华达专栏
酵母菌产纤维素酶的发酵条件研究
董 硕1 迟乃玉1 王 鑫1 陈 璨2 张庆芳1
1. 大连大学生物工程学院
2. 大连工业大学生物与食品工程学院
摘 要 利用单因素试验和正交设计方法研究秸秆、麸皮、蛋白胨和酵母膏含量及起始pH等不同条件对酵母菌FWZ8-12产纤维素酶的影响。研究结果表明：在这些影响因素中，秸秆添加量对纤维素酶产量影响最大。培养基中秸秆0.8 %、麸皮5 %、蛋白胨0.25 %和酵母膏0.2 %，发酵起始pH为6，30 ℃发酵培养24 h后，纤维素酶活力22.45 U较优化前提高了1.9 倍。
关键词 酵母菌 纤维素酶 正交设计动物饲料中的秸秆主要成分是粗纤维，包括纤维素、半纤维素、多缩戊糖及镶嵌物质等。纤维素属于木质天然纤维，其结晶度和聚合度均很高，不容易被动物本身降解。为提高牛羊等对秸秆的消化率和吸收率，目前反刍动物饲用酶制剂运用的生物酶系和菌种筛选成为研究重点。自然界中很多真菌都能分泌纤维素酶。目前国内外研究中，产纤维素酶的菌株主要是绿色木霉、康氏木霉和黑曲霉等霉菌，但由于霉菌发酵后霉味明显，降低饲料的适口性，不利于反刍动物饲用酶制剂的应用。而实验室筛选的酵母菌FWZ8-12发酵后，产物无霉味，酒香味明显。对该菌株产纤维素酶的发酵条件通过单因素试验和正交试验进行了优化，对该菌株在动物饲料复合酶制剂的生产应用中有着重要的作用。
酵秸秆粉培养基；酵母菌计数用培养基：PDA固体培养基。1.3 试验方法1.3.1 培养方法
250 mL三角瓶装培养液100 mL，按5 ％的接种量接入菌种，摇床转速180 r/min，30 ℃培养，按时间取样测定。
1.3.2 酵母菌生长曲线的测定
按照上述培养方法，分别在2、4、8、12、24、36、48、60、72和96 h取培养液10 mL，稀释一定倍数后，涂平板，30 ℃静置培养36 h后，菌落计数。1.3.3 酵母菌生物量的测定
15 mL塑料离心管于65 ℃烘箱中烘干至恒重，放入干燥器中冷却后，分别称质量，备用。按照上述培养方法，分别在12、24、36、48、60、72和96 h取培养液10 mL放入事先准备好的离心管中，4 000 r/min离心10 min，弃去上清液，然后放入65 ℃烘箱中烘干至恒重。
计算公式： Ws＝(Wn-W0-Wck)/10Ws菌体质量(mg/mL发酵液) ；Wn酵母菌体与离心管的质量(mg)；W0离心管的质量(mg)；WckPDA液体培养基离心后质量(mg)。1.3.4 粗酶液制备
发酵液于4 ℃，5 000 r/min离心15 min，上清液即粗酶液。
1 材料与方法
1.1 菌种
酵母菌FWZ8-12，由大连大学生物工程学院发酵工程实验室选育。1.2 培养基
酵母菌保藏培养基：麦芽汁培养基；斜面培养基：土豆琼脂培养基(PDA)；发酵培养基：液体发
收稿日期：2010 - 05 - 26
基金项目：国 家“863”计划项目（海洋低温纤维素酶中试研
究及小规模生产，2007AA091505）
通信作者：张庆芳
饲料研究FEED RESEARCH NO.9,2010
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1.3.5 滤纸酶活力的测定
按照宋桂经等的方法。酶活定义：1 mL发酵液在1 h内催化底物产生1 μmol葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活单位，以 Uc表示。1 U＝1μmol葡萄糖/（1 h・1 mL发酵液）。1.3.6 淀粉酶活的测定方法
3,5二硝基水杨酸比色法。酶活定义：1 mL发酵液在10 min内催化底物产生1 mg麦芽糖所需的酶量定义为一个酶活单位，以 Ud表示。1 U＝1 mg麦芽糖/（10 min・1 mL发酵液）。1.3.7 发酵培养基单因素试验
分别控制秸秆、麸皮、蛋白胨和酵母膏含量及起始pH，进行单因素试验。1.3.8 正交设计
根据单因素试验结果，选择影响液体发酵产纤维素酶的7种发酵条件，温度、发酵时间和起始pH及秸秆、麸皮、蛋白胨和酵母膏含量7个因素3个水平，采用L18(37)正交试验优化发酵条件。各因素的试验取值见表1。
表1 纤维素酶发酵条件正交试验的影响因素和水平
影响因素
水平123
发酵时间/h2436 48
温度/℃283032
起始pH567
秸秆/%0.40.81.0
麸皮/%357
蛋白胨/%0.200.250.30
酵母膏/ %0.10 0.200.25
12 ~24 h为对数生长期，24~48 h为稳定期，48 h后为衰亡期。发酵液中的菌体质量浓度在36 h后达到稳定，此后菌体质量浓度变化很小。2.2 发酵菌种产纤维素酶特性的研究
分别测定酵母菌不同培养时间的纤维素酶活性，试验结果见图2。
纤维素酶活性/（U·mL-1）
16.014.012.010.08.06.04.02.00
12 24 36 48 60 72 96
时间/h
图2 FWZ8-12产纤维素酶曲线
从图2可见：FWZ8-12纤维素酶活性变化明显，在36 h时达到最高。
2.3 发酵菌种产淀粉酶特性的研究
分别测定酵母菌不同培养时间的淀粉酶活性，试验结果见图3。
淀粉酶活性/（U·mL-1）
3.02.52.01.51.00.50
12 24 36 48 60 72 96
时间/h
图3 FWZ8-12产淀粉酶曲线
2 结果与讨论
2.1 酵母菌的生长曲线和菌体质量浓度
酵母菌生长曲线和菌体质量浓度测定结果见图1。
▲
◆
9.08.58.07.57.06.56.05.55.04.54.0
菌数的对数logN菌体的质量浓度
菌体质量浓度/（mg·mL-1）30.025.020.015.010.0
2 4 8 12 24 36 48 60 72 96
时间/h
5.0
菌数的对数logN
从图3可见：FWZ8-12菌株开始淀粉酶活性较低，这可能是因为PDA培养基中，由于存在一定含量的葡萄糖，随着培养基中葡萄糖碳源的耗尽，菌株开始合成淀粉酶，在36 h时，FWZ8-12酶活达到最高。
2.4 单因素试验对FWZ8-12产纤维素酶的影响2.4.1 秸秆含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
从图4可见：培养基中其他成分不变，秸秆含
纤维素酶活性/（U·mL-1）
18.016.014.012.010.08.06.04.02.00
图1 FWZ8-12生长曲线和菌体质量浓度
从图1可见：FWZ8-12菌株0~12 h为停滞期，
0.4 0.8 1.0 1.2 1.6 2.0
秸秆含量/%
图4 秸秆含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
26
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纤维素酶活性/（U·mL-1）
量为1 %时，FWZ8-12培养36 h后纤维素酶活性
最高。选择秸秆含量0.4 %、0.8 %和1 %进行下一步正交试验。
2.4.2 麸皮含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
从图5可见：培养基中其他成分不变，麸皮含量为5 %时，FWZ8-12培养36 h后纤维素酶活性最高。选择秸秆含量3 %、5 %和7 %进行下一步正交试验。
纤维素酶活性/（U·mL-1）
14.0
12.010.08.06.04.02.00
2.4.5 起始发酵pH对FWZ8-12产纤维素酶的影响
从图8可见：当发酵起始pH为6时，FWZ8-12培养36 h后纤维素酶活性最高。选择起始发酵pH为5、6和7进行下一步正交试验。
2520151050
4 5 6 7 8 9 10
pH
图8 起始发酵pH对FWZ8-12产纤维素酶的影响
表2 L18(37)正交试验结果
1 3 5 7 9 11
麸皮含量/ %
图5 麸皮含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
2.4.3 酵母膏含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
从图6可见：培养基中其他成分不变，酵母膏含量为0.1 %时，FWZ8-12培养36 h后纤维素酶活性最高。选择秸秆含量0.1 %、0.2 %和0.25 %进行下一步正交试验。
25纤维素酶活性/（U·mL-1）
20151050
0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.50
酵母膏含量/%
试发酵
温度/起始秸秆麸皮蛋白胨酵母膏纤维素酶活性/
验时间/
℃pH含量/%含量/%含量/%含量/%（U・mL-1）
号h1242850.430.200.1016.912243060.850.250.2022.453243271.070.300.2512.694362850.850.300.2518.595363061.07 0.200.1018.906363270.430.250.2013.837482860.470.250.2511.968483070.830.300.109.409483251.050.200.209.1910242871.050.250.1021.6711243050.470.300.2013.4712243260.830.200.256.9413362861.030.300.2017.1814363070.450.200.258.7715363250.870.250.109.1416482870.870.200.2011.5417483051.030.250.259.0818483260.450.300.104.07
表3 L18(37)正交试验结果分析
项目
发酵起始
温度时间p H
秸秆
含量
麸皮 蛋白胨酵母膏含量含量含量
72.2588.1275.3915.87
80.0887.6568.0319.62
图6 酵母膏含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
2.4.4 蛋白胨含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
从图7可见：培养基中其他成分不变，蛋白胨含量为0.25 %时，FWZ8-12培养36 h后纤维素酶活性最高。选择秸秆含量0.2 %、0.25 %和0.3 %进行下一步正交试验。
纤维素酶活性/（U·mL-1）
[1**********]0
0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.50
蛋白胨含量/%
K194.1394.1376.3869.0173.35
纤维素酶活性/K286.4082.0781.4978.0584.73（U・mL-1）K355.2355.8677.8988.7077.68
R
38.9038.27
5.11
19.6911.38
图7 蛋白胨含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
2.5 正交试验对FWZ8-12产纤维素酶的影响
试验结果见表2。
通过不同的培养条件和培养基成分发酵试验，极差分析表明：培养条件中对FWZ8-12产纤维素酶影响最大的是发酵时间，影响最小的是起始pH；培养基中秸秆含量对FWZ8-12产纤维素酶影响最大，说明纤维素酶是诱导酶。
试验结果表明：2号条件纤维素酶活最高，也就是当培养基中，秸秆含量0.8 %、麸皮含量5 %、
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蛋白胨含量0.25 %、酵母膏含量0.2 %，发酵起始pH为6，30 ℃发酵培养24 h后，酶活达到最高22.45 U葡萄糖/（1 h・1 mL发酵液）。
3 结论
试验中筛选出1株产纤维素酶的酵母菌FWZ8-12，发酵后，产物无霉味，酒香味明显。FWZ8-12纤维素酶的合成随发酵时间变化明显；培养基中秸秆含量对FWZ8-12产纤维素酶影响最大，说明纤维素酶是诱导酶。当培养基中，秸秆含量0.8 %、麸皮含量5 %、蛋白胨含量0.25 %、酵母膏含量0.2 %，发酵起始pH为6，30 ℃发酵培养24 h后，酶活达到最高22.45 U，比优化前的11.81 U提高1.9倍。FWZ8-12菌株可合成一定量的淀粉酶。
参考文献
[1] 陈翠微，刘长江，郭文洁，等. 微生物发酵农
作物秸秆生产蛋白饲料的研究与应用. 微生物
学通报, 2000,279(4):291-292.
[2] 周娟，潘振亮，杨焕民. 饲料纤维素酶的研究
与应用. 畜牧与饲料科学, 2007(1):67-69.[3] 乔君毅，亢晋， 张福元，等. 黑曲霉发酵玉米秸
秆产纤维素酶的研究. 饲料研究,2008(12) :63-66.[4] 王锡彬,吴周新,林强,等.碳源对一株酵母菌产
生纤维素酶的影响.中国食品学报,2003(1):53-57.[5] 金加明，吴宝霞. 纤维素酶和酵母菌处理小麦
秸秆喂育肥羊试验. 饲料研究,2007(9):45-46.[6] 何钢,陈介南,王义强，等. 酵母工程菌降解纤维素
的研究进展. 生物质化学工程，2006(40) :173-177.[7] 司美茹，薛泉宏，蔡艳，等. 混合发酵对纤维
素酶和淀粉酶活性的影响. 西北农林科技大学学报:自然科学版,2002,30(5) :69-73.
通信地址： 辽宁省大连市开发区学府路10号
大连大学生物工程学院 116622
（上接第19页）
表3 试验各组禽流感抗体检测结果（nlog2）
组别藿香正气散组优乐舒组大地蒜宝组对照组
注同表2
H5
11 d1.50±0.551.55±0.831.68±0.461.65±0.46
42 d4.43±0.834.67±0.52Ab4.10b
3.90±0.02aA
11 d1.71±0.761.75±0.761.73±0.521.80±0.46
H9
42 d7.13±0.647.86±1.57 aAB6.50±1.00bA6.60±0.55cB
力，促进生长发育，提高饲料转化率，整体上有提高鸭生产性能的趋势，优乐舒效果最好，其次是大地蒜宝和藿香正气散。在提高禽流感抗体滴度上，优乐舒和藿香正气散效果均优于大地蒜宝和对照组。优乐舒是复合电解多维对免疫有一定的促进作用；藿香正气散本身就具有增强免疫的功能。在生产实践中，可综合考虑使用以上药物来预防花边鸭抗热应激。
参考文献
[1] 陈婕,尚宏华.鸭热应激及其防制.中兽医学杂
志,2008(1):17-18.
[2] 齐淑波.“藿香止泻合剂”治疗鸡暑湿外感证的
临床试验.养殖技术顾问,2006(8):52.
[3] 任撑住,李进,郭予强,等. 中药电解多维水溶
性粉对肉鸡的饲喂试验.广东畜牧兽医科技, 2007,32 (1) :35-37.
通信地址：四川雅安四川农业大学动物医学院
药学系 625014
从表3可见：在11日龄时，由于母源抗体的
急剧下降，各组的抗体水平都较低，无显著差异，其中藿香正气散组H5测得的抗体最低，大地蒜宝组最高。各组添加不同的药物以后，在42日龄时，藿香正气散组与对照组比较差异显著；优乐舒组与对照组差异极显著,与大地蒜宝组比较差异显著。在11日龄时，各组的抗体水平都较低，无显著差异，其中大地蒜宝组H9测得的抗体最低，对照组最高；42日龄时藿香正气散组分别与其他3组比较差异显著，优乐舒组分别与大地蒜宝组和对照组比较差异极显著。
3 结论
试验结果表明：在高温下试验所用各种抗热应激药物与空白对照组相比均有增强肉鸭的抗应激
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酵母菌产纤维素酶的发酵条件研究
董 硕1 迟乃玉1 王 鑫1 陈 璨2 张庆芳1
1. 大连大学生物工程学院
2. 大连工业大学生物与食品工程学院
摘 要 利用单因素试验和正交设计方法研究秸秆、麸皮、蛋白胨和酵母膏含量及起始pH等不同条件对酵母菌FWZ8-12产纤维素酶的影响。研究结果表明：在这些影响因素中，秸秆添加量对纤维素酶产量影响最大。培养基中秸秆0.8 %、麸皮5 %、蛋白胨0.25 %和酵母膏0.2 %，发酵起始pH为6，30 ℃发酵培养24 h后，纤维素酶活力22.45 U较优化前提高了1.9 倍。
关键词 酵母菌 纤维素酶 正交设计动物饲料中的秸秆主要成分是粗纤维，包括纤维素、半纤维素、多缩戊糖及镶嵌物质等。纤维素属于木质天然纤维，其结晶度和聚合度均很高，不容易被动物本身降解。为提高牛羊等对秸秆的消化率和吸收率，目前反刍动物饲用酶制剂运用的生物酶系和菌种筛选成为研究重点。自然界中很多真菌都能分泌纤维素酶。目前国内外研究中，产纤维素酶的菌株主要是绿色木霉、康氏木霉和黑曲霉等霉菌，但由于霉菌发酵后霉味明显，降低饲料的适口性，不利于反刍动物饲用酶制剂的应用。而实验室筛选的酵母菌FWZ8-12发酵后，产物无霉味，酒香味明显。对该菌株产纤维素酶的发酵条件通过单因素试验和正交试验进行了优化，对该菌株在动物饲料复合酶制剂的生产应用中有着重要的作用。
酵秸秆粉培养基；酵母菌计数用培养基：PDA固体培养基。1.3 试验方法1.3.1 培养方法
250 mL三角瓶装培养液100 mL，按5 ％的接种量接入菌种，摇床转速180 r/min，30 ℃培养，按时间取样测定。
1.3.2 酵母菌生长曲线的测定
按照上述培养方法，分别在2、4、8、12、24、36、48、60、72和96 h取培养液10 mL，稀释一定倍数后，涂平板，30 ℃静置培养36 h后，菌落计数。1.3.3 酵母菌生物量的测定
15 mL塑料离心管于65 ℃烘箱中烘干至恒重，放入干燥器中冷却后，分别称质量，备用。按照上述培养方法，分别在12、24、36、48、60、72和96 h取培养液10 mL放入事先准备好的离心管中，4 000 r/min离心10 min，弃去上清液，然后放入65 ℃烘箱中烘干至恒重。
计算公式： Ws＝(Wn-W0-Wck)/10Ws菌体质量(mg/mL发酵液) ；Wn酵母菌体与离心管的质量(mg)；W0离心管的质量(mg)；WckPDA液体培养基离心后质量(mg)。1.3.4 粗酶液制备
发酵液于4 ℃，5 000 r/min离心15 min，上清液即粗酶液。
1 材料与方法
1.1 菌种
酵母菌FWZ8-12，由大连大学生物工程学院发酵工程实验室选育。1.2 培养基
酵母菌保藏培养基：麦芽汁培养基；斜面培养基：土豆琼脂培养基(PDA)；发酵培养基：液体发
收稿日期：2010 - 05 - 26
基金项目：国 家“863”计划项目（海洋低温纤维素酶中试研
究及小规模生产，2007AA091505）
通信作者：张庆芳
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1.3.5 滤纸酶活力的测定
按照宋桂经等的方法。酶活定义：1 mL发酵液在1 h内催化底物产生1 μmol葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活单位，以 Uc表示。1 U＝1μmol葡萄糖/（1 h・1 mL发酵液）。1.3.6 淀粉酶活的测定方法
3,5二硝基水杨酸比色法。酶活定义：1 mL发酵液在10 min内催化底物产生1 mg麦芽糖所需的酶量定义为一个酶活单位，以 Ud表示。1 U＝1 mg麦芽糖/（10 min・1 mL发酵液）。1.3.7 发酵培养基单因素试验
分别控制秸秆、麸皮、蛋白胨和酵母膏含量及起始pH，进行单因素试验。1.3.8 正交设计
根据单因素试验结果，选择影响液体发酵产纤维素酶的7种发酵条件，温度、发酵时间和起始pH及秸秆、麸皮、蛋白胨和酵母膏含量7个因素3个水平，采用L18(37)正交试验优化发酵条件。各因素的试验取值见表1。
表1 纤维素酶发酵条件正交试验的影响因素和水平
影响因素
水平123
发酵时间/h2436 48
温度/℃283032
起始pH567
秸秆/%0.40.81.0
麸皮/%357
蛋白胨/%0.200.250.30
酵母膏/ %0.10 0.200.25
12 ~24 h为对数生长期，24~48 h为稳定期，48 h后为衰亡期。发酵液中的菌体质量浓度在36 h后达到稳定，此后菌体质量浓度变化很小。2.2 发酵菌种产纤维素酶特性的研究
分别测定酵母菌不同培养时间的纤维素酶活性，试验结果见图2。
纤维素酶活性/（U·mL-1）
16.014.012.010.08.06.04.02.00
12 24 36 48 60 72 96
时间/h
图2 FWZ8-12产纤维素酶曲线
从图2可见：FWZ8-12纤维素酶活性变化明显，在36 h时达到最高。
2.3 发酵菌种产淀粉酶特性的研究
分别测定酵母菌不同培养时间的淀粉酶活性，试验结果见图3。
淀粉酶活性/（U·mL-1）
3.02.52.01.51.00.50
12 24 36 48 60 72 96
时间/h
图3 FWZ8-12产淀粉酶曲线
2 结果与讨论
2.1 酵母菌的生长曲线和菌体质量浓度
酵母菌生长曲线和菌体质量浓度测定结果见图1。
▲
◆
9.08.58.07.57.06.56.05.55.04.54.0
菌数的对数logN菌体的质量浓度
菌体质量浓度/（mg·mL-1）30.025.020.015.010.0
2 4 8 12 24 36 48 60 72 96
时间/h
5.0
菌数的对数logN
从图3可见：FWZ8-12菌株开始淀粉酶活性较低，这可能是因为PDA培养基中，由于存在一定含量的葡萄糖，随着培养基中葡萄糖碳源的耗尽，菌株开始合成淀粉酶，在36 h时，FWZ8-12酶活达到最高。
2.4 单因素试验对FWZ8-12产纤维素酶的影响2.4.1 秸秆含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
从图4可见：培养基中其他成分不变，秸秆含
纤维素酶活性/（U·mL-1）
18.016.014.012.010.08.06.04.02.00
图1 FWZ8-12生长曲线和菌体质量浓度
从图1可见：FWZ8-12菌株0~12 h为停滞期，
0.4 0.8 1.0 1.2 1.6 2.0
秸秆含量/%
图4 秸秆含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
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纤维素酶活性/（U·mL-1）
量为1 %时，FWZ8-12培养36 h后纤维素酶活性
最高。选择秸秆含量0.4 %、0.8 %和1 %进行下一步正交试验。
2.4.2 麸皮含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
从图5可见：培养基中其他成分不变，麸皮含量为5 %时，FWZ8-12培养36 h后纤维素酶活性最高。选择秸秆含量3 %、5 %和7 %进行下一步正交试验。
纤维素酶活性/（U·mL-1）
14.0
12.010.08.06.04.02.00
2.4.5 起始发酵pH对FWZ8-12产纤维素酶的影响
从图8可见：当发酵起始pH为6时，FWZ8-12培养36 h后纤维素酶活性最高。选择起始发酵pH为5、6和7进行下一步正交试验。
2520151050
4 5 6 7 8 9 10
pH
图8 起始发酵pH对FWZ8-12产纤维素酶的影响
表2 L18(37)正交试验结果
1 3 5 7 9 11
麸皮含量/ %
图5 麸皮含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
2.4.3 酵母膏含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
从图6可见：培养基中其他成分不变，酵母膏含量为0.1 %时，FWZ8-12培养36 h后纤维素酶活性最高。选择秸秆含量0.1 %、0.2 %和0.25 %进行下一步正交试验。
25纤维素酶活性/（U·mL-1）
20151050
0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.50
酵母膏含量/%
试发酵
温度/起始秸秆麸皮蛋白胨酵母膏纤维素酶活性/
验时间/
℃pH含量/%含量/%含量/%含量/%（U・mL-1）
号h1242850.430.200.1016.912243060.850.250.2022.453243271.070.300.2512.694362850.850.300.2518.595363061.07 0.200.1018.906363270.430.250.2013.837482860.470.250.2511.968483070.830.300.109.409483251.050.200.209.1910242871.050.250.1021.6711243050.470.300.2013.4712243260.830.200.256.9413362861.030.300.2017.1814363070.450.200.258.7715363250.870.250.109.1416482870.870.200.2011.5417483051.030.250.259.0818483260.450.300.104.07
表3 L18(37)正交试验结果分析
项目
发酵起始
温度时间p H
秸秆
含量
麸皮 蛋白胨酵母膏含量含量含量
72.2588.1275.3915.87
80.0887.6568.0319.62
图6 酵母膏含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
2.4.4 蛋白胨含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
从图7可见：培养基中其他成分不变，蛋白胨含量为0.25 %时，FWZ8-12培养36 h后纤维素酶活性最高。选择秸秆含量0.2 %、0.25 %和0.3 %进行下一步正交试验。
纤维素酶活性/（U·mL-1）
[1**********]0
0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.50
蛋白胨含量/%
K194.1394.1376.3869.0173.35
纤维素酶活性/K286.4082.0781.4978.0584.73（U・mL-1）K355.2355.8677.8988.7077.68
R
38.9038.27
5.11
19.6911.38
图7 蛋白胨含量对FWZ8-12产纤维素酶的影响
2.5 正交试验对FWZ8-12产纤维素酶的影响
试验结果见表2。
通过不同的培养条件和培养基成分发酵试验，极差分析表明：培养条件中对FWZ8-12产纤维素酶影响最大的是发酵时间，影响最小的是起始pH；培养基中秸秆含量对FWZ8-12产纤维素酶影响最大，说明纤维素酶是诱导酶。
试验结果表明：2号条件纤维素酶活最高，也就是当培养基中，秸秆含量0.8 %、麸皮含量5 %、
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蛋白胨含量0.25 %、酵母膏含量0.2 %，发酵起始pH为6，30 ℃发酵培养24 h后，酶活达到最高22.45 U葡萄糖/（1 h・1 mL发酵液）。
3 结论
试验中筛选出1株产纤维素酶的酵母菌FWZ8-12，发酵后，产物无霉味，酒香味明显。FWZ8-12纤维素酶的合成随发酵时间变化明显；培养基中秸秆含量对FWZ8-12产纤维素酶影响最大，说明纤维素酶是诱导酶。当培养基中，秸秆含量0.8 %、麸皮含量5 %、蛋白胨含量0.25 %、酵母膏含量0.2 %，发酵起始pH为6，30 ℃发酵培养24 h后，酶活达到最高22.45 U，比优化前的11.81 U提高1.9倍。FWZ8-12菌株可合成一定量的淀粉酶。
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素酶和淀粉酶活性的影响. 西北农林科技大学学报:自然科学版,2002,30(5) :69-73.
通信地址： 辽宁省大连市开发区学府路10号
大连大学生物工程学院 116622
（上接第19页）
表3 试验各组禽流感抗体检测结果（nlog2）
组别藿香正气散组优乐舒组大地蒜宝组对照组
注同表2
H5
11 d1.50±0.551.55±0.831.68±0.461.65±0.46
42 d4.43±0.834.67±0.52Ab4.10b
3.90±0.02aA
11 d1.71±0.761.75±0.761.73±0.521.80±0.46
H9
42 d7.13±0.647.86±1.57 aAB6.50±1.00bA6.60±0.55cB
力，促进生长发育，提高饲料转化率，整体上有提高鸭生产性能的趋势，优乐舒效果最好，其次是大地蒜宝和藿香正气散。在提高禽流感抗体滴度上，优乐舒和藿香正气散效果均优于大地蒜宝和对照组。优乐舒是复合电解多维对免疫有一定的促进作用；藿香正气散本身就具有增强免疫的功能。在生产实践中，可综合考虑使用以上药物来预防花边鸭抗热应激。
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志,2008(1):17-18.
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性粉对肉鸡的饲喂试验.广东畜牧兽医科技, 2007,32 (1) :35-37.
通信地址：四川雅安四川农业大学动物医学院
药学系 625014
从表3可见：在11日龄时，由于母源抗体的
急剧下降，各组的抗体水平都较低，无显著差异，其中藿香正气散组H5测得的抗体最低，大地蒜宝组最高。各组添加不同的药物以后，在42日龄时，藿香正气散组与对照组比较差异显著；优乐舒组与对照组差异极显著,与大地蒜宝组比较差异显著。在11日龄时，各组的抗体水平都较低，无显著差异，其中大地蒜宝组H9测得的抗体最低，对照组最高；42日龄时藿香正气散组分别与其他3组比较差异显著，优乐舒组分别与大地蒜宝组和对照组比较差异极显著。
3 结论
试验结果表明：在高温下试验所用各种抗热应激药物与空白对照组相比均有增强肉鸭的抗应激
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