一、选择题：每小题只有一个选项最符合题意。
1．下列4种生物中，哪一种生物的细胞结构与其他3种生物的细胞有明显的区别（ ）
A．酵母菌 B．乳酸菌 C．青霉菌 D．蘑菇
2．细菌培养基通常在121℃压力锅中灭菌。如果只有在100℃的温度下将细菌培养基灭菌，以下哪一种生物仍会存活？（ ）
A．大肠杆菌 B．一种青霉菌 C．枯草芽孢杆菌 D．鼠伤寒沙门氏菌
3．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（ ）
A.接种针、手、培养基 B.高压锅、手、接种针 C.培养基、手、接种针 D.接种针、手、高压锅
4．关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是（ ） Ａ．操作顺序为计算、称量、熔化、倒平板、灭菌 Ｂ．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯 Ｃ．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板 Ｄ．待平板冷却凝固约5~10min后将平板倒过来放置
5．获得纯净培养物的关键是（ ）
Ａ．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌
B．接种纯种细菌 C.适宜环境条件下培养 D.防止外来杂菌的入侵
6．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是（ ）
A.对比观察培养基有没有被微生物利用 B.对比分析培养基上是否生有杂菌 C.没必要放入未接种的培养基 D.为了下次接种时再使用 7．下列叙述错误的是（ ）
Ａ．培养乳酸菌时需要在培养基中添加维生素
Ｂ．培养霉菌时需将培养基的PH调至碱性 Ｃ．培养细菌时需将PH调至中性或微碱性 Ｄ．培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件
8．关于牛肉膏蛋白胨培养基的配制需要在火焰旁操作的是（ ）
A.称量 B.灭菌 C.溶化 D.倒平板 下列有关碳源的叙述不正确的是（ ）
A．碳源主要用于构成微生物的细胞物质和一些代谢产物 B．某些碳源可以作为微生物的主要能源物质
C．蛋白质一定不能做碳源
D．不同种类的微生物的碳源可能不同
下列有关平板划线接种法的操作错误的是 （ ）
A．将接种环放在火焰上灼烧 B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液
C．蘸取菌液和划线要在火焰旁进行 D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连
10．有关倒平板的操作错误的是（ ）
Ａ．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上
D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置
12.有关稀释涂布平板法，叙述错误的是（ ） Ａ．先将菌液进行一系列的梯度稀释
Ｂ．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面
Ｃ．适宜条件下培养 D.结果都可在培养基表面形成单个的菌落 13.涂布平板操作需要用到（ ） A.接种环、滴管、酒精灯
B.接种环、移液管、酒精灯
C.涂布器、移液管、酒精灯 D.涂布器、接种环、酒精灯
16．微生物培养过程中，肉眼鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据是（ ） A．细菌的大小、形状、颜色 B．菌落的大小、形状、颜色 C．有无鞭毛 D．培养基的不同 19．以下操作用到接种环的是（ ）
A．平板划线操作 B．系列稀释操作 C．涂布平板操作 20．能排除培养基是否有杂菌污染的方法是（ ） A.将未接种的培养基放在实验桌上培养 B.将未接种的培养基放在窗台上培养 C.将未接种的培养基放在恒温箱中培养
D.将已接种的培养基放在恒温箱中培养
21．要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用（ ） A．固体培养基 B．液体培养基
C．加入青霉素的培养基 D．加入高浓度食盐的培养基
22．甲、乙、丙是三种微生物，下表I、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在I中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是（ ）
D．倒平板操作
A、甲、乙、丙都是异养微生物
B、甲、乙都足自养微生物、丙是异养微生物
C、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙足自养微生物 D、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物
23．农田土壤的表层，自生固氮菌的含量比较多，将用表层土制成的稀泥浆，接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其它细菌分开，对培养的要求是（ ）
①加抗生素 ②不加抗生素 ③加氮素 ④不加氮素 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖 ⑦37℃恒温箱培养 ⑧28 ℃--30℃温度下培养 A．①③⑤⑦ C．②④⑤⑧
B．②④⑥⑧ D．①④⑥⑦
24.伊红—美蓝培养基常用来鉴别大肠杆菌，其原理是（ ） A．大肠杆菌在该培养基中形成特定的菌落
B．大肠杆菌能使培养基改变颜色
C．大肠杆菌菌的代谢产物与伊红—美蓝结合，使菌落呈深紫色，并有金属光泽 D．大肠杆菌能在该培养基中很好生活，其余微生物不能很好生活
25．通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微牛物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10％酚可以抑制细菌和霉菌。利用下述方法不能从混杂的微生物群体中分别分离出（ ） A．大肠杆菌 B．霉菌 C．放线菌 D．固氮细菌
29．右图表示某有机物加入某种酶后在0～80℃的环境中，有机物的 分解总量与温度的关系图，依图判断，在0～80℃环境中，酶的 活性变化曲线（pH适宜）正确的是（ ）
A B C
32．在PCR扩增前，需要将下列哪些物质加入微量离心管中？（ ）
①模板DNA②模板RNA③DNA解旋酶④耐高温的DNA聚合酶⑤引物⑥PCR缓冲液⑦脱氧核苷酸贮备液⑧核苷酸贮备液 A．①④⑤⑥⑦ B．①③④⑤⑥⑧ C．②③④⑤⑥⑦ D．①④⑥⑦⑧ 34．PCR技术的操作步骤依次是（ ） A．高温变性 、中温延伸、低温复性 B. 高温变性、低温复性、中温延伸
C．中温延伸、高温变性、低温复性 D. 中温延伸、低温复性、高温变性
37．在培养基中加入伊红和美蓝可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌，这种培养基称为( ) A．选择培养基
B．鉴别培养基
C．液体培养基 D．固体培养基
41．在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌岭脱氧核苷酸是460个）放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是（ ） A．540个 B．8100个 C．17280个 D．7560个
47．在一个普通的锥形瓶中，加入大半瓶含有酵母菌的葡萄糖溶液后密封。下列坐标图不正确的是（ ）
D
6．在做分离“分解尿素的细菌”实验时，A同学从对应10培养基中筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。下列有关叙述正确的是（双选） （ BC ） A．A同学出现这种结果的原因是土样不同
-6
B．可以将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对照，以证明培养基是否受到污染
C．让其他同学用与A同学一样的土壤进行实验，如果结果与A同学一样，则可证明A同学无误 D．B、C选项的实验思路都遵循了实验的对照原则
1．下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是 （ D ） A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上 C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时
D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数 4．下列关于微生物的培养和运用的叙述，错误的是 （ B ） A．通过消毒不能杀死物体内所有的微生物 B．利用平板划线法可以统计样品中活菌的数目 C．平板划线法和稀释涂布法常用于微生物的接种
D．微生物所用的培养基成分和植物组织培养用的培养基成分不同
5．下列有关微生物的培养或纯化的叙述，错误的是 （ D ） A．微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种
B．培养液中溶氧量的变化会影响酵母菌的繁殖和代谢途径
C．分离纯化微生物的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法 D．分离自养型微生物的方法是用纤维素作为唯一碳源的培养基
二、非选择题：本题包括6小题，共50分。
51.（7分）为了检测饮用水中是否会有某种细菌，配制如下培养基进行
培养：
（1）该培养基所含有的碳源有___________，其功能是_____________。
（2）该培养基所含有的氮源有___________，其功能是_____________。
（3）该培养基除含碳源、氮源外，还有微生物需要的营养物质，是
____________________。 （4）该细菌在同化作用上的代谢类型是___________型。 （5）该培养基可用来鉴别哪种细菌______________。 A.霉菌 B.酵母菌 C.大肠杆菌 D.乳酸菌
答案：（1）蔗糖、乳糖、蛋白胨 主要用于构成微生物的细胞物质和代谢产物 （2）蛋白胨主要用于合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物 （3）水、无机盐（或K2HPO4） （4）异养 （5）C
54．某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混合在一起。请你完成分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌的实验步骤，并回答有关问题： ⑴主要步骤：
①制备两种培养基：一种是 培养基，另一种 的培养基。分别分成两份，依次标上A，A／和B，B／，备用。
②分别向A、B培养基中接种 。 ③接种后，放在恒温箱中培养3～4天。
④分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌种，接种到A／、B／培养基中。
⑤接种后，把A、B培养基放入恒温箱中培养3～4天。 ⑵回答问题： 在步骤①②中，为保证无杂菌污染，实验中应采用的主要措施有 、
、 。
第④⑤两个步骤的目的是 。 54.⑴无氮 加青霉素 混合菌
⑵培养基高压蒸气灭菌 接种环在酒精灯火焰上灭菌 接种过程在酒精灯火焰附近进行 获得纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌
55．空气中的含菌量是衡量空气质量的指标之一，为了检测学校生物实验室、教室、校长室、小树林4个地方空气中的含菌情况，请利用所提供条件设计一个实验。 （1）、请用100ml量筒、4副培养皿、煮沸过的 洗碗水，设计取样的实验步骤。 （2）、请用4支试管、滴管、0.01%亚甲基蓝溶液，设计检测的实验步骤。 （3）、实验结果的预测和分析。 （4）、你所设计的实验检测到的是_________________细菌的相对数量。 55.(1)①用量筒取等量的煮沸过的洗碗水,分别倒入4只培养皿中； ② 分别将以上4只培养皿露置于4个场所； ③ 静置1—3天后，同时加盖取回
（2）①分别取等量放置过的洗碗水放入4支试管中
② 在每只试管内滴加5—10滴0.01%亚甲基蓝溶液，置于温暖处
（3）根据4支试管内洗碗水在相同时间内褪色的程度，来判定空气中的含菌量，其中褪色程度最大的，空气中含菌量相对最高；褪色程度最小的，空气中含菌量最低。 （4）好氧性 7．（2009·宁夏理综，40）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑 和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、 、 等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。
（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行灭菌处理，其中对培养皿进行灭菌常用的方法是 ；操作者的双手需要进行清洗和 ；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能 。 （3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的 。 （4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的。 （5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是 。
（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过防止培养物的扩散。 7．（1）温度 pH 易培养 生活周期短 （2）干热灭菌法 消毒 损伤DNA的结构
（3）比例合适 （4）鉴定（或分类） （5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生（6）灭菌
9．从自然菌样筛选较理想的生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。 （1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养嗜盐菌的菌样应从 环境采集。
（2）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其在群落中的数量大大增加，
／／
从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择 的培养基，并在 条件下培养。
（3）下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。 获得图A效果的接种方法是 ，获得图B效果的接种方法是 。 （4）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行 ，接种前要进行 ，在整个微生物的分离和
培养中，一定要注意在
条件下进行。 9．（1）海滩等高盐（2）以淀粉为唯一碳源 高温（3）稀释涂布平板法 平板划线法 （4）pH调整 高压蒸汽灭菌 无菌
6．某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如下图所示。请分析回答问题：
⑴培养基中加入化合物A的目的是筛选 ，这种培养基属于 培养基。 ⑵“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的 ，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是 。
⑶培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量 的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量 。
⑷转为固体培养时，常采用 的方法接种，获得单菌落后继续筛选。 ⑸实验结束时，使用过的培养基应该进行 处理后，才能倒掉。
答案： ⑴目的菌 选择 ⑵化合物A 异养需氧型 ⑶减少 增加 ⑷划线 ⑸灭菌
18．（山东临沭一中高三选修测试，生物，8）能够测定样品活菌数的方法是( )
A．稀释涂布平板法 B．直接计数法 C．重量法 D．比浊法
19.在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作，培养与观察，则乙组实验属于（ ）
A．空白对照 B．标准对照 C．相互对照 D．条件对照 20.培养SARS病毒时，应选用（ ）
A．固体培养基 B．含有多种无机盐的培养液 C．活的鸡胚 D．牛肉汤 21．在培养基的配制过程中，具有如下步骤，其正确顺序为
①溶化 ②调pH ③加棉塞 ④包扎 ⑤培养基的分装 ⑥称量 A．①②⑥⑤③④ B．⑥①②⑤③④ C．⑥①②⑤④③ D．①②⑤④⑥③ 24．（安徽卷，理综，6）下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是
A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B．取104、105 、106倍的土壤稀释液和无菌水各0．1ml，分别涂布于各组平板上 C．将实验组和对照组平板倒置，370C恒温培养24-48小时
D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数
1．富集培养的微生物学中的最强有力的技术手段之一。
主要是指利用不同微生物间生命活动特点的
不同，制定环境条件，是仅适应该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。富集条件可根据所需分离的微生物的特点，从物理、化学、生物及综合多个方面进行选择，如温度、PH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等许多方面。下图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。
利用富集培养技术从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物 请分析回答：
(1)本实验所需培养基为 碳源为 。 (2)实验原理是 。
(3)①→③重复培养的目的是 。 (4)⑤的菌落中大部分是降解 微生物。
(5)⑥为 组，⑦为 组，设置⑥的目的是 。
(6)⑤→⑥采用 法，接种到⑥的培养基中，在操作过程中为防止污染应注意的事项是 。
1.答案： （1）选择培养基 对羟基苯甲酸 （2）利用以对羟基苯甲酸为唯一的碳源选择培养基，经富集培养，选择出能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物 （3）增大分解对羟基苯甲酸微生物的比例 （4）对羟基苯甲酸 （5）对照 实验 说明通过富集培养的确得到了欲分离的目标微生物 （6）单细胞挑取 接种环在火焰上灼烧灭菌，烧红的接种环在空气中冷却，同时打开皿盖挑取菌落接种到试管中，并塞好棉塞，接种环在火焰上灼烧，杀灭残留物
2
⑵要用此材料配制观察细菌菌落状况的培养基，还需添加的成分是 。 ⑶表中各成分含量确定的原则是 。
⑷培养基配制好后，分装前应进行的工作是 。
⑸从配制培养基直到培养完成，所采用的预防杂菌感染的方法是 。 ⑹在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是 。
2．答案：⑴提供碳源、氮源、生长因子 ⑵琼脂（凝固剂） ⑶所培养微生物对各营养成分的
需要量⑷调整pH ⑸高压蒸汽灭菌、烧灼接种环、酒精棉擦手、棉塞塞试管口、在火焰旁接种 ⑹ 扩大接种面积
3.（辽宁、宁夏卷，理综，40）
（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑______、______和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、______、______等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。
（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行________（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和______；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能__________。
（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_______。
（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的____________。
（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_________。
（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_______处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。 3.答案：
（1）温度 酸碱度 易培养 生活周期短 （2）灭菌 消毒 损伤DNA的结构 （3）比例合适
（4）鉴定(或分类)
（5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生. （6）灭菌
4. （山东卷，理综，34）科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白，这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。
⑴分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的 、大小及形状不同，在电场中的 不同而实现分离。
⑵可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的抗菌特性。抗菌实验中所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供 和 。
⑶分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的 ，确定该蛋白质的抗菌效果。
⑷细菌培养常用的接种方法有 和 。实验结束后，对使用过的培养基应进行 处理。
5.（上海卷，理综，39）39.（9分）氯苯化合物是重要的有机化工原料，原因不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案（图1）筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌，培养基配方如表1。
（1）配制Ⅱ号固体培养基时，除添加Ⅱ号液体培养基成分外，还应添加1%的____________。 （2）培养基配制时，灭菌与调PH的先后顺序是____________。
（3）从用途上来说，Ⅰ号培养基和Ⅱ号培养基分别属于____________培养基和____________培养基。在Ⅱ号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是____________。
（4）在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为 ____________。
（5）将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的Ⅲ号培养液中培养，得到生长曲线（如图2）。从图2可知SP1菌在____________培养条件下最早停止生长，其原因是____________。 5.答案： （1）琼脂
（2）先调PH，后灭菌
（3）通用 选择 硝酸铵 （4）芽孢
（5）20mg/L氯苯 硝酸最早耗尽
51． 52.答案：（1）基因能控制蛋白质的合成 （2）双螺旋脱氧核糖核酸 互补配对 （3）转录 翻译 人的一段DNA 异种生物 核糖核苷酸 特定的一段mRNA 氨基酸 tRNA 核糖体 （4）药物蛋白质 53.答案：（1）脱分化（或脱分化形成愈伤组织） 细胞的全能性 （2）“S”型增长 细胞数量 细胞所处的生长期 （3）保证氧气供应充足 使细胞与培养液充分接触
56.（7分） (1)囊胚 原肠胚 (2) [3]外胚层 [5]内胚层 (3) 细胞分化 (4) 2N (5) D
一、选择题：每小题只有一个选项最符合题意。
1．下列4种生物中，哪一种生物的细胞结构与其他3种生物的细胞有明显的区别（ ）
A．酵母菌 B．乳酸菌 C．青霉菌 D．蘑菇
2．细菌培养基通常在121℃压力锅中灭菌。如果只有在100℃的温度下将细菌培养基灭菌，以下哪一种生物仍会存活？（ ）
A．大肠杆菌 B．一种青霉菌 C．枯草芽孢杆菌 D．鼠伤寒沙门氏菌
3．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（ ）
A.接种针、手、培养基 B.高压锅、手、接种针 C.培养基、手、接种针 D.接种针、手、高压锅
4．关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是（ ） Ａ．操作顺序为计算、称量、熔化、倒平板、灭菌 Ｂ．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯 Ｃ．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板 Ｄ．待平板冷却凝固约5~10min后将平板倒过来放置
5．获得纯净培养物的关键是（ ）
Ａ．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌
B．接种纯种细菌 C.适宜环境条件下培养 D.防止外来杂菌的入侵
6．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是（ ）
A.对比观察培养基有没有被微生物利用 B.对比分析培养基上是否生有杂菌 C.没必要放入未接种的培养基 D.为了下次接种时再使用 7．下列叙述错误的是（ ）
Ａ．培养乳酸菌时需要在培养基中添加维生素
Ｂ．培养霉菌时需将培养基的PH调至碱性 Ｃ．培养细菌时需将PH调至中性或微碱性 Ｄ．培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件
8．关于牛肉膏蛋白胨培养基的配制需要在火焰旁操作的是（ ）
A.称量 B.灭菌 C.溶化 D.倒平板 下列有关碳源的叙述不正确的是（ ）
A．碳源主要用于构成微生物的细胞物质和一些代谢产物 B．某些碳源可以作为微生物的主要能源物质
C．蛋白质一定不能做碳源
D．不同种类的微生物的碳源可能不同
下列有关平板划线接种法的操作错误的是 （ ）
A．将接种环放在火焰上灼烧 B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液
C．蘸取菌液和划线要在火焰旁进行 D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连
10．有关倒平板的操作错误的是（ ）
Ａ．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上
D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置
12.有关稀释涂布平板法，叙述错误的是（ ） Ａ．先将菌液进行一系列的梯度稀释
Ｂ．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面
Ｃ．适宜条件下培养 D.结果都可在培养基表面形成单个的菌落 13.涂布平板操作需要用到（ ） A.接种环、滴管、酒精灯
B.接种环、移液管、酒精灯
C.涂布器、移液管、酒精灯 D.涂布器、接种环、酒精灯
16．微生物培养过程中，肉眼鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据是（ ） A．细菌的大小、形状、颜色 B．菌落的大小、形状、颜色 C．有无鞭毛 D．培养基的不同 19．以下操作用到接种环的是（ ）
A．平板划线操作 B．系列稀释操作 C．涂布平板操作 20．能排除培养基是否有杂菌污染的方法是（ ） A.将未接种的培养基放在实验桌上培养 B.将未接种的培养基放在窗台上培养 C.将未接种的培养基放在恒温箱中培养
D.将已接种的培养基放在恒温箱中培养
21．要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用（ ） A．固体培养基 B．液体培养基
C．加入青霉素的培养基 D．加入高浓度食盐的培养基
22．甲、乙、丙是三种微生物，下表I、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在I中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是（ ）
D．倒平板操作
A、甲、乙、丙都是异养微生物
B、甲、乙都足自养微生物、丙是异养微生物
C、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙足自养微生物 D、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物
23．农田土壤的表层，自生固氮菌的含量比较多，将用表层土制成的稀泥浆，接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其它细菌分开，对培养的要求是（ ）
①加抗生素 ②不加抗生素 ③加氮素 ④不加氮素 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖 ⑦37℃恒温箱培养 ⑧28 ℃--30℃温度下培养 A．①③⑤⑦ C．②④⑤⑧
B．②④⑥⑧ D．①④⑥⑦
24.伊红—美蓝培养基常用来鉴别大肠杆菌，其原理是（ ） A．大肠杆菌在该培养基中形成特定的菌落
B．大肠杆菌能使培养基改变颜色
C．大肠杆菌菌的代谢产物与伊红—美蓝结合，使菌落呈深紫色，并有金属光泽 D．大肠杆菌能在该培养基中很好生活，其余微生物不能很好生活
25．通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微牛物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10％酚可以抑制细菌和霉菌。利用下述方法不能从混杂的微生物群体中分别分离出（ ） A．大肠杆菌 B．霉菌 C．放线菌 D．固氮细菌
29．右图表示某有机物加入某种酶后在0～80℃的环境中，有机物的 分解总量与温度的关系图，依图判断，在0～80℃环境中，酶的 活性变化曲线（pH适宜）正确的是（ ）
A B C
32．在PCR扩增前，需要将下列哪些物质加入微量离心管中？（ ）
①模板DNA②模板RNA③DNA解旋酶④耐高温的DNA聚合酶⑤引物⑥PCR缓冲液⑦脱氧核苷酸贮备液⑧核苷酸贮备液 A．①④⑤⑥⑦ B．①③④⑤⑥⑧ C．②③④⑤⑥⑦ D．①④⑥⑦⑧ 34．PCR技术的操作步骤依次是（ ） A．高温变性 、中温延伸、低温复性 B. 高温变性、低温复性、中温延伸
C．中温延伸、高温变性、低温复性 D. 中温延伸、低温复性、高温变性
37．在培养基中加入伊红和美蓝可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌，这种培养基称为( ) A．选择培养基
B．鉴别培养基
C．液体培养基 D．固体培养基
41．在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌岭脱氧核苷酸是460个）放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是（ ） A．540个 B．8100个 C．17280个 D．7560个
47．在一个普通的锥形瓶中，加入大半瓶含有酵母菌的葡萄糖溶液后密封。下列坐标图不正确的是（ ）
D
6．在做分离“分解尿素的细菌”实验时，A同学从对应10培养基中筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。下列有关叙述正确的是（双选） （ BC ） A．A同学出现这种结果的原因是土样不同
-6
B．可以将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对照，以证明培养基是否受到污染
C．让其他同学用与A同学一样的土壤进行实验，如果结果与A同学一样，则可证明A同学无误 D．B、C选项的实验思路都遵循了实验的对照原则
1．下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是 （ D ） A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上 C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时
D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数 4．下列关于微生物的培养和运用的叙述，错误的是 （ B ） A．通过消毒不能杀死物体内所有的微生物 B．利用平板划线法可以统计样品中活菌的数目 C．平板划线法和稀释涂布法常用于微生物的接种
D．微生物所用的培养基成分和植物组织培养用的培养基成分不同
5．下列有关微生物的培养或纯化的叙述，错误的是 （ D ） A．微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种
B．培养液中溶氧量的变化会影响酵母菌的繁殖和代谢途径
C．分离纯化微生物的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法 D．分离自养型微生物的方法是用纤维素作为唯一碳源的培养基
二、非选择题：本题包括6小题，共50分。
51.（7分）为了检测饮用水中是否会有某种细菌，配制如下培养基进行
培养：
（1）该培养基所含有的碳源有___________，其功能是_____________。
（2）该培养基所含有的氮源有___________，其功能是_____________。
（3）该培养基除含碳源、氮源外，还有微生物需要的营养物质，是
____________________。 （4）该细菌在同化作用上的代谢类型是___________型。 （5）该培养基可用来鉴别哪种细菌______________。 A.霉菌 B.酵母菌 C.大肠杆菌 D.乳酸菌
答案：（1）蔗糖、乳糖、蛋白胨 主要用于构成微生物的细胞物质和代谢产物 （2）蛋白胨主要用于合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物 （3）水、无机盐（或K2HPO4） （4）异养 （5）C
54．某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混合在一起。请你完成分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌的实验步骤，并回答有关问题： ⑴主要步骤：
①制备两种培养基：一种是 培养基，另一种 的培养基。分别分成两份，依次标上A，A／和B，B／，备用。
②分别向A、B培养基中接种 。 ③接种后，放在恒温箱中培养3～4天。
④分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌种，接种到A／、B／培养基中。
⑤接种后，把A、B培养基放入恒温箱中培养3～4天。 ⑵回答问题： 在步骤①②中，为保证无杂菌污染，实验中应采用的主要措施有 、
、 。
第④⑤两个步骤的目的是 。 54.⑴无氮 加青霉素 混合菌
⑵培养基高压蒸气灭菌 接种环在酒精灯火焰上灭菌 接种过程在酒精灯火焰附近进行 获得纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌
55．空气中的含菌量是衡量空气质量的指标之一，为了检测学校生物实验室、教室、校长室、小树林4个地方空气中的含菌情况，请利用所提供条件设计一个实验。 （1）、请用100ml量筒、4副培养皿、煮沸过的 洗碗水，设计取样的实验步骤。 （2）、请用4支试管、滴管、0.01%亚甲基蓝溶液，设计检测的实验步骤。 （3）、实验结果的预测和分析。 （4）、你所设计的实验检测到的是_________________细菌的相对数量。 55.(1)①用量筒取等量的煮沸过的洗碗水,分别倒入4只培养皿中； ② 分别将以上4只培养皿露置于4个场所； ③ 静置1—3天后，同时加盖取回
（2）①分别取等量放置过的洗碗水放入4支试管中
② 在每只试管内滴加5—10滴0.01%亚甲基蓝溶液，置于温暖处
（3）根据4支试管内洗碗水在相同时间内褪色的程度，来判定空气中的含菌量，其中褪色程度最大的，空气中含菌量相对最高；褪色程度最小的，空气中含菌量最低。 （4）好氧性 7．（2009·宁夏理综，40）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑 和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、 、 等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。
（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行灭菌处理，其中对培养皿进行灭菌常用的方法是 ；操作者的双手需要进行清洗和 ；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能 。 （3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的 。 （4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的。 （5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是 。
（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过防止培养物的扩散。 7．（1）温度 pH 易培养 生活周期短 （2）干热灭菌法 消毒 损伤DNA的结构
（3）比例合适 （4）鉴定（或分类） （5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生（6）灭菌
9．从自然菌样筛选较理想的生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。 （1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养嗜盐菌的菌样应从 环境采集。
（2）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其在群落中的数量大大增加，
／／
从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择 的培养基，并在 条件下培养。
（3）下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。 获得图A效果的接种方法是 ，获得图B效果的接种方法是 。 （4）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行 ，接种前要进行 ，在整个微生物的分离和
培养中，一定要注意在
条件下进行。 9．（1）海滩等高盐（2）以淀粉为唯一碳源 高温（3）稀释涂布平板法 平板划线法 （4）pH调整 高压蒸汽灭菌 无菌
6．某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如下图所示。请分析回答问题：
⑴培养基中加入化合物A的目的是筛选 ，这种培养基属于 培养基。 ⑵“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的 ，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是 。
⑶培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量 的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量 。
⑷转为固体培养时，常采用 的方法接种，获得单菌落后继续筛选。 ⑸实验结束时，使用过的培养基应该进行 处理后，才能倒掉。
答案： ⑴目的菌 选择 ⑵化合物A 异养需氧型 ⑶减少 增加 ⑷划线 ⑸灭菌
18．（山东临沭一中高三选修测试，生物，8）能够测定样品活菌数的方法是( )
A．稀释涂布平板法 B．直接计数法 C．重量法 D．比浊法
19.在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作，培养与观察，则乙组实验属于（ ）
A．空白对照 B．标准对照 C．相互对照 D．条件对照 20.培养SARS病毒时，应选用（ ）
A．固体培养基 B．含有多种无机盐的培养液 C．活的鸡胚 D．牛肉汤 21．在培养基的配制过程中，具有如下步骤，其正确顺序为
①溶化 ②调pH ③加棉塞 ④包扎 ⑤培养基的分装 ⑥称量 A．①②⑥⑤③④ B．⑥①②⑤③④ C．⑥①②⑤④③ D．①②⑤④⑥③ 24．（安徽卷，理综，6）下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是
A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B．取104、105 、106倍的土壤稀释液和无菌水各0．1ml，分别涂布于各组平板上 C．将实验组和对照组平板倒置，370C恒温培养24-48小时
D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数
1．富集培养的微生物学中的最强有力的技术手段之一。
主要是指利用不同微生物间生命活动特点的
不同，制定环境条件，是仅适应该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。富集条件可根据所需分离的微生物的特点，从物理、化学、生物及综合多个方面进行选择，如温度、PH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等许多方面。下图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。
利用富集培养技术从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物 请分析回答：
(1)本实验所需培养基为 碳源为 。 (2)实验原理是 。
(3)①→③重复培养的目的是 。 (4)⑤的菌落中大部分是降解 微生物。
(5)⑥为 组，⑦为 组，设置⑥的目的是 。
(6)⑤→⑥采用 法，接种到⑥的培养基中，在操作过程中为防止污染应注意的事项是 。
1.答案： （1）选择培养基 对羟基苯甲酸 （2）利用以对羟基苯甲酸为唯一的碳源选择培养基，经富集培养，选择出能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物 （3）增大分解对羟基苯甲酸微生物的比例 （4）对羟基苯甲酸 （5）对照 实验 说明通过富集培养的确得到了欲分离的目标微生物 （6）单细胞挑取 接种环在火焰上灼烧灭菌，烧红的接种环在空气中冷却，同时打开皿盖挑取菌落接种到试管中，并塞好棉塞，接种环在火焰上灼烧，杀灭残留物
2
⑵要用此材料配制观察细菌菌落状况的培养基，还需添加的成分是 。 ⑶表中各成分含量确定的原则是 。
⑷培养基配制好后，分装前应进行的工作是 。
⑸从配制培养基直到培养完成，所采用的预防杂菌感染的方法是 。 ⑹在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是 。
2．答案：⑴提供碳源、氮源、生长因子 ⑵琼脂（凝固剂） ⑶所培养微生物对各营养成分的
需要量⑷调整pH ⑸高压蒸汽灭菌、烧灼接种环、酒精棉擦手、棉塞塞试管口、在火焰旁接种 ⑹ 扩大接种面积
3.（辽宁、宁夏卷，理综，40）
（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑______、______和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、______、______等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。
（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行________（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和______；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能__________。
（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_______。
（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的____________。
（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_________。
（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_______处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。 3.答案：
（1）温度 酸碱度 易培养 生活周期短 （2）灭菌 消毒 损伤DNA的结构 （3）比例合适
（4）鉴定(或分类)
（5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生. （6）灭菌
4. （山东卷，理综，34）科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白，这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。
⑴分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的 、大小及形状不同，在电场中的 不同而实现分离。
⑵可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的抗菌特性。抗菌实验中所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供 和 。
⑶分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的 ，确定该蛋白质的抗菌效果。
⑷细菌培养常用的接种方法有 和 。实验结束后，对使用过的培养基应进行 处理。
5.（上海卷，理综，39）39.（9分）氯苯化合物是重要的有机化工原料，原因不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案（图1）筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌，培养基配方如表1。
（1）配制Ⅱ号固体培养基时，除添加Ⅱ号液体培养基成分外，还应添加1%的____________。 （2）培养基配制时，灭菌与调PH的先后顺序是____________。
（3）从用途上来说，Ⅰ号培养基和Ⅱ号培养基分别属于____________培养基和____________培养基。在Ⅱ号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是____________。
（4）在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为 ____________。
（5）将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的Ⅲ号培养液中培养，得到生长曲线（如图2）。从图2可知SP1菌在____________培养条件下最早停止生长，其原因是____________。 5.答案： （1）琼脂
（2）先调PH，后灭菌
（3）通用 选择 硝酸铵 （4）芽孢
（5）20mg/L氯苯 硝酸最早耗尽
51． 52.答案：（1）基因能控制蛋白质的合成 （2）双螺旋脱氧核糖核酸 互补配对 （3）转录 翻译 人的一段DNA 异种生物 核糖核苷酸 特定的一段mRNA 氨基酸 tRNA 核糖体 （4）药物蛋白质 53.答案：（1）脱分化（或脱分化形成愈伤组织） 细胞的全能性 （2）“S”型增长 细胞数量 细胞所处的生长期 （3）保证氧气供应充足 使细胞与培养液充分接触
56.（7分） (1)囊胚 原肠胚 (2) [3]外胚层 [5]内胚层 (3) 细胞分化 (4) 2N (5) D