[摘要] 目的 探讨miR-126对卵巢癌细胞株的细胞周期和形态的影响，评价miR-126靶向调控卵巢癌增殖侵袭的作用。 方法 体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3，通过慢病毒包装miR-126并转染卵巢癌SKOV3细胞系，将其分为三组：转染miR-126表达组（SKOV3/LV3-has-miR-126组）、转染阴性对照组（SKOV3/LV3NC组）和空白对照组（SKOV3组），观察转染miR-126后细胞形态变化，并用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期，分析转染miR-126后细胞形态与细胞周期的改变情况。 结果 转染miR-126后卵巢癌细胞组短梭形细胞居多，片状伪足减少，这均不有利于肿瘤细胞的迁移。同时SKOV3组、SKOV3/LV3NC组、SKOV3/LV3-has-miR-126组S期细胞平均比例分别为（53.8±4.5）%、（55.2±4.2）%和（39.7±6.6）%，而G1细胞比例则分别为（43.2±13.2）%、（42.6±13.2）%和（55.6±13.2）%，可见SKOV3组和SKOV3/LV3NC组细胞S期和G1期细胞比例相近（P > 0.05），而与其他两组比较，SKOV3/LV3-has-miR-126组的细胞S期增殖指数较低，而停留在G1的细胞比例则较高，两期比较差异有统计学意义（P [关键词] miR-126；卵巢癌；细胞周期；侵袭 [中图分类号] R737.31 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）07（a）-0021-04 卵巢癌是妇科常见肿瘤之一，其早期症状隐匿，因此约70%卵巢癌患者在确诊时已处于癌症晚期。卵巢癌具有较强的恶性生物学行为，易发生腹腔内的广泛种植，已成为影响妇女生命的最主要的肿瘤之一[1-2]。卵巢癌的侵袭转移而产生的各种并发症及器官衰竭是卵巢癌患者死亡的主要原因，目前卵巢癌的发生和发展机制尚未完全明确，而阐明其侵袭转移机制是卵巢癌根治的关键环节之一，因此，卵巢癌的侵袭转移机制已成为国内外研究的热点，一般认为恶性肿瘤的侵袭转移涉及肿瘤细胞从原发灶的脱离、蛋白酶水解周围基底膜以及肿瘤细胞迁移到蛋白酶水解部位等过程[3-5]，上述的肿瘤侵袭转移过程具有肿瘤血管依赖性，其中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及其受体调控途径是肿瘤血管形成的最重要因素。郎景和课题组研究表明卵巢癌患者术前血清VEGF水平是影响卵巢癌预后的独立因素，且与卵巢癌的复发密切相关，VEGF表达水平升高是患者预后不良的标志[6]，因此如何从源头上抑制VEGF的表达无疑成为卵巢癌的有效治疗方法之一。 microRNA是真核细胞内的非编码微小RNA，大量研究表明miRNA与多种肿瘤的发生、发展密切相关，其可能发挥着抑癌基因或癌基因的作用[6-7]。miR-126是作为一种特异性表达的microRNA，是新近被鉴定的血管生成相关microRNA，它们来源于共同的前体结构，位于染色体9q34.3上EGFL7基因内含子中，少数情况下也可位于EGFL7基因外显子及部分非编码区域，研究证实miR-126通过VEGF mRNA 3'UTR中的互补位点结合，在翻译水平抑制VEGF的表达[8-9]，它能够通过调控VEGF等基因的表达参与调控血管发育，新生血管形成以及血管炎性反应等血管的生理和病理生理过程[10]。研究表明miR-126可以抑制多种肿瘤的增殖和转移，如肺癌，乳腺癌，结肠癌等，提示miR-126可能具有潜在的抑癌基因作用，但其在卵巢癌中的作用尚未阐明[11-13]。本研究通过体外培养SKOV3卵巢癌细胞株，同时通过慢病毒转染miR-126的基因，复制SKOV3卵巢癌细胞株miR-126过表达模型，以探讨miR-126对卵巢癌细胞株的细胞周期及细胞形态改变的影响，评价miR-126靶向调控卵巢癌增殖侵袭的作用。 1 材料与方法 1.1 细胞培养 SKOV3细胞株购自南京凯基生物科技发展有限公司，将SKOV3细胞移入培养瓶中，加入新鲜培养液，适当稀释细胞（含细胞的冻存液：新鲜培养液=1�9），放置CO2培养箱中培养，待细胞贴壁后换液去除二甲亚砜（DMSO）；或者将细胞低速离心（1500 r/min，5 min）以直接去除含DMSO的培养液，然后加入新鲜培养基，轻轻吹打接种到培养瓶中。 1.2 慢病毒转染 miR-126质粒构建和慢病毒包装由上海吉玛制药技术有限公司完成，参照慢病毒说明书，取对数生长期细胞，接种于6 cm培养皿，每孔细胞数为3×105个，加2 mL全培养基培养，24 h后待细胞长至80%～90%融合时，用2 mL无血清培养基洗细胞1次，准备转染。实验分3组：转染miR-126表达组（SKOV3/LV3-has-miR-126组）：1 mL培养基+45 μL LV3-has-miR-126慢毒原液+1 μL 5 g/L凝聚胺溶液（polybrene）；转染阴性对照组（SKOV3/LV3NC组）：1 mL培养基+45 μL LV3NC慢病毒原液+1 μL 5 g/L polybrene；空白对照组（SKOV3组）：1 mL培养基+1 μL l5 g/L polybrene，混合均匀后放入培养箱培养24 h，然后更换正常的培养基继续培养24 h后，取出培养皿，直接在倒置荧光显微镜下进行观察、细胞计数并拍照，随机计数100个细胞，计算有绿色荧光的细胞所占细胞总数的百分比，即为转染效率。LV3-has-miR-126寡核苷酸序列为5'-TCGTACCGTGAGTAATAATGCG-3'，LV3NC寡核苷酸序列为5'-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3'。慢病毒上均含有编码GFP的基因，故转染细胞在荧光显微镜下可激发出绿色荧光。在荧光显微镜下观察计数，细胞的转染效率为70%～90%。 1.3 细胞生长周期检测 对数期生长的细胞（细胞总数≥1×106个），0.25%胰酶消化成细胞悬液，1500 r/min离心10 min，弃上清；PBS洗涤1次，1500 r/min离心10 min，弃上清；加入0.3 mL PBS（含10%小牛血清30 μL）重悬；悬液加至放有0.7 mL无水乙醇的EP管内，20℃保存。碘化丙啶（PI）染色：-20℃固定的细胞3000 r/min离心1 min，PBS洗涤两次，每次1500 r/min离心10 min，弃上清，加入0.1 mL RNaseA（1 mg/mL），37℃水浴30 min，加入0.4 mL PI，暗处染色20 min。流式细胞仪分析DNA含量分布、Multicycle软件分析DNA合成前期（G1），DNA合成期（S）细胞的比例。 1.4 统计学方法 采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P 2 结果 2.1 细胞转染结果 三组细胞均呈单层贴壁生长，SKOV3组和阴性转染对照组细胞为短梭形或呈多角形，胞核均呈圆形或椭圆形胞质透亮。LV3-has-miR-126组卵巢癌细胞组短梭形细胞居多，片状伪足减少，提示miR-126可一定程度上改变卵巢癌细胞的形态，这均不有利于肿瘤细胞的迁移（图1，封三）。 2.2 三组卵巢癌细胞细胞周期的检测 经流式细胞仪检测三组细胞的细胞周期分析发现，SKOV3组、SKOV3/LV3NC组、SKOV3/LV3-has-miR-126组S期细胞平均比例分别为（53.8±4.5）%、（55.2±4.2）%和（39.7±6.6）%，而G1细胞比例则分别为（43.2±13.2）%、（42.6±13.2）%和（55.6±13.2）%，上述数据显示SKOV3组和SKOV3/LV3 NC组细胞S期和G1期细胞比例比较，差异无统计学意义（P > 0.05）；与SKOV3组和SKOV3/LV3NC组细胞比较，SKOV3/LV3-has-miR-126组的细胞S期增殖指数较低而停留在G1的细胞比例则较高，差异有统计学意义（P 3 讨论 近来年，microRNA作为一种真核细胞内的非编码微小RNA，在肿瘤发生发展中的作用已成为研究的热点之一。大量研究证明miRNA参与了细胞的增殖、分化、凋亡，在肿瘤的发生中，miRNA 扮演着癌基因或者抑癌基因的角色，不同类型的肿瘤发生中有着不同miRNA表达的改变，特征性miRNA表达的改变预示着肿瘤患者的预后和生存[14-15]。 上皮性卵巢癌是严重威胁女性健康的常见恶性肿瘤之一，其侵袭转移是卵巢癌致死的重要原因，其发生机制目前尚未完全明确[16-17]。研究卵巢癌的侵袭转移机制可以为临床患者的治疗提供实验基础，为卵巢癌的治疗提供新的靶点。MiR-126是一种新发现的与血管生成相关的microRNA，研究发现miR-126在血管化组织中表达较正常组织明显增加，并且，miR-126是目前发现的唯一的在内皮细胞系和造血始祖细胞中特异性表达的miRNA，大量研究表明，miR-126与多种肿瘤的发生发展相关，如乳腺癌、肺癌、前列腺癌等，通过抑制肿瘤细胞的增生、迁移和侵袭转移，或者抑制调控相关因子的表达[11-13]。在原发性乳腺癌中，miR-126的表达下降，同时发现与miR-126表达高的乳腺癌患者相比，miR-126低表达的患者远处转移能力明显增强，预后较差[18]。上述研究提示miR-126的表达水平可能与肿瘤细胞的增殖与侵袭转移相关。细胞周期通常可划分为分裂间期和分裂期，分裂间期是物质准备和积累阶段，分裂期则是细胞增殖的实施过程。整个周期表示为：G1期-S期-G2期-M期，其中分裂间期又常常可以划分为G1、S和DNA合成后期（G2），在此期间的任务主要是完成染色质中的DNA复制和相关蛋白质的合成，通常认为细胞S期细胞数目与增殖密切相关，而G1的细胞比例高认为细胞增殖抑制[19-20]，本研究结果显示，SKOV3/LV3-has-miR-126组的细胞S期细胞明显减少，而停留在G1的细胞比例则较高，表明miR-126过表达后，细胞S期合成显著抑制。 综上所述，SKOV3细胞内过表达miR-126后，卵巢癌细胞形态呈短梭形，片状伪足减少，不有利于肿瘤细胞的迁移。同时S期细胞减少而G1的细胞增多，癌细胞增殖受抑制，提示miR-126是卵巢癌治疗的潜在靶点，为卵巢癌的治疗提供了新的思路。 [参考文献] [1] Fader AN，Java J，Ueda S，et al. Survival in women with grade 1 serous ovariancarcinoma [J]. Obstet Gynecol，2013，122（2 Pt 1）：225-232. [2] Kmietowicz Z. Death rate from ovarian cancer in England has fallen by a fifth since 2001 [J]. BMJ，2012，345：e7861. [3] Ho CS，Yap SH，Phuah NH，et al. MicroRNAs associated with tumour migration，invasion and angiogenic properties in A549 and SK-Lu1 human lung adenocarcinoma cells [J]. Lung Cancer，2014，83（2）：154-162. [4] 江忠清，陈小芳，孙蓬明，等.不同转移能力的卵巢上皮性癌细胞中matriptase mRNA和蛋白的表达及与其转移能力的相关性[J].中华妇产科杂志，2013，48（5）：370-374. [5] 郭清，吴小华.腹腔微环境与卵巢上皮性癌腹腔转移关系的研究进展[J].中华妇产科杂志，2013，48（5）：388-390. [6] 谭先杰，郎景和，沈铿，等.卵巢上皮性癌患者术前血清血管内皮生长因子与CA125水平的相关性及其预测预后的价值[J].中华妇产科杂志，2008，43（1）：9-12. [7] To KK. MicroRNA：a prognostic biomarker and a possible druggable target for circumventing multidrug resistance in cancer chemotherapy [J]. J Biomed Sci，2013，20（1）：99. [8] Sasahira T，Kurihara M，Bhawal UK，et al. Downregulation of miR-126 induces angiogenesis and lymphangiogenesis by activation of VEGF-A in oral cancer [J]. Br J Cancer，2012，107（4）：700-706. [9] Zhang Y，Wang X，Xu B，et al. Epigenetic silencing of miR-126 contributes to tumor invasion and angiogenesis in colorectal cancer [J]. Oncol Rep，2013，30（4）：1976-1984. [10] Li Z，Li N，Wu M，et al. Expression of miR-126 suppresses migration and invasion of colon cancer cells by targeting CXCR4 [J]. Mol Cell Biochem，2013，381（1-2）：233-242. [11] Zhu X，Li H，Long L，et al. miR-126 enhances the sensitivity of non-small cell lung cancer cells to anticancer agents by targeting vascular endothelial growth factor A [J]. Acta Biochim Biophys Sin （Shanghai），2012，44（6）：519-526. [12] Bai Y，Bai X，Wang Z，et al. MicroRNA-126 inhibits ischemia-induced retinal neovascularization via regulating angiogenic growth factors [J]. Exp Mol Pathol，2011，91（1）：471-477. [13] Donnem T，Lonvik K，Eklo K，et al. Independent and tissue-specific prognostic impact of miR-126 in nonsmall cell lung cancer：coexpression with vascular endothelial growth factor-A predicts poor survival [J]. Cancer，2011， 117（14）：3193-3200. [14] Zhou X，Liu J，Ye X，et al. Ensemble classifier based on context specific miRNA regulation modules： a new method for cancer outcome prediction [J]. BMC Bioinformatics，2013，14（12）：6. [15] Yan JW，Lin JS，He XX. The emerging role of miR-375 in cancer [J]. Int J Cancer，2013，1（1）：122-124. [16] Liliac L，Amalinei C，Balan R，et al. Ovarian cancer：insights into genetics and pathogeny [J]. Histol Histopathol，2012，27（6）：707-719. [17] Rosanò L，Spinella F，Bagnato A. The importance of endothelin axis in initiation，progression， and therapy of ovarian cancer [J]. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol，2010，299（2）：395-404. [18] Hoppe R，Achinger-Kawecka J，Winter S，et al. Increased expression of miR-126 and miR-10a predict prolonged relapse-free time of primary oestrogen receptor-positive breast cancer following tamoxifen treatment [J]. Eur J Cancer，2013，49（17）：3598-3608. [19] Yang ZL，Cheng K，Han ZD. Effect of bFGF on the MCF-7 cell cycle with CD44（+）/CD24（-）：promoting the G0/G1→G2/S transition [J]. J Breast Cancer，2012，15（4）：388-392. [20] Ho K，Yazan LS，Ismail N， et al. Apoptosis and cell cycle arrest of human colorectal cancer cell line HT-29 induced by vanillin [J]. Cancer Epidemiol，2009，33（2）：155-160. （收稿日期：2014-03-31 本文编辑：任 念）
[摘要] 目的 探讨miR-126对卵巢癌细胞株的细胞周期和形态的影响，评价miR-126靶向调控卵巢癌增殖侵袭的作用。 方法 体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3，通过慢病毒包装miR-126并转染卵巢癌SKOV3细胞系，将其分为三组：转染miR-126表达组（SKOV3/LV3-has-miR-126组）、转染阴性对照组（SKOV3/LV3NC组）和空白对照组（SKOV3组），观察转染miR-126后细胞形态变化，并用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期，分析转染miR-126后细胞形态与细胞周期的改变情况。 结果 转染miR-126后卵巢癌细胞组短梭形细胞居多，片状伪足减少，这均不有利于肿瘤细胞的迁移。同时SKOV3组、SKOV3/LV3NC组、SKOV3/LV3-has-miR-126组S期细胞平均比例分别为（53.8±4.5）%、（55.2±4.2）%和（39.7±6.6）%，而G1细胞比例则分别为（43.2±13.2）%、（42.6±13.2）%和（55.6±13.2）%，可见SKOV3组和SKOV3/LV3NC组细胞S期和G1期细胞比例相近（P > 0.05），而与其他两组比较，SKOV3/LV3-has-miR-126组的细胞S期增殖指数较低，而停留在G1的细胞比例则较高，两期比较差异有统计学意义（P [关键词] miR-126；卵巢癌；细胞周期；侵袭 [中图分类号] R737.31 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）07（a）-0021-04 卵巢癌是妇科常见肿瘤之一，其早期症状隐匿，因此约70%卵巢癌患者在确诊时已处于癌症晚期。卵巢癌具有较强的恶性生物学行为，易发生腹腔内的广泛种植，已成为影响妇女生命的最主要的肿瘤之一[1-2]。卵巢癌的侵袭转移而产生的各种并发症及器官衰竭是卵巢癌患者死亡的主要原因，目前卵巢癌的发生和发展机制尚未完全明确，而阐明其侵袭转移机制是卵巢癌根治的关键环节之一，因此，卵巢癌的侵袭转移机制已成为国内外研究的热点，一般认为恶性肿瘤的侵袭转移涉及肿瘤细胞从原发灶的脱离、蛋白酶水解周围基底膜以及肿瘤细胞迁移到蛋白酶水解部位等过程[3-5]，上述的肿瘤侵袭转移过程具有肿瘤血管依赖性，其中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及其受体调控途径是肿瘤血管形成的最重要因素。郎景和课题组研究表明卵巢癌患者术前血清VEGF水平是影响卵巢癌预后的独立因素，且与卵巢癌的复发密切相关，VEGF表达水平升高是患者预后不良的标志[6]，因此如何从源头上抑制VEGF的表达无疑成为卵巢癌的有效治疗方法之一。 microRNA是真核细胞内的非编码微小RNA，大量研究表明miRNA与多种肿瘤的发生、发展密切相关，其可能发挥着抑癌基因或癌基因的作用[6-7]。miR-126是作为一种特异性表达的microRNA，是新近被鉴定的血管生成相关microRNA，它们来源于共同的前体结构，位于染色体9q34.3上EGFL7基因内含子中，少数情况下也可位于EGFL7基因外显子及部分非编码区域，研究证实miR-126通过VEGF mRNA 3'UTR中的互补位点结合，在翻译水平抑制VEGF的表达[8-9]，它能够通过调控VEGF等基因的表达参与调控血管发育，新生血管形成以及血管炎性反应等血管的生理和病理生理过程[10]。研究表明miR-126可以抑制多种肿瘤的增殖和转移，如肺癌，乳腺癌，结肠癌等，提示miR-126可能具有潜在的抑癌基因作用，但其在卵巢癌中的作用尚未阐明[11-13]。本研究通过体外培养SKOV3卵巢癌细胞株，同时通过慢病毒转染miR-126的基因，复制SKOV3卵巢癌细胞株miR-126过表达模型，以探讨miR-126对卵巢癌细胞株的细胞周期及细胞形态改变的影响，评价miR-126靶向调控卵巢癌增殖侵袭的作用。 1 材料与方法 1.1 细胞培养 SKOV3细胞株购自南京凯基生物科技发展有限公司，将SKOV3细胞移入培养瓶中，加入新鲜培养液，适当稀释细胞（含细胞的冻存液：新鲜培养液=1�9），放置CO2培养箱中培养，待细胞贴壁后换液去除二甲亚砜（DMSO）；或者将细胞低速离心（1500 r/min，5 min）以直接去除含DMSO的培养液，然后加入新鲜培养基，轻轻吹打接种到培养瓶中。 1.2 慢病毒转染 miR-126质粒构建和慢病毒包装由上海吉玛制药技术有限公司完成，参照慢病毒说明书，取对数生长期细胞，接种于6 cm培养皿，每孔细胞数为3×105个，加2 mL全培养基培养，24 h后待细胞长至80%～90%融合时，用2 mL无血清培养基洗细胞1次，准备转染。实验分3组：转染miR-126表达组（SKOV3/LV3-has-miR-126组）：1 mL培养基+45 μL LV3-has-miR-126慢毒原液+1 μL 5 g/L凝聚胺溶液（polybrene）；转染阴性对照组（SKOV3/LV3NC组）：1 mL培养基+45 μL LV3NC慢病毒原液+1 μL 5 g/L polybrene；空白对照组（SKOV3组）：1 mL培养基+1 μL l5 g/L polybrene，混合均匀后放入培养箱培养24 h，然后更换正常的培养基继续培养24 h后，取出培养皿，直接在倒置荧光显微镜下进行观察、细胞计数并拍照，随机计数100个细胞，计算有绿色荧光的细胞所占细胞总数的百分比，即为转染效率。LV3-has-miR-126寡核苷酸序列为5'-TCGTACCGTGAGTAATAATGCG-3'，LV3NC寡核苷酸序列为5'-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3'。慢病毒上均含有编码GFP的基因，故转染细胞在荧光显微镜下可激发出绿色荧光。在荧光显微镜下观察计数，细胞的转染效率为70%～90%。 1.3 细胞生长周期检测 对数期生长的细胞（细胞总数≥1×106个），0.25%胰酶消化成细胞悬液，1500 r/min离心10 min，弃上清；PBS洗涤1次，1500 r/min离心10 min，弃上清；加入0.3 mL PBS（含10%小牛血清30 μL）重悬；悬液加至放有0.7 mL无水乙醇的EP管内，20℃保存。碘化丙啶（PI）染色：-20℃固定的细胞3000 r/min离心1 min，PBS洗涤两次，每次1500 r/min离心10 min，弃上清，加入0.1 mL RNaseA（1 mg/mL），37℃水浴30 min，加入0.4 mL PI，暗处染色20 min。流式细胞仪分析DNA含量分布、Multicycle软件分析DNA合成前期（G1），DNA合成期（S）细胞的比例。 1.4 统计学方法 采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P 2 结果 2.1 细胞转染结果 三组细胞均呈单层贴壁生长，SKOV3组和阴性转染对照组细胞为短梭形或呈多角形，胞核均呈圆形或椭圆形胞质透亮。LV3-has-miR-126组卵巢癌细胞组短梭形细胞居多，片状伪足减少，提示miR-126可一定程度上改变卵巢癌细胞的形态，这均不有利于肿瘤细胞的迁移（图1，封三）。 2.2 三组卵巢癌细胞细胞周期的检测 经流式细胞仪检测三组细胞的细胞周期分析发现，SKOV3组、SKOV3/LV3NC组、SKOV3/LV3-has-miR-126组S期细胞平均比例分别为（53.8±4.5）%、（55.2±4.2）%和（39.7±6.6）%，而G1细胞比例则分别为（43.2±13.2）%、（42.6±13.2）%和（55.6±13.2）%，上述数据显示SKOV3组和SKOV3/LV3 NC组细胞S期和G1期细胞比例比较，差异无统计学意义（P > 0.05）；与SKOV3组和SKOV3/LV3NC组细胞比较，SKOV3/LV3-has-miR-126组的细胞S期增殖指数较低而停留在G1的细胞比例则较高，差异有统计学意义（P 3 讨论 近来年，microRNA作为一种真核细胞内的非编码微小RNA，在肿瘤发生发展中的作用已成为研究的热点之一。大量研究证明miRNA参与了细胞的增殖、分化、凋亡，在肿瘤的发生中，miRNA 扮演着癌基因或者抑癌基因的角色，不同类型的肿瘤发生中有着不同miRNA表达的改变，特征性miRNA表达的改变预示着肿瘤患者的预后和生存[14-15]。 上皮性卵巢癌是严重威胁女性健康的常见恶性肿瘤之一，其侵袭转移是卵巢癌致死的重要原因，其发生机制目前尚未完全明确[16-17]。研究卵巢癌的侵袭转移机制可以为临床患者的治疗提供实验基础，为卵巢癌的治疗提供新的靶点。MiR-126是一种新发现的与血管生成相关的microRNA，研究发现miR-126在血管化组织中表达较正常组织明显增加，并且，miR-126是目前发现的唯一的在内皮细胞系和造血始祖细胞中特异性表达的miRNA，大量研究表明，miR-126与多种肿瘤的发生发展相关，如乳腺癌、肺癌、前列腺癌等，通过抑制肿瘤细胞的增生、迁移和侵袭转移，或者抑制调控相关因子的表达[11-13]。在原发性乳腺癌中，miR-126的表达下降，同时发现与miR-126表达高的乳腺癌患者相比，miR-126低表达的患者远处转移能力明显增强，预后较差[18]。上述研究提示miR-126的表达水平可能与肿瘤细胞的增殖与侵袭转移相关。细胞周期通常可划分为分裂间期和分裂期，分裂间期是物质准备和积累阶段，分裂期则是细胞增殖的实施过程。整个周期表示为：G1期-S期-G2期-M期，其中分裂间期又常常可以划分为G1、S和DNA合成后期（G2），在此期间的任务主要是完成染色质中的DNA复制和相关蛋白质的合成，通常认为细胞S期细胞数目与增殖密切相关，而G1的细胞比例高认为细胞增殖抑制[19-20]，本研究结果显示，SKOV3/LV3-has-miR-126组的细胞S期细胞明显减少，而停留在G1的细胞比例则较高，表明miR-126过表达后，细胞S期合成显著抑制。 综上所述，SKOV3细胞内过表达miR-126后，卵巢癌细胞形态呈短梭形，片状伪足减少，不有利于肿瘤细胞的迁移。同时S期细胞减少而G1的细胞增多，癌细胞增殖受抑制，提示miR-126是卵巢癌治疗的潜在靶点，为卵巢癌的治疗提供了新的思路。 [参考文献] [1] Fader AN，Java J，Ueda S，et al. 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