临床微生物检验流程

临床生物检微验程流

微生物实

验工室作流程待

检样本

1•标本.采集 2•镜. •3检.分离培 •养.细4鉴菌 定•5药.试验敏

涂片色染血 清检测 学ND A针探 克隆单抗

体接种

养培

阳

涂片染性色

阴性 I

报D告 STA

报告

2标采本集

标本标 本集收 病理

尿/痰

道感尿染/吸道感呼染

大

肠食便中物毒，泻腹

生殖

标本道

拭子

阴道炎,

宫炎颈, 前列腺 , 尿炎道,炎 病… 脓性肿, 腹液, 腔皮肤感染

脓

拭子或

射器注

3

标本送运

上马标本把种或接使用送培运基养

为什?么

细-菌生是 物!- 有 要 :必• 保 它持生存们 防•它止们增 长 为什么 ? -验实室采标与的地本距点很远离 :标本 是在家里， 或在病采人边床采

4

本运送

如果不能马上标种培养接基, 在送运过中把标本程储存

: 送培运基能避养标本免干

4℃燥尿

大，便

3

℃7/和或 运培养送 生殖道基本标 ,CS,F血 脓,

?

不需

细菌要生增 能可脆弱的是细 可菌能厌是氧

菌

5

样本送运运送－养培

细基

菌•Am eis培养 基 St•urats培’基

养• aCy－Bralri养基

培•运送拭子： Ameis琼脂凝、胶体运液送子 拭病毒 • 4M养培（基制成）• M4 TR培养（基成制）

6

检

镜 -1 直接查检把一滴放在 玻与片片之间盖 镜片:x 4 ,0 dr y•细 菌的在存和数 •目形 和分态类点 特• 力 • 细动胞学观：察胞细 如白：胞（感细染的指使

7

）

镜

检 2–革 兰氏染色 菌学最常细用染色的法方

用来给

菌分类

细

兰氏+

革兰革 -氏

紫蓝色 粉

红

8色

其

他染的方色法

olorCtainowith ethmylee nlbe亚u基甲染蓝

色于用白胞细的细内菌染色 e g :淋双病球

 菌Giema吉母s染色萨

于用液或血胞细的细菌染色

内Zi hl - eeNelen s-齐奈染色

用于

支分杆染色

菌A rciide noanger啶橙吖色

染

荧染光色用于菌细染量感的少标

9本

检镜－液染染

试剂色

•革 氏染色液兰装套 4R080025 0m*l4 •抗 染液酸套装分枝杆菌－（核结）R 0411 252ml0*6 荧•染光液真－菌微、子孢等 虫aBtcDrip染o剂

染色色控片质•

抗酸 色染革、氏染兰、色隐子虫等孢

01

培

养

如果使细菌生长, 要必须满足菌细需的 要

:•营养 琼 •脂 正确空的气环境• 确的温度正

11

分离培养

培养—基-

择正确选培的基养 • :乎要视测检的细菌 视乎标本

•?

础基养培 ?

显色培基基养?

增菌培

基 ?养

选性培择基 养

?21

分离培养—培养

•基 同种类不的养培

基 基础培•基 : 养最含少的营养元素

增菌•养培:基 础培基养+ 血基 ,生因子...长

•选择 性培养 :基 加抗生有或素他 •其 色培养基显: 加有导 产生致颜色菌落有的显底物色

培基可养以同是时择选和增菌,性 或择选性显和..色.

1

3

培

养

•

在固培体养的生长 基:

细菌放在把养营上会基使细增长菌和形成肉可眼的见组:

菌落

= 1万细百菌= 02代



来分用

离1

4

培养－ xOodi干粉培养

基 •M：基础干C，含有丰粉的富源、碳源氮、长生子因、选性抑择因子制 ，显色 剂 SR：•加添，剂常通包1装小瓶/0，盒瓶通每常可制5配00lm22或5ml加添的 养基，培成分常通抗是生和热敏感素营的养分

成

51

养－ 培Oxid制o培养成基医院常用

项：品

•滋 性养：养营脂琼、血板平巧、克力平 •板肠道菌 麦：凯、康中蓝国玫酸、

红

伊红美、 蓝SS平板

分隔•平：血琼脂/麦康凯板脂、 血琼琼脂/国中蓝红玫琼酸等 •脂真 ：沙菌保氏葡萄糖• 显色：念菌珠色显养基培 尿、感路染色显培基

1养

6

培

养

•

液体培养在的基生长:

细菌在

营肉养汤会增里,生 培令养基变浑得 浊(可以用眼观察肉)用肉

来汤培养不能是区多种别菌生长还是细种细菌一生

长来用增

菌

例:脑心 肉, 汤胰酶大豆汤.肉..

1

7

分

离培养—培养度温

• 选

正确择的温度:

- 细菌: 37℃ - 霉 菌 : 30℃培 养箱 ? 0℃3 73

1℃9

离培分养—养条培件

不

的呼同种吸类

1

23 4

2

0分培养—离养培件

条 - 1对绝氧需 菌要有需氧 它气们是用氧利来气产生能量 :呼吸（ 一氧化的种代谢用）作

例 ：假单菌胞分，支菌

杆 - 兼2性氧菌厌可在 空气有没有或空下生长， 但气主是要能量的是发酵靠生产

例

： 肠 道菌杆

12

离分培养—养条培件

3 绝-厌氧对菌只 在会没有空气情的生长况。氧气这些对菌细有是 毒。 的有的所能量是从发酵来 而（酵发代）谢

例 :

梭

菌属细菌

4 - 微需

氧细菌较 喜在欢氧少气环境的生长下

：例弯曲 ， 支原菌体5

嗜-氧二碳的细菌化 有些菌较细喜欢二多氧碳化环境生的

例 ：长 淋氏病菌

22

分离

培养培养—件 条•选 择当的适空气环 :境-

需菌氧 -兼性需氧

- 微需菌菌 氧-厌氧菌 - 嗜 二氧化的细菌

碳需产无生

器

需微菌产生器氧

厌产生氧 C器2O 产器

生2

3

分离

养培—养培间时

•细 生菌过程长

菌细度浓

324

1

时间

24rHs2

4

4

8rs

H离分培养

目的：获纯得养培后一步鉴进 1定 .无菌位的部标本血（液，脊液脑，胸水腹，关节，液尿液）

：直

接种在液接/体体固培基。养2

.正常 菌群在存部的标本位各（鼻咽种，道试子，尿粪）：便 种接至选择鉴别培或基养 。培条养件37℃ ：1-260时小培养少数，3需-周（4如鲁菌，布枝杆菌分 ）优点：比直接片涂镜检的阳率高。

25

性

细菌鉴

定用条需件: 取 得一个纯培 (养如果多是种菌细标本

)第步一: 分 离把标 接种在本养营1 细 菌1菌 落

26

细

菌定鉴

纯

1 分22

3 4 4

27

细鉴定菌—菌细类分

根据

•族 属• 种类•M icorocccacaee球菌微族 Stpahlocoyccus葡萄球菌属aur ues金黄色萄球菌葡 S. ureAs金黄色u萄葡菌球e xaplme: Entero acterbicaaee肠菌杆族E sherichcia希氏埃属 菌cli大o（肠杆）菌

E Co.li肠大希埃菌

2

8

细鉴定菌—向倾实性验

结果帮能助判细断的族或菌 属 •态形学: 球菌或菌（形杆）  态布情况 分 色染况情 •观 察平板上菌的特征：落大小

，颜色外型，，气，在味血平上板否是血溶

•

触 酶，化氧

酶2

9

细鉴定—酶类检测

菌 触–实验酶:还 原过化氧氢

2 H22 O 2H 2O O+

触酶

2–

氧化酶: T PM

D氧 化 的MPTD

阳性呈现

红紫

(色MTP D= TeNtar metyh l-para - phnyleee - dinamin)

e

03

例

举–球菌革，兰阳性，触酶性阳 葡萄球菌 球–菌，革阳兰，触性酶性阴 链球 –菌菌，革杆阴兰性氧化酶，性阴杆菌肠 杆-菌，革兰性，阴化氧阳性酶非发酵菌

31

细鉴定菌生—化性特研

细菌新陈代究谢究研酶类代谢）（举例:

酵糖发产 葡酸萄糖酶 pH小

减

颜变化 TE色S T+)(

无酶 T

ST (-)

E2

3细菌

定鉴生化反应

生—化反应 ：的氧糖化发酵或 萄葡糖乳，糖，蔗， 阿拉伯糖糖 白质蛋谢 凝代胶乳类，， 蛋血白，酶脲酶，羧酶 脱糖类谢 脂代谢代 ：肪脂，卵磷酶酵脂

鉴别素纸片杆菌：肽、普托奥欣片

诊纸断片和纸断条

诊33

诊断

鉴与定R－PAD生I化鉴定

•速鉴快别种微多生物

•

简的单一步种

接• 小时有氧孵育

• 4独的特色颜应和明确反结的果

大•量容数据

库

34

细菌鉴

定乳胶—集

凝•抗原特 性研 究免反应 : 疫抗-原抗反应体抗 体定固乳于胶颗粒 应相抗出原现时抗主动黏体

附

黏 包被抗附乳胶 体细菌

-用 分纯已细的菌-

直或用标本 接优 :势快 速(立即反 应)

3

5细

鉴定—菌色显养基

•培 通过色来颜定鉴：

接直在平上鉴定细板菌: 菌颜色

落

克柔珠念菌 光念滑菌 白色珠念菌珠 热念带菌珠 平滑近念珠菌



于常见用本标

用常于见细

重菌要性: 约节间和时成本

36

菌细定鉴—分子生学方物

法•分 生子学物鉴定 通：检过特测定DN的A段片来定细鉴

用菌细或直接用标本进菌DNA检行

3测

7

药物敏

感实验 (AS)T

目的：指临床导理合用抗生使素，制控染感，细耐菌 性监药测

方法：

片扩散纸(法K-法B E-Te)t 琼s脂稀法(平释板 肉)稀释汤: 试法管 孔板微

38

片扩纸散法•

测 菌抑圈直 径•直 大径小对MIC应值

A

B•

根直径报告S据，，IR。

H

GC

F

E

D

3

9

纸片散扩法

4

0

汤肉释稀法MI

INUM MNIIBITHORYCON ENCTARTON(MIC)最低I抑浓度 抗生素能菌抑制菌可见细生的长最浓度。低



不生

=长抗 素生抑细制生长菌 长生= 抗生 无法素

抑制细菌长

Inc生easirn Agnibiottci onc.C. 5 2.5 102 4

MIC

=8 gµ/lm8

6 132

1

4

肉汤

微稀释法量

4

2

脂稀琼法释•

逐增加渐养培中基抗生的素浓度

1

1

2

1

2

1

1

2

3

4

3

4

3

4

3

4C

ontol

r1/glm

2g/m

l4g/m

l3

4

琼

稀释脂法

1

2

1

21

2

1

2

3

4

34

2g3/m

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4

3

4

ConrtloS raitn 12 34

4

41gm/l G + C+ ++1 g/ml+ + +2g/ml +

+

4g/lm MC 4

4 4g/lm +

Et-se

4t

5敏药试验

临

结床果报告类分:

S

R I

S scueptblei敏 Res感siatt耐药nI tnemedraiet中

介

6

4

鉴

药敏定动化仪器的自用

使实对验的室助

1.帮加 快实验告报的速 2. 度少人为误减差提高检，结果的验准确

3.性降低 患的者治费疗用

.4提高实验室 的济效益经

74

床临生微物实验室的务任



助帮临医生床对感染性疾病作出及时断诊制定和确治疗方正案 评抗菌治疗估的疗效 感对菌染行流进病学调行查和跟

踪

48

微生物实验室点

特检测对象的微：生物小 检的时测限需一定：间的时养 培检结测的果临床义：意指导临用床药国 微内生实验室的现状物 1：检.手段测（富差贫明异显 ）.实2验地室位较低 3国内.临床生医的诊治疗习断惯4 实.工作验人素员质5. 与床临严脱重节

49

Q&A

50

oTgtheer ,Evryeone cAhieves oMr

5e

1

临床生物检微验程流

微生物实

验工室作流程待

检样本

1•标本.采集 2•镜. •3检.分离培 •养.细4鉴菌 定•5药.试验敏

涂片色染血 清检测 学ND A针探 克隆单抗

体接种

养培

阳

涂片染性色

阴性 I

报D告 STA

报告

2标采本集

标本标 本集收 病理

尿/痰

道感尿染/吸道感呼染

大

肠食便中物毒，泻腹

生殖

标本道

拭子

阴道炎,

宫炎颈, 前列腺 , 尿炎道,炎 病… 脓性肿, 腹液, 腔皮肤感染

脓

拭子或

射器注

3

标本送运

上马标本把种或接使用送培运基养

为什?么

细-菌生是 物!- 有 要 :必• 保 它持生存们 防•它止们增 长 为什么 ? -验实室采标与的地本距点很远离 :标本 是在家里， 或在病采人边床采

4

本运送

如果不能马上标种培养接基, 在送运过中把标本程储存

: 送培运基能避养标本免干

4℃燥尿

大，便

3

℃7/和或 运培养送 生殖道基本标 ,CS,F血 脓,

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不需

细菌要生增 能可脆弱的是细 可菌能厌是氧

菌

5

样本送运运送－养培

细基

菌•Am eis培养 基 St•urats培’基

养• aCy－Bralri养基

培•运送拭子： Ameis琼脂凝、胶体运液送子 拭病毒 • 4M养培（基制成）• M4 TR培养（基成制）

6

检

镜 -1 直接查检把一滴放在 玻与片片之间盖 镜片:x 4 ,0 dr y•细 菌的在存和数 •目形 和分态类点 特• 力 • 细动胞学观：察胞细 如白：胞（感细染的指使

7

）

镜

检 2–革 兰氏染色 菌学最常细用染色的法方

用来给

菌分类

细

兰氏+

革兰革 -氏

紫蓝色 粉

红

8色

其

他染的方色法

olorCtainowith ethmylee nlbe亚u基甲染蓝

色于用白胞细的细内菌染色 e g :淋双病球

 菌Giema吉母s染色萨

于用液或血胞细的细菌染色

内Zi hl - eeNelen s-齐奈染色

用于

支分杆染色

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染

荧染光色用于菌细染量感的少标

9本

检镜－液染染

试剂色

•革 氏染色液兰装套 4R080025 0m*l4 •抗 染液酸套装分枝杆菌－（核结）R 0411 252ml0*6 荧•染光液真－菌微、子孢等 虫aBtcDrip染o剂

染色色控片质•

抗酸 色染革、氏染兰、色隐子虫等孢

01

培

养

如果使细菌生长, 要必须满足菌细需的 要

:•营养 琼 •脂 正确空的气环境• 确的温度正

11

分离培养

培养—基-

择正确选培的基养 • :乎要视测检的细菌 视乎标本

•?

础基养培 ?

显色培基基养?

增菌培

基 ?养

选性培择基 养

?21

分离培养—培养

•基 同种类不的养培

基 基础培•基 : 养最含少的营养元素

增菌•养培:基 础培基养+ 血基 ,生因子...长

•选择 性培养 :基 加抗生有或素他 •其 色培养基显: 加有导 产生致颜色菌落有的显底物色

培基可养以同是时择选和增菌,性 或择选性显和..色.

1

3

培

养

•

在固培体养的生长 基:

细菌放在把养营上会基使细增长菌和形成肉可眼的见组:

菌落

= 1万细百菌= 02代



来分用

离1

4

培养－ xOodi干粉培养

基 •M：基础干C，含有丰粉的富源、碳源氮、长生子因、选性抑择因子制 ，显色 剂 SR：•加添，剂常通包1装小瓶/0，盒瓶通每常可制5配00lm22或5ml加添的 养基，培成分常通抗是生和热敏感素营的养分

成

51

养－ 培Oxid制o培养成基医院常用

项：品

•滋 性养：养营脂琼、血板平巧、克力平 •板肠道菌 麦：凯、康中蓝国玫酸、

红

伊红美、 蓝SS平板

分隔•平：血琼脂/麦康凯板脂、 血琼琼脂/国中蓝红玫琼酸等 •脂真 ：沙菌保氏葡萄糖• 显色：念菌珠色显养基培 尿、感路染色显培基

1养

6

培

养

•

液体培养在的基生长:

细菌在

营肉养汤会增里,生 培令养基变浑得 浊(可以用眼观察肉)用肉

来汤培养不能是区多种别菌生长还是细种细菌一生

长来用增

菌

例:脑心 肉, 汤胰酶大豆汤.肉..

1

7

分

离培养—培养度温

• 选

正确择的温度:

- 细菌: 37℃ - 霉 菌 : 30℃培 养箱 ? 0℃3 73

1℃9

离培分养—养条培件

不

的呼同种吸类

1

23 4

2

0分培养—离养培件

条 - 1对绝氧需 菌要有需氧 它气们是用氧利来气产生能量 :呼吸（ 一氧化的种代谢用）作

例 ：假单菌胞分，支菌

杆 - 兼2性氧菌厌可在 空气有没有或空下生长， 但气主是要能量的是发酵靠生产

例

： 肠 道菌杆

12

离分培养—养条培件

3 绝-厌氧对菌只 在会没有空气情的生长况。氧气这些对菌细有是 毒。 的有的所能量是从发酵来 而（酵发代）谢

例 :

梭

菌属细菌

4 - 微需

氧细菌较 喜在欢氧少气环境的生长下

：例弯曲 ， 支原菌体5

嗜-氧二碳的细菌化 有些菌较细喜欢二多氧碳化环境生的

例 ：长 淋氏病菌

22

分离

培养培养—件 条•选 择当的适空气环 :境-

需菌氧 -兼性需氧

- 微需菌菌 氧-厌氧菌 - 嗜 二氧化的细菌

碳需产无生

器

需微菌产生器氧

厌产生氧 C器2O 产器

生2

3

分离

养培—养培间时

•细 生菌过程长

菌细度浓

324

1

时间

24rHs2

4

4

8rs

H离分培养

目的：获纯得养培后一步鉴进 1定 .无菌位的部标本血（液，脊液脑，胸水腹，关节，液尿液）

：直

接种在液接/体体固培基。养2

.正常 菌群在存部的标本位各（鼻咽种，道试子，尿粪）：便 种接至选择鉴别培或基养 。培条养件37℃ ：1-260时小培养少数，3需-周（4如鲁菌，布枝杆菌分 ）优点：比直接片涂镜检的阳率高。

25

性

细菌鉴

定用条需件: 取 得一个纯培 (养如果多是种菌细标本

)第步一: 分 离把标 接种在本养营1 细 菌1菌 落

26

细

菌定鉴

纯

1 分22

3 4 4

27

细鉴定菌—菌细类分

根据

•族 属• 种类•M icorocccacaee球菌微族 Stpahlocoyccus葡萄球菌属aur ues金黄色萄球菌葡 S. ureAs金黄色u萄葡菌球e xaplme: Entero acterbicaaee肠菌杆族E sherichcia希氏埃属 菌cli大o（肠杆）菌

E Co.li肠大希埃菌

2

8

细鉴定菌—向倾实性验

结果帮能助判细断的族或菌 属 •态形学: 球菌或菌（形杆）  态布情况 分 色染况情 •观 察平板上菌的特征：落大小

，颜色外型，，气，在味血平上板否是血溶

•

触 酶，化氧

酶2

9

细鉴定—酶类检测

菌 触–实验酶:还 原过化氧氢

2 H22 O 2H 2O O+

触酶

2–

氧化酶: T PM

D氧 化 的MPTD

阳性呈现

红紫

(色MTP D= TeNtar metyh l-para - phnyleee - dinamin)

e

03

例

举–球菌革，兰阳性，触酶性阳 葡萄球菌 球–菌，革阳兰，触性酶性阴 链球 –菌菌，革杆阴兰性氧化酶，性阴杆菌肠 杆-菌，革兰性，阴化氧阳性酶非发酵菌

31

细鉴定菌生—化性特研

细菌新陈代究谢究研酶类代谢）（举例:

酵糖发产 葡酸萄糖酶 pH小

减

颜变化 TE色S T+)(

无酶 T

ST (-)

E2

3细菌

定鉴生化反应

生—化反应 ：的氧糖化发酵或 萄葡糖乳，糖，蔗， 阿拉伯糖糖 白质蛋谢 凝代胶乳类，， 蛋血白，酶脲酶，羧酶 脱糖类谢 脂代谢代 ：肪脂，卵磷酶酵脂

鉴别素纸片杆菌：肽、普托奥欣片

诊纸断片和纸断条

诊33

诊断

鉴与定R－PAD生I化鉴定

•速鉴快别种微多生物

•

简的单一步种

接• 小时有氧孵育

• 4独的特色颜应和明确反结的果

大•量容数据

库

34

细菌鉴

定乳胶—集

凝•抗原特 性研 究免反应 : 疫抗-原抗反应体抗 体定固乳于胶颗粒 应相抗出原现时抗主动黏体

附

黏 包被抗附乳胶 体细菌

-用 分纯已细的菌-

直或用标本 接优 :势快 速(立即反 应)

3

5细

鉴定—菌色显养基

•培 通过色来颜定鉴：

接直在平上鉴定细板菌: 菌颜色

落

克柔珠念菌 光念滑菌 白色珠念菌珠 热念带菌珠 平滑近念珠菌



于常见用本标

用常于见细

重菌要性: 约节间和时成本

36

菌细定鉴—分子生学方物

法•分 生子学物鉴定 通：检过特测定DN的A段片来定细鉴

用菌细或直接用标本进菌DNA检行

3测

7

药物敏

感实验 (AS)T

目的：指临床导理合用抗生使素，制控染感，细耐菌 性监药测

方法：

片扩散纸(法K-法B E-Te)t 琼s脂稀法(平释板 肉)稀释汤: 试法管 孔板微

38

片扩纸散法•

测 菌抑圈直 径•直 大径小对MIC应值

A

B•

根直径报告S据，，IR。

H

GC

F

E

D

3

9

纸片散扩法

4

0

汤肉释稀法MI

INUM MNIIBITHORYCON ENCTARTON(MIC)最低I抑浓度 抗生素能菌抑制菌可见细生的长最浓度。低



不生

=长抗 素生抑细制生长菌 长生= 抗生 无法素

抑制细菌长

Inc生easirn Agnibiottci onc.C. 5 2.5 102 4

MIC

=8 gµ/lm8

6 132

1

4

肉汤

微稀释法量

4

2

脂稀琼法释•

逐增加渐养培中基抗生的素浓度

1

1

2

1

2

1

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4

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4C

ontol

r1/glm

2g/m

l4g/m

l3

4

琼

稀释脂法

1

2

1

21

2

1

2

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34

2g3/m

l

4

3

4

ConrtloS raitn 12 34

4

41gm/l G + C+ ++1 g/ml+ + +2g/ml +

+

4g/lm MC 4

4 4g/lm +

Et-se

4t

5敏药试验

临

结床果报告类分:

S

R I

S scueptblei敏 Res感siatt耐药nI tnemedraiet中

介

6

4

鉴

药敏定动化仪器的自用

使实对验的室助

1.帮加 快实验告报的速 2. 度少人为误减差提高检，结果的验准确

3.性降低 患的者治费疗用

.4提高实验室 的济效益经

74

床临生微物实验室的务任



助帮临医生床对感染性疾病作出及时断诊制定和确治疗方正案 评抗菌治疗估的疗效 感对菌染行流进病学调行查和跟

踪

48

微生物实验室点

特检测对象的微：生物小 检的时测限需一定：间的时养 培检结测的果临床义：意指导临用床药国 微内生实验室的现状物 1：检.手段测（富差贫明异显 ）.实2验地室位较低 3国内.临床生医的诊治疗习断惯4 实.工作验人素员质5. 与床临严脱重节

49

Q&A

50

oTgtheer ,Evryeone cAhieves oMr

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1