・192・表2 结肠癌患者各临床期TI L CD8、CD28表达(%,
x ±s ) 组别
Dukes A 期
Dukes B 期Dukes C 期Dukes D 期
n
测, 实验结果往往受到其他细胞的干扰。本文参考流式细胞仪检测白血病免疫分型时C D45设门要求和方法, 在检测中应用C D452SSC 双参数进行设门, 可直接检测肿瘤组织中浸润淋巴细胞C D28的表达, 排除组织中肿瘤细胞及其他组织细胞对检测结果的影响。具有方便、直接、准确的优点。
参
考
文
献
〔4〕
CD8+CD28-34. 01±11. 03
36. 90±15. 2743. 63±8. 7341. 36±12. 28
CD8-CD28+10. 10±4. 623
5. 63±2. 814. 32±2. 072. 76±1. 59
CD8+CD28+8. 64±3. 093
6. 07±3. 29#2. 69±1. 482. 61±1. 09
16
13118
3与临床B 期、C 期、D 期比较, P
表3 结肠癌患者淋巴结转移TI L CD8、CD28表达(%,
x ±s )
组别转移组未转移组
n
CD8+CD28-37. 11±14. 2338. 03±13. 95
CD8-CD28+5. 26±2. 813
8. 73±5. 16
CD8+CD28+4. 68±3. 45#
7. 87±3. 91
19
29
3与未转移组比较, P
色法, 或用Ficoll 21 Lipponen PK, Eskelinen M J , Jakhiainen K, et al. Tum or in filtrating
lym phocytes as an independent prognostic fact or in transitional cell blad 2der cancer. Eur J Cancer , 1991, 29(1:69275.
2 K ruger K, C , Schriever T lym phocytes bind in situ
to of but adhesion to tum or cells. Eur , 31:3, . . . 2001, 16(1) :35. 4, 方国安, 刘波, 等. CD45在白血病表型分析中应用价值的探讨. 江西医学检验, 2000, 18(1) :829.
(收稿日期:2005206217)
・免疫检测・
两种荧光染料—CFSE 与碘化丙啶染色方法检测细胞杀伤能力
陈必成 夏鹏 杨丽红 蔡勇 吴存造 李澄棣 杨亦荣 郑少玲
细胞杀伤能力在评估细胞毒T 细胞
(CT L ) 及NK 细胞的杀伤能力中起到重
性细胞数) ×100%。数据通过Mann 2
Whitney T est 非参数检验处理。
求(
要的作用。我们采用两种荧光染料染色的方法检测脾细胞对同种异体细胞的杀
表1 实验分组
分组
12(对照) 34
细胞经CFSE 染色后可经荧光显微
镜及流式细胞仪观察到, 并可稳定存在。经典51Cr 方法比较,CFSE 和PI 染色法具
伤能力。将实验小鼠分为4组, 见表1。C57BL Π6小鼠脾细胞可以杀伤全部有更方便、廉价、提供信息更完整的特
BA LB Πc 脾脏贴壁细胞。在BA LB Πc 脾细
靶细胞
BA LB Πc 脾脏
点。但当靶细胞为贴壁细胞时, 会增加实验步骤。且PI 染色不能识别早期的细胞凋亡, 但通过延长反应时间可以达到相同的效果。本法采用荧光标记, 染料浓度对结果的辨认会产生一定影响。且CFSE 染色的细胞在被杀伤后可见荧光有轻微下降, 可能与细胞死亡后胞内少量蛋白质流出胞体有关。
选择脾脏贴壁细胞及脾脏细胞作为靶细胞, 可以观察到相互的杀伤作用, 对研究移植免疫的双向性有一定的参考价值, 成为观察细胞间杀伤提供了有效的手段。通过体外实验证实, CFSE 、PI 染色技术具有操作简单、使用方便、无辐射等诸多优点, 而且还可同时检测到效应细胞、靶细胞的相互作用, 特别适合于在移植免疫的应用。
(收稿日期:2005210214)
效应细胞脾细胞免疫过的
C 57B L Π6
未处理的C 57B L Π6脾细胞免疫过的C 57B L Π6
地塞米松处理胞免疫组,CFSE 标记的靶细胞中PI 阳性细胞数目明显多于地塞米松处理组与对照组(P
CFSE (2) PI (+) 细胞多于CFSE (+) PI (+) 双阳性细胞数目, 证实地塞米松抑
贴壁细胞
BA LB Πc 全脾细胞BA LB Πc 全脾细胞BA LB Πc 全脾细胞
无菌取小鼠脾脏, 制成细胞悬液, 按常规纯化制成靶细胞(T ) 和效应细胞
(E ) 。靶细胞在5μm ol ΠL 的CFDA 2SE 溶
制了脾细胞杀伤能力, 而CFSE 染色的靶细胞依然存在杀伤能力, 产生对效应细胞的杀伤。在流式图中可以观察到靶细胞、效应细胞的死亡数目, 并可清楚地计
液孵育染色。将E ∶T 按比例混合, 加入
96孔板, 反应后加入PI 检测杀伤能力。算出E ∶T 的数值。
杀伤能力=(CFSE 2PI 双阳性细胞数-空本方法采用CFSE 和PI 两种荧光染
(CFSE 白对照CFSE 2PI 双阳性细胞数) Π料染色检测细胞杀伤能力。用低浓度
双阳性细胞数-空白对照CFSE 2PI 双阳
基金项目:国家自然科学基金(30271243)
作者单位:325000温州医学院附属第一医院移植中心(陈必成, 夏鹏, 蔡勇, 吴存造, 李澄棣, 杨亦荣, 郑少玲) , 实验诊断中心(杨丽红)
通讯作者:夏鹏,E mail :bis onch @163.com , 电话:[1**********]47
CFSE 标记靶细胞就足以使之与效应细
胞区分, 在染色后可稳定地与细胞浆内蛋白质结合。PI 染料可以与细胞内核酸结合并只针对死细胞染色。荧光染料结合流式细胞技术在细胞分析的优势是当靶细胞数目少而不符合于其他方法的要
・192・表2 结肠癌患者各临床期TI L CD8、CD28表达(%,
x ±s ) 组别
Dukes A 期
Dukes B 期Dukes C 期Dukes D 期
n
测, 实验结果往往受到其他细胞的干扰。本文参考流式细胞仪检测白血病免疫分型时C D45设门要求和方法, 在检测中应用C D452SSC 双参数进行设门, 可直接检测肿瘤组织中浸润淋巴细胞C D28的表达, 排除组织中肿瘤细胞及其他组织细胞对检测结果的影响。具有方便、直接、准确的优点。
参
考
文
献
〔4〕
CD8+CD28-34. 01±11. 03
36. 90±15. 2743. 63±8. 7341. 36±12. 28
CD8-CD28+10. 10±4. 623
5. 63±2. 814. 32±2. 072. 76±1. 59
CD8+CD28+8. 64±3. 093
6. 07±3. 29#2. 69±1. 482. 61±1. 09
16
13118
3与临床B 期、C 期、D 期比较, P
表3 结肠癌患者淋巴结转移TI L CD8、CD28表达(%,
x ±s )
组别转移组未转移组
n
CD8+CD28-37. 11±14. 2338. 03±13. 95
CD8-CD28+5. 26±2. 813
8. 73±5. 16
CD8+CD28+4. 68±3. 45#
7. 87±3. 91
19
29
3与未转移组比较, P
色法, 或用Ficoll 21 Lipponen PK, Eskelinen M J , Jakhiainen K, et al. Tum or in filtrating
lym phocytes as an independent prognostic fact or in transitional cell blad 2der cancer. Eur J Cancer , 1991, 29(1:69275.
2 K ruger K, C , Schriever T lym phocytes bind in situ
to of but adhesion to tum or cells. Eur , 31:3, . . . 2001, 16(1) :35. 4, 方国安, 刘波, 等. CD45在白血病表型分析中应用价值的探讨. 江西医学检验, 2000, 18(1) :829.
(收稿日期:2005206217)
・免疫检测・
两种荧光染料—CFSE 与碘化丙啶染色方法检测细胞杀伤能力
陈必成 夏鹏 杨丽红 蔡勇 吴存造 李澄棣 杨亦荣 郑少玲
细胞杀伤能力在评估细胞毒T 细胞
(CT L ) 及NK 细胞的杀伤能力中起到重
性细胞数) ×100%。数据通过Mann 2
Whitney T est 非参数检验处理。
求(
要的作用。我们采用两种荧光染料染色的方法检测脾细胞对同种异体细胞的杀
表1 实验分组
分组
12(对照) 34
细胞经CFSE 染色后可经荧光显微
镜及流式细胞仪观察到, 并可稳定存在。经典51Cr 方法比较,CFSE 和PI 染色法具
伤能力。将实验小鼠分为4组, 见表1。C57BL Π6小鼠脾细胞可以杀伤全部有更方便、廉价、提供信息更完整的特
BA LB Πc 脾脏贴壁细胞。在BA LB Πc 脾细
靶细胞
BA LB Πc 脾脏
点。但当靶细胞为贴壁细胞时, 会增加实验步骤。且PI 染色不能识别早期的细胞凋亡, 但通过延长反应时间可以达到相同的效果。本法采用荧光标记, 染料浓度对结果的辨认会产生一定影响。且CFSE 染色的细胞在被杀伤后可见荧光有轻微下降, 可能与细胞死亡后胞内少量蛋白质流出胞体有关。
选择脾脏贴壁细胞及脾脏细胞作为靶细胞, 可以观察到相互的杀伤作用, 对研究移植免疫的双向性有一定的参考价值, 成为观察细胞间杀伤提供了有效的手段。通过体外实验证实, CFSE 、PI 染色技术具有操作简单、使用方便、无辐射等诸多优点, 而且还可同时检测到效应细胞、靶细胞的相互作用, 特别适合于在移植免疫的应用。
(收稿日期:2005210214)
效应细胞脾细胞免疫过的
C 57B L Π6
未处理的C 57B L Π6脾细胞免疫过的C 57B L Π6
地塞米松处理胞免疫组,CFSE 标记的靶细胞中PI 阳性细胞数目明显多于地塞米松处理组与对照组(P
CFSE (2) PI (+) 细胞多于CFSE (+) PI (+) 双阳性细胞数目, 证实地塞米松抑
贴壁细胞
BA LB Πc 全脾细胞BA LB Πc 全脾细胞BA LB Πc 全脾细胞
无菌取小鼠脾脏, 制成细胞悬液, 按常规纯化制成靶细胞(T ) 和效应细胞
(E ) 。靶细胞在5μm ol ΠL 的CFDA 2SE 溶
制了脾细胞杀伤能力, 而CFSE 染色的靶细胞依然存在杀伤能力, 产生对效应细胞的杀伤。在流式图中可以观察到靶细胞、效应细胞的死亡数目, 并可清楚地计
液孵育染色。将E ∶T 按比例混合, 加入
96孔板, 反应后加入PI 检测杀伤能力。算出E ∶T 的数值。
杀伤能力=(CFSE 2PI 双阳性细胞数-空本方法采用CFSE 和PI 两种荧光染
(CFSE 白对照CFSE 2PI 双阳性细胞数) Π料染色检测细胞杀伤能力。用低浓度
双阳性细胞数-空白对照CFSE 2PI 双阳
基金项目:国家自然科学基金(30271243)
作者单位:325000温州医学院附属第一医院移植中心(陈必成, 夏鹏, 蔡勇, 吴存造, 李澄棣, 杨亦荣, 郑少玲) , 实验诊断中心(杨丽红)
通讯作者:夏鹏,E mail :bis onch @163.com , 电话:[1**********]47
CFSE 标记靶细胞就足以使之与效应细
胞区分, 在染色后可稳定地与细胞浆内蛋白质结合。PI 染料可以与细胞内核酸结合并只针对死细胞染色。荧光染料结合流式细胞技术在细胞分析的优势是当靶细胞数目少而不符合于其他方法的要