生物碱的化学显色

生物碱的化学显色五、显色反应

Frohde试剂(1%钼酸钠或5%钼酸铵的浓硫酸溶液):乌头碱显黄棕色,吗啡显紫色转棕色,可待因显暗绿色至淡黄色,黄连素显棕绿色,阿托品等不显色;

Mandelin试剂(1%钒酸铵的浓硫酸溶液):吗啡显棕色,可待因显蓝色,莨菪碱显红色; Marquis试剂(浓硫酸中含少量甲醛:0.2mL30%甲醛溶液与10mL浓硫酸的混合溶液):吗啡显橙色至紫色,可待因显红色至黄棕色。 Labat反应

5%没食子酸的醇溶液

具有亚甲二氧基结构的生物碱呈翠绿色 Vitali反应

发烟硝酸和苛性碱醇溶液结构中有苄氢存在则呈阳性反应

深紫—暗红—最后颜色消失黄酮的显色反应四、呈色反应

黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚羟基及γ-吡喃酮环有关。（一）还原试验——鉴别 1.盐酸-镁粉（或锌粉）反应操作：样品←-1mL甲醇或乙醇

|镁粉振摇

|几滴浓HCl;△ 出现颜色

多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红～紫红色,少数显紫～蓝色;

当B环上有-OH或-OCH3取代时,呈现的颜色即随之加深; 查耳酮、橙酮类无颜色反应,异黄酮类除少数外,均不显色。注意事项:

1.做对照实验(在供试液中仅加入浓盐酸进行观察),花青素及部分橙酮、查耳酮等在单纯浓盐酸酸性下也会发生色变;

2.在用植物粗提取液进行试验时,为了

避免提取液本身颜色的干扰,需注意观察加入浓盐酸后升起的泡沫颜色,若为红色,即示阳性,表明存在黄酮类化合物;

3.盐酸-镁粉反应的机理过去认为是由于生成了花色苷元所致,现在认为是由于生成了正碳离子的缘故。 2.硼氢化钠(钾)反应

NaBH4是对二氢黄酮(醇)类化合物专属性较强的一种还原剂,与二氢黄酮(醇)类化合物产生红～紫色(唯一性) 。操作:试管←0.1mL含有样品的乙醇液

|0.1mL2%NaBH4甲醇液

|1min后,加数滴浓HCl或H2SO4 红色～紫色

另报道二氢黄酮(醇)可与磷钼酸试剂反应呈现棕褐色,也可作为二氢黄酮类化合物的特征鉴别反应。

(二)金属盐类试剂的络合显色反应

络合应具备的条件:黄酮类化合物应具有如下结构

即—C3-OH，C5-OH，邻二OH 结果：有色溶液，沉淀

金属盐:铝盐、铅盐、锆盐、镁盐等用途：鉴定，结构测定，提取分离 1.铝盐

常用试剂为1%三氯化铝或硝酸铝溶液,生成的配位化合物多为黄色(λmax=415nm),并有荧光,可用于定性及定量分析。 2.铅盐

常用试剂为1%醋酸铅及碱式醋酸铅水溶液,可生成黄～红色沉淀。

醋酸铅只能与分子中具有:邻二酚羟基;3-OH 、4-C=O;5-OH 、4-C=O结构的化合物反应生成沉淀;

碱式醋酸铅的沉淀能力较大,一般酚类化合物均可为之沉淀。 3.锆盐

常用2% 二氯氧化锆(ZrOCl2)甲醇溶液。

具有游离3-OH 2%ZrOCl2 枸橼酸

具有游离5-OH --------------→锆配位化合物 (黄绿色)-------→不褪色:3-OH/褪色:5-OH

原因：

3-OH，4-酮基络合物稳定性＞5－OH，4-酮基络合物

操作: 样品0.5～1.0mg

黄绿色配位化合物

4．镁盐 ——鉴别两类二氢黄酮

常用醋酸镁(Mg(OAc)2甲醇溶液。二氢黄酮 Mg(OAc)2

二氢黄酮醇---------------→天蓝色荧光(紫外灯)

喷洒

黄酮、黄酮醇及异黄酮——显黄色～橙黄色～褐色

5.氯化锶（SrCl2） ——鉴别邻二OH

具邻二酚OH黄酮类/氨性甲醇

| SrCl2

绿色～棕色乃至黑色↓ 操作:

1mg样品

|3滴0.01mol/LSrCl2甲醇溶液 |3滴氨蒸气饱和的甲醇溶液是否有沉淀 6.FeCl3反应

含有氢键缔合的酚羟基,呈明显的颜色。（三）硼酸显色反应

具5－OH 的黄酮， 2－OH查耳酮/无机酸有机酸-------→(反应条件，硼酸)亮黄色在草酸存在下显黄色并具有绿色荧光,但在枸橼酸丙酮存在的条件下,则只显黄色而无荧光。

（四）碱性试剂显色反应

在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用碱性试剂处理后的颜色变化情况，对于鉴别黄酮类化合物有一定意义。

1.黄酮醇类在碱液中先呈黄色,通入空气后变为棕色,可与其他黄酮类区别;

2.二氢黄酮类易在碱液中开环,转变成相应的异构体查尔酮类化合物,显橙色至黄色; 3.黄酮类化合物当分子中有邻二酚羟基取代或3,4’-二羟基取代时,在碱液中不稳定,易被氧化,产生黄色-深红色-绿棕色沉淀。

与金属盐类生成沉淀

皂苷的水溶液可以与一些金属盐类如铅盐、钡盐、铜盐等生成沉淀。

酸性皂苷(多是三萜皂苷)的水溶液中加入硫酸铵、醋酸铅或其他中性盐类即生成沉淀;

中性皂苷(多是甾体皂苷)的水溶液中加入碱性醋酸铅、氢氧化钡等碱性盐类才能生成沉淀;

该性质可用于皂苷的提纯与分离。溶血性

皂苷的水溶液大多数能破坏红血球而有溶血作用。各种皂苷的溶血作用强弱不同,可用溶血指数表示。

溶血指数是指在一定条件下(同一来源红血球、等渗、恨温等)能使血液中红细胞完全溶解的最低皂苷溶液浓度。

如薯蓣皂苷的溶血指数为1:400000,甘草皂苷的溶血指数为1:4000。

原因:多数皂苷与血红细胞膜上的胆甾醇生成不溶于水的复合物沉淀,破坏了血红细胞的正常渗透性,致使细胞内渗透压增加而发生崩裂,从而导致溶血现象。

注:1.一般单糖链皂苷的溶血作用较明显,双糖链皂苷溶血作用较弱或无溶血作用; 2.酸性皂苷则显示中等程度的溶血作用; 3.F环裂解的呋甾烷醇类皂苷不具有溶血作用,如原菝葜皂苷;

4.制备皂苷中药静脉注射液时须做溶血试验。

八)皂苷水解

皂苷水解有两种方式:一种为完全水解,得到原始皂苷元,另一种为部分水解,得到次生苷或前皂苷元。 (九)皂苷的皂色反应

1.李伯曼(Lieberman)反应

2.醋酐-浓硫酸(Lieberman-Burchard) 3.氯仿-浓硫酸反应 4.三氯醋酸反应 5.五氯化锑反应

6.芳香醛-硫酸或高氯酸反应醌类

二、化学性质

1. 酸性

醌类多具有Ar-OH的存在，故显酸性，易溶于碱水中，加酸酸化时又可重新沉淀析出——用于“碱提酸沉”从天然药物中提取醌类化合物。

醌类化合物因分子中酚羟基、羧基的数目及位置不同，酸性强弱有一定差别。 (1)具有羧基的醌类化合物、苯醌和萘醌的醌核上的羟基酸性较强;

(2)萘醌和蒽醌的苯环上的羟基酸性：β-羟基 >α-羟基

(3)酚羟基数目增多则酸性也增强羟基蒽醌类的酸性一般随羟基数目的增加而增加。羟基蒽醌类化合物的酸性强弱有如下规律: ＞两个α -OH ＞一个α -OH 5%NaHCO3 5%Na2CO3 1%NaOH 5%NaOH

2.碱性

醌类结构中的羰基氧原子有微弱的碱性,可

以溶于强酸形成佯盐,转化成阳碳离子而发

生颜色改变,大多数蒽醌类溶于浓硫酸时为红色至红紫色。三、颜色反应

1.菲格尔(Feigl)反应———是指醌类衍生物(包括苯醌、萘醌、菲醌及蒽醌)在碱性条件下加热能迅速被醛类还原,再与邻二硝基苯反应生成紫色化合物。

2.无色亚甲蓝显色试验——可区别蒽醌与苯醌萘醌(专用于检验苯醌及萘醌)

3.与活性亚甲基试剂的反应(Kesting-Craven法) ——可区别蒽醌与苯醌萘醌

苯醌及萘醌类化合物当其醌环上有未被取代的位置时,即可在碱性条件下,与一些含亚甲基试剂(如乙酰乙酸乙酯、丙二酸酯、丙

二腈等)的醇溶液反应。

4.碱液呈色反应(Borntrager’s反应)

羟基蒽醌及其苷类遇碱液呈红色或紫红色,其反应机理如下 5.与金属离子反应

在蒽醌类化合物中,如果有α-酚羟基或邻二酚羟基结构,可以与Pb2+、Mg2+等金属离子形成配位化合物。

蒽醌与醋酸铅生成难溶性盐沉淀,将该沉淀溶于水,加入中性盐(NH4)2SO4、Na2SO4或通入H2S气体脱铅,使醌类物质游离出来。羟基蒽醌类化合物能和0.5%醋酸镁醇溶液反应生成橙红色、紫红色或蓝紫色配位化合物。由于羟基位置不同,与醋酸镁反应能生成

不同颜色的配位化合物。

若母核上只有一个α-OH,其配位化合物为橙色; 若每个苯环上各有一个α-OH,并另有一个

间位酚羟基为橙红至红色; 若有对二酚羟基则呈紫红至紫色; 若有邻二酚羟基则呈蓝色至蓝紫色。试验时可将样品溶液滴于滤纸上，干燥后喷0.5%乙酸镁的甲醇溶液,于90℃加热5min即可显色。