江西农业大学学报２０１３，３５（３）：５９３—５９７ｈｔｔｐ：／／ｘｕｅｂａｏ．ｊｘａｕ．ｅｄｕ．ｃｎＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＪｉａｎｇｘｉｅｎｓｉｓＥ—ｍａｉｌ：ｎｄｘｂ７７７５＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
９种植物粗多糖体外降脂及抑制
非酶糖基化活性的研究
王文君，欧阳克蕙，许文凤，徐明生，上官新晨，蒋艳
（江西农业大学江西省天然产物与功能食品重点实验室，江西南昌３３００４５）
摘要：对９种植物中的多糖进行提取，并对其体外降脂和抑制蛋白质非酶糖基化的作用进行了测定。分别将９种植物样品经粉碎、脱脂、脱色处理后，用超声辅助７０％乙醇浸提得粗多糖。以葡萄糖为标准样品，用紫外分光光度法测其在５１０ａｍ处吸光度值并绘制标准曲线，以同样的方法测定样品中多糖的含量。随后进行体外降脂实验，通过比较有无抑制剂（提取液）加入的情况下，脂肪酶的活性差异，所得各提取物的抑制率，比较降脂活性大小；再进行体外非酶糖基化实验，去ｌｍＬ提取液（加氨基胍做阳性对照，加水做阴性对照）与１ｍＬ磷酸缓冲液混合，９０℃水浴４０ｍｉｎ，然后与乙二醛和牛血清白蛋白混合，反应液于３７℃孵育１５ｄ，用荧光法在发射波长４４０ｎｌｎ激发波长３６５ａｍ处测定糖基化产物的自发荧光值，计算９种植物粗提多糖对体外非酶糖基化反应的抑制率。结果表明９种植物多糖粗提物对脂肪酶均有较强的抑制作用，以蛇接骨草的抑制活性最强。在体外非酶糖基化试验中，９种植物对非酶糖基化终产物的生成均有较强的抑制作用，以芦荟粗多糖非酶糖基化抑制活性最强。
关键词：多糖；降脂活性；抑制；非酶糖基化
中图分类号：Ｉｔ２８４．２；Ｑ５３９文献标志码：Ａ文章编号：１０００—２２８６（２０１３）０３—０５９３一０５
ＡＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＨｙｐｏｌｉｐｅｍｉｃａｎｄＮｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｃＧｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎＡｃｔｉｖｉｔｙ
ｉｎＶｉｔｒｏｏｆＣｒｕｄｅＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｏｒｍＮｉｎｅＰｌａｎｔｓ
ＷＡＮＧＷｅｎ－ｊｕｎ，ＯＵＹＡＮＧＫｅ—ｈｕｉ，ＸＵＷｅｎ—Ｆｅｎｇ，ＸＵＭｉｎｇ—ｓｈｅｎｇ，
ＳＨＡＮＧＧＵＡＮＸｉｎ—ｃｈｅｎ，ＪＩＡＮＧＹａｎ
（ＫｅｙＬａｂｆｏｒＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＦｏｏｄｏｆＪｉａｎｇｘｉＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＪｉａｎｇｘｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３００４５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｔｈｅｈｙｐｏｌｉｐｅｍｉｃａｎｄｎｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｃｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｖｉｔｒｏｏｆｒｏｕｇｈｐｏｌｙｓａｃ—ｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍｎｉｎｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅｐｌａｎｔｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｓｍａｓｈｅｄ，ｄｅｇｒｅａｓｅｄ，ｂｌｅａｃｈｅｄ，ｔｈｅｎｔｈｅｒｏｕｇｈｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｗｉｔｈ７０％ｅｔｈａｎｏｌａｎｄｓｕｐｅｒｓｏｎｉｃ．Ｔｈｅｈｙｐｏｌｉｐｅｍｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｐｅｌｙｓａｃｃｈａ－ｒｉｄｅｆｒｏｍｎｉｎｅｐｌａｎｔｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｖｉｔｒｏｂｙｍｅａｓｕｒｉｎｇｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｌｉｐａｓｅ．Ｉｎｔｈｅｎｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｃｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｅｐｅｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｏｌｕｔｉｏｎ（１ｍＬ）ＷａｓｍｉｘｅｄｓｅｐａｒａｔｅｌｙｗｉｔｈＰＢＳ（１ｍＬ），ａｎｄｗａｔｅｒｈｅａｔｅｄａｔ９０ｏＣｆｏｒ４０ｍｉｎｔｏｒｅｍｏｖｅｅｔｈａｎ０１．Ｔｈｅｎｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｍｉｘｅｄｗｉｔｈｔｈｅｒｅａｃｔｉｖｅｓｏｌｕｔｉｏｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ０ｙ—ｏｘａｌａｎｄｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎｗｅｒｅｉｎｃｕｂａｔｅｄａｔ３７℃ｆｏｒ１５ｄ．ａｄｄｅｄｗｉｔｈｔｈｅａｍｉｎｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ弱ｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｗｈｉｌｅｐｕｒｅｗａｔｅｒａｓｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒ０１．ＴｈｅＡＧＥｓｃｏｎｔｅｎｔｓｗｅｒｅａｓｓａｙｅｄｂｙｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ衍ｔｈｅｍｉｓｓｉｏｎａｔ４４０ｎｍｕｐｏｎｅｘｃｉｔａｔｉｏｎａｔ３６５ｎｎｌｔｏｃａｌｃｕｌａｔｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｍｏｆ出ｅｐｅｌｙｓａｃｅｈａｒｉｄｅｆｒｏｍ
收稿日期：２０１２—０７—１０修回日期：２０１２一１１—２４
基金项目：国家自然科学基金项目（３１１６０３１９）、江西省自然科学基金项目（２００９ＧＺＮ００１４）、江西省科技厅重点项目
（２００９ＢＧＡ０１９００）和江西省教育厅科技项目（ＧＪＪｌｌ４０３）作者简介：王文君（１９７１一）男，教授，博士，主要从事分子营养学研究，Ｅ—ｍａｉｌ：ｗｗｊｕｎ９９９９＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ。
・５９４・江西农业大学学报第３５卷９ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｓｏｎｎｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｃｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ
ｏｎｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｈｙｐｏｌｉｐｅｍｉｃａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｒｏｕｓｈｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｓｔｈｅｌｉｐａｓｅｗｅｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔ，ａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅＣ，ｙｎｕｒａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ
（Ｌｏｕｒ．）Ｍｅｒｒ．ｗａｓｔｈｅｂｅｓｔ；ａｎｄｔｈｅｎｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｃｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｔｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｓｗｅｒｅａｌｓｏｖａｒｉｅｄ，ｏｆａｌｌｔｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅＡｌｏｅｗａｓｔｈｅｂｅｓｔ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｈｙｐｏｌｉｐｅｍｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ；ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ；ｎｏｎｅｎｚｙｍｅｇｌｙｃｏｓｙｌｃｏｓｙｉａｔｉｏｎ
多糖是普遍存在于自然界中的由许多相同或不同的单糖通过糖苷键连接在一起的多聚化合物，不仅是维持生命活动正常运转的基本物质，其生物活性更具有广泛的应用价值。研究显示，植物多糖具有包括免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、保护肝脏以及非酶糖基化等生理功能，且对机体毒副作用小。因此，对植物多糖的研究开发已经成为热门领域。如香菇多糖、灵芝多糖、云芝多糖已经在国内外临床上应用广泛。但是由于灵芝等中药材价钱昂贵，经济效益较差。于是人们开始寻求更为实用的植物来源。
随着生活水平的提高患高血脂、高血糖等心血管疾病的人群越来越多，寻找预防治疗这些疾病的药物也就成为了社会的热点。蛋白质非酶糖基化反应在糖尿病及其血管并发症的发生发展中具有重要的意义。非酶糖基化（ｎｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ，ＮＥＧ）是蛋白质与羰基化合物发生的反应，反应最终形成一系列不可逆的糖基化终产物（ａｄｖａｎｃｅｄｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ，ＡＧＥｓ）¨Ｊ。ＡＧＥｓ可以与机体中的蛋白质发生能够改变蛋白质的生理活性的交联反应，从而引起蛋白质分子层面上的一系列机体病理生理上的状态改变。同时有报告称ＡＧＥＳ可能是引发粥样动脉硬化的关键产物旧Ｊ。如何合理的抑制蛋白质的非酶糖基化反应已经成为了近年来国内外医学药物健康等领域研究的热点∞Ｊ。在国外医学药物学当中已经得到证实的是，药物氨基胍可以有效的抑制蛋白质的糖基化反应【４Ｊ。目前的一些研究表明，多糖类化合物以及黄酮类化合物具有抗氧化，抗癌症肿瘤，抗心脑血管疾病等的多种有益的生物学作用，且对ＡＧＥｓ的生成也有一定抑制作用，而多糖类化合物以及黄酮类化合物广泛生存于多种天然植物中。
青钱柳［Ｃｙｃｌｏｃａｒｙａｐａｌｉｕｒｕｓ（Ｂａｔａｌ．）ｎｊｉ珊ｋａｊａ］、银杏（Ｇｉｎｋｇｏ）、绿茶、芦荟（Ａｌｏｅ）、荷叶（ＦｏｌｉｕｍＮｅｌｕｍｂｉｎｉｓ）、蛇接骨草［Ｇｙｎｕｒａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ（Ｌｏｕｒ）Ｍｅｒｒ］、菝葜（Ｓｍｉｌａｘｃｈｉｎａ）、鱼腥草（ＨｏｕｔｔｕｙｎｉａｃｏｒｄａｔａＴｈｕｎｂ．）、三叶草（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ）等９种植物都属于自然中常见的实用性较强的天然植物，有些还是药食同源的植物。本文对这９种植物粗提总多糖的体外降脂活性和其对非酶糖基化的抑制作用进行了相应的体外研究，以期能为其药用价值的开发利用提供有用的科学依据。
１材料与方法
１．１试验材料
青钱柳、银杏、绿茶、芦荟、鱼腥草、荷叶、蛇接骨草、菝葜和三叶草都来源于江西农业大学植物园。
１．２主要试剂
氢氧化铝、聚乙烯醇、三油酸甘油酯、乙二醛均购白天津永大化学试剂，脂肪酶、氨基胍和标准牛血清白蛋白购片Ｓｉｇｍａ公司。
１．３主要仪器
电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；ＲＥ一５２Ａ旋转蒸发器，上海亚荣生物化仪器厂；ＳＨＥ—ＩＩＩ型循环水真空泵，上海亚荣生化仪器厂；ＳＰ一７５４ＰＣ型分光光度计，上海光谱仪器有限公司；９６０型荧光分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；ＫＱ３２００ＤＢ型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；ＨＨ一６电热恒温水浴锅，国华电器有限公司。
１．４实验方法
多糖的提取植物烘干至恒重后粉碎过７０目筛，称取１００ｇ用石油醚按料液化比１：１０浸提过
夜脱脂脱色，蒸干备用。１．４．１
准确称取处理后的样品各５０ｇ，用石油醚（料液比ｌ：１０）在室温下脱水脱色１２ｈ。用循环真空泵抽滤，取滤渣，晾干。然后用蒸馏水超声辅助水提（料液比１：２０，６０℃，１
用旋转蒸发仪将滤液（６５℃）真空浓缩至约５０ｍＬ。ｈ，１００Ｗ），再次过滤，取滤液。
其次将浓缩物以体积比１：３加无水乙醇沉淀，将溶液在４０００ｒ／ｍｉｎ转速下离心１５ｍｉｎ，得沉淀物
第３期王文君等：９种植物粗多糖体外降脂及抑制非酶糖基化活性的研究．５９５．抽干。最后，用真空冷冻干燥机将抽干物质干燥完全，备用。用蒸馏水将干燥完全的样品定容至１００ｍＬ容量瓶，取５ｍＬ再定容至５０ｍＬ容量瓶，即为样品溶液，备用。
１．４．２体外降脂实验降脂实验根据霍世欣等”１稍有修改。脂肪酶催化脂肪分解，生成脂肪酸，以酚酞做指示剂，用０．０５ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ溶液滴定。通过比较有无抑制剂（提取液）加入的情况下，脂肪酶活性的差异，可得提取物对脂肪酶的抑制率，体现抗氧化活性的大小，并与含量进行相关性比较。
抑制率＝抑制脂肪酶活性／脂肪酶活性Ｘ１００％（１）采用脂肪酶活性测定法：
（１）取１００ｍＬ三角瓶，加入５ｍＬ０．０２５ｍｏＶｌ磷酸缓冲液（ｐＨ７．４）和４ｍＬ聚乙烯醇三油酸甘油酯乳化液（Ｏ．２２ｇ／ｍＬ聚乙烯醇，油酸甘油酯ｌｍＬ混合，高速搅拌均匀，得乳白色乳化液）作为底物，置于３７℃水浴中反应１０ｍｉｎ。加入１ｍＬ脂肪酶（２ｍｇ／ｍＬ），准确反应１５ｍｉｎ后，加体积分数为９５％乙醇终止反应。加酚酞２～３滴，用０．０５ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ标准溶液滴定至微红色，平行实验３次。
（２）按上述测定方法加入底物３７℃水浴保温１０ｍｉｎ后，在体系中加入１ｍＬ脂肪酶，后续相同。空白实验为加人底物后３７℃水浴保温１０ｍｉｎ，终止反应，加人１ｍＬ酶液和１ｍＬ样品提取液，滴定步骤同上。１．４．３糖基化实验在蛋白质非酶糖基化反应表１９种植物粗多糖降脂效果
体系中加人粗提黄酮进行药物干预实验，１５ｄ中每Ｔａｂ．１Ｈｙｐｏｆｉｐｅｍｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｎｉｎｅｋｉｎｄｓ３ｄ用荧光光度计测定荧光值，绘制动态曲线，加氨ｏｆｐｌａｎｔｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ％
基胍做阳性对照，加水做阴性对照，进行抑制能力
分析；以氨基胍作参比，计算粗提物对糖基化终产样品抑制率物ＡＧＥｓ的抑制率，并与含量进行相关性分析。ＳａｍｐｌｅＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｉｏ
（１）反应液配制：根据文献［６］稍加修改，将青钱柳Ｃｙｃｌｏｃａｒｙａｐａｌｉｕｒｕｓ３７．ｏｏ±６．５３８叫
乙二醛（ＧＸＬ）１２ｍｇ／ｍＬ，牛血清白蛋白（ＢＳＡ）银杏Ｇｉｎｋｇｏ５０．００±１０．５０“１２０ｍｇ／ｍＬ和ＥＤＴＡ１ｍｏＬ／Ｌ，在ｐＨ７．４的磷酸缓绿茶Ｃａｍｅｌｌｍｓｉｎｅｓｉｓ７２．００±４．６２６冲液（ＰＢＳ）０．２ｍｏｉ／Ｌ中混合而成，备用。芦荟Ａｌｏｅ６５．３３±６．１７“
（２）蛋白质非酶糖基化的药物干预实验：根荷叶Ｆｏｌｉｕｍｎｅｌｕｍｂｉｎｉｓ６２．６７±７．７５＆
据文献［１］的方法稍加修改，将提取液ｌｍＬ（浓度ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ７８．３３±２。９１“为１ｍｇ／ｍＬ）与ＰＢＳ１ｍＬ在９０℃下混合，４０蛇接骨草Ｃ柙ｕｒａｍｉｎ菝葜Ｓｍｉｌａｘｃｈｉｎａ１７．６７土７．８６８０“（以去除乙醇），再加入反应液１ｍＬ，３７℃水浴避
光孵育１、３、６、９、１２、１５ｄ，时间分６批，重复３份。鱼腥草Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａｃｏｒｄａｔａ４６．６７±３．１８Ｂ’”“
ｍｒ，／ｍＬ）与反应液做阳性三叶草Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ４３．２１±１．４７ＢＦＨｈ
氨基胍１ｍＬ（０．１
对照，蒸馏水１ｍＬ与反应液做空白对照。同一列不同大写字母表示差异极显著（Ｐ＜０．０１），
（３）抑制率的测定：根据糖基化终产物有自小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５）
发荧光的特性，采用荧光法测定荧光值，将抑制率Ｔｈｅｍｅａｎｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｏｒｃａｐｉｔａｌｌｅｔｔｅｒｉｎｔｈｅｓ蛐ｅ
ｒｏｗ与含量进行相关性分析。测定条件参考刘乃丰ｉｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（Ｐ＜０．０５ｏｒＰ＜０．０１）
等…：激发波长３６５ｎｍ，发射波长４４０ｎｍ，狭缝１０ｎｍ，灵敏度１。
抑制率，＝（Ｂ—Ａ）尉（２）其中Ｊ『：抑制率；Ａ：空白对照荧光强度；Ｂ：样品荧光强度。
１．５统计分析
各项指标以平均数土标准差表示，数据统计分析时采用ＤＰＳ数据处理系统（ｖ３．０１专业版）。
２结果与分析
２．１体外降脂实验测定结果
由表１可知，不同植物粗多糖抗氧化的活性相关很大，其中抑制胰脂肪酶活性最强的为蛇接骨草的提取物，达到７８．４１％，最低的是菝葜，其抗氧化活性仅为１７．６７％，两者差异极显著（Ｐ＜０．００１）。其他植物粗多糖的抗氧化活性大小依次为绿茶、芦荟、荷叶、银杏、鱼腥草、三叶草和青钱柳。
２。２非酶糖基化实验测定结果
由表２可知，在１～１５ｄ，随着时间的延长，荧光强度逐步增高，各提取物的抑制能力增强。在１５ｄ时，抑制糖基化反应能力最强的是芦荟粗多糖提取物，其抑制率达到９６．５１％，其余的提取物中，青钱柳
．５９６．江西农业大学学报第３５卷多糖、绿茶多糖的抑制率亦分别达到９５．７６％、９６．５１％，与氨基胍相比差异显著（Ｐ＜０．０５）。另外荷叶多糖达到８７．０８％、菝葜多糖达到８９．６４％，与氨基胍抑制率相当。
表２
Ｔａｂ．２９种植物粗多糖抑制糖基化结果％Ｒ鹳Ｉｌｌｔｓｏｆｎｏｎｅｎｚｙｎｍｔｉｃｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ飘ｔｉｖｉ白，ｏｆｎｉｎｅｐｌａｎｔｃｒｕｄｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
与氨基胍相比｛Ｐ＜０．０５，｝｝Ｐ＜０．０１。
ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅａｍｉｎｏｇｕａｎｉｄｉｎｅｇｒｏｕｐ＋Ｐ＜０．０５．籼＃尸＜０．０１．
３讨论
多糖对脂肪酶活性抑制作用测定的原理是，根据脂肪酶催化脂肪水解，生成脂肪酸和甘油。产生的脂肪酸可用标准碱液滴定，从而做定量测定怫Ｊ。在本研究中，对比未加植物粗多糖实验组，加入多糖实验组消耗的ＮａＯＨ减少，说明脂肪酶催化产生的脂肪酸减少，也可推断脂肪酶活性受到抑制。在本实验中发现，不同植物的粗多糖对脂肪酶活性一定抑制作用，能减少体内游离脂肪酸的产生，提示多糖可能通过抑制脂肪酶活性降低血脂水平，从而在一定程度上能预防心血管相关疾病。
蛋白质糖基化在糖尿病血管并发症的发生占有非常重要的地位。蛋白质和葡萄糖在体内可通过发生非酶促反应形成Ｓｃｈｉｆｆ碱和Ａｍａｄｏｒｉ产物等早期产物，进而经过一系列步骤形成不可逆的非酶糖基化终末产物一Ｊ。研究表明，ＡＧＥｓ可与蛋白质发生交联，沉积在长寿蛋白上，引起一系列病理生理改变，表现为造成动脉粥样硬化、视网膜微血管瘤形成和肾病的发生等¨０。。有研究表明，非酶糖基化反应除会引起糖尿病并发症之外，还可以通过阻碍与血红蛋白结合氧的释放和减少血流量两方面造成组织假性缺氧并加速血糖升高‘“。
多糖作为一种重要的活性成分，具有很强的抗氧化作用，可清除自由基，调节血糖和血脂的功能¨１｜。本研究对９种天然植物的粗多糖提取物进行了体外降脂和非酶糖基化的研究。发现绿茶、芦荟和蛇接骨草的体外降脂作用比较明显；而非酶糖基化的研究表明，绿茶、芦荟、青钱柳和菝葜对非酶糖基化的抑制率较高，且各种植物多糖提取物对非酶糖基化的抑制率都随着时间的延长，各提取物的抑制能力增强，与文献［１２］报道一致。尽管体外试验表明９种植物的粗多糖具有体外降脂和对非酶糖基化抑制作用，但对ＡＧＥｓ的抑制作用机制目前研究的不是很清楚，还有待进一步研究。（下转第６３０页）
．６３０．江西农业大学学报第３５卷压阀定位为１０Ｌ／ｍｉｎ，充气量１．４３Ｌ，也可表示为充气时间８．６Ｓ。
为了证实预测的试验条件的准确性，采用试验中得到的最佳提取工艺条件重复实验３次，得到花生壳内氮气含量９７。８２４％，与预测值为９６．８２６２％基本一致（相对误差Ｉ．０３％），说明该方程与实际情况拟合很好，充分验证了所构建模型的正确性，说明响应面法适用于花生充氮工艺进行分析和参数优化。
３结论
（１）优化得到的最佳工艺条件为：抽气时间２３
得到的含氮量为９７．８２４％。Ｓｘ充气量１．４３Ｌ、花生质量为１３４ｇ。此工艺条件下
（２）响应面法能较好地对烘烤花生真空充氮工艺进行回归分析和参数优化。３个因素对含氮量影响作用的相对大小依次为抽气时间、充气量、花生质量，抽气时间和充气量的交互项对花生壳内氮气含量影响高度显著；抽气时间和充气量的二次项的偏回归系数达到显著，表明试验因素对响应值的影响并不是单一的线性关系。
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9种植物粗多糖体外降脂及抑制非酶糖基化活性的研究
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英文刊名：
年，卷(期)：王文君， 欧阳克蕙， 许文凤， 徐明生， 上官新晨， 蒋艳， WANG Wen-jun， OUYANG Ke-hui， XU Wen-Feng， XU Ming-sheng， SHANGGUAN Xin-chen， JIANG Yan江西农业大学江西省天然产物与功能食品重点实验室,江西南昌,330045江西农业大学学报Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis(Natural Sciences Edition)2013,35(3)
参考文献(12条)
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本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_jxnydxxb201303028.aspx
江西农业大学学报２０１３，３５（３）：５９３—５９７ｈｔｔｐ：／／ｘｕｅｂａｏ．ｊｘａｕ．ｅｄｕ．ｃｎＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＪｉａｎｇｘｉｅｎｓｉｓＥ—ｍａｉｌ：ｎｄｘｂ７７７５＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
９种植物粗多糖体外降脂及抑制
非酶糖基化活性的研究
王文君，欧阳克蕙，许文凤，徐明生，上官新晨，蒋艳
（江西农业大学江西省天然产物与功能食品重点实验室，江西南昌３３００４５）
摘要：对９种植物中的多糖进行提取，并对其体外降脂和抑制蛋白质非酶糖基化的作用进行了测定。分别将９种植物样品经粉碎、脱脂、脱色处理后，用超声辅助７０％乙醇浸提得粗多糖。以葡萄糖为标准样品，用紫外分光光度法测其在５１０ａｍ处吸光度值并绘制标准曲线，以同样的方法测定样品中多糖的含量。随后进行体外降脂实验，通过比较有无抑制剂（提取液）加入的情况下，脂肪酶的活性差异，所得各提取物的抑制率，比较降脂活性大小；再进行体外非酶糖基化实验，去ｌｍＬ提取液（加氨基胍做阳性对照，加水做阴性对照）与１ｍＬ磷酸缓冲液混合，９０℃水浴４０ｍｉｎ，然后与乙二醛和牛血清白蛋白混合，反应液于３７℃孵育１５ｄ，用荧光法在发射波长４４０ｎｌｎ激发波长３６５ａｍ处测定糖基化产物的自发荧光值，计算９种植物粗提多糖对体外非酶糖基化反应的抑制率。结果表明９种植物多糖粗提物对脂肪酶均有较强的抑制作用，以蛇接骨草的抑制活性最强。在体外非酶糖基化试验中，９种植物对非酶糖基化终产物的生成均有较强的抑制作用，以芦荟粗多糖非酶糖基化抑制活性最强。
关键词：多糖；降脂活性；抑制；非酶糖基化
中图分类号：Ｉｔ２８４．２；Ｑ５３９文献标志码：Ａ文章编号：１０００—２２８６（２０１３）０３—０５９３一０５
ＡＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＨｙｐｏｌｉｐｅｍｉｃａｎｄＮｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｃＧｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎＡｃｔｉｖｉｔｙ
ｉｎＶｉｔｒｏｏｆＣｒｕｄｅＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｏｒｍＮｉｎｅＰｌａｎｔｓ
ＷＡＮＧＷｅｎ－ｊｕｎ，ＯＵＹＡＮＧＫｅ—ｈｕｉ，ＸＵＷｅｎ—Ｆｅｎｇ，ＸＵＭｉｎｇ—ｓｈｅｎｇ，
ＳＨＡＮＧＧＵＡＮＸｉｎ—ｃｈｅｎ，ＪＩＡＮＧＹａｎ
（ＫｅｙＬａｂｆｏｒＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＦｏｏｄｏｆＪｉａｎｇｘｉＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＪｉａｎｇｘｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３００４５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｔｈｅｈｙｐｏｌｉｐｅｍｉｃａｎｄｎｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｃｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｖｉｔｒｏｏｆｒｏｕｇｈｐｏｌｙｓａｃ—ｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍｎｉｎｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅｐｌａｎｔｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｓｍａｓｈｅｄ，ｄｅｇｒｅａｓｅｄ，ｂｌｅａｃｈｅｄ，ｔｈｅｎｔｈｅｒｏｕｇｈｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｗｉｔｈ７０％ｅｔｈａｎｏｌａｎｄｓｕｐｅｒｓｏｎｉｃ．Ｔｈｅｈｙｐｏｌｉｐｅｍｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｐｅｌｙｓａｃｃｈａ－ｒｉｄｅｆｒｏｍｎｉｎｅｐｌａｎｔｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｖｉｔｒｏｂｙｍｅａｓｕｒｉｎｇｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｌｉｐａｓｅ．Ｉｎｔｈｅｎｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｃｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｅｐｅｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｏｌｕｔｉｏｎ（１ｍＬ）ＷａｓｍｉｘｅｄｓｅｐａｒａｔｅｌｙｗｉｔｈＰＢＳ（１ｍＬ），ａｎｄｗａｔｅｒｈｅａｔｅｄａｔ９０ｏＣｆｏｒ４０ｍｉｎｔｏｒｅｍｏｖｅｅｔｈａｎ０１．Ｔｈｅｎｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｍｉｘｅｄｗｉｔｈｔｈｅｒｅａｃｔｉｖｅｓｏｌｕｔｉｏｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ０ｙ—ｏｘａｌａｎｄｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎｗｅｒｅｉｎｃｕｂａｔｅｄａｔ３７℃ｆｏｒ１５ｄ．ａｄｄｅｄｗｉｔｈｔｈｅａｍｉｎｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ弱ｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｗｈｉｌｅｐｕｒｅｗａｔｅｒａｓｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒ０１．ＴｈｅＡＧＥｓｃｏｎｔｅｎｔｓｗｅｒｅａｓｓａｙｅｄｂｙｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ衍ｔｈｅｍｉｓｓｉｏｎａｔ４４０ｎｍｕｐｏｎｅｘｃｉｔａｔｉｏｎａｔ３６５ｎｎｌｔｏｃａｌｃｕｌａｔｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｍｏｆ出ｅｐｅｌｙｓａｃｅｈａｒｉｄｅｆｒｏｍ
收稿日期：２０１２—０７—１０修回日期：２０１２一１１—２４
基金项目：国家自然科学基金项目（３１１６０３１９）、江西省自然科学基金项目（２００９ＧＺＮ００１４）、江西省科技厅重点项目
（２００９ＢＧＡ０１９００）和江西省教育厅科技项目（ＧＪＪｌｌ４０３）作者简介：王文君（１９７１一）男，教授，博士，主要从事分子营养学研究，Ｅ—ｍａｉｌ：ｗｗｊｕｎ９９９９＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ。
・５９４・江西农业大学学报第３５卷９ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｓｏｎｎｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｃｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ
ｏｎｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｈｙｐｏｌｉｐｅｍｉｃａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｒｏｕｓｈｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｓｔｈｅｌｉｐａｓｅｗｅｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔ，ａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅＣ，ｙｎｕｒａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ
（Ｌｏｕｒ．）Ｍｅｒｒ．ｗａｓｔｈｅｂｅｓｔ；ａｎｄｔｈｅｎｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｃｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｔｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｓｗｅｒｅａｌｓｏｖａｒｉｅｄ，ｏｆａｌｌｔｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅＡｌｏｅｗａｓｔｈｅｂｅｓｔ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｈｙｐｏｌｉｐｅｍｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ；ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ；ｎｏｎｅｎｚｙｍｅｇｌｙｃｏｓｙｌｃｏｓｙｉａｔｉｏｎ
多糖是普遍存在于自然界中的由许多相同或不同的单糖通过糖苷键连接在一起的多聚化合物，不仅是维持生命活动正常运转的基本物质，其生物活性更具有广泛的应用价值。研究显示，植物多糖具有包括免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、保护肝脏以及非酶糖基化等生理功能，且对机体毒副作用小。因此，对植物多糖的研究开发已经成为热门领域。如香菇多糖、灵芝多糖、云芝多糖已经在国内外临床上应用广泛。但是由于灵芝等中药材价钱昂贵，经济效益较差。于是人们开始寻求更为实用的植物来源。
随着生活水平的提高患高血脂、高血糖等心血管疾病的人群越来越多，寻找预防治疗这些疾病的药物也就成为了社会的热点。蛋白质非酶糖基化反应在糖尿病及其血管并发症的发生发展中具有重要的意义。非酶糖基化（ｎｏｎｅｎｚｙｍａｔｉｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ，ＮＥＧ）是蛋白质与羰基化合物发生的反应，反应最终形成一系列不可逆的糖基化终产物（ａｄｖａｎｃｅｄｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ，ＡＧＥｓ）¨Ｊ。ＡＧＥｓ可以与机体中的蛋白质发生能够改变蛋白质的生理活性的交联反应，从而引起蛋白质分子层面上的一系列机体病理生理上的状态改变。同时有报告称ＡＧＥＳ可能是引发粥样动脉硬化的关键产物旧Ｊ。如何合理的抑制蛋白质的非酶糖基化反应已经成为了近年来国内外医学药物健康等领域研究的热点∞Ｊ。在国外医学药物学当中已经得到证实的是，药物氨基胍可以有效的抑制蛋白质的糖基化反应【４Ｊ。目前的一些研究表明，多糖类化合物以及黄酮类化合物具有抗氧化，抗癌症肿瘤，抗心脑血管疾病等的多种有益的生物学作用，且对ＡＧＥｓ的生成也有一定抑制作用，而多糖类化合物以及黄酮类化合物广泛生存于多种天然植物中。
青钱柳［Ｃｙｃｌｏｃａｒｙａｐａｌｉｕｒｕｓ（Ｂａｔａｌ．）ｎｊｉ珊ｋａｊａ］、银杏（Ｇｉｎｋｇｏ）、绿茶、芦荟（Ａｌｏｅ）、荷叶（ＦｏｌｉｕｍＮｅｌｕｍｂｉｎｉｓ）、蛇接骨草［Ｇｙｎｕｒａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ（Ｌｏｕｒ）Ｍｅｒｒ］、菝葜（Ｓｍｉｌａｘｃｈｉｎａ）、鱼腥草（ＨｏｕｔｔｕｙｎｉａｃｏｒｄａｔａＴｈｕｎｂ．）、三叶草（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ）等９种植物都属于自然中常见的实用性较强的天然植物，有些还是药食同源的植物。本文对这９种植物粗提总多糖的体外降脂活性和其对非酶糖基化的抑制作用进行了相应的体外研究，以期能为其药用价值的开发利用提供有用的科学依据。
１材料与方法
１．１试验材料
青钱柳、银杏、绿茶、芦荟、鱼腥草、荷叶、蛇接骨草、菝葜和三叶草都来源于江西农业大学植物园。
１．２主要试剂
氢氧化铝、聚乙烯醇、三油酸甘油酯、乙二醛均购白天津永大化学试剂，脂肪酶、氨基胍和标准牛血清白蛋白购片Ｓｉｇｍａ公司。
１．３主要仪器
电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；ＲＥ一５２Ａ旋转蒸发器，上海亚荣生物化仪器厂；ＳＨＥ—ＩＩＩ型循环水真空泵，上海亚荣生化仪器厂；ＳＰ一７５４ＰＣ型分光光度计，上海光谱仪器有限公司；９６０型荧光分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；ＫＱ３２００ＤＢ型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；ＨＨ一６电热恒温水浴锅，国华电器有限公司。
１．４实验方法
多糖的提取植物烘干至恒重后粉碎过７０目筛，称取１００ｇ用石油醚按料液化比１：１０浸提过
夜脱脂脱色，蒸干备用。１．４．１
准确称取处理后的样品各５０ｇ，用石油醚（料液比ｌ：１０）在室温下脱水脱色１２ｈ。用循环真空泵抽滤，取滤渣，晾干。然后用蒸馏水超声辅助水提（料液比１：２０，６０℃，１
用旋转蒸发仪将滤液（６５℃）真空浓缩至约５０ｍＬ。ｈ，１００Ｗ），再次过滤，取滤液。
其次将浓缩物以体积比１：３加无水乙醇沉淀，将溶液在４０００ｒ／ｍｉｎ转速下离心１５ｍｉｎ，得沉淀物
第３期王文君等：９种植物粗多糖体外降脂及抑制非酶糖基化活性的研究．５９５．抽干。最后，用真空冷冻干燥机将抽干物质干燥完全，备用。用蒸馏水将干燥完全的样品定容至１００ｍＬ容量瓶，取５ｍＬ再定容至５０ｍＬ容量瓶，即为样品溶液，备用。
１．４．２体外降脂实验降脂实验根据霍世欣等”１稍有修改。脂肪酶催化脂肪分解，生成脂肪酸，以酚酞做指示剂，用０．０５ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ溶液滴定。通过比较有无抑制剂（提取液）加入的情况下，脂肪酶活性的差异，可得提取物对脂肪酶的抑制率，体现抗氧化活性的大小，并与含量进行相关性比较。
抑制率＝抑制脂肪酶活性／脂肪酶活性Ｘ１００％（１）采用脂肪酶活性测定法：
（１）取１００ｍＬ三角瓶，加入５ｍＬ０．０２５ｍｏＶｌ磷酸缓冲液（ｐＨ７．４）和４ｍＬ聚乙烯醇三油酸甘油酯乳化液（Ｏ．２２ｇ／ｍＬ聚乙烯醇，油酸甘油酯ｌｍＬ混合，高速搅拌均匀，得乳白色乳化液）作为底物，置于３７℃水浴中反应１０ｍｉｎ。加入１ｍＬ脂肪酶（２ｍｇ／ｍＬ），准确反应１５ｍｉｎ后，加体积分数为９５％乙醇终止反应。加酚酞２～３滴，用０．０５ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ标准溶液滴定至微红色，平行实验３次。
（２）按上述测定方法加入底物３７℃水浴保温１０ｍｉｎ后，在体系中加入１ｍＬ脂肪酶，后续相同。空白实验为加人底物后３７℃水浴保温１０ｍｉｎ，终止反应，加人１ｍＬ酶液和１ｍＬ样品提取液，滴定步骤同上。１．４．３糖基化实验在蛋白质非酶糖基化反应表１９种植物粗多糖降脂效果
体系中加人粗提黄酮进行药物干预实验，１５ｄ中每Ｔａｂ．１Ｈｙｐｏｆｉｐｅｍｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｎｉｎｅｋｉｎｄｓ３ｄ用荧光光度计测定荧光值，绘制动态曲线，加氨ｏｆｐｌａｎｔｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ％
基胍做阳性对照，加水做阴性对照，进行抑制能力
分析；以氨基胍作参比，计算粗提物对糖基化终产样品抑制率物ＡＧＥｓ的抑制率，并与含量进行相关性分析。ＳａｍｐｌｅＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｉｏ
（１）反应液配制：根据文献［６］稍加修改，将青钱柳Ｃｙｃｌｏｃａｒｙａｐａｌｉｕｒｕｓ３７．ｏｏ±６．５３８叫
乙二醛（ＧＸＬ）１２ｍｇ／ｍＬ，牛血清白蛋白（ＢＳＡ）银杏Ｇｉｎｋｇｏ５０．００±１０．５０“１２０ｍｇ／ｍＬ和ＥＤＴＡ１ｍｏＬ／Ｌ，在ｐＨ７．４的磷酸缓绿茶Ｃａｍｅｌｌｍｓｉｎｅｓｉｓ７２．００±４．６２６冲液（ＰＢＳ）０．２ｍｏｉ／Ｌ中混合而成，备用。芦荟Ａｌｏｅ６５．３３±６．１７“
（２）蛋白质非酶糖基化的药物干预实验：根荷叶Ｆｏｌｉｕｍｎｅｌｕｍｂｉｎｉｓ６２．６７±７．７５＆
据文献［１］的方法稍加修改，将提取液ｌｍＬ（浓度ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ７８．３３±２。９１“为１ｍｇ／ｍＬ）与ＰＢＳ１ｍＬ在９０℃下混合，４０蛇接骨草Ｃ柙ｕｒａｍｉｎ菝葜Ｓｍｉｌａｘｃｈｉｎａ１７．６７土７．８６８０“（以去除乙醇），再加入反应液１ｍＬ，３７℃水浴避
光孵育１、３、６、９、１２、１５ｄ，时间分６批，重复３份。鱼腥草Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａｃｏｒｄａｔａ４６．６７±３．１８Ｂ’”“
ｍｒ，／ｍＬ）与反应液做阳性三叶草Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ４３．２１±１．４７ＢＦＨｈ
氨基胍１ｍＬ（０．１
对照，蒸馏水１ｍＬ与反应液做空白对照。同一列不同大写字母表示差异极显著（Ｐ＜０．０１），
（３）抑制率的测定：根据糖基化终产物有自小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５）
发荧光的特性，采用荧光法测定荧光值，将抑制率Ｔｈｅｍｅａｎｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｏｒｃａｐｉｔａｌｌｅｔｔｅｒｉｎｔｈｅｓ蛐ｅ
ｒｏｗ与含量进行相关性分析。测定条件参考刘乃丰ｉｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（Ｐ＜０．０５ｏｒＰ＜０．０１）
等…：激发波长３６５ｎｍ，发射波长４４０ｎｍ，狭缝１０ｎｍ，灵敏度１。
抑制率，＝（Ｂ—Ａ）尉（２）其中Ｊ『：抑制率；Ａ：空白对照荧光强度；Ｂ：样品荧光强度。
１．５统计分析
各项指标以平均数土标准差表示，数据统计分析时采用ＤＰＳ数据处理系统（ｖ３．０１专业版）。
２结果与分析
２．１体外降脂实验测定结果
由表１可知，不同植物粗多糖抗氧化的活性相关很大，其中抑制胰脂肪酶活性最强的为蛇接骨草的提取物，达到７８．４１％，最低的是菝葜，其抗氧化活性仅为１７．６７％，两者差异极显著（Ｐ＜０．００１）。其他植物粗多糖的抗氧化活性大小依次为绿茶、芦荟、荷叶、银杏、鱼腥草、三叶草和青钱柳。
２。２非酶糖基化实验测定结果
由表２可知，在１～１５ｄ，随着时间的延长，荧光强度逐步增高，各提取物的抑制能力增强。在１５ｄ时，抑制糖基化反应能力最强的是芦荟粗多糖提取物，其抑制率达到９６．５１％，其余的提取物中，青钱柳
．５９６．江西农业大学学报第３５卷多糖、绿茶多糖的抑制率亦分别达到９５．７６％、９６．５１％，与氨基胍相比差异显著（Ｐ＜０．０５）。另外荷叶多糖达到８７．０８％、菝葜多糖达到８９．６４％，与氨基胍抑制率相当。
表２
Ｔａｂ．２９种植物粗多糖抑制糖基化结果％Ｒ鹳Ｉｌｌｔｓｏｆｎｏｎｅｎｚｙｎｍｔｉｃｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ飘ｔｉｖｉ白，ｏｆｎｉｎｅｐｌａｎｔｃｒｕｄｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
与氨基胍相比｛Ｐ＜０．０５，｝｝Ｐ＜０．０１。
ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅａｍｉｎｏｇｕａｎｉｄｉｎｅｇｒｏｕｐ＋Ｐ＜０．０５．籼＃尸＜０．０１．
３讨论
多糖对脂肪酶活性抑制作用测定的原理是，根据脂肪酶催化脂肪水解，生成脂肪酸和甘油。产生的脂肪酸可用标准碱液滴定，从而做定量测定怫Ｊ。在本研究中，对比未加植物粗多糖实验组，加入多糖实验组消耗的ＮａＯＨ减少，说明脂肪酶催化产生的脂肪酸减少，也可推断脂肪酶活性受到抑制。在本实验中发现，不同植物的粗多糖对脂肪酶活性一定抑制作用，能减少体内游离脂肪酸的产生，提示多糖可能通过抑制脂肪酶活性降低血脂水平，从而在一定程度上能预防心血管相关疾病。
蛋白质糖基化在糖尿病血管并发症的发生占有非常重要的地位。蛋白质和葡萄糖在体内可通过发生非酶促反应形成Ｓｃｈｉｆｆ碱和Ａｍａｄｏｒｉ产物等早期产物，进而经过一系列步骤形成不可逆的非酶糖基化终末产物一Ｊ。研究表明，ＡＧＥｓ可与蛋白质发生交联，沉积在长寿蛋白上，引起一系列病理生理改变，表现为造成动脉粥样硬化、视网膜微血管瘤形成和肾病的发生等¨０。。有研究表明，非酶糖基化反应除会引起糖尿病并发症之外，还可以通过阻碍与血红蛋白结合氧的释放和减少血流量两方面造成组织假性缺氧并加速血糖升高‘“。
多糖作为一种重要的活性成分，具有很强的抗氧化作用，可清除自由基，调节血糖和血脂的功能¨１｜。本研究对９种天然植物的粗多糖提取物进行了体外降脂和非酶糖基化的研究。发现绿茶、芦荟和蛇接骨草的体外降脂作用比较明显；而非酶糖基化的研究表明，绿茶、芦荟、青钱柳和菝葜对非酶糖基化的抑制率较高，且各种植物多糖提取物对非酶糖基化的抑制率都随着时间的延长，各提取物的抑制能力增强，与文献［１２］报道一致。尽管体外试验表明９种植物的粗多糖具有体外降脂和对非酶糖基化抑制作用，但对ＡＧＥｓ的抑制作用机制目前研究的不是很清楚，还有待进一步研究。（下转第６３０页）
．６３０．江西农业大学学报第３５卷压阀定位为１０Ｌ／ｍｉｎ，充气量１．４３Ｌ，也可表示为充气时间８．６Ｓ。
为了证实预测的试验条件的准确性，采用试验中得到的最佳提取工艺条件重复实验３次，得到花生壳内氮气含量９７。８２４％，与预测值为９６．８２６２％基本一致（相对误差Ｉ．０３％），说明该方程与实际情况拟合很好，充分验证了所构建模型的正确性，说明响应面法适用于花生充氮工艺进行分析和参数优化。
３结论
（１）优化得到的最佳工艺条件为：抽气时间２３
得到的含氮量为９７．８２４％。Ｓｘ充气量１．４３Ｌ、花生质量为１３４ｇ。此工艺条件下
（２）响应面法能较好地对烘烤花生真空充氮工艺进行回归分析和参数优化。３个因素对含氮量影响作用的相对大小依次为抽气时间、充气量、花生质量，抽气时间和充气量的交互项对花生壳内氮气含量影响高度显著；抽气时间和充气量的二次项的偏回归系数达到显著，表明试验因素对响应值的影响并不是单一的线性关系。
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9种植物粗多糖体外降脂及抑制非酶糖基化活性的研究
作者：
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刊名：
英文刊名：
年，卷(期)：王文君， 欧阳克蕙， 许文凤， 徐明生， 上官新晨， 蒋艳， WANG Wen-jun， OUYANG Ke-hui， XU Wen-Feng， XU Ming-sheng， SHANGGUAN Xin-chen， JIANG Yan江西农业大学江西省天然产物与功能食品重点实验室,江西南昌,330045江西农业大学学报Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis(Natural Sciences Edition)2013,35(3)
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