醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质
一、实验原理
1、电泳是带电粒子在电场作用下向着与其电荷相反的电极移动的过程。许多生物分子如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可解离基团，它们在某个特定的pH 值下可以带正电荷或负电荷。其电荷的多少取决于分子组成、性质及其所用电泳介质的pH 值。
电泳技术就是利用在电场的作用下，被分离物质中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移方向和速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。
2、蛋白质是两性电解质，在pH 小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极；在pH 大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同，故可用电泳法将它们分离。由下表知血清中五种蛋白质的等电点大部分低于pH7.0，所以在缓冲液（pH8.6）中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。
表 1人血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量
3、醋酸纤维素薄膜是有一层薄薄的聚乙烯和压附在其上的醋酸纤维素酯构成的。醋酸纤维素薄膜经透明液处理后即透明，故可获得背景为无色的电泳图谱。
二、实验试剂
1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，0.075mol/L）
2、氨基黑10B 染色液
3、漂洗液：95%乙醇45mL ，冰乙酸5mL ，加50mL 蒸馏水，混匀（临用时配制）
4、透明液：冰乙酸：无水乙醇=1：3(V:V)，混匀（临用时配制）
三、实验器材
醋酸纤维薄膜，人血清（新鲜、无溶血现象），培养皿，点样玻片，电吹风，直流稳压电泳仪，电泳槽
四、实验步骤
1、准备和点样
取一条2cm*8cm的醋酸纤维薄膜浸入缓冲液中，完全浸透后，用镊子轻轻取出，将薄膜无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，薄膜上再放一张干净滤纸，吸去多余的缓冲液。
滴一滴血清在一片载玻片上，再用另一片宽度小于薄膜的载玻片的界面轻轻在液滴上蘸一下，然后轻轻与距纤维薄膜一端1.5cm 处接触，样品即呈一条状涂于纤维膜上，注意点样量要少。迅速将薄膜平贴于已放在电泳槽上，并已浸透缓冲液的纱布上，点样端为阴极。薄膜在纱布桥上应保持平直，薄膜之间应保持一定的间隔。
2、电泳
接通电源，进行电泳。电压110V ，电泳60min 。
3、染色
电泳完毕，将薄膜浸于染色液中5~10min，取出，用漂洗液漂至背景无色（约4~5次），再浸于蒸馏水中。
4、透明
用电吹风将薄膜吹干，待薄膜完全干燥后，浸入透明液中约2~3min，取出，平贴于干净玻璃片上，干燥，即得背景透明的电泳图谱，此图谱可长期保存。
五、实验结果
六、分析与讨论
1、在电场作用下，带电量大的分子移动的速度较快；带电量相同时，质量小的分子移动的较快，因此本次血清蛋白电泳图谱中各条带由远至近依次是白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白。
2、本次实验中染色时间略短，导致最终的个别条带颜色不清楚。点样量掠多，有拖尾现象。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质
一、实验原理
1、电泳是带电粒子在电场作用下向着与其电荷相反的电极移动的过程。许多生物分子如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可解离基团，它们在某个特定的pH 值下可以带正电荷或负电荷。其电荷的多少取决于分子组成、性质及其所用电泳介质的pH 值。
电泳技术就是利用在电场的作用下，被分离物质中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移方向和速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。
2、蛋白质是两性电解质，在pH 小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极；在pH 大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同，故可用电泳法将它们分离。由下表知血清中五种蛋白质的等电点大部分低于pH7.0，所以在缓冲液（pH8.6）中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。
表 1人血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量
3、醋酸纤维素薄膜是有一层薄薄的聚乙烯和压附在其上的醋酸纤维素酯构成的。醋酸纤维素薄膜经透明液处理后即透明，故可获得背景为无色的电泳图谱。
二、实验试剂
1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，0.075mol/L）
2、氨基黑10B 染色液
3、漂洗液：95%乙醇45mL ，冰乙酸5mL ，加50mL 蒸馏水，混匀（临用时配制）
4、透明液：冰乙酸：无水乙醇=1：3(V:V)，混匀（临用时配制）
三、实验器材
醋酸纤维薄膜，人血清（新鲜、无溶血现象），培养皿，点样玻片，电吹风，直流稳压电泳仪，电泳槽
四、实验步骤
1、准备和点样
取一条2cm*8cm的醋酸纤维薄膜浸入缓冲液中，完全浸透后，用镊子轻轻取出，将薄膜无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，薄膜上再放一张干净滤纸，吸去多余的缓冲液。
滴一滴血清在一片载玻片上，再用另一片宽度小于薄膜的载玻片的界面轻轻在液滴上蘸一下，然后轻轻与距纤维薄膜一端1.5cm 处接触，样品即呈一条状涂于纤维膜上，注意点样量要少。迅速将薄膜平贴于已放在电泳槽上，并已浸透缓冲液的纱布上，点样端为阴极。薄膜在纱布桥上应保持平直，薄膜之间应保持一定的间隔。
2、电泳
接通电源，进行电泳。电压110V ，电泳60min 。
3、染色
电泳完毕，将薄膜浸于染色液中5~10min，取出，用漂洗液漂至背景无色（约4~5次），再浸于蒸馏水中。
4、透明
用电吹风将薄膜吹干，待薄膜完全干燥后，浸入透明液中约2~3min，取出，平贴于干净玻璃片上，干燥，即得背景透明的电泳图谱，此图谱可长期保存。
五、实验结果
六、分析与讨论
1、在电场作用下，带电量大的分子移动的速度较快；带电量相同时，质量小的分子移动的较快，因此本次血清蛋白电泳图谱中各条带由远至近依次是白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白。
2、本次实验中染色时间略短，导致最终的个别条带颜色不清楚。点样量掠多，有拖尾现象。