实验常用试剂、缓冲液的配制方法
1、1M Tris-HCl □组份浓度 1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0） □配制量 1L
□配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值 浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、1.5 M Tris-HCl □组份浓度 1.5 M Tris-HCl （pH8.8） □配制量 1L
□配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10×TE Buffer □组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0） □配制量 1L
□配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL 500 mM EDTA（pH8.0） 20mL
2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。
4、3 M 醋酸钠 □组份浓度 3 M 醋酸钠 （pH5.2） □配制量 100mL
□配置方法 1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。
5、PBS Buffer □组份浓度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 □配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6、10 M醋酸铵 □组份浓度 10 M醋酸铵 □配制量 100mL
□配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7、Tris- HCl平衡苯酚 □配置方法
1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
① 液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
② 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。
③ 加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ④ 重复操作步骤③。
⑤ 加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ⑥ 重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。 ⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 ⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
8、苯酚/氯仿/异戊醇 □配置方法
1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1） 质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
9、10％（W/V）SDS □组份浓度 10％（W/V）SDS □配制量 100mL
□配置方法 1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。
2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。 3. 将溶液定容至100mL后，室温保存。 10、2 N NaOH □组份浓度 2N NaOH □配制量 100mL □配置方法
1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。
2. 称取8g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。 3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。 4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。 11、2.5 N HCl □组份浓度 2.5 N HCl □配制量 100mL
□配置方法 1. 在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。 2. 室温保存。
12、5 M NaCl □组份浓度 5 M NaCl □配制量 1L
□配置方法 1. 称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。 3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
13、20％（W/V）Glucose □组份浓度 20％（W/V）Glucose □配制量 100mL
□配置方法 1. 称取20g Glucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100mL。 3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
14、Solution I □组份浓度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose
（质粒提取用） □配制量 1L
□配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。 1M Tris-HCl（pH8.0） 25mL
0.5 M EDTA（pH8.0） 20mL 20％Glucose（1.11M） 45mL dH2O 910mL 2. 高温高压灭菌后，4℃保存。
3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A（20mg/mL）。
15、Solution II □组份浓度 250mM NaOH，1％（W/V）SDS （质粒提取用） □配制量 500mL
□配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
10％SDS 50mL 2N NaOH 50mL 2. 加灭菌水定容至500mL，充分混匀。
3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。 注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。
16、Solution III □组份浓度 3M KOAc，5M CH3COOH （质粒提取用） □配制量 500mL
□配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
KOAc 147g CH3COOH 57.5mL 2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解。 3. 加去离子水将溶液定容至500mL。 4. 高温高压灭菌后，4℃保存。 17、0.5M EDTA □组份浓度 0.5 M EDTA (pH8.0) □配制量 1L
□配置方法 1. 称取186.1g Na2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌。 3. 用NaOH调节pH值值8.0（约20g NaOH）。 注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。 4. 加去离子水将溶液定容至1L。 5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。 6. 室温保存。
18、1 M DTT □组份浓度 1 M DTT □配制量 20mL
□配置方法 1. 称取3.09g DTT，加入到50mL塑料离心管内。 2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。 19、10mM ATP □组份浓度 10mM ATP □配制量 20mL
□配置方法 1. 称取121mg Na2ATP•3H2O，加入到50mL塑料离心管内。
2. 加20mL的25mM Tris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。 3. 适量分成小份，-20℃保存。
分子生物学实验常用培养基的配制方法
1、Ampicillin □组份浓度 100mg/ml Ampicillin （100mg/ml） □配制量 50mL
□配置方法 1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 2、IPTG □组份浓度 24mg/mL IPTG （24mg/mL） □配制量 50mL
配置方法 1. 称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 3、X- Gal □组份浓度 20mg/mL X- Gal （20mg/mL） □配制量 50mL
□配置方法 1. 称取1g X-Gal置于50mL离心管中。 2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 4、LB培养基 □组份浓度 1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl □配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中
Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 高温高压灭菌后，4℃保存。
5、LB/Amp培养基 □组份浓度 1％（W/V） Tryptone 0.5％（W/V） Yeast Extract 1％（W/V） NaCl 0.1mg/mL Ampicillin □配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。
6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均匀混合。 7. 4℃保存。
6、TB培养基 □组份浓度 1.2％（W/V） Tryptone 2.4％（W/V） Yeast Extract 0.4％（V/V） Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 □配制量 1L
□配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。
2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL
3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。 5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。 6. 4℃保存。
7、TB/Apm培养基 □组份浓度 1.2％（W/V） Tryptone 2.4％（W/V） Yeast Extract 0.4％（V/V） Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0.1mg/mL Ampicillin □配制量 1L □配置方法
1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。溶解2.31g KH2PO4和2.54g K2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。 2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。
5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mL Ampicillin（100mg/mL）。 6. 均匀混合后4℃保存。
8、SOB培养基 □组份浓度 2％（W/V） Tryptone 0.5％（W/V） Yeast Extract 0.05％（W /V） NaCl 2.5mM KCl 10mM MgCl2 □配制量 1L □配置方法
1. 配制250mM KCl溶液。 在90mL的去离子水中溶解1.86g KCl后，定容至100mL。
2. 配制2M MgCl2溶液。在90mL的去离子水中溶解19g MgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。 3. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 20g Yeast Extract 5g NaCl 0.5g 4. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 5 量取10mL 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。 6. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 7. 加入去离子水将培养基定容至1L。 8. 高温高压灭菌后，4℃保存。
9. 使用前加入5mL灭菌的2M MgCl2溶液。
9、SOC培养基 □组份浓度 2％（W/V） Tryptone 0.5％（W/V） Yeast Extract 0.05％（W /V） NaCl 2.5mM KCl
10mM MgCl2 20mM 葡萄糖 □配制量 100mL □配置方法
1. 配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22μm滤膜过滤除菌。
2. 向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。 3. 4℃保存。
10、2×YT培养基 □组份浓度 1.6％（W/V）Tryptone， 1％（W/V）Yeast Extract，0.5％（W/V）NaCl □配制量 1L
□配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 16g Yeast Extract 10g NaCl 5g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.0。 4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后，4℃保存。
11、Φb×broth培养基 □组份浓度 2％（W/V）Tryptone， 0.5％（W/V）Yeast Extract，0.5％（W/V）MgSO4•7H2O □配制量 1L
□配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 20g Yeast Extract 5g MgSO4•7H2O 5g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.5。
4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后，4℃保存。
12、NZCYM培养基 □组份浓度 0.5％（W/V） Yeast Extract 0.1％（W/V） Casamino Acid 1％（W /V） NZ胺 0.5％（W /V） NaCl 0.2％（W /V） MgSO4•7H2O □配制量 1L
□配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Yeast Extract 5g Casamino Acid 1g NZ胺 10g NaCl 5g MgSO4•7H2O 2g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后，4℃保存。
13、NZYM培养基 □组份浓度 0.5％（W/V） Yeast Extract 1％（W /V） NZ胺 0.5％（W /V） NaCl
0.2％（W /V） MgSO4•7H2O □配置方法 NZYM培养基除不含Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。
14、NZM培养基 □组份浓度 1％（W /V） NZ胺 0.5％（W /V） NaCl 0.2％（W /V） MgSO4•7H2O □配置方法 NZM培养基除不含Yeast Extract（酵母提取物）外，其他成份与NZYM培养基相同。
15、一般固体培养基的 □配置方法 1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。 配制 Agar（琼脂：铺制平板用） 15g/L Agar（琼脂：配制顶层琼脂用） 7g/L Agarose（琼脂糖：铺制平板用） 15 g/L Agarose（琼脂糖：配制顶层琼脂用） 7g/L 2. 高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。 3. 待培养基冷却至50～60℃时，加入热不稳定物质（如抗生素），摇动容器充分混匀。
4. .铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养皿）。 16、LB/Amp/X-Gal/IPTG □组份浓度 1％（W /V） Tryptone
平板培养基 0.5％（W/V） Yeast Extract 1％（W/V） NaCl 0.1mg/mL Ampicillin 0.5％（W /V） IPTG 0.04mg/mL X-Gal 1.5％（W /V） Agar □配制量 1L
□配置方法 1. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。 5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。 6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。 7. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。 8. 4℃保存平板。
17、TB/Amp/X-Gal/IPTG □组份浓度
1.2％（W /V） Tryptone
平板培养基 2.4％（W/V） Yeast Extract 0.4％（W/V） Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0.1mg/mL Ampicillin 0.024mg/mL IPTG 0.04mg/mL X-Gal 1.5％（W /V） Agar
□配制量 1L
□配置方法 1.配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。
2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。 5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。 6. 加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。
7. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。 8. 4℃保存平板。 生物化学实验常用试剂的配制方法
1、0.5mol/L氢氧化钠溶液 □组份浓度 0.5mol/L □配制量 2L □配置方法 1.准确称取氢氧化钠40g。 2.用去离子水溶解并稀释至2L。 2、0.5mol/L盐酸溶液 □组份浓度 0.5mol/L □配制量 2L □配置方法 1.准确量取盐酸83.4mL。 2.用去离子水稀释至2L。 4、0.2％葡萄糖标准溶液 □组份浓度 0.2％ □配制量 1L
□配置方法 1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中，在70℃干燥2小时。 2.干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重。 3.准确称取葡萄糖2.000g。 4.用去离子水溶解并定容至1L 5.于4℃保存。
5、250μg/mL牛血清 □组份浓度 250μg/mL 白蛋白标准液 □配制量 2L
□配置方法 1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。
2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。 3.4℃保存。 6、Folin试剂甲
□配置方法 1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中， 加入50g无水碳酸钠，溶解，待用。 2.称取0.5g酒石酸钾钠，溶于80mL去离子水中， 加入0.25g硫酸铜•5水，溶解。
3.将1：2：去离子水按20：4：1的比例混合即可。 4. 4℃保存，可用一周。 7、Folin试剂乙 □配置方法
1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠•2水25.0359g， 钼酸钠•2水6.2526g，去离子水175mL，85％磷酸12.5mL， 浓盐酸25mL，充分混合。
2.回流10小时，再加硫酸锂37.5g，去离子水12.5mL及数滴溴。 3.然后开口沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后定容到250mL。
4.于棕色瓶中保存，可使用多年
注意：上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左 右，几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的 浓度作为应用液，我们这时是把贮备液于使用前稀释18 倍，使之浓度为0.1mol/L略高。这种稀释18倍后的Folin 试剂乙就是上文称之为的“应用液”。Folin试剂乙贮备 液浓度的标定，一般是以酚酞为指示剂。用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准氢氧化钠溶液，当溶液颜色由红变为紫灰，再突然变成墨绿即为终点，如果用氢氧化钠去滴定Folin试剂乙，终点不太好掌握，溶液地颜色是由浅黄变为浅绿，再变为灰紫色为终点。 8、DNS试剂
□配置方法 1.取3，5-二硝基水杨酸10g,加入2mol/L氢氧化钠溶液200mL。 （3，5-二硝基水杨酸试剂） 2.将3，5-二硝基水杨酸溶解，然后加入酒石酸钾钠300g。 3. 待其完全溶解，用去离子水稀释至2000mL，棕色瓶保存。 9、5％蔗糖溶液 □组份浓度 5％ □配制量 1L
□配置方法 称取蔗糖50g，用去离子水溶解定容至1L。 10、0.1mol/L蔗糖溶液 □组份浓度 0.1mol/L □配制量 1L
□配置方法 称取蔗糖34.230g，用去离子水溶解并定容至1L。
11、20％乙酸溶液 □组份浓度 20％ □配制量 1.2L
□配置方法 量取冰乙酸300mL，用去离子水稀释至1200mL。 12、30％（W/V）Acrylamide
□组份浓度 30％（W/V）Acrylamide 0.05％ □配制量 1L
□配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中 Acrylamide 290g BIS 10g
2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解 3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。 4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收， 其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。 13、40％（W/V）Acrylamide
□组份浓度 40％（W/V）Acrylamide 0.05％ □配制量 1L
□配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中 Acrylamide 380g BIS 20g
2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解 3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。
4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收， 其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。
14、10％（W/V）过硫酸铵 □组份浓度 10％（W/V）过硫酸铵 □配制量 10mL
□配置方法 1.称取1g过硫酸铵。
2.加入10mL的去离子水后搅拌溶解。 3.贮存于4℃。
注意：10％过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右， 超过期限会失去催化作用。 15、考马斯亮蓝R-250染色液
□组份浓度 0.1％（W/V）考马斯亮蓝R-250，25%（V/V）异丙醇， 10％（V/V）冰醋酸 □配制量 1L
□配置方法 1.称取1g考马斯亮蓝R-250,置于1L烧杯中。 2.量取250mL的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。 3.加入100mL的冰乙醋酸，均匀搅拌。 4.加入650mL的去离子水，均匀搅拌。 5.用滤纸出去颗粒物质后，室温保存。 16、考马斯亮蓝染色脱色液
□组份浓度 10％（V/V）醋酸，5％（V/V）乙醇 □配制量 1L
□配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。 醋酸 100mL 乙醇 50mL dH2O 850mL 2.充分混合后使用。 17、凝胶固定液
□组份浓度 50％（V/V）甲醇，10％（V/V）醋酸 (SDS-PAGE银氨染色用) □配制量 100L □配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。 甲醇 500mL 醋酸 100mL dH2O 400mL 2.均匀混合后室温保存。 18、凝胶处理液
□组份浓度 50％（V/V）甲醇，10％（V/V）戊二醛 (SDS-PAGE银氨染色用) □配制量 1L □配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。 甲醇 50mL 戊二醛 10mL dH2O 40mL 2. 均匀混合后室温保存。 19、凝胶染色液
□组份浓度 0.4％（W/V）硝酸银，1％（V/V）浓氨水， (SDS-PAGE银氨染色用) 0.04％（W/V）氢氧化钠 □配制量 100L
□配置方法 1.量取下列试剂，加入100～200mL试剂瓶中。 20％硝酸银 2mL 浓氨水 1mL 4％氢氧化钠 1mL dH2O 96mL
2.均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水浓度过低时溶液 会呈现混浊状，此时应补加浓氨水，直至透明。 3.本染色液应现用现配，不宜保存。 20、显影液
□组份浓度 0.005％（V/V）柠檬酸，0.02％（V/V）甲醛 (SDS-PAGE银氨染色用) □配制量 1L
□配置方法 1.称取下列试剂，置于1L试剂瓶中。 柠檬酸 50mg 甲醛 0.2mL 2.加入1L去离子水后，摇动混合后溶解。 3.室温保存。
21、45％乙醇溶液 □组份浓度 45％ □配制量 1L
□配置方法 量取无水乙醇450mL，加入去离子水550mL，混匀。 22、5％的十二烷基硫酸钠溶液 □组份浓度 5％ （W/V） □配制量 0.1L
配置方法:称取5.0g十二烷基硫酸钠,溶于100mL4％的乙醇溶液中。 23、三氯甲烷-异戊醇混合试剂
配置方法 取500mL三氯甲烷试剂，加入21mL异戊醇试剂，混匀。 24、1.6％乙醛溶液 □组份浓度 1.6％ □配制量 0.1L
□配置方法 取47％乙醛3.4mL，用去离子水定容至100mL。 25、二苯胺试剂
□配置方法 1.称取二苯胺试剂0.8g，溶解于180mL冰乙酸中， 2.再加入8mL高氯酸混匀。
3. 临用前加入0.8mL 1.6％乙醛溶液。 注意：配制完成后试剂应为无色。 26、15％三氯乙酸溶液 □组份浓度 15％ □配制量 2L
□配置方法 称取三氯乙酸300g，用去离子水溶解定容至2000mL。 27、1％谷氨酸溶液 □组份浓度 1％ □配制量 0.5L
□配置方法 1.称取5g谷氨酸，先用适量得用去离子水溶解。 2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。 3. 最后用去离子水定容至0.5L。 28、1％丙酮酸溶液 □组份浓度 1％ □配制量 0.5L
□配置方法 1.称取5g丙氨酸，先用适量得用去离子水溶解。 2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。 3. 最后用去离子水定容至0.5L。 29、0.1％的碳酸氢钾溶液 □组份浓度 0.1％ □配制量 0.5L
□配置方法 称取碳酸氢钾0.5g，用去离子水溶解定容至0.5L。 30、0.05％的碘乙酸溶液 □组份浓度 0.05％ □配制量 0.25L
□配置方法 称取0.125g碘乙酸，用去离子水溶解定容至0.25L。 31、Locke氏溶液 □配制量 2L
配置方法 称取18g氯化钠,0.84g氯化钾, 48g氯化钙,0.3g碳酸 氢钠，2g葡萄糖，用去离子水溶解定容至2000mL。
32、0.2mol/L的丁酸溶液 □组份浓度 0.2mol/L □配制量 1L □配置方法 1.量取18mL正丁酸试剂。 2.用1mol/L的氢氧化钠中和。 3.再用去离子水定容至1L。 33、0.1mol/L的硫代硫酸钠溶液 □组份浓度 0.1mol/L □配制量 10L
□配置方法 称248.17g硫代硫酸钠，用去离子水溶解并定至10L。 34、0.1mol/L的碘溶液 □组份浓度 0.1mol/L □配制量 1L □配置方法 1.称取碘12.7g和碘化钾25g。 2.用去离子水溶解并定容至1L。 3.用0.1mol/L的硫代硫酸钠标定。 35、10％氢氧化钠溶液 □组份浓度 10％ □配制量 2L
□配置方法 称取200g氢氧化钠，用去离子水溶解并定容至2L。 36、10％盐酸溶液 □组份浓度 10％ □配制量 0.2L
□配置方法 量取浓盐酸49.3mL，用去离子水定至0.2mL。 37、0.1％标准丙氨酸溶液 □组份浓度 0.1％ □配制量 0.5L
□配置方法 称取丙氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至0.5mL。 38、0.1％标准谷氨酸溶液 □组份浓度 0.1％ □配制量 0.5L
□配置方法 称取谷氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至500mL。 39、0.1％水合茚三酮乙醇溶液 □组份浓度 0.1％ □配制量 1L
□配置方法 称取1g水合茚三酮试剂，溶于1000mL无水乙醇中。 40、酚溶液
□配置方法 在大烧杯中加入80mL去离子水，再加入300g 苯酚，在水 浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗内，轻轻振荡混合，使其成为乳状液。静止7～10小时，乳状液变成两层透明溶液，下层为被水饱和的酚溶液，放出下层，贮存于棕色瓶中备用。 41、0.5％淀粉溶液 □组份浓度 0.5％ □配制量 0.1L
□配置方法 称取淀粉0.5g，用去离子水溶解定容至0.1L。 42、对羟基联苯试剂
配置方法 称取对羟基联苯1.5g，溶于100mL0.5％氢氧化钠溶液中， 配制成1.5％的溶液。若对羟基联苯颜色较深，应用丙酮
或 无水乙醇重结晶，放置时间较长后，会出项针状结晶，应摇匀后使用。
生物化学实验常用缓冲液的配制方法
1、0.2 mol/L 磷酸缓冲液 □组份浓度 0.2mol/L （pH 6.0） □配制量 1L
□配置方法 1. 称取磷酸氢二钠•12水 8.82 g。 2. 称取磷酸二氢钠•2水 27.34g。
3. 用去离子水溶解并定容至1L。室温保存。 注意：此为母液，使用时稀释40倍使用。 2、洗脱液 □组份浓度 0.15mol/L
（含0.15mol/L氯 □配制量 10L
化钠的0.005mol/L □配置方法 1.称取氯化钠87.66g。 pH 6.0的磷酸缓冲液） 2. 用0.2mol/L pH6.0的
磷酸缓冲液250mL溶解。
3. 用去离子水稀释至10 L。室温保存。 3、0.3mol/L磷酸缓冲液 □组份浓度 0.3mol/L （pH7.8） □配制量 0.5L
□配置方法 1.准确称取磷酸氢二钠•12水49.150g。 2.磷酸二氢钠•2水2.000g。
3. 用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存。 注意：此为母液，使用时稀释10倍使用。 4、0.2mol/L乙酸缓冲液 □组份浓度 0.2mol/L （pH4.6） □配制量 2L □配置方法 1.准确称取乙酸钠•3水54.44g。 2. 加入23mL冰乙酸，溶解。
3. 用去离子水溶解并定容至2L。4℃保存。 5、0.2mol/L磷酸-柠檬酸 □组份浓度 0.2mol/L 缓冲液 □配制量 各1L （pH 2.6、4.6、6.6）
□配置方法 1. 母液A（0.2mol/L的Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4•12水143.256g， 用去离子水定容至2L。
2. 母液B（0.1mol/L的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸•1水42.028g 用去离子水溶解定容至2L。
3. pH2.6、4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制： pH值 A（mL） B（mL） 2.6 109.0 891.0 4.6 467.5 532.5 6.6 727.5 272.5 4. 按上表混匀后，4℃保存。 6、20×SSC 缓冲液 □配制量 1L
（pH7.0） □配置方法 1.准确称取175.2g氯化钠。 2.准确称取88.2g柠檬酸钠•2水。 3.溶解于800mL去离子水中。 4.加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。 5.加去离子水定容至1L。 注意：按实验需要可分装后高压灭菌。
10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相应稀释得到。 7、0.15mol/L氯化钠- □组份浓度 0.15mol/L 乙二胺四乙酸二钠 □配制量 1L
缓冲液 □配置方法 1.准确称取氯化钠8.77g。 （pH8.0） 2. 称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。 3. 溶于800mL去离子水中。 4.用固体的氢氧化钠调pH值为8.0。 5.加去离子水定容至1L。 8、1/15mol/L的磷酸盐 □组份浓度 0.15mol/L 缓冲液 □配制量 1L （pH7.6） □配置方法
1.溶液甲（1/15mol/L的KH2PO4溶液）：称取KH2PO4 9.078g，用去离子水溶解定容至1L。
2. 溶液乙(1/15mol/L的Na2HPO4溶液):称取Na2HPO4• 2水11.876g（或磷酸氢二钠•12水23.894g）用去离子水溶解定容至1L。 3.pH7.6磷酸盐缓冲液：将①和②按1.4：8.6比例混合即可。 9、5×Tris-GlycineBuffer □组份浓度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5％（w/v）SDS
（SDS-PAGE电泳缓冲液） □配制量 1L □配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tris 15.1g Glycine 94g SDS 5.0g 2.加入约800mL的去离子水，搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。 10、5×SDS-PAGE □组份浓度 250mM Tris-HCl（pH6.8） Loading Buffer 10％（W/V） SDS 0.5％（W/V） BPB 50％（V/V） 甘油 5％（W/V） β-巯基乙醇 □配制量 5mL
□配置方法 1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。 1M Tris-HCl 1.25mL SDS 0.5g BPB 25mg 甘油 2.5mL 2.加入去离子水溶解后定容至5mL。 3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。 4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。 5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右 生物化学实验常用柱料数据及性质 1、DEAE阴离子交换纤维素 （1）纤维素的处理
取纤维素干品用蒸馏水浸泡，充分溶涨并搅拌均匀，
过夜。次日再搅匀，静止30min留下沉集部分（重复3次），用真空泵抽干。然后用适量的0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性；再用适量的0.5mol/L的盐酸溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性；重复用0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性。最后用0.005mol/L pH6.0的磷酸缓冲液浸泡待用。
（2）纤维素的重生
回收的纤维素先用0.5mol/L氯化钠-0.5mol/L氢氧化钠
溶液浸泡，再按上述（1）操作处理，即可再次投入使用。
（3）纤维素的保存
回收后，用0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡30min后，蒸
馏水洗至中性，抽干，于鼓风干燥箱中60℃烘干后，保存。
2、SephadexG型葡聚糖凝胶 （1）凝胶的特性要点
葡聚糖G后面的数字代表不同的交联度，数值越大交联度越小，吸
水量越大。其数值大致为吸水量X的10倍。Sephadex对碱和弱酸稳定（在0.1mol/L盐酸中可以浸泡1～2小时）。在中性时可以高压灭菌。不同型号中又有颗粒粗细之分。颗粒粗的分离效果差，流速快。颗粒越细分离效果越好，
但流速也越慢。交联葡聚糖工作时的pH稳定在2～11的范围内。葡聚糖G型凝胶分离的分子量分级范围为700～8×105。SephadexG型葡聚糖凝胶的数据见下表
。
*本表数值取自Pharmacia Biotech Biodirectory 1996。 **为2.6×30cm层析柱在25℃用蒸馏水测定之值。 D＝Darcy’s law (2)凝胶的溶胀*
G系交联葡聚糖凝胶亲水性强，只能在水中溶胀（仅有少量的有机溶剂也可以使之溶胀），有机溶剂或含有有机溶剂较多的水溶液会改变其孔隙，使之收缩失去或降低凝胶的分离能力。在水中溶胀时如在室温则需要较长时间，才能达到充分溶胀的程度，但可煮沸到100℃，以缩短其溶胀时间。见下表 Sephadex G型葡聚糖凝胶溶胀所需时间
*溶胀时要将凝胶浸泡在过量的水或缓冲液中。在整个溶胀过程中应避免剧烈地搅拌，尤其不能使用电磁搅拌，以免破坏了它的颗粒结构，以及产生许多碎末而影响洗脱时的流速。
（3）凝胶的回收与保存
凝胶的再生最好不要在柱上进行（有些凝胶可以在
位清洗），可将凝胶在0.5mol/L氯化钠及0.5mol/L氢氧化钠的混合溶液中浸泡；一般约需30分钟以上。然后用蒸馏水洗至中性，最后用缓冲液平衡即可恢复使用。
经常使用的凝胶，一般加入一些抗菌剂放在普通冰箱中，即可保存较长的时间。如确切在相当长的时间里不准备使用时，则以保存干凝胶为好。处理时可先用较浓的氯化钠浸泡（如0.5mol/L）,在用0.5mol/L的氢氧化钠处理并用蒸馏水洗至中性，然后用递增百分比浓度的乙醇分多次作脱水处理。一般可从30％的乙醇开始；每次均应让凝胶在乙醇中多浸泡一些时间。在无水乙醇处理后，最后再用乙醚处理一次以加速乙醇的挥发。处理后的凝胶宜在80℃以下的温度烘干。在进行凝胶的回收时，如在每一步操作时，均使用布氏漏斗抽滤可大大地加快整个回收过程。 【注意】
a．凝胶在氢氧化钠溶液中浸泡的时间不要太长。
b．不要图快过早地使用百分浓度太大地乙醇，以免凝胶颗粒收缩太快，破坏了它地结构，因而影响了它地分离能力。
c．在乙醚未充分挥发完以前，切不可将含有多量乙醚地凝胶放入烘箱，以免发生危险。
d．溶胀了地凝胶不可放入低温冰箱中冻结，以免其球形结构被破坏。
微生物学实验常用培养基的配制 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）
牛肉膏 3g 蛋白胨 5g 氯化钠 10g 琼脂 15~20g pH 7.0~7.2
水
1000mL
121℃灭菌20min。
2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉 20g 硝酸钾 1g 氯化钠 0.5g 磷酸氢二钾 0.5g 硫酸镁 0.5g 硫酸亚铁 0.01g 琼脂 20g
水
1000mL
pH 7.2～7.4
配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。
3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用） 硝酸钠 2g 磷酸氢二钾 1g 氯化钾 0.5g 硫酸镁 0.5g 硫酸亚铁 0.01g 蔗糖 30g 琼脂 15~20g 水 1000mL
pH
自然
121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用） 葡萄糖 10g 蛋白胨 5g 磷酸二氢钾 1g 七水合硫酸镁 0.5g 1/3000孟加拉红（rose 100mL
bengal，玫瑰红水溶液） 琼脂 15—20g
pH 自然
蒸馏水
800mL 112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用） 马铃薯
200g 蔗糖（或葡萄糖） 20g 琼脂 15—20g
pH
自然
培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。121℃灭菌30min。
实验常用试剂、缓冲液的配制方法
1、1M Tris-HCl □组份浓度 1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0） □配制量 1L
□配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值 浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、1.5 M Tris-HCl □组份浓度 1.5 M Tris-HCl （pH8.8） □配制量 1L
□配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10×TE Buffer □组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0） □配制量 1L
□配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL 500 mM EDTA（pH8.0） 20mL
2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。
4、3 M 醋酸钠 □组份浓度 3 M 醋酸钠 （pH5.2） □配制量 100mL
□配置方法 1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。
5、PBS Buffer □组份浓度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 □配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6、10 M醋酸铵 □组份浓度 10 M醋酸铵 □配制量 100mL
□配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7、Tris- HCl平衡苯酚 □配置方法
1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
① 液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
② 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。
③ 加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ④ 重复操作步骤③。
⑤ 加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ⑥ 重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。 ⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 ⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
8、苯酚/氯仿/异戊醇 □配置方法
1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1） 质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
9、10％（W/V）SDS □组份浓度 10％（W/V）SDS □配制量 100mL
□配置方法 1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。
2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。 3. 将溶液定容至100mL后，室温保存。 10、2 N NaOH □组份浓度 2N NaOH □配制量 100mL □配置方法
1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。
2. 称取8g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。 3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。 4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。 11、2.5 N HCl □组份浓度 2.5 N HCl □配制量 100mL
□配置方法 1. 在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。 2. 室温保存。
12、5 M NaCl □组份浓度 5 M NaCl □配制量 1L
□配置方法 1. 称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。 3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
13、20％（W/V）Glucose □组份浓度 20％（W/V）Glucose □配制量 100mL
□配置方法 1. 称取20g Glucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100mL。 3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
14、Solution I □组份浓度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose
（质粒提取用） □配制量 1L
□配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。 1M Tris-HCl（pH8.0） 25mL
0.5 M EDTA（pH8.0） 20mL 20％Glucose（1.11M） 45mL dH2O 910mL 2. 高温高压灭菌后，4℃保存。
3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A（20mg/mL）。
15、Solution II □组份浓度 250mM NaOH，1％（W/V）SDS （质粒提取用） □配制量 500mL
□配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
10％SDS 50mL 2N NaOH 50mL 2. 加灭菌水定容至500mL，充分混匀。
3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。 注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。
16、Solution III □组份浓度 3M KOAc，5M CH3COOH （质粒提取用） □配制量 500mL
□配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
KOAc 147g CH3COOH 57.5mL 2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解。 3. 加去离子水将溶液定容至500mL。 4. 高温高压灭菌后，4℃保存。 17、0.5M EDTA □组份浓度 0.5 M EDTA (pH8.0) □配制量 1L
□配置方法 1. 称取186.1g Na2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌。 3. 用NaOH调节pH值值8.0（约20g NaOH）。 注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。 4. 加去离子水将溶液定容至1L。 5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。 6. 室温保存。
18、1 M DTT □组份浓度 1 M DTT □配制量 20mL
□配置方法 1. 称取3.09g DTT，加入到50mL塑料离心管内。 2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。 19、10mM ATP □组份浓度 10mM ATP □配制量 20mL
□配置方法 1. 称取121mg Na2ATP•3H2O，加入到50mL塑料离心管内。
2. 加20mL的25mM Tris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。 3. 适量分成小份，-20℃保存。
分子生物学实验常用培养基的配制方法
1、Ampicillin □组份浓度 100mg/ml Ampicillin （100mg/ml） □配制量 50mL
□配置方法 1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 2、IPTG □组份浓度 24mg/mL IPTG （24mg/mL） □配制量 50mL
配置方法 1. 称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 3、X- Gal □组份浓度 20mg/mL X- Gal （20mg/mL） □配制量 50mL
□配置方法 1. 称取1g X-Gal置于50mL离心管中。 2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 4、LB培养基 □组份浓度 1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl □配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中
Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 高温高压灭菌后，4℃保存。
5、LB/Amp培养基 □组份浓度 1％（W/V） Tryptone 0.5％（W/V） Yeast Extract 1％（W/V） NaCl 0.1mg/mL Ampicillin □配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。
6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均匀混合。 7. 4℃保存。
6、TB培养基 □组份浓度 1.2％（W/V） Tryptone 2.4％（W/V） Yeast Extract 0.4％（V/V） Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 □配制量 1L
□配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。
2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL
3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。 5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。 6. 4℃保存。
7、TB/Apm培养基 □组份浓度 1.2％（W/V） Tryptone 2.4％（W/V） Yeast Extract 0.4％（V/V） Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0.1mg/mL Ampicillin □配制量 1L □配置方法
1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。溶解2.31g KH2PO4和2.54g K2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。 2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。
5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mL Ampicillin（100mg/mL）。 6. 均匀混合后4℃保存。
8、SOB培养基 □组份浓度 2％（W/V） Tryptone 0.5％（W/V） Yeast Extract 0.05％（W /V） NaCl 2.5mM KCl 10mM MgCl2 □配制量 1L □配置方法
1. 配制250mM KCl溶液。 在90mL的去离子水中溶解1.86g KCl后，定容至100mL。
2. 配制2M MgCl2溶液。在90mL的去离子水中溶解19g MgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。 3. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 20g Yeast Extract 5g NaCl 0.5g 4. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 5 量取10mL 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。 6. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 7. 加入去离子水将培养基定容至1L。 8. 高温高压灭菌后，4℃保存。
9. 使用前加入5mL灭菌的2M MgCl2溶液。
9、SOC培养基 □组份浓度 2％（W/V） Tryptone 0.5％（W/V） Yeast Extract 0.05％（W /V） NaCl 2.5mM KCl
10mM MgCl2 20mM 葡萄糖 □配制量 100mL □配置方法
1. 配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22μm滤膜过滤除菌。
2. 向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。 3. 4℃保存。
10、2×YT培养基 □组份浓度 1.6％（W/V）Tryptone， 1％（W/V）Yeast Extract，0.5％（W/V）NaCl □配制量 1L
□配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 16g Yeast Extract 10g NaCl 5g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.0。 4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后，4℃保存。
11、Φb×broth培养基 □组份浓度 2％（W/V）Tryptone， 0.5％（W/V）Yeast Extract，0.5％（W/V）MgSO4•7H2O □配制量 1L
□配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Tryptone 20g Yeast Extract 5g MgSO4•7H2O 5g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加1N KOH，调节pH值至7.5。
4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后，4℃保存。
12、NZCYM培养基 □组份浓度 0.5％（W/V） Yeast Extract 0.1％（W/V） Casamino Acid 1％（W /V） NZ胺 0.5％（W /V） NaCl 0.2％（W /V） MgSO4•7H2O □配制量 1L
□配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。 Yeast Extract 5g Casamino Acid 1g NZ胺 10g NaCl 5g MgSO4•7H2O 2g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后，4℃保存。
13、NZYM培养基 □组份浓度 0.5％（W/V） Yeast Extract 1％（W /V） NZ胺 0.5％（W /V） NaCl
0.2％（W /V） MgSO4•7H2O □配置方法 NZYM培养基除不含Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。
14、NZM培养基 □组份浓度 1％（W /V） NZ胺 0.5％（W /V） NaCl 0.2％（W /V） MgSO4•7H2O □配置方法 NZM培养基除不含Yeast Extract（酵母提取物）外，其他成份与NZYM培养基相同。
15、一般固体培养基的 □配置方法 1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。 配制 Agar（琼脂：铺制平板用） 15g/L Agar（琼脂：配制顶层琼脂用） 7g/L Agarose（琼脂糖：铺制平板用） 15 g/L Agarose（琼脂糖：配制顶层琼脂用） 7g/L 2. 高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。 3. 待培养基冷却至50～60℃时，加入热不稳定物质（如抗生素），摇动容器充分混匀。
4. .铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养皿）。 16、LB/Amp/X-Gal/IPTG □组份浓度 1％（W /V） Tryptone
平板培养基 0.5％（W/V） Yeast Extract 1％（W/V） NaCl 0.1mg/mL Ampicillin 0.5％（W /V） IPTG 0.04mg/mL X-Gal 1.5％（W /V） Agar □配制量 1L
□配置方法 1. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。 5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。 6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。 7. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。 8. 4℃保存平板。
17、TB/Amp/X-Gal/IPTG □组份浓度
1.2％（W /V） Tryptone
平板培养基 2.4％（W/V） Yeast Extract 0.4％（W/V） Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0.1mg/mL Ampicillin 0.024mg/mL IPTG 0.04mg/mL X-Gal 1.5％（W /V） Agar
□配制量 1L
□配置方法 1.配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。
2. 称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。 5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。 6. 加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。
7. 铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。 8. 4℃保存平板。 生物化学实验常用试剂的配制方法
1、0.5mol/L氢氧化钠溶液 □组份浓度 0.5mol/L □配制量 2L □配置方法 1.准确称取氢氧化钠40g。 2.用去离子水溶解并稀释至2L。 2、0.5mol/L盐酸溶液 □组份浓度 0.5mol/L □配制量 2L □配置方法 1.准确量取盐酸83.4mL。 2.用去离子水稀释至2L。 4、0.2％葡萄糖标准溶液 □组份浓度 0.2％ □配制量 1L
□配置方法 1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中，在70℃干燥2小时。 2.干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重。 3.准确称取葡萄糖2.000g。 4.用去离子水溶解并定容至1L 5.于4℃保存。
5、250μg/mL牛血清 □组份浓度 250μg/mL 白蛋白标准液 □配制量 2L
□配置方法 1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。
2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。 3.4℃保存。 6、Folin试剂甲
□配置方法 1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中， 加入50g无水碳酸钠，溶解，待用。 2.称取0.5g酒石酸钾钠，溶于80mL去离子水中， 加入0.25g硫酸铜•5水，溶解。
3.将1：2：去离子水按20：4：1的比例混合即可。 4. 4℃保存，可用一周。 7、Folin试剂乙 □配置方法
1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠•2水25.0359g， 钼酸钠•2水6.2526g，去离子水175mL，85％磷酸12.5mL， 浓盐酸25mL，充分混合。
2.回流10小时，再加硫酸锂37.5g，去离子水12.5mL及数滴溴。 3.然后开口沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后定容到250mL。
4.于棕色瓶中保存，可使用多年
注意：上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左 右，几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的 浓度作为应用液，我们这时是把贮备液于使用前稀释18 倍，使之浓度为0.1mol/L略高。这种稀释18倍后的Folin 试剂乙就是上文称之为的“应用液”。Folin试剂乙贮备 液浓度的标定，一般是以酚酞为指示剂。用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准氢氧化钠溶液，当溶液颜色由红变为紫灰，再突然变成墨绿即为终点，如果用氢氧化钠去滴定Folin试剂乙，终点不太好掌握，溶液地颜色是由浅黄变为浅绿，再变为灰紫色为终点。 8、DNS试剂
□配置方法 1.取3，5-二硝基水杨酸10g,加入2mol/L氢氧化钠溶液200mL。 （3，5-二硝基水杨酸试剂） 2.将3，5-二硝基水杨酸溶解，然后加入酒石酸钾钠300g。 3. 待其完全溶解，用去离子水稀释至2000mL，棕色瓶保存。 9、5％蔗糖溶液 □组份浓度 5％ □配制量 1L
□配置方法 称取蔗糖50g，用去离子水溶解定容至1L。 10、0.1mol/L蔗糖溶液 □组份浓度 0.1mol/L □配制量 1L
□配置方法 称取蔗糖34.230g，用去离子水溶解并定容至1L。
11、20％乙酸溶液 □组份浓度 20％ □配制量 1.2L
□配置方法 量取冰乙酸300mL，用去离子水稀释至1200mL。 12、30％（W/V）Acrylamide
□组份浓度 30％（W/V）Acrylamide 0.05％ □配制量 1L
□配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中 Acrylamide 290g BIS 10g
2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解 3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。 4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收， 其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。 13、40％（W/V）Acrylamide
□组份浓度 40％（W/V）Acrylamide 0.05％ □配制量 1L
□配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中 Acrylamide 380g BIS 20g
2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解 3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm滤膜滤去杂质。
4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收， 其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。
14、10％（W/V）过硫酸铵 □组份浓度 10％（W/V）过硫酸铵 □配制量 10mL
□配置方法 1.称取1g过硫酸铵。
2.加入10mL的去离子水后搅拌溶解。 3.贮存于4℃。
注意：10％过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右， 超过期限会失去催化作用。 15、考马斯亮蓝R-250染色液
□组份浓度 0.1％（W/V）考马斯亮蓝R-250，25%（V/V）异丙醇， 10％（V/V）冰醋酸 □配制量 1L
□配置方法 1.称取1g考马斯亮蓝R-250,置于1L烧杯中。 2.量取250mL的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。 3.加入100mL的冰乙醋酸，均匀搅拌。 4.加入650mL的去离子水，均匀搅拌。 5.用滤纸出去颗粒物质后，室温保存。 16、考马斯亮蓝染色脱色液
□组份浓度 10％（V/V）醋酸，5％（V/V）乙醇 □配制量 1L
□配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。 醋酸 100mL 乙醇 50mL dH2O 850mL 2.充分混合后使用。 17、凝胶固定液
□组份浓度 50％（V/V）甲醇，10％（V/V）醋酸 (SDS-PAGE银氨染色用) □配制量 100L □配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。 甲醇 500mL 醋酸 100mL dH2O 400mL 2.均匀混合后室温保存。 18、凝胶处理液
□组份浓度 50％（V/V）甲醇，10％（V/V）戊二醛 (SDS-PAGE银氨染色用) □配制量 1L □配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。 甲醇 50mL 戊二醛 10mL dH2O 40mL 2. 均匀混合后室温保存。 19、凝胶染色液
□组份浓度 0.4％（W/V）硝酸银，1％（V/V）浓氨水， (SDS-PAGE银氨染色用) 0.04％（W/V）氢氧化钠 □配制量 100L
□配置方法 1.量取下列试剂，加入100～200mL试剂瓶中。 20％硝酸银 2mL 浓氨水 1mL 4％氢氧化钠 1mL dH2O 96mL
2.均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水浓度过低时溶液 会呈现混浊状，此时应补加浓氨水，直至透明。 3.本染色液应现用现配，不宜保存。 20、显影液
□组份浓度 0.005％（V/V）柠檬酸，0.02％（V/V）甲醛 (SDS-PAGE银氨染色用) □配制量 1L
□配置方法 1.称取下列试剂，置于1L试剂瓶中。 柠檬酸 50mg 甲醛 0.2mL 2.加入1L去离子水后，摇动混合后溶解。 3.室温保存。
21、45％乙醇溶液 □组份浓度 45％ □配制量 1L
□配置方法 量取无水乙醇450mL，加入去离子水550mL，混匀。 22、5％的十二烷基硫酸钠溶液 □组份浓度 5％ （W/V） □配制量 0.1L
配置方法:称取5.0g十二烷基硫酸钠,溶于100mL4％的乙醇溶液中。 23、三氯甲烷-异戊醇混合试剂
配置方法 取500mL三氯甲烷试剂，加入21mL异戊醇试剂，混匀。 24、1.6％乙醛溶液 □组份浓度 1.6％ □配制量 0.1L
□配置方法 取47％乙醛3.4mL，用去离子水定容至100mL。 25、二苯胺试剂
□配置方法 1.称取二苯胺试剂0.8g，溶解于180mL冰乙酸中， 2.再加入8mL高氯酸混匀。
3. 临用前加入0.8mL 1.6％乙醛溶液。 注意：配制完成后试剂应为无色。 26、15％三氯乙酸溶液 □组份浓度 15％ □配制量 2L
□配置方法 称取三氯乙酸300g，用去离子水溶解定容至2000mL。 27、1％谷氨酸溶液 □组份浓度 1％ □配制量 0.5L
□配置方法 1.称取5g谷氨酸，先用适量得用去离子水溶解。 2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。 3. 最后用去离子水定容至0.5L。 28、1％丙酮酸溶液 □组份浓度 1％ □配制量 0.5L
□配置方法 1.称取5g丙氨酸，先用适量得用去离子水溶解。 2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。 3. 最后用去离子水定容至0.5L。 29、0.1％的碳酸氢钾溶液 □组份浓度 0.1％ □配制量 0.5L
□配置方法 称取碳酸氢钾0.5g，用去离子水溶解定容至0.5L。 30、0.05％的碘乙酸溶液 □组份浓度 0.05％ □配制量 0.25L
□配置方法 称取0.125g碘乙酸，用去离子水溶解定容至0.25L。 31、Locke氏溶液 □配制量 2L
配置方法 称取18g氯化钠,0.84g氯化钾, 48g氯化钙,0.3g碳酸 氢钠，2g葡萄糖，用去离子水溶解定容至2000mL。
32、0.2mol/L的丁酸溶液 □组份浓度 0.2mol/L □配制量 1L □配置方法 1.量取18mL正丁酸试剂。 2.用1mol/L的氢氧化钠中和。 3.再用去离子水定容至1L。 33、0.1mol/L的硫代硫酸钠溶液 □组份浓度 0.1mol/L □配制量 10L
□配置方法 称248.17g硫代硫酸钠，用去离子水溶解并定至10L。 34、0.1mol/L的碘溶液 □组份浓度 0.1mol/L □配制量 1L □配置方法 1.称取碘12.7g和碘化钾25g。 2.用去离子水溶解并定容至1L。 3.用0.1mol/L的硫代硫酸钠标定。 35、10％氢氧化钠溶液 □组份浓度 10％ □配制量 2L
□配置方法 称取200g氢氧化钠，用去离子水溶解并定容至2L。 36、10％盐酸溶液 □组份浓度 10％ □配制量 0.2L
□配置方法 量取浓盐酸49.3mL，用去离子水定至0.2mL。 37、0.1％标准丙氨酸溶液 □组份浓度 0.1％ □配制量 0.5L
□配置方法 称取丙氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至0.5mL。 38、0.1％标准谷氨酸溶液 □组份浓度 0.1％ □配制量 0.5L
□配置方法 称取谷氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至500mL。 39、0.1％水合茚三酮乙醇溶液 □组份浓度 0.1％ □配制量 1L
□配置方法 称取1g水合茚三酮试剂，溶于1000mL无水乙醇中。 40、酚溶液
□配置方法 在大烧杯中加入80mL去离子水，再加入300g 苯酚，在水 浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗内，轻轻振荡混合，使其成为乳状液。静止7～10小时，乳状液变成两层透明溶液，下层为被水饱和的酚溶液，放出下层，贮存于棕色瓶中备用。 41、0.5％淀粉溶液 □组份浓度 0.5％ □配制量 0.1L
□配置方法 称取淀粉0.5g，用去离子水溶解定容至0.1L。 42、对羟基联苯试剂
配置方法 称取对羟基联苯1.5g，溶于100mL0.5％氢氧化钠溶液中， 配制成1.5％的溶液。若对羟基联苯颜色较深，应用丙酮
或 无水乙醇重结晶，放置时间较长后，会出项针状结晶，应摇匀后使用。
生物化学实验常用缓冲液的配制方法
1、0.2 mol/L 磷酸缓冲液 □组份浓度 0.2mol/L （pH 6.0） □配制量 1L
□配置方法 1. 称取磷酸氢二钠•12水 8.82 g。 2. 称取磷酸二氢钠•2水 27.34g。
3. 用去离子水溶解并定容至1L。室温保存。 注意：此为母液，使用时稀释40倍使用。 2、洗脱液 □组份浓度 0.15mol/L
（含0.15mol/L氯 □配制量 10L
化钠的0.005mol/L □配置方法 1.称取氯化钠87.66g。 pH 6.0的磷酸缓冲液） 2. 用0.2mol/L pH6.0的
磷酸缓冲液250mL溶解。
3. 用去离子水稀释至10 L。室温保存。 3、0.3mol/L磷酸缓冲液 □组份浓度 0.3mol/L （pH7.8） □配制量 0.5L
□配置方法 1.准确称取磷酸氢二钠•12水49.150g。 2.磷酸二氢钠•2水2.000g。
3. 用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存。 注意：此为母液，使用时稀释10倍使用。 4、0.2mol/L乙酸缓冲液 □组份浓度 0.2mol/L （pH4.6） □配制量 2L □配置方法 1.准确称取乙酸钠•3水54.44g。 2. 加入23mL冰乙酸，溶解。
3. 用去离子水溶解并定容至2L。4℃保存。 5、0.2mol/L磷酸-柠檬酸 □组份浓度 0.2mol/L 缓冲液 □配制量 各1L （pH 2.6、4.6、6.6）
□配置方法 1. 母液A（0.2mol/L的Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4•12水143.256g， 用去离子水定容至2L。
2. 母液B（0.1mol/L的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸•1水42.028g 用去离子水溶解定容至2L。
3. pH2.6、4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制： pH值 A（mL） B（mL） 2.6 109.0 891.0 4.6 467.5 532.5 6.6 727.5 272.5 4. 按上表混匀后，4℃保存。 6、20×SSC 缓冲液 □配制量 1L
（pH7.0） □配置方法 1.准确称取175.2g氯化钠。 2.准确称取88.2g柠檬酸钠•2水。 3.溶解于800mL去离子水中。 4.加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。 5.加去离子水定容至1L。 注意：按实验需要可分装后高压灭菌。
10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相应稀释得到。 7、0.15mol/L氯化钠- □组份浓度 0.15mol/L 乙二胺四乙酸二钠 □配制量 1L
缓冲液 □配置方法 1.准确称取氯化钠8.77g。 （pH8.0） 2. 称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。 3. 溶于800mL去离子水中。 4.用固体的氢氧化钠调pH值为8.0。 5.加去离子水定容至1L。 8、1/15mol/L的磷酸盐 □组份浓度 0.15mol/L 缓冲液 □配制量 1L （pH7.6） □配置方法
1.溶液甲（1/15mol/L的KH2PO4溶液）：称取KH2PO4 9.078g，用去离子水溶解定容至1L。
2. 溶液乙(1/15mol/L的Na2HPO4溶液):称取Na2HPO4• 2水11.876g（或磷酸氢二钠•12水23.894g）用去离子水溶解定容至1L。 3.pH7.6磷酸盐缓冲液：将①和②按1.4：8.6比例混合即可。 9、5×Tris-GlycineBuffer □组份浓度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5％（w/v）SDS
（SDS-PAGE电泳缓冲液） □配制量 1L □配置方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tris 15.1g Glycine 94g SDS 5.0g 2.加入约800mL的去离子水，搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。 10、5×SDS-PAGE □组份浓度 250mM Tris-HCl（pH6.8） Loading Buffer 10％（W/V） SDS 0.5％（W/V） BPB 50％（V/V） 甘油 5％（W/V） β-巯基乙醇 □配制量 5mL
□配置方法 1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。 1M Tris-HCl 1.25mL SDS 0.5g BPB 25mg 甘油 2.5mL 2.加入去离子水溶解后定容至5mL。 3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。 4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。 5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右 生物化学实验常用柱料数据及性质 1、DEAE阴离子交换纤维素 （1）纤维素的处理
取纤维素干品用蒸馏水浸泡，充分溶涨并搅拌均匀，
过夜。次日再搅匀，静止30min留下沉集部分（重复3次），用真空泵抽干。然后用适量的0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性；再用适量的0.5mol/L的盐酸溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性；重复用0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性。最后用0.005mol/L pH6.0的磷酸缓冲液浸泡待用。
（2）纤维素的重生
回收的纤维素先用0.5mol/L氯化钠-0.5mol/L氢氧化钠
溶液浸泡，再按上述（1）操作处理，即可再次投入使用。
（3）纤维素的保存
回收后，用0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡30min后，蒸
馏水洗至中性，抽干，于鼓风干燥箱中60℃烘干后，保存。
2、SephadexG型葡聚糖凝胶 （1）凝胶的特性要点
葡聚糖G后面的数字代表不同的交联度，数值越大交联度越小，吸
水量越大。其数值大致为吸水量X的10倍。Sephadex对碱和弱酸稳定（在0.1mol/L盐酸中可以浸泡1～2小时）。在中性时可以高压灭菌。不同型号中又有颗粒粗细之分。颗粒粗的分离效果差，流速快。颗粒越细分离效果越好，
但流速也越慢。交联葡聚糖工作时的pH稳定在2～11的范围内。葡聚糖G型凝胶分离的分子量分级范围为700～8×105。SephadexG型葡聚糖凝胶的数据见下表
。
*本表数值取自Pharmacia Biotech Biodirectory 1996。 **为2.6×30cm层析柱在25℃用蒸馏水测定之值。 D＝Darcy’s law (2)凝胶的溶胀*
G系交联葡聚糖凝胶亲水性强，只能在水中溶胀（仅有少量的有机溶剂也可以使之溶胀），有机溶剂或含有有机溶剂较多的水溶液会改变其孔隙，使之收缩失去或降低凝胶的分离能力。在水中溶胀时如在室温则需要较长时间，才能达到充分溶胀的程度，但可煮沸到100℃，以缩短其溶胀时间。见下表 Sephadex G型葡聚糖凝胶溶胀所需时间
*溶胀时要将凝胶浸泡在过量的水或缓冲液中。在整个溶胀过程中应避免剧烈地搅拌，尤其不能使用电磁搅拌，以免破坏了它的颗粒结构，以及产生许多碎末而影响洗脱时的流速。
（3）凝胶的回收与保存
凝胶的再生最好不要在柱上进行（有些凝胶可以在
位清洗），可将凝胶在0.5mol/L氯化钠及0.5mol/L氢氧化钠的混合溶液中浸泡；一般约需30分钟以上。然后用蒸馏水洗至中性，最后用缓冲液平衡即可恢复使用。
经常使用的凝胶，一般加入一些抗菌剂放在普通冰箱中，即可保存较长的时间。如确切在相当长的时间里不准备使用时，则以保存干凝胶为好。处理时可先用较浓的氯化钠浸泡（如0.5mol/L）,在用0.5mol/L的氢氧化钠处理并用蒸馏水洗至中性，然后用递增百分比浓度的乙醇分多次作脱水处理。一般可从30％的乙醇开始；每次均应让凝胶在乙醇中多浸泡一些时间。在无水乙醇处理后，最后再用乙醚处理一次以加速乙醇的挥发。处理后的凝胶宜在80℃以下的温度烘干。在进行凝胶的回收时，如在每一步操作时，均使用布氏漏斗抽滤可大大地加快整个回收过程。 【注意】
a．凝胶在氢氧化钠溶液中浸泡的时间不要太长。
b．不要图快过早地使用百分浓度太大地乙醇，以免凝胶颗粒收缩太快，破坏了它地结构，因而影响了它地分离能力。
c．在乙醚未充分挥发完以前，切不可将含有多量乙醚地凝胶放入烘箱，以免发生危险。
d．溶胀了地凝胶不可放入低温冰箱中冻结，以免其球形结构被破坏。
微生物学实验常用培养基的配制 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）
牛肉膏 3g 蛋白胨 5g 氯化钠 10g 琼脂 15~20g pH 7.0~7.2
水
1000mL
121℃灭菌20min。
2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉 20g 硝酸钾 1g 氯化钠 0.5g 磷酸氢二钾 0.5g 硫酸镁 0.5g 硫酸亚铁 0.01g 琼脂 20g
水
1000mL
pH 7.2～7.4
配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。
3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用） 硝酸钠 2g 磷酸氢二钾 1g 氯化钾 0.5g 硫酸镁 0.5g 硫酸亚铁 0.01g 蔗糖 30g 琼脂 15~20g 水 1000mL
pH
自然
121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用） 葡萄糖 10g 蛋白胨 5g 磷酸二氢钾 1g 七水合硫酸镁 0.5g 1/3000孟加拉红（rose 100mL
bengal，玫瑰红水溶液） 琼脂 15—20g
pH 自然
蒸馏水
800mL 112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用） 马铃薯
200g 蔗糖（或葡萄糖） 20g 琼脂 15—20g
pH
自然
培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。121℃灭菌30min。