水中细菌总数的检测
一．目的与要求
了解水细菌学检测的卫生学意义和基本原理，学习和掌握检验水中细菌总数的方法，以评价水体的质量，确保饮水和用水的卫生和安全。
二．实验原理
生活饮用水及其水源水等水体受到生活污水、工农业废水或人和动物粪便的污染后，水中的细菌数量可大量增加，其中病原菌也随之增加，引发传染，危害人类健康，因而水中细菌总数和大肠菌数量可反映水体受微生物污染的程度。水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。故水的细菌学检验对了解水体被污染的程度，在流行病学和提供水质标准中具有重要意义和价值，它是评价水质污染程度的重要指标之一。。
细菌总数是指1mL 水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h 培养后，所生长的细菌菌落的总数（CFU ）。我国生活饮用水卫生标准中规定生活饮用水的细菌总数1mL 中不得超过100CFU 。
三．材料与方法
1． 材料
① 营养琼脂培养基 ② 2216E 培养基：配方如下：蛋白胨 50g 、酵母膏 1.0g 、FePO 4 0.01g、琼脂 18.0g 、蒸馏水 1000mL 、pH 值7.6-7.8。 2． 方法
水中细菌总数的平板计数测定方法。 3． 仪器
高压蒸汽灭菌锅；9cm 培养皿；1mL 、5mL 移液管；45mL 烧杯；250mL 三角瓶
四．实验步骤
1． 水样的采集
① 自来水：先将自来水龙头用火焰灼烧3min 灭菌，再打开水龙头是水流5min 后，以灭过菌的三角瓶接取水样，以待分析。
若水样内含有余氯，则采样瓶在为灭菌前按采500mL 水样加3%硫代硫酸钠（Na 2S 2O 3·5H 2O 溶液1mL 的量，预先加入采样瓶内，用以采样后中和水样内的余氯，以防止余氯的杀菌作用。
② 江水、河水、湖水、塘水、水库等水源水：可应用采样器，器内的采样瓶应先灭菌。采样时，将采样器置于水体中所置的深度，水即注入采样瓶中。待注满后取出水面，立即送检，一般不应超过4h ，否则需放入冰箱中保存，但不能超过24h 。 2． 水样的稀释
根据水被污染的程度的不同，按无菌操作做10倍系列稀释。 3． 细菌总数的测定 （1）自来水：
①用灭菌移液管吸取1mL 水样，注入灭菌培养皿中。
②分别倾注15mL 已融化并冷却到45℃左右的灭菌营养琼脂培养基，并立即在桌面上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。
③另取一空的灭菌培养皿，倾注45℃左右的灭菌营养琼脂培养基15mL ，作空白对照。 ④培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24h ，进行菌落计数。两个平板的菌落数平均值即为1mL 水样的细菌总数。
(2)水源水
①稀释水样：取4个灭菌试管，分别加入4.5mL 灭菌水。取0.5mL 水样注入盛有4.5mL 灭菌水的第一试管中，摇匀成10-1稀释液，再从第一试管取0.5mL 至下一试管灭菌水中，如此稀释到第三试管，稀释度分别为10-1，10-2，10-3。稀释倍数看水样污染程度而定，以培养后平板的菌落数在30-300个为最合适。若三个稀释度的菌落数都多到或少到无法计数，则需加大或减少稀释倍数。一般中等污染的水样，取10-1，10-2，10-3三个稀释度，污染严重的取10-2，10-3，10-4三个连续稀释度。
②自最后两个稀释度的试管中各取1mL 稀释水样加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做两个培养皿。
③各倾注15mL 已融化并冷却到45℃左右的灭菌营养琼脂培养基，立即放在桌面上摇匀。 ④凝固后倒置于37℃培养箱中培养24h 。
五．实验报告
（1）菌落数计算原则
记录各平皿的菌落数后，计算相同稀释度的平均菌落数，供下一步计算用。若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到平皿的一半，而其余的一半菌落分布有很均匀时，则将此一般菌落数乘2以代表平板的全部菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。 （2）细菌总数计算方法：按已获得的同稀释度的平均菌落数的不同情况进行计算。
①首先选择平均菌落数在30-300之间，查表进行计算。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数，报告该水样的细菌总数（表1例1）。
②若有两个稀释度，其平均菌落数均在30-300之间，则应按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2应报告两者的平均数，若大于2则报告其中较小的菌落总数（表1例2及例3）。
③若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（表1例4）
④若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（表1例5）
⑤若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（表1例6）
（3）报告水样品中细菌总数。从水质细菌检测结果，分析饮用水、水源水是否符合标准。 （4）水的细菌学检测中应注意哪些关键事项？
六．注意事项
（1） 严格无菌操作，防止污染。
（2） 注意正确培养方法。
水中细菌总数的检测
一．目的与要求
了解水细菌学检测的卫生学意义和基本原理，学习和掌握检验水中细菌总数的方法，以评价水体的质量，确保饮水和用水的卫生和安全。
二．实验原理
生活饮用水及其水源水等水体受到生活污水、工农业废水或人和动物粪便的污染后，水中的细菌数量可大量增加，其中病原菌也随之增加，引发传染，危害人类健康，因而水中细菌总数和大肠菌数量可反映水体受微生物污染的程度。水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。故水的细菌学检验对了解水体被污染的程度，在流行病学和提供水质标准中具有重要意义和价值，它是评价水质污染程度的重要指标之一。。
细菌总数是指1mL 水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h 培养后，所生长的细菌菌落的总数（CFU ）。我国生活饮用水卫生标准中规定生活饮用水的细菌总数1mL 中不得超过100CFU 。
三．材料与方法
1． 材料
① 营养琼脂培养基 ② 2216E 培养基：配方如下：蛋白胨 50g 、酵母膏 1.0g 、FePO 4 0.01g、琼脂 18.0g 、蒸馏水 1000mL 、pH 值7.6-7.8。 2． 方法
水中细菌总数的平板计数测定方法。 3． 仪器
高压蒸汽灭菌锅；9cm 培养皿；1mL 、5mL 移液管；45mL 烧杯；250mL 三角瓶
四．实验步骤
1． 水样的采集
① 自来水：先将自来水龙头用火焰灼烧3min 灭菌，再打开水龙头是水流5min 后，以灭过菌的三角瓶接取水样，以待分析。
若水样内含有余氯，则采样瓶在为灭菌前按采500mL 水样加3%硫代硫酸钠（Na 2S 2O 3·5H 2O 溶液1mL 的量，预先加入采样瓶内，用以采样后中和水样内的余氯，以防止余氯的杀菌作用。
② 江水、河水、湖水、塘水、水库等水源水：可应用采样器，器内的采样瓶应先灭菌。采样时，将采样器置于水体中所置的深度，水即注入采样瓶中。待注满后取出水面，立即送检，一般不应超过4h ，否则需放入冰箱中保存，但不能超过24h 。 2． 水样的稀释
根据水被污染的程度的不同，按无菌操作做10倍系列稀释。 3． 细菌总数的测定 （1）自来水：
①用灭菌移液管吸取1mL 水样，注入灭菌培养皿中。
②分别倾注15mL 已融化并冷却到45℃左右的灭菌营养琼脂培养基，并立即在桌面上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。
③另取一空的灭菌培养皿，倾注45℃左右的灭菌营养琼脂培养基15mL ，作空白对照。 ④培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24h ，进行菌落计数。两个平板的菌落数平均值即为1mL 水样的细菌总数。
(2)水源水
①稀释水样：取4个灭菌试管，分别加入4.5mL 灭菌水。取0.5mL 水样注入盛有4.5mL 灭菌水的第一试管中，摇匀成10-1稀释液，再从第一试管取0.5mL 至下一试管灭菌水中，如此稀释到第三试管，稀释度分别为10-1，10-2，10-3。稀释倍数看水样污染程度而定，以培养后平板的菌落数在30-300个为最合适。若三个稀释度的菌落数都多到或少到无法计数，则需加大或减少稀释倍数。一般中等污染的水样，取10-1，10-2，10-3三个稀释度，污染严重的取10-2，10-3，10-4三个连续稀释度。
②自最后两个稀释度的试管中各取1mL 稀释水样加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做两个培养皿。
③各倾注15mL 已融化并冷却到45℃左右的灭菌营养琼脂培养基，立即放在桌面上摇匀。 ④凝固后倒置于37℃培养箱中培养24h 。
五．实验报告
（1）菌落数计算原则
记录各平皿的菌落数后，计算相同稀释度的平均菌落数，供下一步计算用。若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到平皿的一半，而其余的一半菌落分布有很均匀时，则将此一般菌落数乘2以代表平板的全部菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。 （2）细菌总数计算方法：按已获得的同稀释度的平均菌落数的不同情况进行计算。
①首先选择平均菌落数在30-300之间，查表进行计算。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数，报告该水样的细菌总数（表1例1）。
②若有两个稀释度，其平均菌落数均在30-300之间，则应按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2应报告两者的平均数，若大于2则报告其中较小的菌落总数（表1例2及例3）。
③若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（表1例4）
④若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（表1例5）
⑤若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（表1例6）
（3）报告水样品中细菌总数。从水质细菌检测结果，分析饮用水、水源水是否符合标准。 （4）水的细菌学检测中应注意哪些关键事项？
六．注意事项
（1） 严格无菌操作，防止污染。
（2） 注意正确培养方法。