实验四、叶绿素的提取、分离及化学性质鉴定
一．实验目的：
掌握植物中叶绿体色素的成分分离和定性、定量分析的原理和方法。
二．实验原理：
1、溶解性。
叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取
2、吸附性。滤纸对Chlb 、Chla 、叶黄素、胡萝卜素的吸附能力不同(？) ，当用石油醚作
推动剂时，其在滤纸上的移动速度不同，可相互分离。
当用适当溶剂推动时，混合物中各成分在两相（固定相和流动相）间具有不同分配系数，
所以移动速度不同，一定时间后可将各种色素分离
三．实验材料:
新鲜植物叶片
器具：
研钵一个，漏斗一个，刻度试管两支，剪刀一把，长滴管一个，培养皿(直径9cm) 一个，
圆形滤纸（11cm 和7cm) 各一张，滤纸条一张
试剂：95%乙醇，石油醚
四．实验步骤:
1. 色素提取（乙醇粗提液）
a. 取新鲜叶片洗净擦干，去中脉 称1g 左右 剪碎于研钵
b. 研钵中加3-5ml 95%乙醇研磨成匀浆 过滤于刻度试管 残渣用少许乙醇冲洗一并
过滤 定容至10ml
注：研磨用石英砂或SiO2以利于充分研磨，加入CaCO3以保护叶绿素。
2. 荧光观察
将乙醇提取液试管放于太阳光下观察反射光和透射光下的颜色
现象：透射光下呈绿色，反射光下呈红色为叶绿素荧光
3. 色素萃取（石油醚提取液）
取乙醇提取液5ml 与另一支试管 加2ml 石油醚摇荡 静止片刻上层深绿色为石油醚
提取液
注：用丙酮提取会更好些，各色素在石油醚中溶解度不同
4. 色素分离
a. 将（11cm) 圆滤纸中间剪一小圆孔 取滤纸条捻成紧实芯一端插入圆滤纸中心（孔缘
与纸芯紧贴且露出少许，最好相平） 用长滴管吸少许石油醚提取液滴于纸芯上端
待风干后再滴加几次。
b. 将盛有石油醚的内盖（不要过满）放于培养皿中央 将插上纸芯的滤纸放在培养
皿上纸芯下端浸入石油醚 迅速盖好培养皿。
c. 推动剂前缘接近滤纸边缘时取出滤纸，风干可见分离色带，用铅笔标出各种色素位置
和名称
注：带宽和移动速度说明？
答： 带 宽： 色素越多，色素带越宽, 所以色素共分为好几个带
移动速度： 溶解度高的移动速度快，就越接近滤纸上边缘。
实验四、叶绿素的提取、分离及化学性质鉴定
一．实验目的：
掌握植物中叶绿体色素的成分分离和定性、定量分析的原理和方法。
二．实验原理：
1、溶解性。
叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取
2、吸附性。滤纸对Chlb 、Chla 、叶黄素、胡萝卜素的吸附能力不同(？) ，当用石油醚作
推动剂时，其在滤纸上的移动速度不同，可相互分离。
当用适当溶剂推动时，混合物中各成分在两相（固定相和流动相）间具有不同分配系数，
所以移动速度不同，一定时间后可将各种色素分离
三．实验材料:
新鲜植物叶片
器具：
研钵一个，漏斗一个，刻度试管两支，剪刀一把，长滴管一个，培养皿(直径9cm) 一个，
圆形滤纸（11cm 和7cm) 各一张，滤纸条一张
试剂：95%乙醇，石油醚
四．实验步骤:
1. 色素提取（乙醇粗提液）
a. 取新鲜叶片洗净擦干，去中脉 称1g 左右 剪碎于研钵
b. 研钵中加3-5ml 95%乙醇研磨成匀浆 过滤于刻度试管 残渣用少许乙醇冲洗一并
过滤 定容至10ml
注：研磨用石英砂或SiO2以利于充分研磨，加入CaCO3以保护叶绿素。
2. 荧光观察
将乙醇提取液试管放于太阳光下观察反射光和透射光下的颜色
现象：透射光下呈绿色，反射光下呈红色为叶绿素荧光
3. 色素萃取（石油醚提取液）
取乙醇提取液5ml 与另一支试管 加2ml 石油醚摇荡 静止片刻上层深绿色为石油醚
提取液
注：用丙酮提取会更好些，各色素在石油醚中溶解度不同
4. 色素分离
a. 将（11cm) 圆滤纸中间剪一小圆孔 取滤纸条捻成紧实芯一端插入圆滤纸中心（孔缘
与纸芯紧贴且露出少许，最好相平） 用长滴管吸少许石油醚提取液滴于纸芯上端
待风干后再滴加几次。
b. 将盛有石油醚的内盖（不要过满）放于培养皿中央 将插上纸芯的滤纸放在培养
皿上纸芯下端浸入石油醚 迅速盖好培养皿。
c. 推动剂前缘接近滤纸边缘时取出滤纸，风干可见分离色带，用铅笔标出各种色素位置
和名称
注：带宽和移动速度说明？
答： 带 宽： 色素越多，色素带越宽, 所以色素共分为好几个带
移动速度： 溶解度高的移动速度快，就越接近滤纸上边缘。