专题3 植物的组织培养
课题1菊花的组织培养
一、 课时重难点
【重点】1.植物组织培养的相关概念和过程
2.影响植物组织培养的因素
3.植物组织培养过程中使用的无菌技术。
【难点】1.影响植物组织培养的因素。
2.植物组织培养过程中使用的无菌技术。
三、授课过程：
（一）植物组织培养的相关概念和基本过程
1.植物组织培养的相关概念
（1）细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在__________、__________和__________上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是基因__________的结果。
（2）细胞的全能性：__________的植物细胞仍然具有发育成为__________的潜能。细胞全能性是组织培养的基本原理。
（3）愈伤组织：由离体的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过__________过程形成的组织，就叫愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种__________的呈无定形状态的__________。
（4）脱分化：由__________的植物组织或细胞产生__________的过程，称为脱分化，又叫去分化。
（5）再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成__________，这个过程叫做再分化。
（6）外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。
2. 植物组织培养的基本过程
人为使用植物激素控制
移植
——→试管苗———→完整的植物体
（二）影响植物组织培养的因素
1． 内部因素：不同的植物组织，培养的难易程度差别很大。同种植物材料，__________ ，__________ 等也会影响实验结果。菊花的组织培养，一般选择 __________的茎上部新萌生的侧枝。
2． 外部因素：
（1）营养条件：常用的是__________ 培养基，其主要成分包括： __________，如
_____________________________；__________ ，如______________________________ ；
__________ 等。
（2）植物激素：植物激素中__________ 和__________ 是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性
因素。____________________、____________________ 以及__________ 等，都会影响实验结果。
（3）环境因素：__________ 、__________ 、 __________等条件也能影响植物组织培养。菊花组织培养，一般PH控制在 __________ ；温度控制在 __________ ；每天用日光灯照射__________小时。
【思考】
1． MS培养基中，各种营养成分各有什么作用？与微生物培养基的配方相比，有什么不同?
微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
2．生长素使用的先后顺序、用量比例不同分别会造成哪些影响？
（三）实验操作过程
1．制备MS固体培养基
实验室一般使用4℃保存的配制好的培养基母液来制备
（1）配制各种母液。
配制母液时，大量元素浓缩__________ ，微量元素浓缩__________ 。常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照1mg/ml的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时，
需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。
（2）配制培养基。
配制1LMS培养基时，将称量好的琼脂加入800mL蒸馏水，加热熔化，然后加入蔗糖30g,依次加入母液，定容至1000mL。__________，然后分装到锥形瓶中，每瓶分装__________。
（3）灭菌。高压蒸汽灭菌
2．外植体消毒
选取菊花茎段时，要取 ____________________。无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料（外植体）的消毒灭菌。对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑_______________；另一方面还要考虑植物材料的__________。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。一般情况下，细菌污染可 能是由接种人员造成的，真菌污染可能是_________灭菌不当。
过程：
流水冲洗→软刷刷洗→流水冲洗__________→无菌吸水纸吸干外植体表面→体积分数为__________的酒精中摇动2～3次，持续__________→无菌水清洗→无菌吸水纸吸干外植体表面→质量分数为0.1﹪的__________溶液中1～2min→无菌水中至少清洗3次
3．接种
接种前，用体积分数70%的酒精将工作台擦拭，然后点燃酒精灯。所有的接种操作必须在酒精灯旁进行，并且每次使用器械后，都要用火焰灼烧灭菌
4．培养
接种后的锥形瓶最好放在__________中培养。培养期间定期消毒，温度控制在18-22℃，并且每天用日光灯光照12h
5．移栽
6．栽培 附：一般来说，容易进行__________的植物，也容易进行组织培养。
【思考】：
（1）实验操作过程中为什么要进行一系列的消毒、灭菌，实验中是如何做到无菌操作的？
（2）你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？
【知识补充】无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键
植物组织培养不同于扦插、分根、叶插等常规无性繁殖。由于植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，所以对培养条件的要求较高，对无菌操作的要求非常严格。
无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料（外植体）的消毒灭菌。对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。
专题3 植物的组织培养
课题1菊花的组织培养
一、 课时重难点
【重点】1.植物组织培养的相关概念和过程
2.影响植物组织培养的因素
3.植物组织培养过程中使用的无菌技术。
【难点】1.影响植物组织培养的因素。
2.植物组织培养过程中使用的无菌技术。
三、授课过程：
（一）植物组织培养的相关概念和基本过程
1.植物组织培养的相关概念
（1）细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在__________、__________和__________上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是基因__________的结果。
（2）细胞的全能性：__________的植物细胞仍然具有发育成为__________的潜能。细胞全能性是组织培养的基本原理。
（3）愈伤组织：由离体的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过__________过程形成的组织，就叫愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种__________的呈无定形状态的__________。
（4）脱分化：由__________的植物组织或细胞产生__________的过程，称为脱分化，又叫去分化。
（5）再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成__________，这个过程叫做再分化。
（6）外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。
2. 植物组织培养的基本过程
人为使用植物激素控制
移植
——→试管苗———→完整的植物体
（二）影响植物组织培养的因素
1． 内部因素：不同的植物组织，培养的难易程度差别很大。同种植物材料，__________ ，__________ 等也会影响实验结果。菊花的组织培养，一般选择 __________的茎上部新萌生的侧枝。
2． 外部因素：
（1）营养条件：常用的是__________ 培养基，其主要成分包括： __________，如
_____________________________；__________ ，如______________________________ ；
__________ 等。
（2）植物激素：植物激素中__________ 和__________ 是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性
因素。____________________、____________________ 以及__________ 等，都会影响实验结果。
（3）环境因素：__________ 、__________ 、 __________等条件也能影响植物组织培养。菊花组织培养，一般PH控制在 __________ ；温度控制在 __________ ；每天用日光灯照射__________小时。
【思考】
1． MS培养基中，各种营养成分各有什么作用？与微生物培养基的配方相比，有什么不同?
微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
2．生长素使用的先后顺序、用量比例不同分别会造成哪些影响？
（三）实验操作过程
1．制备MS固体培养基
实验室一般使用4℃保存的配制好的培养基母液来制备
（1）配制各种母液。
配制母液时，大量元素浓缩__________ ，微量元素浓缩__________ 。常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照1mg/ml的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时，
需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。
（2）配制培养基。
配制1LMS培养基时，将称量好的琼脂加入800mL蒸馏水，加热熔化，然后加入蔗糖30g,依次加入母液，定容至1000mL。__________，然后分装到锥形瓶中，每瓶分装__________。
（3）灭菌。高压蒸汽灭菌
2．外植体消毒
选取菊花茎段时，要取 ____________________。无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料（外植体）的消毒灭菌。对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑_______________；另一方面还要考虑植物材料的__________。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。一般情况下，细菌污染可 能是由接种人员造成的，真菌污染可能是_________灭菌不当。
过程：
流水冲洗→软刷刷洗→流水冲洗__________→无菌吸水纸吸干外植体表面→体积分数为__________的酒精中摇动2～3次，持续__________→无菌水清洗→无菌吸水纸吸干外植体表面→质量分数为0.1﹪的__________溶液中1～2min→无菌水中至少清洗3次
3．接种
接种前，用体积分数70%的酒精将工作台擦拭，然后点燃酒精灯。所有的接种操作必须在酒精灯旁进行，并且每次使用器械后，都要用火焰灼烧灭菌
4．培养
接种后的锥形瓶最好放在__________中培养。培养期间定期消毒，温度控制在18-22℃，并且每天用日光灯光照12h
5．移栽
6．栽培 附：一般来说，容易进行__________的植物，也容易进行组织培养。
【思考】：
（1）实验操作过程中为什么要进行一系列的消毒、灭菌，实验中是如何做到无菌操作的？
（2）你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？
【知识补充】无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键
植物组织培养不同于扦插、分根、叶插等常规无性繁殖。由于植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，所以对培养条件的要求较高，对无菌操作的要求非常严格。
无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料（外植体）的消毒灭菌。对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。