多酚类物质的提取与含量测定
一、实验原理
酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应生成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比。测定总多酚时所用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿茶酚能较好地代表茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时，则以没食子酸作标准物较合适。
二、实验材料、试剂与仪器
材料：茶叶；
仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等；
试剂：（1）酒石酸亚铁溶液：称取1.00g 硫酸亚铁（FeSO4·7H2O ）和5.00g 酒石酸钾钠(C4H4O6NaK·4H2O ）, 混合后加蒸馏水溶解, 定容到1000mL ；
（2）pH 7.5磷酸盐缓冲液：称取60.20g Na2HPO4·12H2O 和5.00g NaH2PO4·12H2O ， 混合后加蒸馏水溶解, 定容到1000mL 。
三、操作步骤
（一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用
# 标准曲线的制作参照GB-8313-87《茶—茶多酚测定》方法。
为简化操作，可用在一定操作条件下“吸光度值为1.00时，供试液中茶多酚的浓度为7.826 mg/mL”这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。
（二）样品总多酚的提取
准确称取1.0g 磨碎并混匀的茶叶样品于200mL 三角瓶中，加入80mL 沸水，并在沸水浴中保温浸提30min ，然后过滤、洗涤滤渣，将滤液合并、冷却、加蒸馏水定容至100mL 。
（二）样品多酚提取液的多酚总量测定
吸取1mL 样品多酚提取液于25mL 容量瓶中，加入4mL 蒸馏水和5mL 酒石酸亚铁溶液，摇匀，再用pH 7.5磷酸盐缓冲液稀释至刻度，混匀。同是以蒸馏水代替样品提取液，加入与样品测定同样的试剂作空白，用0.5cm 比色皿在540nm 波长处测定吸光度。
4.3 测定步骤
4.3.1 试液的制备 按GB 8305-87《茶 水浸出物测定》中3.4.1的规定, 制备试液。
4.3.2 测定 准确吸取上述(4.3.1)试液1mL, 注入25mL 的容量瓶中, 加水4mL 和酒石酸亚铁溶液 (3.1)5mL,充分混合, 再加pH7.5的缓冲液(3.2)至刻度, 用10mm 比色杯, 在波长540nm 处, 以试剂空白溶液作参比, 测定吸光度(A)。
四、计算
7.826—吸光度为1.00时, 茶多酚含量的经验值 (mg/mL)。
# 如果制作标准曲线，则样品提取液的测定与标准曲线制作步骤相同，并根据标准曲线和相应公式，求得样品中茶多酚的含量。
计算方法和公式 茶叶中茶多酚的含量, 以干态质量百分率表示, 按下式计算:
A×1.957×2 L1
茶多酚(％) ＝——————×—————×100
100 L2×M×m
式中: L1--试液的总量,mL; L2--测定时的用液量,mL; M--试样的质量,g; m--试样干物质含量百分率, ％； A--试样的吸光度; 1.957--用10mm 比色杯, 当吸光度等于0.50时, 每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg 。如果符合重复性(5.2)的要求, 则取两次测定的算术平均值作为结果。
5.2 重复性 同一样品的两次测定值之差, 每100g 试样不得超过0.5g 。
多酚类物质的提取与含量测定
一、实验原理
酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应生成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比。测定总多酚时所用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿茶酚能较好地代表茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时，则以没食子酸作标准物较合适。
二、实验材料、试剂与仪器
材料：茶叶；
仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等；
试剂：（1）酒石酸亚铁溶液：称取1.00g 硫酸亚铁（FeSO4·7H2O ）和5.00g 酒石酸钾钠(C4H4O6NaK·4H2O ）, 混合后加蒸馏水溶解, 定容到1000mL ；
（2）pH 7.5磷酸盐缓冲液：称取60.20g Na2HPO4·12H2O 和5.00g NaH2PO4·12H2O ， 混合后加蒸馏水溶解, 定容到1000mL 。
三、操作步骤
（一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用
# 标准曲线的制作参照GB-8313-87《茶—茶多酚测定》方法。
为简化操作，可用在一定操作条件下“吸光度值为1.00时，供试液中茶多酚的浓度为7.826 mg/mL”这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。
（二）样品总多酚的提取
准确称取1.0g 磨碎并混匀的茶叶样品于200mL 三角瓶中，加入80mL 沸水，并在沸水浴中保温浸提30min ，然后过滤、洗涤滤渣，将滤液合并、冷却、加蒸馏水定容至100mL 。
（二）样品多酚提取液的多酚总量测定
吸取1mL 样品多酚提取液于25mL 容量瓶中，加入4mL 蒸馏水和5mL 酒石酸亚铁溶液，摇匀，再用pH 7.5磷酸盐缓冲液稀释至刻度，混匀。同是以蒸馏水代替样品提取液，加入与样品测定同样的试剂作空白，用0.5cm 比色皿在540nm 波长处测定吸光度。
4.3 测定步骤
4.3.1 试液的制备 按GB 8305-87《茶 水浸出物测定》中3.4.1的规定, 制备试液。
4.3.2 测定 准确吸取上述(4.3.1)试液1mL, 注入25mL 的容量瓶中, 加水4mL 和酒石酸亚铁溶液 (3.1)5mL,充分混合, 再加pH7.5的缓冲液(3.2)至刻度, 用10mm 比色杯, 在波长540nm 处, 以试剂空白溶液作参比, 测定吸光度(A)。
四、计算
7.826—吸光度为1.00时, 茶多酚含量的经验值 (mg/mL)。
# 如果制作标准曲线，则样品提取液的测定与标准曲线制作步骤相同，并根据标准曲线和相应公式，求得样品中茶多酚的含量。
计算方法和公式 茶叶中茶多酚的含量, 以干态质量百分率表示, 按下式计算:
A×1.957×2 L1
茶多酚(％) ＝——————×—————×100
100 L2×M×m
式中: L1--试液的总量,mL; L2--测定时的用液量,mL; M--试样的质量,g; m--试样干物质含量百分率, ％； A--试样的吸光度; 1.957--用10mm 比色杯, 当吸光度等于0.50时, 每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg 。如果符合重复性(5.2)的要求, 则取两次测定的算术平均值作为结果。
5.2 重复性 同一样品的两次测定值之差, 每100g 试样不得超过0.5g 。