免蛋黄液，同时使用特效护囊清，能有效地提高治疗效果，同时又能避免鸡传染性法氏囊病的反复。
后记
此次所诊治的病例是本人在泰州市海陵区九龙镇兽医站工作期间所接触到的病例，此篇论文匡存林教授给予了耐心指导，感谢我的论文导师匡存林教授在此次论文中对我的悉心帮助，以及一同参与该病诊治的同事。最后感谢百忙中抽出时间对本文评审并提出宝贵意见的各位老师。
参考文献
[1] 殷震，刘景华. .动物病毒学[M]. 2版. 北京：科学出版社，1997.
[2] 李明峰，孙宏鑫，韩书祥，等. .家禽病毒性免疫抑制病的危害及其防制措施[J]. 中国家禽，2006，28（9）：44-46.
[3] 王桂军，魏建忠，吴忆春，等. 安徽地区IBDV 超强毒株的分离鉴定和VP2基因序列分析 [J]. 畜牧与兽医，2006，38（8）：4-7.
[4] 胡永新，尹燕博，许江涛，等. 十一株鸡传染性法氏囊炎病毒VP2全基因序列的特征分析[J]. 中国兽医科学，2011，41（4）：359-366.
[5] KUTA N，ATTRACHE JEL，VILLEGAS P，et al. Molecular characterization of brazilian infectious bursaldisease virus[J]. Avian Disease，2001，45:297-306.
[6] 侯宏艳，潘孝成，赵瑞宏，等. 鸡传染性法氏囊病病毒分离鉴定及其VP2基因高变区序列分析[J]. 国外畜牧学— —猪与禽，2012（5）：63-66.
[7] 何秀苗，阳秀英，韦平. 传染性法氏囊病及其病原分子生物学研究进展[J]. 动物医学进展，2007，28（2）：48-51.
[8] 于海，张丽，常维山，等. 鸡传染性法氏囊病超强毒的流行特点、病因及防治对策[J]. 山东家禽，2003（12）：10.
[9] 赵启韬，井庆川，吴洪涛，等. 鸡传染性法氏囊病防制研究进展[J]. 山东家禽，2003（10）：20.
[10] 付旭彬，张少华，李守军. 鸡传染性法氏囊病发展趋势[J]. 中国禽业导刊，2003（10）：21.
[11] VAN DEN BERG TP. Acute infectious bursal disease inpoultry: a review [J]. Avian Pathology，2000，29：175 -194.
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鸡传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病病毒（IBDV ）引起仔鸡的一种急性、高度传染性疾病。目前疫苗接种是预防该病的主要方法，该病容易引起雏鸡的免疫抑制，使病鸡对大肠杆菌、腺病毒、沙门氏菌、鸡球虫等病更易感，使马立克疫苗、新城疫疫苗等接种的反应能力下降，因此养殖户在养鸡过程中要特别注意诊断治疗。本文就一病例结合临床和实验室诊断进行分析，并对该病防治措施进行了总结。 关键词:鸡传染性法氏囊病 诊断 治疗
目 录
1 前言 ........................................................................................................ 1
1.1研究背景 . ....................................................................................... 1
1.2 国内外研究现状 . .......................................................................... 2
1.3 研究目的和意义 . .......................................................................... 2
2 一例鸡传染性法氏囊病的诊断与治疗 . ............................................... 3
2.1 发病情况 . ...................................................................................... 3
2.2 剖检病变 . ...................................................................................... 3
2.3 实验室诊断 . .................................................................................. 4
2.4治疗措施 . ....................................................................................... 5
3 结论与建议 ............................................................................................ 6
后记 ............................................................................................................ 7
参考文献 .................................................................................................... 8
1前言
1.1研究背景
鸡传染性法氏囊炎是雏鸡和青年鸡的一种急性、接触性传染病。各个品种的鸡均可发病，无季节性。目前主要已知的传染性法氏囊病毒有两个血清型，即血清Ⅰ型（鸡源性毒株）和血清Ⅱ型（火鸡源性毒株）。鸡对本病最易感染，潜伏期为2～3天，主要发生在2～15周龄的鸡，以3～6周龄的鸡最易感染。近年来，该病发病日龄已经大为扩展，小至10龄左右，大至136日龄鸡群均有发病的报道，成年鸡发病率低，成年鸡隐性感染较常见[1]。
本病根据临床症状可分为典型感染和（亚临床型）感染。典型病鸡早期症状是有些鸡自啄泄殖腔，病鸡表现为羽毛蓬松，采食减少，慢食或者不食，畏寒，常聚堆，精神委顿，随及出现腹泻，排出白色或黄白色样粪便，内含细石灰渣样物，干涸后呈现石灰状，肛门周围羽毛常被污染。严重者头垂地，闭眼呈昏睡状态。在后期体温低于正常，严重脱水，极度虚弱，常在发病后2天后死亡。
亚临床型主要见于1～3周龄的雏鸡，无明显临床症状。该型感染率高，发病率低，雏鸡死亡率高，表现为少数鸡精神不振，厌食，间歇性腹泻，震颤，高度虚弱，死亡率低，但病程和鸡群的整个流行期都较长，常在一个鸡群中反复发生，造成免疫抑制[2]。
病鸡和带毒鸡是最主要的传染源。病毒主要随病鸡和带毒鸡粪便排出，污染饲料、饮水和环境，使鸡群经消化道、呼吸道和眼结膜感染；各种用具、人员及昆虫也可以携带病毒，扩散传播。病毒在外界环境中极为稳定，在鸡舍内能够持续存在122天，特别耐热、耐阳光及紫外线照射。病毒耐酸不耐碱，pH12时可被灭活。3%的煤酚皂溶液、2%的次氯酸钠、5%的漂白粉、3%的福尔马林可在30 min内灭活病毒。
该病常与大肠杆菌病、新城疫、鸡毒支原体、鸡球虫病混合感染而使死亡率提高，随着养禽业的迅速发展与高度集约化饲养，鸡传染性法氏囊病已成为鸡群重要的疾病之一。
1.2国内外研究现状
快速诊断和治疗该病是防治关键。目前国内外的诊断方法多根据流行病学调查、临床症状、病理变化等多方面情况综合分析，做出初步诊断。
实验室检查可以通过病毒分离鉴定，鸡群在发病后的2～3天，法氏囊中的病毒含量最高，其次是脾和肾。取发病鸡的法氏囊和脾，经磨碎后，加灭菌生理盐水做5～10倍稀释，离心取上清液加入抗生素作用1小时左右，制成悬液，经鸡胚绒毛尿囊膜上接种于9～12日龄SPF 鸡胚。接种后3~5天后鸡胚死亡，胚胎全身水肿，头部和趾部充血和小点出血，肝有斑驳状坏死。在鸡胚中适应的IBDV 毒株也能适应于细胞培养，可用阳性血清在鸡胚上做中和试验来鉴定分离该病毒。 也可通过琼脂扩散试验，既可以检测抗原，也可以检测抗体。在制备好的琼脂平板上，用7孔打孔器准确打孔，中央的孔径约为4 mm，周边的孔径约为3 mm，中央孔距周围孔间距均为3 mm 。中间空放抗原，其余放抗体，37 ℃扩散24～48 h。通过观察被检样品孔与中心孔之间有无
沉淀线来判定结果。
将分离出的病毒经易感动物试验进行进一步的确诊，取病死鸡有典型病理变化的法氏囊磨碎制成悬液，经滴鼻和口服感染21～35日龄易感鸡，在感染后48～72 h出现临床症状，死后剖检见法氏囊有特征性病变。
IBD 已遍及世界各国，1985年以来，世界许多地方相继报道了变异株/血清亚型或超强毒株的出现[3-5]， 安徽省侯宏艳在2012年对分离到的2株AH01和AH02进行了VP2高变区序列的克隆和分析，认为这2株均为超强毒株[6]。 而VP2是宿主型特异性抗原和主要保护性抗原[7]，VP2 蛋白序列的变异使 IBD 呈现了新的流行特点，对养鸡业会造成更加严重的危害。
近年来国内外陆续报道分离出法氏囊病毒变异株，其致病特性以出现亚临床型症状为主，没有经典毒株所致的高死亡率及典型的腿肌出血等症状，最典型的病变是病鸡法氏囊迅速萎缩，导致严重的免疫抑制。当经常规法氏囊疫苗免疫的鸡群受到法氏囊病W 型（变异毒株）侵袭时，仍有较高的发病率和死亡率，这是当前某些地区鸡群发生传染性法氏囊病的突出特点[8]。
有研究发现，在使用同一疫苗的前提下，母源抗体水平低时可以进行早期疫苗接种，成功获得抗体；母源抗体水平高时早期免疫受到母源抗体的干扰，推迟免疫会收到更好的效果。另外，来源于不同种鸡群的种蛋，孵出的雏鸡母源抗体水平高低不一，严重影响免疫效果。过早接种疫苗，对有母源抗体的鸡不产生免疫应答；太迟接种，雏鸡易受野毒的侵袭。雏鸡母源抗体水平高低取决于种蛋来源、保存时间的长短及种鸡年龄等[9]。
其他因素影响免疫效果：生产过程中的免疫接种、气候骤变、营养不良、管理不善以及发生疾病等诸多因素，都可降低鸡体抵抗力，诱发免疫抑制，导致免疫失败。
1.3研究目的和意义
目前，该病在世界的许多国家和地区广泛流行，也是严重威胁我国养鸡业的重要传染病之一。 该病可使发病鸡群的死亡率和淘汰率增加，并可导致鸡只的免疫抑制，因此常给养鸡业造成巨大的经济损失。法氏囊是鸡的中枢免疫器官，鸡患传染性法氏囊病后使机体免疫机能下降，发病鸡日龄越早，免疫抑制越严重[10]。如鸡2周龄以前发生传染性法氏囊病会造成终身免疫抑制，从而降低机体对其他疾病的抵御能力，病鸡极易继发或并发其他细菌性或病毒性疾病，如大肠杆菌病、鸡新城疫等，所造成的间接损失往往超过传染性法氏囊病造成的直接损失。所以，建立快速诊断鉴别该病的方法，可以很大程度上减少养鸡业的损失。
2一例鸡传染性法氏囊病的诊断与治疗
鸡传染性法氏囊病是养禽业中重要的常见的一种疾病，鸡传染性法氏囊病（IBD ）是由双股 RNA 病毒科的传染性法氏囊病病毒（IBDV ）引起的鸡和火鸡的一种急性、高度接触性传染病。 该病主要侵害3～12周龄的幼鸡，破坏法氏囊中携带 IgM 的早期分化的B 淋巴细胞，导致鸡体体液免疫抑制，而常继发多种疫病[11]。它对养鸡生产的危害十分严重，分布很广，世界各地普遍发生，临床型主要发生于2~15周龄的雏鸡和成年鸡，各种品种的鸡均可感染，菜航鸡尤为易感，在易感鸡群中，感染率高达几乎100%，发病率7%～10%，有时达30%以上，死亡率不定。其典型特征是：早期症状是有些鸡自啄泄殖腔，病鸡表现为羽毛蓬松，采食减少，慢食或者不食，畏寒，常聚堆，震颤，高度虚弱，间歇性腹泻，排出白色或黄白色样粪便，肛门周围羽毛场被污染，肾脏有不同程度肿胀，腺胃乳头周围出血，尤以腺胃和肌胃交界处明显。2015年7月，泰州市海陵区九龙镇某鸡场散养鸡4000只疑似出现该病，经临床诊断和实验室诊断，现报告如下。
2.1. 发病情况
该鸡场从孵化厂购回雏鸡后，饲养和生长均正常，大约26日龄时，突然有25只发病，迅速将病鸡隔离，并用青霉素、链霉素治疗，饲料中拌入乳酸诺氟沙星辅助治疗，效果并不佳，死鸡仍然出现，晚上死亡15只，第2 d死亡17只，第3 d死亡70只，发病率高达50%；死亡率达20%。在调查中发现鸡舍通风不良，鸡群接种了法氏囊疫苗，但未进行带鸡消毒。病鸡主要厌食、呆立，羽毛蓬乱，畏寒战栗等，继而部分鸡有自行啄肛现象。随后病鸡排白色或黄白色水样便，肛门周围羽毛被粪便污染。通过病史及流行病学调查，临床症状，剖检病变等以及细菌学检查，琼脂扩散试验确诊该病为鸡传染性法氏囊病，迅速进行治疗组织病情扩散，现将诊疗过程介绍如下：
2.2剖检病变
2.2.1外部检查
检查鸡冠、羽毛、口腔、泄殖腔、皮肤、鸡爪等无异常。
2.2.2剖检与器官采集
剖检前用水将尸体表面及羽毛浸湿。将尸体仰卧于搪瓷盘内，用力掰开两腿，使髋关节脱位，拔掉颈、胸、腹正中部的羽毛，在胸骨嵴部纵行切开皮肤，然后向前、后延伸至嘴角和肛门，向两侧剥离颈，胸、腹部皮肤。观察皮肤下有充血、出血、水肿、坏死等病变，注胸部肌肉的丰满程度、颜色，有无出血、坏死。在脊椎两侧需找并观察胸腺的大小及颜色，有出血，坏死点。检查嗉囊内容物的数量及形状。
在后腹部，将腹壁横行切开。顺切口的两侧分别向剪断胸肋骨喙骨及锁骨，最后把整个胸壁翻向头部，显露出整个胸腔和腹腔。
体腔打开后，注意观察各脏器的位置、颜色、浆膜的状况，体腔内有无液体，各脏器间有无粘连。然后分别取出各个内脏器官。
2.2.3主要病变
法氏囊水肿、充血和出血，比正常重2倍，5天后法氏囊开始萎缩，切开后黏膜皱褶多混浊不清，黏膜表面有点状出血或弥漫性出血（图1）。严重者法氏囊内有干酪样渗出物，肾脏有不同程度肿胀，腺胃和肌胃交界处见有条状出血点（图2）。
图1 鸡法氏囊出血明显 图2 鸡腿肌条纹状出血
2.3. 实验室诊断
2.3.1材料
2.3.1.1病料来源
送检的病雏鸡6只。
2.3.1.2器材
普通光学显微镜、恒温培养箱、接种环、打孔器、酒精灯、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、洁净平皿若干。
美兰染液、优质琼脂糖、0.01 mol/L柳硫汞、pH 值为7.4磷酸盐缓冲液。
2.3.2方法
2.3.2.1细菌学检查
（1）触片镜检：取病鸡的肝脏和法氏囊无菌操作触片，经美兰染色后镜检。
（2
）细菌培养：无菌操作取病死鸡的肝脏、脾脏、法氏囊，接种于鲜血琼脂培养基、麦康
凯琼脂培养基上，置37℃恒温箱中培养，观察是否有菌落生长。
2.3.2.2琼脂扩散试验检查
（1）制板打孔：取优质琼脂糖1.0~1.2 g，放入含0.02%柳硫汞pH 值为7.4浓度为0.01 mol/L的100 ml磷酸盐缓冲盐水中。然后置水浴中加热煮沸，中间振荡数次，促其溶化均匀。取洁净平皿，放在平台上，注入已溶化的热琼脂液。室温下冷却凝固后，用7孔打孔器准确打孔，中央孔孔径约为4 mm，周边孔孔径约为3 mm，中央孔距周围孔间距均为3 mm。
（2）加样完后，将琼脂板置于湿盒中，37℃扩散24~48 h。
（3）结果判定：在被检样品孔与中心孔之间有明显的沉淀线，并与标准阳性血清孔的沉淀线互相融合者判为阳性；不出现沉淀线者判为阴性；已知抗原与阳性血清之间所产生的沉淀线末端向被检样品孔内侧偏弯时，则该被检样品判为弱阳性。有时被检材料可能出现两条以上沉淀线，其中一条与已知抗原或阳性血清的沉淀线融合者判为强阳性。
2.3.3检查结果
2.3.3.1细菌学检查结果
显微镜下镜检，未查到细菌，肝脏、脾脏接种于鲜血琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基上培养24 h后，结果无任何细菌生长。
2.3.3.2琼脂扩散试验结果
琼脂平板上被检样品孔与中心孔之间形成清晰的沉淀线，并与周边已知抗原或阳性血清孔的沉淀线互相融合者判为阳性。
根据病史流行病学调查，临床症状，剖检病变等临床诊断以及细菌分离培养、琼脂扩散试验等实验室诊断，初步诊断该鸡群发病死亡原因由鸡传染性法氏囊病毒感染所致。
2.4. 治疗措施
首先做好鸡只的隔离工作，对发病鸡舍应严格封锁，并对发病的鸡舍、鸡群、场地、用具等用0.3 %的过氧乙酸进行消毒。同时降低饲料中蛋白质含量，提高维生素含量。用口服补液盐和电多维饮水，防止鸡脱水，以保持机体水、电解质、营养的平衡，促进康复。全群肌肉注射传染性法氏囊病高免蛋黄液，同时使用特效护囊清，能有效地提高治疗效果，同时又能避免鸡传染性法氏囊病的反复发作。
通5天后回访，除症状严重的病鸡死亡外，鸡群恢复正常，该病得到有效控制。
3结论与建议
该病尚无有效治疗方法，必要时在发病早期可用传染性法氏囊病高免血清或高免卵黄液进行肌肉注射， 同时配合使用抗生素，防止继发感染。 还可在饮水中加入 0.2 %的肾肿解毒药、0.1 %的 VC 。
在防控该病时，首先要做好环境的消毒工作，特别是育雏室的消毒，尤其是种蛋入孵前必须进行严格消毒。对环境、鸡舍、用具、笼具等进行消毒，第1 次消毒结束后，进行彻底清扫和冲洗，然后再进行 2～3 次的消毒。因为雏鸡从疫苗接种到抗体的产生需要一段时间，所以必须将经过免疫接种的雏鸡，放置在彻底消毒的育雏室内，以预防 IBDV 的早期感染。如果被 IBDV 污染后的环境不采取严格、认真、彻底的消毒措施，在污染环境中饲养的雏鸡由于大量 IBDV 先于疫苗侵害法氏囊，导致疫苗接种后不能产生有效的免疫力。
同时，养鸡场也要加强管理，做好卫生消毒工作，防止从外边将病毒带入鸡场。一旦发病，应及时处理病鸡，并进行彻底消毒。消毒可选用以下药物和方法：喷洒0.2 %的过氧乙酸或2%的氯酸钠、5 %的漂白粉等。门前消毒池宜用2 %的戊二醛溶液，每2~3周更换1次。
种鸡群经疫苗免疫后，可产生高的抗体水平，并可将其传递给子代。如果种鸡在18～20周龄和 40～42鸡可获得较整齐和较高的母源抗体，在2～3周龄内得到较好的保护，能防止雏鸡早期感染和免疫抑制。但是，高母源抗体可干扰主动免疫，因此对雏鸡应选择合适的疫苗和首免日龄。 一旦发现该病，首先做好鸡只的隔离工作，对发病鸡舍应严格封锁，并对发病的鸡舍、鸡群、场地、用具等用0.3 %的过氧乙酸进行消毒。在育雏阶段如果发生该病，应注意提高育雏舍的温度。 同时降低饲料中蛋白质含量，提高维生素含量。用口服补液盐和电解多维饮水，防止鸡脱水，以保持机体水、电解质、营养的平衡，促进康复。全群肌肉注射传染性法氏囊病高免蛋黄液，同时使用特效护囊清，能有效地提高治疗效果，同时又能避免鸡传染性法氏囊病的反复。
后记
此次所诊治的病例是本人在泰州市海陵区九龙镇兽医站工作期间所接触到的病例，此篇论文匡存林教授给予了耐心指导，感谢我的论文导师匡存林教授在此次论文中对我的悉心帮助，以及一同参与该病诊治的同事。最后感谢百忙中抽出时间对本文评审并提出宝贵意见的各位老师。
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