两种新型琥珀酸脱氢酶抑制剂的抑菌活性比较

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两种新型琥珀酸脱氢酶抑制剂的

抑菌活性比较

申瑞平,宋莹莹,王秋红,刘

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(山东农业大学植物保护学院,农药毒理与应用重点实验室,山东泰安271018)

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摘要:采用茵丝生长速率法、孢子萌发法和幼苗法比较了吡唑萘茵胺和氟吡茵酰胺对23

收稿日期:2014—04—22

基金项目:公益性行业(农业)科研专项(200903033)。

作者简介:申瑞平,女,硕士研究生。联系电话:18205483158;E—mail:shenmipin9518@163.com。

通讯作者:刘峰,男,博士,副教授,主要研究农药毒理与应用技术。联系电话:0538—8242611;E—mail:niu@sd锄.

edu.cno

一52—

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种病原茵的毒力。结果表明,吡唑萘茵胺对黄瓜褐斑病菌、黄瓜炭疽病菌、辣椒炭疽病菌、番茄早疫病菌、苹果斑点病菌、辣椒疫霉病菌、马铃薯晚疫病茵、番茄灰霉病菌、番茄茵核病茵、水稻稻瘟病茵和苹果轮纹病茵茵丝生长均有较高的抑制活性,其EC∞值为0.10~

9.52吵咖L,EC∞值为1.87~62.23¨∥mL。吡唑萘茵胺对花生白绢病茵、苹果腐烂病茵、棉花

黄萎病菌、棉花立枯病茵和镰刀茵属病原茵的抑制活性均高于氟吡茵酰胺。而氟吡茵酰胺却对黄瓜褐斑病茵、番茄早疫病茵、苹果斑点病茵、番茄灰霉病茵、番茄茵核病茵和苹果

褐斑病菌具有较高的抑制活性,其EC瓶为0.39~3.98斗∥mL,与吡唑萘茵胺相当。吡唑萘茵

胺对玉米丝黑穗、花生冠腐病茵和番茄灰霉病茵的孢子有较高的毒力,其EC∞值分别为

O.002

9、0.07和1.38斗g,mL。氟吡茵酰胺仅对花生冠腐病菌、番茄灰霉病茵的孢子有较高的

活性,且它与吡唑萘茵胺活性相当。吡唑萘茵胺和氟吡茵酰胺对黄瓜白粉病茵均有较高的毒力,EC50值分别为O.04、0.05斗g,mL。因此,吡唑萘茵胺比氟吡茵酰胺更加广谱,且抑茵活性相当或更高。

关键词:琥珀酸脱氢酶抑制剂;抑茵活性;吡唑萘茵胺;氟吡茵酰胺中图分类号:S482.2;s481+.9

文献标识码:A

文章编号:1002—5480(2014)08—52—06

琥珀酸脱氢酶抑制剂类(SDHIs)杀菌剂是活性,但对属卵菌的辣椒疫霉病菌没有活性【31。杀菌剂抗性行动委员会(FRAC)新划分出来的尽管两种药剂的作用机制相同.但结构存在较一类作用机制和抗性机理相似的化合物【“。该类大差异,其杀菌谱间是否也存在差异尚未见系杀菌剂通过作用于蛋白复合体Ⅱ影响病原菌的统报道。

呼吸链电子传递系统,阻碍其能量的代谢,抑本文系统比较了吡唑萘菌胺和氟吡菌酰胺制病原菌的生长、导致其死亡【2】。目前琥珀酸脱对国内常见农作物病原菌的毒力。为该类药剂氢酶抑制剂从化学结构上可分为7类,包括15个的进一步开发和应用提供参考。品种【3】。萎锈灵是该类杀菌剂最早的品种,以及1材料与方法

之后的氧化萎锈灵,但这些品种防治谱较窄【41。1.1

供试材料供试菌株:黄瓜靶斑病菌

随着新化合物创制技术的发展,新一代的琥珀

(co畔spomc∞s讹。如);黄瓜炭疽病菌(coZ.

酸脱氢酶抑制剂如:吡唑萘菌胺(厶op"篮瓣)

如tot廊^u,,lor6拓以删);辣椒炭疽病菌(cof.

和氟吡菌酰胺(∥Hop”册.)具有广谱活性嘲。

如to‘庇^啪c印s记i);番茄枯萎病菌(‰祈啪

吡唑萘菌胺是先正达公司于2008年研发的删Dmm)、玉米茎腐病菌(凡塔硎“mgr啪in-

一种新型杀菌剂,并于2010年在英国获得批准e帆m)、小麦赤霉病菌(fk硎Mmg胁in—上市【q,在中国正进行农药登记。该杀菌剂用于e伽肌)、棉花红腐病菌(胁硎啪spp.);番茄

防治小麦、大麦和其他谷物的重要病害,且可早疫病菌(A抛r力砒so协i)、苹果斑点落叶病

以促进作物增产网。吡唑萘菌胺对麦类病原菌如菌(Akrn硼池,利i);番茄灰霉病菌(鼬彤蠡

锈菌和壳针孢属菌有较高的防治效果【q。氟吡菌ci,lere口);番茄菌核病菌(&如roti讹sc如ro如.

酰胺由拜耳作物科学公司研发嘲。并于2010年在九肌);马铃薯晚疫病菌(用咿op^£br口i,咖s—

中国登记用于防治黄瓜白粉病。氟吡菌酰胺可t删)、辣椒疫霉病菌(聊^tbm

用于防治多种作物上的病害。对番茄早疫病菌、瘟病菌(P廊舭D够循);花生白绢病菌

c印s记i);稻

黄瓜白粉病菌、人参黑斑病菌、大蒜菌核病菌、(&如roti啪ro狐越);苹果轮纹病菌(肘0cropb,觚

花生褐斑病菌、番茄灰霉病菌等有良好的抑制

矗舢协以面);苹果褐斑病菌(M嬲so,liM

coro一

一53—

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病菌孢子悬浮液:将病菌接种于PDA平板上,M砌);苹果腐烂病菌(印ospDms∞c以淞);棉

花黄萎病菌(%厅如i胁umaf60一以mm);棉花立

25℃培养,待其产生大量分生孢子后,用灭菌水

枯病菌(R^扬oc幻n谊soki);玉米丝黑穗病菌

(sp^nceZo£kcore以i帆o);花生冠腐病菌(As—

从产生大量分生孢子的培养基上洗下分生孢子,

经灭菌纱布过滤后制成分生孢子悬浮液,并用血球计数板测定孢子浓度,将分生孢子悬浮液

pe呼ffmn谚r);黄瓜白粉病菌(印^nero£kco

膨柳聊口)。以上菌株均由山东农业大学农药毒理

与应用重点实验室保存菌种,经转接、纯化培养后供试。

供试培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA);燕麦琼脂培养基;水琼脂葡萄糖培养基。

供试药剂:吡唑萘菌胺(isopymzam)99%原药;氟吡菌酰胺(nuopyram)99%原药,均由西格玛奥德里奇有限公司提供。2个原药均用丙

浓度调节到约1×105c“mL。

1.2.2.2接种与培养将100斗L孢子悬浮液

(1×105c“mL)均匀涂布在含吡唑萘菌胺系列浓

度的2%水琼脂(1%葡萄糖)平板上,25℃恒温箱中黑暗培养,待空白对照孢子萌发率达60%以上。镜检孢子萌发情况,每处理随机检测100个

孢子。计算药剂对孢子的萌发抑制率。采用DPs

统计软件中几率值分析法,计算药剂对靶标菌孢子萌发的有效抑制中浓度(EC卯值)。以氟吡菌酰胺作为对照药剂,不含药的平板为空白对

酮配制成浓度为1×104斗咖L的母液备用。

1.2试验方法

1.2.1抑制病原菌菌丝生长的毒力测定

采用

照,每处理重复4次。

1.2.3对黄瓜白粉病菌的毒力测定

1.2.3.1

菌丝生长速率法【91,将母液用无菌水配制成5~7个系列浓度,PDA培养基灭菌后稍冷却,加入配好的药剂充分摇匀,制成含有吡唑蓁菌胺系列浓度供试药剂的培养基平板(辣椒疫霉病菌和

分生孢子悬浮液的配制

参考贾忠明

等【nl的方法,采集温室黄瓜叶片上自生新鲜白粉病叶。剪取发病充分的新鲜病斑,置于0.1%的十二烷基硫酸钠(SDS)溶液中,洗涤分生孢子.在微型漩涡混合仪上混合20s使分生孢子充分悬浮,稀释成浓度为每视野40~50个孢子,视野(10×10倍显微镜)的孢子悬浮液,供接种。1.2.3.2药剂配制及毒力测定采用小苗喷雾法.将黄瓜种植于装有灭菌育苗基质的塑料杯中。每杯1粒。待子叶充分展开时供试验备用。将母液配制成5.7个系列浓度,每处理4次重复(共12株),设清水对照。24h后毛笔涂抹接种,待子叶自然晾干后,置于光照培养箱光暗(16L:8D)交替培养7d后,检查病斑数,计算病

马铃薯晚疫病菌用燕麦琼脂培养基。其余用PDA

培养基)。置于25℃(马铃薯晚疫病菌于18℃)恒温箱中黑暗培养.当空白对照的菌丝长至70mm以上时,测量各处理菌落直径,并计算抑制率。采用DPs统计软件中几率值分析法,计算药剂对靶标菌菌丝生长的有效抑制中浓度(EC卯值)。以氟吡菌酰胺作为对照药剂。不含药的平板为空白对照,每处理重复4次。

1.2.2抑制病原菌孢子萌发的毒力测定1.2.2.1孢子悬浮液的配制

玉米丝黑穗冬孢

子悬浮液嗍:称取10mg病菌冬孢子粉,将孢子粉放入无菌水中浸泡48h后.4000r离心10min弃上清液,再用0.03%Tween一20水溶液浸泡4h后

斑抑制率。采用DPS统计软件中几率值分析法,

计算药剂对黄瓜白粉病菌的有效抑制中浓度(EC50值)。

000r离心10IIlin弃上清液,再加入高锰酸钾0.25%

水溶液20mL,震荡摇匀,静置30Ⅱlin,4000r离心10min弃上清液,并用血球计数板测定孢子浓度,

病斑抑制率=盐驾翳镰产×・嗽

清水对照病斑数

将分生孢子悬浮液浓度调节到约l×105c“mL。

花生冠腐病菌、番茄灰霉病菌和番茄枯萎

1.3数据分析实验数据采用DPs软件进行处

理,并采用Dunc粕氏新复极差法进行显著性分析。

一54—

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2结果与分析

2.1

高的抑菌活性,EC∞值为0.12—9.52斗∥mL,EC∞

两种药剂抑制病原茵菌丝生长的毒力

值为11.37~62.23“咖L;其对番茄枯萎病菌、玉

米茎腐病菌、小麦赤霉病菌、棉花红腐病菌、花生白绢病菌、苹果褐斑病菌、苹果腐烂病菌、棉花黄萎病菌、棉花立枯病菌的毒力较低,

含不同浓度吡唑萘菌胺的培养基上,20种供试病原菌的菌丝生长均受到不同程度的抑制,抑制率与药剂质量浓度呈正相关(表1)。毒力回归分析结果表明:吡唑萘菌胺对水稻稻瘟病菌的毒力最高,EC50值为0.10斗g/mL,EC∞值为

EC.艚均达100斗咖L以上,但其抑菌活性仍明显

高于氟吡菌酰胺。氟吡菌酰胺仅对黄瓜褐斑病菌、番茄早疫病菌、苹果斑点病菌、番茄灰霉病菌、番茄菌核病菌、苹果褐斑病菌6种病原菌有较高的的抑菌活性,且活性与吡唑萘菌胺相当。

1.87¨咖L;其次是对黄瓜褐斑病、黄瓜炭疽病

菌、辣椒炭疽病菌、番茄早疫病菌、辣椒疫霉病菌、马铃薯晚疫病菌、苹果斑点病菌、番茄灰霉病菌、番茄菌核病菌、苹果轮纹病菌有较

表1吡唑萘蕾胺和氟吡菌酰胺对加种病原菌丝生长的毒力

黄瓜褐斑病菌黄瓜炭疽病菌辣椒炭疽病菌番茄枯萎病菌玉米茎腐病菌小麦赤霉病菌棉花红腐病菌番茄早疫病菌苹果斑点病菌番茄灰毒病菌番茄菌核病菌

4.953“1.2577x

4.4508+1.6005x

1.09(0.68一1.75)11.37(5.30—24.40)

13.92(10.09一19.23)

4.912“1.2009x

4.3429+0.2235x3.7184+0.4452x3.3752+0.6523x3.7191+0.5422x3.8436+o.5125x2.9352+o.9900x4.7655+1.2763x5.319

1.18(O.65—2.16)13.80(6.46—29.49)

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2.20(1.88—2.59)

4.62(2.72—7.86)7.52(5.2l—10.84)7.99(6.89—9.26)

870.77(184.150117.61)

755.77(344.06一l660.18)309.63(187.65—510.92)230.3l(93.8l一565.46)

4.242“1.1388x

4.3285+0.7665x

61.7I(34.52一llO.32)

353.3l(139.32—895.95)

000

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4x143.67(103.O帖200.40)346.56(103.2扣1163.26)

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4.5575+0.6788x3.7222+1.0132x4.2464+1.3569I5.5122+0.6746x5.350O+0.6386x4.1037+1.8581x

4.49(2.58—7.∞)180.46(帅.59404.10)

121.80(79.13一187.46)

1.53(1.24一1.88)

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18.25(13.96—23.85)33S.74(187.15撕02.31)

3.59(3.27—3.94)

31.6l(26.77—37.34)

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15.4l(10.58—22.45)

0.17(0.07加.42)

0.28(O.18_o.45)3.04(2.32。3.97)9.52(6.36一14.24)

13.82(4.3“一39.47)28.75(10.28一舳.43)14.嘶(10.54—20.97)

62.23(30.93一125.22)57.23(22.33一146.69)

1.87(1.16—3.01)255.13(105.74_615.55)

5+o.7∞6x

0.39(O.2伽.59)

O.50(0.32加.77)

3.98(3.344.73)

>l000>l000

17.傩(9.69—30.09)39.66(13.69~114.86)

14.77(10.49—20.80)

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5.204l+0.674lx3.65l9+2.2485x

马铃薯晚疫病菌3.4622+1.57l5x辣椒痰霉病菌水稻稻瘟病菌花生白绢病菌苹果轮纹病菌苹果褐斑病菌苹果腐烂病菌棉花黄萎病菌棉花立枯病菌

5.0175+o.7192x6.0084.403

2.312∞O.4765x

3.0938+o.536lx2.4733+o.8783x4.1541+0.3395x4.0379+o-3323x4.6757+0.9932x3.1002+0.8825x3.963l+0.4773x3.9443+o.8273x

0.95(0.“一2.05)0.10(O.∞加.13)

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4l-38(11.78一145.43)

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5.8l(3.4∞8.46)

n13(o.05—D_30)1.48(0.6“3.30)

3lO.34(114.船一838.32)785.66(175.280521.66)

2.12(1.014.46)

142.14(116.6l—173.24)148.70(90.4l一244.57)18.88(14.13~25.23)

5.4298+o.4808x4.8848+0.6780x2.6839+1.423

59.1l(14.48—241.35)

114.82(39.55—333.33)

9】【42.32(32.69—54.77)336.13(192.77—5跖.12)

lx

19.34(17.65—21.19)154.05(127.58一186.00)

3.170“1.422

>l咖

668.49(323.75一l

3.967l+o.9260x

13.05(“.32一15.03)315.77(211.39071.70)

3∞.34)

2.2两种药剂抑制病原茵孢子萌发的毒力在原菌孢子萌发均受到不同程度的抑制,抑制率与药剂质量浓度呈正相关。由表2可知,吡唑萘

含不同浓度吡唑萘菌胺的培养基上,4种供试病

一55—

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为O.002

兰堡!!兰!!!!!皇!塑!!!堡!!!竺璺垒!塑堕!!竺生!!

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菌胺对玉米丝黑穗孢子萌发毒力最高,EC卯值

2.3两种药剂抑制黄瓜白粉病茵的毒力

兹黧萼‰誓淼璺斗箍翼咄、o.05mm艚分别煳州伪咖L,

吡唑萘菌胺对花生冠腐病菌和灰霉病菌的孢1,38恤g/mL,与氟吡菌酰胺毒力相当;吡唑萘菌胺对番茄枯萎病菌孢子毒力较低,EC50值为

9弘咖L,明显高于氟吡菌酰胺的毒力;

喷雾法测定结果表明,吡唑萘菌胺和氟吡菌酰胺

对黄瓜白粉病菌均有较高的毒力,EC∞值分别为

…。…。P酽~’—…一“…~~、…7P∥~’

前者毒力略高于氟吡菌酰胺,但差异不显著(表2)。

10.10斗咖L,仍明显高于氟吡菌酰胺的毒力。

蹇2眦唑藿苗腔和■毗菌醯腔对4种病原菌袖子荫发爰对白粉病菌的毫力

3结论与讨论

从已有报道来看。不同SDHIs杀菌剂的杀菌谱存在一定差异1121。而SDHIs类杀菌剂中杂环种类、杂环上取代基和取代位置不同.可能是造

抑菌活性。而氟吡菌酰胺仅对黄瓜褐斑病菌、辣椒早疫病菌、苹果斑点病菌、番茄灰霉病菌、番茄菌核病菌、苹果褐斑病有较高的抑菌活性。因此,吡唑萘菌胺比氟吡菌酰胺的杀菌谱相对更广且抑菌活性更高。

吡唑萘菌胺和氟吡菌酰胺均属于琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂,但吡唑萘菌胺含有吡唑和酰胺两种高活性结构基团,而且“苯并降冰片烯环”结构为其提供了独特的“双捆绑”特性。赋予吡唑萘菌胺对蜡质层良好的附着力及对病原线粒体上琥珀酸脱氢酶的亲和力。使其有较高的抑菌活性及较长的持效期【7】。本研究测定氟吡菌酰胺的杀菌谱与李良孔【3】的报道的除炭疽病菌有较大差异。对其他病原菌的抑制作用一致。

成不同品种间杀菌谱存在较大差异的原因。廖

国辉【13J报道吡唑萘菌胺属于吡唑一4一甲酰胺类化合物,吡唑.4一甲酰胺类化合物对番茄灰霉病菌、苹果炭疽病菌、水稻稻瘟病菌和番茄早疫病菌有较好的抑制效果。本研究表明,吡唑萘菌胺对水稻稻瘟病菌、玉米丝黑穗病菌、花生冠腐病菌、黄瓜白粉病菌有明显的抑制作用。EC如值均<2斗g,mL。其对黄瓜褐斑病菌、黄瓜炭疽病菌、辣椒炭疽病菌、番茄早疫病菌、苹果斑点病菌、番茄灰霉病菌、番茄菌核病菌、马铃薯晚疫病菌、辣椒疫霉病菌、水稻稻瘟病菌、苹果轮纹病菌有较高的抑菌活性,EC帅值均<100斗g,mL。其对番茄枯萎病菌、玉米茎腐病菌、小麦赤霉病菌、棉花红腐病菌、花生白绢病菌、苹果腐烂病菌、棉花黄萎病菌、棉花立枯病菌有一定的抑制作用.高于氟吡菌酰胺的

琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂是近年来新

品种开发最活跃的一类杀菌剂。自2003年上市的啶酰菌胺后,又有7个品种上市或即将上市,如吡噻菌胺(pentlli叩yrad)、吡唑萘菌胺(isopyII北am)、联苯吡菌胺(bixafen)、氟唑环菌

一56—

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phytopathogenic643—651.

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胺(seda】【aIle)、氟唑菌苯胺(peIlnufen)、氟唑菌酰胺(nu】【印yroxad)、氟吡菌酰胺(nuopy.ram)嘲。新研发的品种化学结构中均含有氟原子,氟原子具有模拟效应、电子效应、阻碍效应和渗透效应等4种效应,因此它的引入使化合物的生物活性倍增嗍。新品种由于安全高效和广谱,已成为生产上非常重要的一类杀菌剂。但该类药剂作用位点单一,其抗性风险备受关注,已被FRAC(杀菌剂抗性行动委员会)归为中度抗性风险杀菌剂【堋。因此。SDHIs类杀菌剂须与作用机制不同的杀菌剂交替或混配使用。以延缓抗性的发生,同时可进一步扩大其兼治范围。

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√澍婚

57

两种新型琥珀酸脱氢酶抑制剂的抑菌活性比较

作者:作者单位:刊名:英文刊名:年,卷(期):

申瑞平, 宋莹莹, 王秋红, 刘峰, Shen Ruiping, Song Yingying, Wang Qiuhong, Liu Feng山东农业大学 植物保护学院,农药毒理与应用重点实验室,山东泰安271018农药科学与管理

Pesticide Science and Administration2014,35(8)

引用本文格式:申瑞平.宋莹莹.王秋红.刘峰.Shen Ruiping.Song Yingying.Wang Qiuhong.Liu Feng 两种新型琥珀酸脱氢酶抑制剂的抑菌活性比较[期刊论文]-农药科学与管理 2014(8)

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两种新型琥珀酸脱氢酶抑制剂的

抑菌活性比较

申瑞平,宋莹莹,王秋红,刘

峰+

(山东农业大学植物保护学院,农药毒理与应用重点实验室,山东泰安271018)

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dehydmgen鹊e

inhibitor;antifungal

activit),;isopyr北锄;nuopy舢

摘要:采用茵丝生长速率法、孢子萌发法和幼苗法比较了吡唑萘茵胺和氟吡茵酰胺对23

收稿日期:2014—04—22

基金项目:公益性行业(农业)科研专项(200903033)。

作者简介:申瑞平,女,硕士研究生。联系电话:18205483158;E—mail:shenmipin9518@163.com。

通讯作者:刘峰,男,博士,副教授,主要研究农药毒理与应用技术。联系电话:0538—8242611;E—mail:niu@sd锄.

edu.cno

一52—

!竺!!!二!兰!!塑!!竺兰!!竺!竺壁垒璺竺竺!塑竺!竺

垫!兰:!!!!!ii■i誓盈i誓iii

种病原茵的毒力。结果表明,吡唑萘茵胺对黄瓜褐斑病菌、黄瓜炭疽病菌、辣椒炭疽病菌、番茄早疫病菌、苹果斑点病菌、辣椒疫霉病菌、马铃薯晚疫病茵、番茄灰霉病菌、番茄茵核病茵、水稻稻瘟病茵和苹果轮纹病茵茵丝生长均有较高的抑制活性,其EC∞值为0.10~

9.52吵咖L,EC∞值为1.87~62.23¨∥mL。吡唑萘茵胺对花生白绢病茵、苹果腐烂病茵、棉花

黄萎病菌、棉花立枯病茵和镰刀茵属病原茵的抑制活性均高于氟吡茵酰胺。而氟吡茵酰胺却对黄瓜褐斑病茵、番茄早疫病茵、苹果斑点病茵、番茄灰霉病茵、番茄茵核病茵和苹果

褐斑病菌具有较高的抑制活性,其EC瓶为0.39~3.98斗∥mL,与吡唑萘茵胺相当。吡唑萘茵

胺对玉米丝黑穗、花生冠腐病茵和番茄灰霉病茵的孢子有较高的毒力,其EC∞值分别为

O.002

9、0.07和1.38斗g,mL。氟吡茵酰胺仅对花生冠腐病菌、番茄灰霉病茵的孢子有较高的

活性,且它与吡唑萘茵胺活性相当。吡唑萘茵胺和氟吡茵酰胺对黄瓜白粉病茵均有较高的毒力,EC50值分别为O.04、0.05斗g,mL。因此,吡唑萘茵胺比氟吡茵酰胺更加广谱,且抑茵活性相当或更高。

关键词:琥珀酸脱氢酶抑制剂;抑茵活性;吡唑萘茵胺;氟吡茵酰胺中图分类号:S482.2;s481+.9

文献标识码:A

文章编号:1002—5480(2014)08—52—06

琥珀酸脱氢酶抑制剂类(SDHIs)杀菌剂是活性,但对属卵菌的辣椒疫霉病菌没有活性【31。杀菌剂抗性行动委员会(FRAC)新划分出来的尽管两种药剂的作用机制相同.但结构存在较一类作用机制和抗性机理相似的化合物【“。该类大差异,其杀菌谱间是否也存在差异尚未见系杀菌剂通过作用于蛋白复合体Ⅱ影响病原菌的统报道。

呼吸链电子传递系统,阻碍其能量的代谢,抑本文系统比较了吡唑萘菌胺和氟吡菌酰胺制病原菌的生长、导致其死亡【2】。目前琥珀酸脱对国内常见农作物病原菌的毒力。为该类药剂氢酶抑制剂从化学结构上可分为7类,包括15个的进一步开发和应用提供参考。品种【3】。萎锈灵是该类杀菌剂最早的品种,以及1材料与方法

之后的氧化萎锈灵,但这些品种防治谱较窄【41。1.1

供试材料供试菌株:黄瓜靶斑病菌

随着新化合物创制技术的发展,新一代的琥珀

(co畔spomc∞s讹。如);黄瓜炭疽病菌(coZ.

酸脱氢酶抑制剂如:吡唑萘菌胺(厶op"篮瓣)

如tot廊^u,,lor6拓以删);辣椒炭疽病菌(cof.

和氟吡菌酰胺(∥Hop”册.)具有广谱活性嘲。

如to‘庇^啪c印s记i);番茄枯萎病菌(‰祈啪

吡唑萘菌胺是先正达公司于2008年研发的删Dmm)、玉米茎腐病菌(凡塔硎“mgr啪in-

一种新型杀菌剂,并于2010年在英国获得批准e帆m)、小麦赤霉病菌(fk硎Mmg胁in—上市【q,在中国正进行农药登记。该杀菌剂用于e伽肌)、棉花红腐病菌(胁硎啪spp.);番茄

防治小麦、大麦和其他谷物的重要病害,且可早疫病菌(A抛r力砒so协i)、苹果斑点落叶病

以促进作物增产网。吡唑萘菌胺对麦类病原菌如菌(Akrn硼池,利i);番茄灰霉病菌(鼬彤蠡

锈菌和壳针孢属菌有较高的防治效果【q。氟吡菌ci,lere口);番茄菌核病菌(&如roti讹sc如ro如.

酰胺由拜耳作物科学公司研发嘲。并于2010年在九肌);马铃薯晚疫病菌(用咿op^£br口i,咖s—

中国登记用于防治黄瓜白粉病。氟吡菌酰胺可t删)、辣椒疫霉病菌(聊^tbm

用于防治多种作物上的病害。对番茄早疫病菌、瘟病菌(P廊舭D够循);花生白绢病菌

c印s记i);稻

黄瓜白粉病菌、人参黑斑病菌、大蒜菌核病菌、(&如roti啪ro狐越);苹果轮纹病菌(肘0cropb,觚

花生褐斑病菌、番茄灰霉病菌等有良好的抑制

矗舢协以面);苹果褐斑病菌(M嬲so,liM

coro一

一53—

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病菌孢子悬浮液:将病菌接种于PDA平板上,M砌);苹果腐烂病菌(印ospDms∞c以淞);棉

花黄萎病菌(%厅如i胁umaf60一以mm);棉花立

25℃培养,待其产生大量分生孢子后,用灭菌水

枯病菌(R^扬oc幻n谊soki);玉米丝黑穗病菌

(sp^nceZo£kcore以i帆o);花生冠腐病菌(As—

从产生大量分生孢子的培养基上洗下分生孢子,

经灭菌纱布过滤后制成分生孢子悬浮液,并用血球计数板测定孢子浓度,将分生孢子悬浮液

pe呼ffmn谚r);黄瓜白粉病菌(印^nero£kco

膨柳聊口)。以上菌株均由山东农业大学农药毒理

与应用重点实验室保存菌种,经转接、纯化培养后供试。

供试培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA);燕麦琼脂培养基;水琼脂葡萄糖培养基。

供试药剂:吡唑萘菌胺(isopymzam)99%原药;氟吡菌酰胺(nuopyram)99%原药,均由西格玛奥德里奇有限公司提供。2个原药均用丙

浓度调节到约1×105c“mL。

1.2.2.2接种与培养将100斗L孢子悬浮液

(1×105c“mL)均匀涂布在含吡唑萘菌胺系列浓

度的2%水琼脂(1%葡萄糖)平板上,25℃恒温箱中黑暗培养,待空白对照孢子萌发率达60%以上。镜检孢子萌发情况,每处理随机检测100个

孢子。计算药剂对孢子的萌发抑制率。采用DPs

统计软件中几率值分析法,计算药剂对靶标菌孢子萌发的有效抑制中浓度(EC卯值)。以氟吡菌酰胺作为对照药剂,不含药的平板为空白对

酮配制成浓度为1×104斗咖L的母液备用。

1.2试验方法

1.2.1抑制病原菌菌丝生长的毒力测定

采用

照,每处理重复4次。

1.2.3对黄瓜白粉病菌的毒力测定

1.2.3.1

菌丝生长速率法【91,将母液用无菌水配制成5~7个系列浓度,PDA培养基灭菌后稍冷却,加入配好的药剂充分摇匀,制成含有吡唑蓁菌胺系列浓度供试药剂的培养基平板(辣椒疫霉病菌和

分生孢子悬浮液的配制

参考贾忠明

等【nl的方法,采集温室黄瓜叶片上自生新鲜白粉病叶。剪取发病充分的新鲜病斑,置于0.1%的十二烷基硫酸钠(SDS)溶液中,洗涤分生孢子.在微型漩涡混合仪上混合20s使分生孢子充分悬浮,稀释成浓度为每视野40~50个孢子,视野(10×10倍显微镜)的孢子悬浮液,供接种。1.2.3.2药剂配制及毒力测定采用小苗喷雾法.将黄瓜种植于装有灭菌育苗基质的塑料杯中。每杯1粒。待子叶充分展开时供试验备用。将母液配制成5.7个系列浓度,每处理4次重复(共12株),设清水对照。24h后毛笔涂抹接种,待子叶自然晾干后,置于光照培养箱光暗(16L:8D)交替培养7d后,检查病斑数,计算病

马铃薯晚疫病菌用燕麦琼脂培养基。其余用PDA

培养基)。置于25℃(马铃薯晚疫病菌于18℃)恒温箱中黑暗培养.当空白对照的菌丝长至70mm以上时,测量各处理菌落直径,并计算抑制率。采用DPs统计软件中几率值分析法,计算药剂对靶标菌菌丝生长的有效抑制中浓度(EC卯值)。以氟吡菌酰胺作为对照药剂。不含药的平板为空白对照,每处理重复4次。

1.2.2抑制病原菌孢子萌发的毒力测定1.2.2.1孢子悬浮液的配制

玉米丝黑穗冬孢

子悬浮液嗍:称取10mg病菌冬孢子粉,将孢子粉放入无菌水中浸泡48h后.4000r离心10min弃上清液,再用0.03%Tween一20水溶液浸泡4h后

斑抑制率。采用DPS统计软件中几率值分析法,

计算药剂对黄瓜白粉病菌的有效抑制中浓度(EC50值)。

000r离心10IIlin弃上清液,再加入高锰酸钾0.25%

水溶液20mL,震荡摇匀,静置30Ⅱlin,4000r离心10min弃上清液,并用血球计数板测定孢子浓度,

病斑抑制率=盐驾翳镰产×・嗽

清水对照病斑数

将分生孢子悬浮液浓度调节到约l×105c“mL。

花生冠腐病菌、番茄灰霉病菌和番茄枯萎

1.3数据分析实验数据采用DPs软件进行处

理,并采用Dunc粕氏新复极差法进行显著性分析。

一54—

垦堡竺至!!!!!!堕!!!!坠堡竺!!竺堕垒塑!翌堕!型垫翌垫!!:!!!!!:;互墨盈墨蓄臣;;j互

2结果与分析

2.1

高的抑菌活性,EC∞值为0.12—9.52斗∥mL,EC∞

两种药剂抑制病原茵菌丝生长的毒力

值为11.37~62.23“咖L;其对番茄枯萎病菌、玉

米茎腐病菌、小麦赤霉病菌、棉花红腐病菌、花生白绢病菌、苹果褐斑病菌、苹果腐烂病菌、棉花黄萎病菌、棉花立枯病菌的毒力较低,

含不同浓度吡唑萘菌胺的培养基上,20种供试病原菌的菌丝生长均受到不同程度的抑制,抑制率与药剂质量浓度呈正相关(表1)。毒力回归分析结果表明:吡唑萘菌胺对水稻稻瘟病菌的毒力最高,EC50值为0.10斗g/mL,EC∞值为

EC.艚均达100斗咖L以上,但其抑菌活性仍明显

高于氟吡菌酰胺。氟吡菌酰胺仅对黄瓜褐斑病菌、番茄早疫病菌、苹果斑点病菌、番茄灰霉病菌、番茄菌核病菌、苹果褐斑病菌6种病原菌有较高的的抑菌活性,且活性与吡唑萘菌胺相当。

1.87¨咖L;其次是对黄瓜褐斑病、黄瓜炭疽病

菌、辣椒炭疽病菌、番茄早疫病菌、辣椒疫霉病菌、马铃薯晚疫病菌、苹果斑点病菌、番茄灰霉病菌、番茄菌核病菌、苹果轮纹病菌有较

表1吡唑萘蕾胺和氟吡菌酰胺对加种病原菌丝生长的毒力

黄瓜褐斑病菌黄瓜炭疽病菌辣椒炭疽病菌番茄枯萎病菌玉米茎腐病菌小麦赤霉病菌棉花红腐病菌番茄早疫病菌苹果斑点病菌番茄灰毒病菌番茄菌核病菌

4.953“1.2577x

4.4508+1.6005x

1.09(0.68一1.75)11.37(5.30—24.40)

13.92(10.09一19.23)

4.912“1.2009x

4.3429+0.2235x3.7184+0.4452x3.3752+0.6523x3.7191+0.5422x3.8436+o.5125x2.9352+o.9900x4.7655+1.2763x5.319

1.18(O.65—2.16)13.80(6.46—29.49)

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2.20(1.88—2.59)

4.62(2.72—7.86)7.52(5.2l—10.84)7.99(6.89—9.26)

870.77(184.150117.61)

755.77(344.06一l660.18)309.63(187.65—510.92)230.3l(93.8l一565.46)

4.242“1.1388x

4.3285+0.7665x

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353.3l(139.32—895.95)

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4x143.67(103.O帖200.40)346.56(103.2扣1163.26)

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4.5575+0.6788x3.7222+1.0132x4.2464+1.3569I5.5122+0.6746x5.350O+0.6386x4.1037+1.8581x

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121.80(79.13一187.46)

1.53(1.24一1.88)

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18.25(13.96—23.85)33S.74(187.15撕02.31)

3.59(3.27—3.94)

31.6l(26.77—37.34)

>l0【Ⅺ

15.4l(10.58—22.45)

0.17(0.07加.42)

0.28(O.18_o.45)3.04(2.32。3.97)9.52(6.36一14.24)

13.82(4.3“一39.47)28.75(10.28一舳.43)14.嘶(10.54—20.97)

62.23(30.93一125.22)57.23(22.33一146.69)

1.87(1.16—3.01)255.13(105.74_615.55)

5+o.7∞6x

0.39(O.2伽.59)

O.50(0.32加.77)

3.98(3.344.73)

>l000>l000

17.傩(9.69—30.09)39.66(13.69~114.86)

14.77(10.49—20.80)

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5.204l+0.674lx3.65l9+2.2485x

马铃薯晚疫病菌3.4622+1.57l5x辣椒痰霉病菌水稻稻瘟病菌花生白绢病菌苹果轮纹病菌苹果褐斑病菌苹果腐烂病菌棉花黄萎病菌棉花立枯病菌

5.0175+o.7192x6.0084.403

2.312∞O.4765x

3.0938+o.536lx2.4733+o.8783x4.1541+0.3395x4.0379+o-3323x4.6757+0.9932x3.1002+0.8825x3.963l+0.4773x3.9443+o.8273x

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5.4298+o.4808x4.8848+0.6780x2.6839+1.423

59.1l(14.48—241.35)

114.82(39.55—333.33)

9】【42.32(32.69—54.77)336.13(192.77—5跖.12)

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19.34(17.65—21.19)154.05(127.58一186.00)

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3.967l+o.9260x

13.05(“.32一15.03)315.77(211.39071.70)

3∞.34)

2.2两种药剂抑制病原茵孢子萌发的毒力在原菌孢子萌发均受到不同程度的抑制,抑制率与药剂质量浓度呈正相关。由表2可知,吡唑萘

含不同浓度吡唑萘菌胺的培养基上,4种供试病

一55—

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菌胺对玉米丝黑穗孢子萌发毒力最高,EC卯值

2.3两种药剂抑制黄瓜白粉病茵的毒力

兹黧萼‰誓淼璺斗箍翼咄、o.05mm艚分别煳州伪咖L,

吡唑萘菌胺对花生冠腐病菌和灰霉病菌的孢1,38恤g/mL,与氟吡菌酰胺毒力相当;吡唑萘菌胺对番茄枯萎病菌孢子毒力较低,EC50值为

9弘咖L,明显高于氟吡菌酰胺的毒力;

喷雾法测定结果表明,吡唑萘菌胺和氟吡菌酰胺

对黄瓜白粉病菌均有较高的毒力,EC∞值分别为

…。…。P酽~’—…一“…~~、…7P∥~’

前者毒力略高于氟吡菌酰胺,但差异不显著(表2)。

10.10斗咖L,仍明显高于氟吡菌酰胺的毒力。

蹇2眦唑藿苗腔和■毗菌醯腔对4种病原菌袖子荫发爰对白粉病菌的毫力

3结论与讨论

从已有报道来看。不同SDHIs杀菌剂的杀菌谱存在一定差异1121。而SDHIs类杀菌剂中杂环种类、杂环上取代基和取代位置不同.可能是造

抑菌活性。而氟吡菌酰胺仅对黄瓜褐斑病菌、辣椒早疫病菌、苹果斑点病菌、番茄灰霉病菌、番茄菌核病菌、苹果褐斑病有较高的抑菌活性。因此,吡唑萘菌胺比氟吡菌酰胺的杀菌谱相对更广且抑菌活性更高。

吡唑萘菌胺和氟吡菌酰胺均属于琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂,但吡唑萘菌胺含有吡唑和酰胺两种高活性结构基团,而且“苯并降冰片烯环”结构为其提供了独特的“双捆绑”特性。赋予吡唑萘菌胺对蜡质层良好的附着力及对病原线粒体上琥珀酸脱氢酶的亲和力。使其有较高的抑菌活性及较长的持效期【7】。本研究测定氟吡菌酰胺的杀菌谱与李良孔【3】的报道的除炭疽病菌有较大差异。对其他病原菌的抑制作用一致。

成不同品种间杀菌谱存在较大差异的原因。廖

国辉【13J报道吡唑萘菌胺属于吡唑一4一甲酰胺类化合物,吡唑.4一甲酰胺类化合物对番茄灰霉病菌、苹果炭疽病菌、水稻稻瘟病菌和番茄早疫病菌有较好的抑制效果。本研究表明,吡唑萘菌胺对水稻稻瘟病菌、玉米丝黑穗病菌、花生冠腐病菌、黄瓜白粉病菌有明显的抑制作用。EC如值均<2斗g,mL。其对黄瓜褐斑病菌、黄瓜炭疽病菌、辣椒炭疽病菌、番茄早疫病菌、苹果斑点病菌、番茄灰霉病菌、番茄菌核病菌、马铃薯晚疫病菌、辣椒疫霉病菌、水稻稻瘟病菌、苹果轮纹病菌有较高的抑菌活性,EC帅值均<100斗g,mL。其对番茄枯萎病菌、玉米茎腐病菌、小麦赤霉病菌、棉花红腐病菌、花生白绢病菌、苹果腐烂病菌、棉花黄萎病菌、棉花立枯病菌有一定的抑制作用.高于氟吡菌酰胺的

琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂是近年来新

品种开发最活跃的一类杀菌剂。自2003年上市的啶酰菌胺后,又有7个品种上市或即将上市,如吡噻菌胺(pentlli叩yrad)、吡唑萘菌胺(isopyII北am)、联苯吡菌胺(bixafen)、氟唑环菌

一56—

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胺(seda】【aIle)、氟唑菌苯胺(peIlnufen)、氟唑菌酰胺(nu】【印yroxad)、氟吡菌酰胺(nuopy.ram)嘲。新研发的品种化学结构中均含有氟原子,氟原子具有模拟效应、电子效应、阻碍效应和渗透效应等4种效应,因此它的引入使化合物的生物活性倍增嗍。新品种由于安全高效和广谱,已成为生产上非常重要的一类杀菌剂。但该类药剂作用位点单一,其抗性风险备受关注,已被FRAC(杀菌剂抗性行动委员会)归为中度抗性风险杀菌剂【堋。因此。SDHIs类杀菌剂须与作用机制不同的杀菌剂交替或混配使用。以延缓抗性的发生,同时可进一步扩大其兼治范围。

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57

两种新型琥珀酸脱氢酶抑制剂的抑菌活性比较

作者:作者单位:刊名:英文刊名:年,卷(期):

申瑞平, 宋莹莹, 王秋红, 刘峰, Shen Ruiping, Song Yingying, Wang Qiuhong, Liu Feng山东农业大学 植物保护学院,农药毒理与应用重点实验室,山东泰安271018农药科学与管理

Pesticide Science and Administration2014,35(8)

引用本文格式:申瑞平.宋莹莹.王秋红.刘峰.Shen Ruiping.Song Yingying.Wang Qiuhong.Liu Feng 两种新型琥珀酸脱氢酶抑制剂的抑菌活性比较[期刊论文]-农药科学与管理 2014(8)


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