水样中氨氮的测定
（Ⅱ.纳氏试剂比色法）（A）
1.试验目的及要求
（1）掌握纳氏试剂比色法的原理及操作；
（2）熟悉水样中干扰组分的去除方法；
（3）进一步熟练分光光度计的使用及标准曲线制作方法。
2.方法原理
在水样中加入碘化钾和碘化汞的强碱溶液（纳氏试剂），与氨反应生成淡红棕色胶态化合物，此颜色在较宽的波长范围内具有强烈吸收。通常于410~425nm波长范围内测吸光度，利用标准曲线法求出水样中氨氮的含量、
本法最低检出浓度为0.025mg／L，测定上限为2mg／L。水样作适当的预处理后，本法适用于地面水，地下水，工业废水和生活污水中氨氮的测定。
3.仪器和试剂
(1)分光光度计。
(2)50mL比色管及常用的玻璃仪器。
(3)无氨水（水样稀释及试剂配制均用无氨水）。
(4)10％硫酸锌溶液：称取10g硫酸锌溶于水，稀释至100mL。
(5)25％氢氧化钠溶液：称取25g氢氧化钠溶于水，稀释至100mL。贮于聚乙烯瓶中。 (6)1mol／L盐酸溶液，用于调节水样pH值。 (7)1mol／L氢氧化钠溶液，用于调节水样pH值。 (8)淀粉-碘化钾试纸
(9)纳氏试剂：称取20g碘化钾溶于100ml水中，边搅拌边分次少量加入二氯化汞（HgCl2）结晶粉末约10g，至出现朱红色沉淀不易溶解时，改为滴加饱和二氯化汞溶液，并充分搅拌，当出现微量朱红色沉淀不易溶解时，停止滴加氯化汞溶液。
另称取60g氢氧化钾溶于水，并稀释至250ml，充分冷却至室温后，将上述溶液在搅拌下，徐徐注入氢氧化钾溶液中，用水稀释至400ml，混匀。静置过夜。将上清液移入聚乙烯瓶中，密塞保存。
(10)酒石酸钾钠溶液：称取50g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O)溶于100mL水中，加热煮沸以除去氨，放冷，定容至100mL。 (11)铵标准贮备液：称取3.819g经100℃干燥的优级纯氯化铵（NH4Cl)溶于水中，移入1000mL容量瓶中，稀释至标线。此溶液每毫升含1.00mg氨氮。
(12)铵标准使用液：移取5.00mL铵标准贮备液于500mL容量瓶中，用水稀释至标线。此溶液每毫升含氨氮0.010mg。
4.操作步骤
（1）样品采集与保存
采集具有代表性的水样于聚乙烯瓶或玻璃瓶中。采样后尽快分析，否则应在2~5℃下存放，或用硫酸（加入量要少）将样品酸化，使其pH值小于2（应注意防止酸化后的样品吸收空气中的氨而被污染）。 （2）水样预处理
对于较清洁水样，采用絮凝沉淀法；对于污染严重的地面水或工业废水，则用蒸馏法消除干扰。此处采用絮凝沉淀法。
步骤：取100mL水样于具塞量筒或比色管中，加入10％硫酸锌溶液1mL和25％氢氧化钠溶液0.1~0.2mL，调节pH至10.5左右，摇匀。放置使之沉淀，用经无氨水充分洗涤过的中速滤纸过滤，弃去初滤液20mL。若样品中含有余氯，可在絮凝沉淀前加入适量硫代硫酸钠溶液，用淀粉—碘化钾试纸检验。若絮凝沉淀法处理后仍浑浊或有色，应采用蒸馏法处理水样，用硼酸水溶液吸收。 （3）标准曲线的绘制
吸取0、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00、和10.00mL铵标准使用液分别于一组50mL比色管中，加水至标线，加1.0mL酒石酸钾钠溶液，混匀。加1.5mL钠氏试剂，混匀。放置10min后，在波长420nm处，用光程20mm的比色皿，以水为参比测定吸光度。经空白校正后，得到校正吸光度，绘制以氨氮含量（mg）对校正吸光度的标准曲线。 （4）水样测定
①对于经絮凝沉淀预处理后的水样，分别适量该水样（使氨氮含量不超过0.1mg），加入50mL比色管中，稀释至标线。
②向上述比色管中分别加入1.0mL酒石酸钾钠溶液，混匀。再加入1.5mL钠氏试剂，混匀。放置10min后，铵标准曲线绘制的条件测定水样的吸光度。 （5）空白实验
以50mL无氨水代替水样，做全程序空白测定。 （6）数据的记录及处理
表1 标准曲线绘制的数据记录表（9.22）
表2 水样氨氮测定的数据记录表（9.21）
5.结果处理
（1）纳氏比色法测定氨氮的标准曲线
（2）水样中氨氮含量的计算
由水样测得的吸光度减去空白实验的吸光度后，从标准曲线上查得氨氮含量（mg）。
氨氮（mg／L）=m／V样×1000
式中 m—由标准曲线查得的氨氮含量，mg； V样—水样体积，mL。
6.注意事项
（1）钠氏试剂中碘化汞与碘化钾的比例对显色反应的灵敏度有较大影响，因此静置后生成的沉淀应除去。
（2）滤纸中常含有痕量铵盐，使用时注意用无氨水洗涤。所有玻璃皿应避免实验室空气中氨的玷污。
7.思考题
（1）絮凝沉淀法和蒸馏法预处理各适用于何种水样？
（2）测定氨氮时的干扰物质有哪些？如何消除？
水样中氨氮的测定
（Ⅱ.纳氏试剂比色法）（A）
1.试验目的及要求
（1）掌握纳氏试剂比色法的原理及操作；
（2）熟悉水样中干扰组分的去除方法；
（3）进一步熟练分光光度计的使用及标准曲线制作方法。
2.方法原理
在水样中加入碘化钾和碘化汞的强碱溶液（纳氏试剂），与氨反应生成淡红棕色胶态化合物，此颜色在较宽的波长范围内具有强烈吸收。通常于410~425nm波长范围内测吸光度，利用标准曲线法求出水样中氨氮的含量、
本法最低检出浓度为0.025mg／L，测定上限为2mg／L。水样作适当的预处理后，本法适用于地面水，地下水，工业废水和生活污水中氨氮的测定。
3.仪器和试剂
(1)分光光度计。
(2)50mL比色管及常用的玻璃仪器。
(3)无氨水（水样稀释及试剂配制均用无氨水）。
(4)10％硫酸锌溶液：称取10g硫酸锌溶于水，稀释至100mL。
(5)25％氢氧化钠溶液：称取25g氢氧化钠溶于水，稀释至100mL。贮于聚乙烯瓶中。 (6)1mol／L盐酸溶液，用于调节水样pH值。 (7)1mol／L氢氧化钠溶液，用于调节水样pH值。 (8)淀粉-碘化钾试纸
(9)纳氏试剂：称取20g碘化钾溶于100ml水中，边搅拌边分次少量加入二氯化汞（HgCl2）结晶粉末约10g，至出现朱红色沉淀不易溶解时，改为滴加饱和二氯化汞溶液，并充分搅拌，当出现微量朱红色沉淀不易溶解时，停止滴加氯化汞溶液。
另称取60g氢氧化钾溶于水，并稀释至250ml，充分冷却至室温后，将上述溶液在搅拌下，徐徐注入氢氧化钾溶液中，用水稀释至400ml，混匀。静置过夜。将上清液移入聚乙烯瓶中，密塞保存。
(10)酒石酸钾钠溶液：称取50g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O)溶于100mL水中，加热煮沸以除去氨，放冷，定容至100mL。 (11)铵标准贮备液：称取3.819g经100℃干燥的优级纯氯化铵（NH4Cl)溶于水中，移入1000mL容量瓶中，稀释至标线。此溶液每毫升含1.00mg氨氮。
(12)铵标准使用液：移取5.00mL铵标准贮备液于500mL容量瓶中，用水稀释至标线。此溶液每毫升含氨氮0.010mg。
4.操作步骤
（1）样品采集与保存
采集具有代表性的水样于聚乙烯瓶或玻璃瓶中。采样后尽快分析，否则应在2~5℃下存放，或用硫酸（加入量要少）将样品酸化，使其pH值小于2（应注意防止酸化后的样品吸收空气中的氨而被污染）。 （2）水样预处理
对于较清洁水样，采用絮凝沉淀法；对于污染严重的地面水或工业废水，则用蒸馏法消除干扰。此处采用絮凝沉淀法。
步骤：取100mL水样于具塞量筒或比色管中，加入10％硫酸锌溶液1mL和25％氢氧化钠溶液0.1~0.2mL，调节pH至10.5左右，摇匀。放置使之沉淀，用经无氨水充分洗涤过的中速滤纸过滤，弃去初滤液20mL。若样品中含有余氯，可在絮凝沉淀前加入适量硫代硫酸钠溶液，用淀粉—碘化钾试纸检验。若絮凝沉淀法处理后仍浑浊或有色，应采用蒸馏法处理水样，用硼酸水溶液吸收。 （3）标准曲线的绘制
吸取0、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00、和10.00mL铵标准使用液分别于一组50mL比色管中，加水至标线，加1.0mL酒石酸钾钠溶液，混匀。加1.5mL钠氏试剂，混匀。放置10min后，在波长420nm处，用光程20mm的比色皿，以水为参比测定吸光度。经空白校正后，得到校正吸光度，绘制以氨氮含量（mg）对校正吸光度的标准曲线。 （4）水样测定
①对于经絮凝沉淀预处理后的水样，分别适量该水样（使氨氮含量不超过0.1mg），加入50mL比色管中，稀释至标线。
②向上述比色管中分别加入1.0mL酒石酸钾钠溶液，混匀。再加入1.5mL钠氏试剂，混匀。放置10min后，铵标准曲线绘制的条件测定水样的吸光度。 （5）空白实验
以50mL无氨水代替水样，做全程序空白测定。 （6）数据的记录及处理
表1 标准曲线绘制的数据记录表（9.22）
表2 水样氨氮测定的数据记录表（9.21）
5.结果处理
（1）纳氏比色法测定氨氮的标准曲线
（2）水样中氨氮含量的计算
由水样测得的吸光度减去空白实验的吸光度后，从标准曲线上查得氨氮含量（mg）。
氨氮（mg／L）=m／V样×1000
式中 m—由标准曲线查得的氨氮含量，mg； V样—水样体积，mL。
6.注意事项
（1）钠氏试剂中碘化汞与碘化钾的比例对显色反应的灵敏度有较大影响，因此静置后生成的沉淀应除去。
（2）滤纸中常含有痕量铵盐，使用时注意用无氨水洗涤。所有玻璃皿应避免实验室空气中氨的玷污。
7.思考题
（1）絮凝沉淀法和蒸馏法预处理各适用于何种水样？
（2）测定氨氮时的干扰物质有哪些？如何消除？