实验二、细菌培养基地制备
一、目的
1. 常用细菌普通培养基的制备
2. 学会培养基的PH 值的矫正方法
二、培养基的种类和基本要求
三、实验内容
1. 肉水电制备：剔除瘦牛肉的脂肪、肌腱等，切成1.5cm 3的方块，称重，加倍量水煮沸2h. 搅拌，过滤，
补加水至原体积分装，封口，高压灭菌。
2. 普通肉汤培养基的制备，每组称量200ml 肉水分别按1%和5%加入蛋白胨和NaCl ，微波炉溶解，矫
正PH 值7.2-7.6，微波炉沉淀蛋白质20min ，每组过滤，分装2试管，包装后高压灭菌。
3. 普通琼脂培养基的制备：称量剩余的肉汤，按2%加入洗过的琼脂，微波炉溶解，每人分装1试管，
包装，余下的普通琼脂培养基统一包装于500ml 瓶内，高压灭菌。
4. 蛋白胨水培养基的制备：以蒸馏水制备含有蛋白胨和NaCl 培养基，方法同2
5. 葡萄糖蛋白胨水培养基的制备：在蛋白胨水培养基中加入1%的葡萄糖。
6. 糖发酵培养基的制备：蛋白胨水培养基中加入1%的不同糖和1%溴甲酚紫分装糖发酵管中。
四、实验报告内容
1. 培养基的种类、基本要求及原因。
（一）基础培养基
含有基础生长所需的基本营养成分，最常用的是肉浸液，俗称肉汤，主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。基础培养基广泛用于细菌的增菌、检验，也是制备其他培养基的基础成分。
（二）营养培养基
在基础培养基中可加入葡萄糖、血液、生长因子等特殊成分，供营养要求较高的细菌和需要特殊生长因子的细菌生长。最常用的是血琼脂平板、巧克力血平板等。
（三）鉴别培养基
利用细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物的不同，在培养基中加入特定的作用底物和指示剂，观察细菌生长过程中分解底物所释放的不同产物，通过指示剂的反应不同来鉴别细菌。例如糖发酵管、克氏双糖铁琼脂（KIA ）、伊红-美蓝琼脂和动力-吲哚-尿素（MIU ）培养基等。
（四）选择培养基
在培养基中加入抑制剂，去抑制标本中的杂菌生长，有助于对所选择的细菌种类的生长。例如培养肠道致病菌的SS 琼脂，其中的胆盐能抑制革兰阳性菌，枸橼酸钠和煌绿能抑制大肠埃希菌，因而使致病的沙门菌、志贺菌容易分离到。
（五）特殊培养基
包括厌氧培养基和细菌L 型培养基等。前者是培养专性厌氧菌的培养基，除含营养成分外，还加入还原剂以降低培养基的氧化还原电势，如疱肉培养基、琉基乙醇酸钠培养基等。后者是针对细胞壁缺损的细菌L 型，由于胞内渗透压较高，故培养基必须采用高渗（3％～5％NaCl 、10％～20％蔗糖或7％聚乙烯吡咯烷酮等）低琼脂培养基。
2. PH 矫正方法，该组实验结果及计算过程。
PH 矫正方法：酸度用HCL 来调，碱度用0.1mol/LNaOH来调，用PH 试纸，比色法。
3. 本实验制备的各种培养基用什么实验。
普通肉汤培养基：一般细菌培养，HOS 实验
普通琼脂培养基：琼脂起到凝固的作用，用于一般细菌的增菌及计数培养
蛋白胨水培养基：可作靛基质基础液，用于靛基质实验。
葡萄糖蛋白胨水培养基：用于M.R 和V.P . 实验
糖发酵培养基：适用于微球菌科和非发酵菌的鉴定．
附：所需0.1mol/LNaOH量=（培养基量×矫正时用去0.1mol/L的量）/5
实验二、细菌培养基地制备
一、目的
1. 常用细菌普通培养基的制备
2. 学会培养基的PH 值的矫正方法
二、培养基的种类和基本要求
三、实验内容
1. 肉水电制备：剔除瘦牛肉的脂肪、肌腱等，切成1.5cm 3的方块，称重，加倍量水煮沸2h. 搅拌，过滤，
补加水至原体积分装，封口，高压灭菌。
2. 普通肉汤培养基的制备，每组称量200ml 肉水分别按1%和5%加入蛋白胨和NaCl ，微波炉溶解，矫
正PH 值7.2-7.6，微波炉沉淀蛋白质20min ，每组过滤，分装2试管，包装后高压灭菌。
3. 普通琼脂培养基的制备：称量剩余的肉汤，按2%加入洗过的琼脂，微波炉溶解，每人分装1试管，
包装，余下的普通琼脂培养基统一包装于500ml 瓶内，高压灭菌。
4. 蛋白胨水培养基的制备：以蒸馏水制备含有蛋白胨和NaCl 培养基，方法同2
5. 葡萄糖蛋白胨水培养基的制备：在蛋白胨水培养基中加入1%的葡萄糖。
6. 糖发酵培养基的制备：蛋白胨水培养基中加入1%的不同糖和1%溴甲酚紫分装糖发酵管中。
四、实验报告内容
1. 培养基的种类、基本要求及原因。
（一）基础培养基
含有基础生长所需的基本营养成分，最常用的是肉浸液，俗称肉汤，主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。基础培养基广泛用于细菌的增菌、检验，也是制备其他培养基的基础成分。
（二）营养培养基
在基础培养基中可加入葡萄糖、血液、生长因子等特殊成分，供营养要求较高的细菌和需要特殊生长因子的细菌生长。最常用的是血琼脂平板、巧克力血平板等。
（三）鉴别培养基
利用细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物的不同，在培养基中加入特定的作用底物和指示剂，观察细菌生长过程中分解底物所释放的不同产物，通过指示剂的反应不同来鉴别细菌。例如糖发酵管、克氏双糖铁琼脂（KIA ）、伊红-美蓝琼脂和动力-吲哚-尿素（MIU ）培养基等。
（四）选择培养基
在培养基中加入抑制剂，去抑制标本中的杂菌生长，有助于对所选择的细菌种类的生长。例如培养肠道致病菌的SS 琼脂，其中的胆盐能抑制革兰阳性菌，枸橼酸钠和煌绿能抑制大肠埃希菌，因而使致病的沙门菌、志贺菌容易分离到。
（五）特殊培养基
包括厌氧培养基和细菌L 型培养基等。前者是培养专性厌氧菌的培养基，除含营养成分外，还加入还原剂以降低培养基的氧化还原电势，如疱肉培养基、琉基乙醇酸钠培养基等。后者是针对细胞壁缺损的细菌L 型，由于胞内渗透压较高，故培养基必须采用高渗（3％～5％NaCl 、10％～20％蔗糖或7％聚乙烯吡咯烷酮等）低琼脂培养基。
2. PH 矫正方法，该组实验结果及计算过程。
PH 矫正方法：酸度用HCL 来调，碱度用0.1mol/LNaOH来调，用PH 试纸，比色法。
3. 本实验制备的各种培养基用什么实验。
普通肉汤培养基：一般细菌培养，HOS 实验
普通琼脂培养基：琼脂起到凝固的作用，用于一般细菌的增菌及计数培养
蛋白胨水培养基：可作靛基质基础液，用于靛基质实验。
葡萄糖蛋白胨水培养基：用于M.R 和V.P . 实验
糖发酵培养基：适用于微球菌科和非发酵菌的鉴定．
附：所需0.1mol/LNaOH量=（培养基量×矫正时用去0.1mol/L的量）/5