无菌室标准化规程及验收规范
1. 目的
本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。
2. 适用范围
生测实验室
3. 责任者
QC 主管生测员
4. 定义
无
5. 安全注意事项
严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。
6. 规程
6.1. 无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。
6.2. 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。
6.3. 严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。
6.4. 无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。
6.5. 无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。
6.6. 需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。
6.7. 工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手) ，方可进入无菌室进行操作。
6.8. 无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进
行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。
6.9. 供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。
6.10. 每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。
6.11. 吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。
6.12. 接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。
6.13. 带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。
6.14. 如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。
6.15. 凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。
6.16. 无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm 的无菌培养皿若干， 无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml ，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。
7. 参照
《药品卫生检验方法》
《中国药品检验标准操作规范》中(无菌检查法) 章节
中华人民共和国医药行业标准YY/T0188.6-1995《药品检验操作规程》
8. 分发部门
质量管理部
无菌室技术指导说明
在获得了无菌环境和无菌材料后，我们还要保持无菌状态，才能对某种特定的已知微生物进行研究或利用它们的功能，否则外界的各种微生物很容易混入。外界不相干的微生物混入的现象，在微生物学中我们叫做污染杂菌。防止污染是微生物学工作中十分关键的技术。一方面是彻底灭菌，另一方面防止污染，是无菌技术的两个方面。另外，我们还要防止所研究的微生物，特别是致病微生物或经过基因工程改造了的本来自然界不存在的微生物从我们的实验容器中逃逸到外界环境中去。为了这些目的，在微生物学中，有许多措施。
无菌室一般是在微生物实验室内专辟一个小房间。可以用板材和玻璃建造。面积不宜过大，约4—5平方米即可，高2.5米左右。无菌室外要设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭。室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢，便于清洗。工作台的台面应该处于水平状态。无菌室和缓冲间都装有紫外线灯，无菌室的紫外线灯距离工作台面1米。工作人员进入无菌室应穿灭过菌的服装，戴帽子。
当前无菌室多存在于微生物工厂，一般实验室则使用超净台。超净台其主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃。通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面，使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。而且在接近外部的一方有一道高速流动的气帘防止外部带菌空气进入。
在条件较困难的地方，也可以用木制无菌箱代替超净台。无菌箱结构简单，便于移动，箱正面开有两个洞，不操作时用推拉式小门挡住，操作时可以将双臂伸进去。正面上部装有玻璃，便于在内部操作，箱内部装有紫外线灯，从侧面小门可以放进去器具和菌种等。
无菌操作技术当前不仅在微生物学研究和应用上起着举足轻重的作用，而且在许多生物技术中也被广泛应用。例如转基因技术、单克隆抗体技术等。
无菌室建设要求使用与管理
无菌室的要求
1．工作室应矮小、平整，面积只需4米2左右，高2.2—2.3米，内部装修应平整、光滑，无凹凸不平或棱角等，四壁及屋顶应用不透水之材质，便于擦洗及杀菌
2．室内采光面积大，从室外应能看到室内情况。
3．为保证无菌室的洁净，无菌室周围需设缓冲走廊，走廊旁再设缓冲间，其面积可小于无菌室。
4．无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有日光灯及供消毒空气用紫外灯，杀菌紫外灯离工作台以1米为宜 ，其电源开关均应设在室外。
5．无菌室与缓冲间进出口应设拉门，门与窗平齐，门缝要封紧，两门应错开，以免空气对流造成污染。
6．无菌室的使用与管理
（1） 无菌室应保持清洁整齐，室内仅存放必须的检验用具如酒精灯、酒精棉、火柴、镊子、接种针、接种环、玻璃铅笔等。&不要放与检测无关的物品
（2） 室内检验用具及凳桌等保持固定位置，不随便移动。
（3） 每2—3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液喷雾消毒空气，最后紫外灯杀菌半小时
（4） 定期检查室内空气无菌状况，细菌数应控制在10个以下，发现不符合要求时，应立即彻底消毒灭菌。/无菌室无菌程度的测定方法：取普通肉汤琼脂平板、改良马丁培养基平板各3个（平板直径均9厘米），置无菌室各工作位置上，开盖曝露半小时，然后倒置进行培养，测细菌总数应置37℃温箱培养48小时；测霉菌数则应置27℃温箱培养5天。细菌`霉菌总数均不得超过10个为 。
（5） 无菌室杀菌前，应将所有物品置于操作之部位（待检物例外），然后打开紫外灯杀菌30分钟，时间一到，关闭紫外灯待用
（6） 进入无菌室前，必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。
（7） 操作应严格按照无菌操作规定进行，操作中少说话，不喧哗，以保持环境的无菌状态。 器材及场所的灭菌消毒
微生物检验用器材及场所必须进行灭菌或消毒处理，不同的对象采用不同的处理方法
1． 高压蒸汽灭菌: 工作服、口罩、稀释液等，置高压杀菌锅内，一般采用121℃灭菌半小时, 当然不同的培养基有不同的要求, 应分别处理
2． 火焰灭菌： 接种针、接种环等可直接火焰灭菌
3． 高温干燥灭菌： 各种玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃灭菌2小时
4． 一 般消毒: 无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌，必须用其他方法进行消毒处理，采用2%石炭酸或来苏儿水溶液擦拭消毒，工作人员的手也用此法进行消毒
5． 空气的消毒： 开启紫外灯照射30—60分钟 即可。
操作要领
准备工作
1． 先进行无菌室空间的消毒，开启紫外灯30—60分钟
2． 检验用的有关器材， 搬入无菌室前必须分别进会灭菌消毒
3． 操作人员必须将手清洗消毒，穿戴好无菌工作衣、帽和鞋，才能进入无菌室
4． 进入无菌室后再一次消毒手部，然后才进行检验操作
操作过程注意事项
1． 动作要轻，不能太快，以免搅动空气增加污染；玻璃器皿也应轻取轻放，以免破损污染环境
2． 操作应在近火焰区进行。
3． 接种环、接种针等金属器材使用前后均需灼烧，灼烧时先通过内焰，使残物烘干后再灼烧灭菌
4． 使用吸管时，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必须用洗耳球操作。
5． 观察平板时不好 开盖，如欲沾取菌落检查时，必需靠近火焰区操作，平皿盖也不能 大
开，而是上下盖适当开缝。
6． 进行可疑致病菌涂片染色时，应使用夹子夹持玻片，切勿用手 直接拿玻片，以免造成污染，用过的玻片也应置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗涤。
7． 工作结束，收拾好工作台上的样品及器材，最后用消毒液擦拭工作台。
无菌室规程
一, 无菌室的建设:
1. 无菌室应建在较洁净的环境内, 附近无污染源.
2. 无菌室内部装修应平整, 光滑, 无凹凸不平或棱角等, 四壁及屋顶应用不透水的材质, 便于擦洗及杀菌. 无菌室内的操作台, 椅子的材质也应是易清洗消毒的.
3. 室内采光面积大, 从室外应能看到室内情况. 室内门窗结构应密合, 并尽量减少活动窗口面积.
4. 无菌室应设有工作间, 缓冲间和更衣间, 其内均应设有消毒设备, 如选用紫外灯, 则其离地高度不能超过2.2米. 消毒设备的电源开关均应设在室外.
5. 工作间与缓冲间进出口应设拉门, 门缝要封紧, 两门应错开, 以免空气对流造成污染.
6. 无菌室内不可使用中央空调, 应使用带有过滤系统的空调. 无菌室内温度应保持在20-24℃, 湿度保持在45-60%.
7. 无菌室内不可设置水槽和水龙头.
二, 无菌室的使用与管理:
1. 无菌室应保持清洁整齐, 室内仅存放最必须的检验用具如酒精灯, 酒精棉, 打火机, 镊子, 接种针, 接种环等, 与检验无关的物品不得入内.
2. 无菌室应备有工作浓度的消毒液, 如:5%的甲酚溶液,75%的酒精,0.1%的新洁尔灭等.
3. 定期检查室内空气无菌状况, 细菌数应控制在10个以下, 发现不符合要求时, 应立即彻底消毒灭菌, 并重复检查.
4. 无菌室杀菌前, 应将所有物品置于操作之部位(供试品例外), 然后打开紫外灯杀菌30分钟.
紫外灯关闭30分钟后, 工作人员方可入内.
5. 工作人员在进入无菌室前, 必须用肥皂洗手, 然后更衣室更换专用工作服, 帽, 口罩, 鞋, 方可进入无菌室.
6. 从室外带入无菌室内的所有物品表面要用75%酒精或紫外照射预先消毒. 无菌操作前用75%酒精消毒手掌, 手背.
7. 供试品在检查前, 应保持外包装完整, 不得开启, 以防污染. 检查前, 用75%的酒精棉球消毒外表面.
8. 每次操作过程中, 均应作阴性对照, 以检查无菌操作的可靠性.
9. 接种针使用前后, 必须通过火焰灼烧灭菌, 待冷却后, 方可接触菌种.
10. 操作过程中, 如有菌液洒在桌上或地上, 应立即用5%石炭酸溶液或3%的来苏水倾覆被污染处至少30分钟, 再作处理. 工作衣帽等受到菌液污染时, 应立即脱去, 高压蒸汽灭菌后洗涤.
11. 凡是带有活菌的物品, 必须经过消毒后, 才能清洗.
12. 操作应严格按照无菌操作规定进行, 操作中少说话, 不喧哗, 以保持环境的无菌状态.
13. 操作完毕, 应及时清理无菌室, 再用紫外灯辐照灭菌30分钟.
14. 每2-3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台, 门, 窗, 桌, 椅及地面, 然后用3%石炭酸水溶液喷雾消毒空气, 最后紫外灯杀菌半小时.
三, 无菌室器具及空间的灭菌消毒方法:
1. 培养基, 药品和生理盐水:采用高压蒸汽灭菌, 一般为121℃15分钟, 有的培养基有特殊要求, 应分别处理.
2. 玻璃器皿, 剪刀, 镊子:高温干燥灭菌, 置于干燥箱中160℃灭菌2小时.
3. 接种针, 接种环:直接用火焰灼烧灭菌.
4. 工作服, 口罩, 帽子等:采用高压蒸汽灭菌, 一般为121℃30分钟; 也可以用臭氧发生器灭菌,1小时.
5. 无菌室内的工作台, 椅子等:可以用2%石炭酸水溶液擦拭.
6. 空气:开启紫外灯照射30-60分钟; 也可以用臭氧发生器灭菌,1小时.
无菌室标准化规程及验收规范
1. 目的
本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。
2. 适用范围
生测实验室
3. 责任者
QC 主管生测员
4. 定义
无
5. 安全注意事项
严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。
6. 规程
6.1. 无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。
6.2. 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。
6.3. 严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。
6.4. 无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。
6.5. 无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。
6.6. 需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。
6.7. 工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手) ，方可进入无菌室进行操作。
6.8. 无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进
行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。
6.9. 供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。
6.10. 每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。
6.11. 吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。
6.12. 接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。
6.13. 带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。
6.14. 如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。
6.15. 凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。
6.16. 无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm 的无菌培养皿若干， 无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml ，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。
7. 参照
《药品卫生检验方法》
《中国药品检验标准操作规范》中(无菌检查法) 章节
中华人民共和国医药行业标准YY/T0188.6-1995《药品检验操作规程》
8. 分发部门
质量管理部
无菌室技术指导说明
在获得了无菌环境和无菌材料后，我们还要保持无菌状态，才能对某种特定的已知微生物进行研究或利用它们的功能，否则外界的各种微生物很容易混入。外界不相干的微生物混入的现象，在微生物学中我们叫做污染杂菌。防止污染是微生物学工作中十分关键的技术。一方面是彻底灭菌，另一方面防止污染，是无菌技术的两个方面。另外，我们还要防止所研究的微生物，特别是致病微生物或经过基因工程改造了的本来自然界不存在的微生物从我们的实验容器中逃逸到外界环境中去。为了这些目的，在微生物学中，有许多措施。
无菌室一般是在微生物实验室内专辟一个小房间。可以用板材和玻璃建造。面积不宜过大，约4—5平方米即可，高2.5米左右。无菌室外要设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭。室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢，便于清洗。工作台的台面应该处于水平状态。无菌室和缓冲间都装有紫外线灯，无菌室的紫外线灯距离工作台面1米。工作人员进入无菌室应穿灭过菌的服装，戴帽子。
当前无菌室多存在于微生物工厂，一般实验室则使用超净台。超净台其主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃。通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面，使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。而且在接近外部的一方有一道高速流动的气帘防止外部带菌空气进入。
在条件较困难的地方，也可以用木制无菌箱代替超净台。无菌箱结构简单，便于移动，箱正面开有两个洞，不操作时用推拉式小门挡住，操作时可以将双臂伸进去。正面上部装有玻璃，便于在内部操作，箱内部装有紫外线灯，从侧面小门可以放进去器具和菌种等。
无菌操作技术当前不仅在微生物学研究和应用上起着举足轻重的作用，而且在许多生物技术中也被广泛应用。例如转基因技术、单克隆抗体技术等。
无菌室建设要求使用与管理
无菌室的要求
1．工作室应矮小、平整，面积只需4米2左右，高2.2—2.3米，内部装修应平整、光滑，无凹凸不平或棱角等，四壁及屋顶应用不透水之材质，便于擦洗及杀菌
2．室内采光面积大，从室外应能看到室内情况。
3．为保证无菌室的洁净，无菌室周围需设缓冲走廊，走廊旁再设缓冲间，其面积可小于无菌室。
4．无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有日光灯及供消毒空气用紫外灯，杀菌紫外灯离工作台以1米为宜 ，其电源开关均应设在室外。
5．无菌室与缓冲间进出口应设拉门，门与窗平齐，门缝要封紧，两门应错开，以免空气对流造成污染。
6．无菌室的使用与管理
（1） 无菌室应保持清洁整齐，室内仅存放必须的检验用具如酒精灯、酒精棉、火柴、镊子、接种针、接种环、玻璃铅笔等。&不要放与检测无关的物品
（2） 室内检验用具及凳桌等保持固定位置，不随便移动。
（3） 每2—3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液喷雾消毒空气，最后紫外灯杀菌半小时
（4） 定期检查室内空气无菌状况，细菌数应控制在10个以下，发现不符合要求时，应立即彻底消毒灭菌。/无菌室无菌程度的测定方法：取普通肉汤琼脂平板、改良马丁培养基平板各3个（平板直径均9厘米），置无菌室各工作位置上，开盖曝露半小时，然后倒置进行培养，测细菌总数应置37℃温箱培养48小时；测霉菌数则应置27℃温箱培养5天。细菌`霉菌总数均不得超过10个为 。
（5） 无菌室杀菌前，应将所有物品置于操作之部位（待检物例外），然后打开紫外灯杀菌30分钟，时间一到，关闭紫外灯待用
（6） 进入无菌室前，必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。
（7） 操作应严格按照无菌操作规定进行，操作中少说话，不喧哗，以保持环境的无菌状态。 器材及场所的灭菌消毒
微生物检验用器材及场所必须进行灭菌或消毒处理，不同的对象采用不同的处理方法
1． 高压蒸汽灭菌: 工作服、口罩、稀释液等，置高压杀菌锅内，一般采用121℃灭菌半小时, 当然不同的培养基有不同的要求, 应分别处理
2． 火焰灭菌： 接种针、接种环等可直接火焰灭菌
3． 高温干燥灭菌： 各种玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃灭菌2小时
4． 一 般消毒: 无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌，必须用其他方法进行消毒处理，采用2%石炭酸或来苏儿水溶液擦拭消毒，工作人员的手也用此法进行消毒
5． 空气的消毒： 开启紫外灯照射30—60分钟 即可。
操作要领
准备工作
1． 先进行无菌室空间的消毒，开启紫外灯30—60分钟
2． 检验用的有关器材， 搬入无菌室前必须分别进会灭菌消毒
3． 操作人员必须将手清洗消毒，穿戴好无菌工作衣、帽和鞋，才能进入无菌室
4． 进入无菌室后再一次消毒手部，然后才进行检验操作
操作过程注意事项
1． 动作要轻，不能太快，以免搅动空气增加污染；玻璃器皿也应轻取轻放，以免破损污染环境
2． 操作应在近火焰区进行。
3． 接种环、接种针等金属器材使用前后均需灼烧，灼烧时先通过内焰，使残物烘干后再灼烧灭菌
4． 使用吸管时，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必须用洗耳球操作。
5． 观察平板时不好 开盖，如欲沾取菌落检查时，必需靠近火焰区操作，平皿盖也不能 大
开，而是上下盖适当开缝。
6． 进行可疑致病菌涂片染色时，应使用夹子夹持玻片，切勿用手 直接拿玻片，以免造成污染，用过的玻片也应置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗涤。
7． 工作结束，收拾好工作台上的样品及器材，最后用消毒液擦拭工作台。
无菌室规程
一, 无菌室的建设:
1. 无菌室应建在较洁净的环境内, 附近无污染源.
2. 无菌室内部装修应平整, 光滑, 无凹凸不平或棱角等, 四壁及屋顶应用不透水的材质, 便于擦洗及杀菌. 无菌室内的操作台, 椅子的材质也应是易清洗消毒的.
3. 室内采光面积大, 从室外应能看到室内情况. 室内门窗结构应密合, 并尽量减少活动窗口面积.
4. 无菌室应设有工作间, 缓冲间和更衣间, 其内均应设有消毒设备, 如选用紫外灯, 则其离地高度不能超过2.2米. 消毒设备的电源开关均应设在室外.
5. 工作间与缓冲间进出口应设拉门, 门缝要封紧, 两门应错开, 以免空气对流造成污染.
6. 无菌室内不可使用中央空调, 应使用带有过滤系统的空调. 无菌室内温度应保持在20-24℃, 湿度保持在45-60%.
7. 无菌室内不可设置水槽和水龙头.
二, 无菌室的使用与管理:
1. 无菌室应保持清洁整齐, 室内仅存放最必须的检验用具如酒精灯, 酒精棉, 打火机, 镊子, 接种针, 接种环等, 与检验无关的物品不得入内.
2. 无菌室应备有工作浓度的消毒液, 如:5%的甲酚溶液,75%的酒精,0.1%的新洁尔灭等.
3. 定期检查室内空气无菌状况, 细菌数应控制在10个以下, 发现不符合要求时, 应立即彻底消毒灭菌, 并重复检查.
4. 无菌室杀菌前, 应将所有物品置于操作之部位(供试品例外), 然后打开紫外灯杀菌30分钟.
紫外灯关闭30分钟后, 工作人员方可入内.
5. 工作人员在进入无菌室前, 必须用肥皂洗手, 然后更衣室更换专用工作服, 帽, 口罩, 鞋, 方可进入无菌室.
6. 从室外带入无菌室内的所有物品表面要用75%酒精或紫外照射预先消毒. 无菌操作前用75%酒精消毒手掌, 手背.
7. 供试品在检查前, 应保持外包装完整, 不得开启, 以防污染. 检查前, 用75%的酒精棉球消毒外表面.
8. 每次操作过程中, 均应作阴性对照, 以检查无菌操作的可靠性.
9. 接种针使用前后, 必须通过火焰灼烧灭菌, 待冷却后, 方可接触菌种.
10. 操作过程中, 如有菌液洒在桌上或地上, 应立即用5%石炭酸溶液或3%的来苏水倾覆被污染处至少30分钟, 再作处理. 工作衣帽等受到菌液污染时, 应立即脱去, 高压蒸汽灭菌后洗涤.
11. 凡是带有活菌的物品, 必须经过消毒后, 才能清洗.
12. 操作应严格按照无菌操作规定进行, 操作中少说话, 不喧哗, 以保持环境的无菌状态.
13. 操作完毕, 应及时清理无菌室, 再用紫外灯辐照灭菌30分钟.
14. 每2-3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台, 门, 窗, 桌, 椅及地面, 然后用3%石炭酸水溶液喷雾消毒空气, 最后紫外灯杀菌半小时.
三, 无菌室器具及空间的灭菌消毒方法:
1. 培养基, 药品和生理盐水:采用高压蒸汽灭菌, 一般为121℃15分钟, 有的培养基有特殊要求, 应分别处理.
2. 玻璃器皿, 剪刀, 镊子:高温干燥灭菌, 置于干燥箱中160℃灭菌2小时.
3. 接种针, 接种环:直接用火焰灼烧灭菌.
4. 工作服, 口罩, 帽子等:采用高压蒸汽灭菌, 一般为121℃30分钟; 也可以用臭氧发生器灭菌,1小时.
5. 无菌室内的工作台, 椅子等:可以用2%石炭酸水溶液擦拭.
6. 空气:开启紫外灯照射30-60分钟; 也可以用臭氧发生器灭菌,1小时.