如何正确理解自身抗体实验室检测结果

如何正确理解自身抗体实验室检测结果

1. 自身抗体滴度与疾病的相关性

有些自身抗体是高特异性指标。如抗Sm 抗体对SLE 、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体对AIH 等,一旦出现阳性(即使是低滴度),基本上就可做出诊断。但如果这些指标为阴性,也不能排除相关疾病的存在。相反有些指标虽然在疾病中的阳性率比较高,但特异性差,在很多疾病甚至健康人群中均可出现阳性(如ANA ),这种抗体只有在高滴度时,才对相关疾病有诊断意义。自身抗体的滴度不仅对疾病诊断非常重要,并且有些抗体的滴度(如抗dsDNA 抗体) 与疾病的活动度密切相关,可用于疗效和病程监控。

2. 关于抗核抗体(ANA)的滴度范围

检测ANA 的标准方法为间接免疫荧光(IIF)法,最好用Hep-2细胞和灵长类肝冰冻组织切片作为检测基质。我科实验室采用的是德国欧蒙公司Hep-2/猴肝检测ANA 间接免疫荧光试剂盒。其起始稀释度为1:100,滴度超过1:320时,则提示自身免疫性疾病。由于不同检测系统的起始稀释度和滴度系统不同,检测到的滴度数值不能直接进行比较。对ANA 的结果不仅要关心其定性和滴度结果,同时还应了解所用检测系统的实验基质和起始稀释度(正常参考范围)。我科实验室ANA (IIF)的临界值(起始稀释度) 为1:100。

在正常人群中ANA 阳性率3-15%,抗体滴度较低,在年龄大于60岁的正常人群中ANA 阳性率可高达10-37%。

ANA 滴度及临床意义如下:

ANA 滴度 荧光强度 临床意义

1:100 (+) 可疑阳性,继续追踪观察。少数正常人群也可能阳性。

1:320 + 弱阳性,提示可能存在相关疾病。极少数正常人也可能阳性。

1:1000 ++ 中等阳性,提示可能存在相关疾病。

1:3200 +++ 强阳性,高度提示存在相关疾病。

1:10000 ++++ 很强的阳性,高度提示存在相关疾病。

3. 自身抗体检测方法对结果的影响

不同的检测方法对实验结果有一定影响,如抗dsDNA 抗体检测常用的方法有ELISA 、放射免疫分析法和间接免疫荧光法(IIF)。这三种方法所能检测的抗体的亲和力差别很大,放射免疫法的特异性最高,IIF 次之,ELISA 较差。因此ELISA 检出抗dsDNA 阳性时,应用其它方法确认。

4. 自身抗体流行病学资料的积累

在IIF 检测时,很多荧光模型相对应的靶抗原尚不清楚,且这些荧光模型的临床意义不明确。随着对自身免疫性疾病及其相关自身抗体研究的深入,越来越多的以前认为没有临床意义的抗体成为新的研究焦点。因而对于这些结果,实验室也应该报告,以引起临床的重视,通过临床和实验室的共同努力,不断积累这些荧光模型的流行病学资料。

5. 为何患者ANA 阳性,却无明显临床症状?

ANA 阴性结果提示患者体内不存在抗核抗体。若患者仅仅出现ANA 阳性结果而无其他临床表现或指征,则并不提示自身免疫性疾病。主要原因如下:

1)ANA 在健康人群中的阳性率约为3-15%,而且ANA 的产生与患者的年龄相关,年龄在65岁以上的健康人群ANA 阳性率可高达10-37%。另外健康人群在感染病毒的情况下,也可能出现ANA 阳性,但这些抗体多为短暂出现。

2)一些药物治疗可能引起ANA 阳性。因此ANA 阳性需结合患者用药情况综合判断。

3) 一些特殊疾病(如肿瘤)也可能导致ANA 阳性。

目前已有的研究表明,自身抗体往往早于临床症状出现。对于SLE 患者而言,至少有一种以上SLE 相关自身抗体在临床诊断前即已出现(最早达9.4年前,平均为3.3年),而且抗体与疾病特异性越高,出现的时间越晚。另外,随着SLE 病情进展,抗体产生的数量逐渐增加(见参考文献[1])。

6. 如何认识间接免疫荧光法ANA 阴性,而印迹法靶抗原(SSA 、Jo-1、M2、和dsDNA 等)结果阳性的实验结果?

客观上不同的检测方法学之间存在敏感度和特异性的差异。因此针对上述问题应根据靶抗原的实际结果,进行具体情况具体分析。

1)由于SSA 和Jo-1抗原在真核细胞中的表达量不高,而且细胞固定剂对于抗原结构也可能产生影响,因此基于培养细胞作为基质的间接免疫荧光法绝非抗SSA 和Jo-1抗体的最佳检测方法(见参考文献[2])。

2)抗线粒体M2抗体对PBC 疾病的诊断具有良好的敏感性和特异性。有研究表明临床明确诊断的PBC 患者样本,即使应用大鼠肾检测抗线粒体M2抗体也可能出现荧光法阴性而重组抗原方法阳性的结果(见参考文献[3])。

3)对于dsDNA 抗体临床检测,由于不同实验体系中所应用的抗原来源不同、抗原呈现形式不同以及反应条件不同等因素的影响,因此不同实验方法学之间的结果并不具备可比性(见参考文献[4])。

7. 单独出现Ro52抗体阳性是否具有临床意义?

目前已有的研究表明,抗SSA 抗体主要提示干燥综合症、SLE 和新生儿红斑狼疮等疾病。但Ro52抗体在许多疾病中(如风湿性疾病、感染性疾病和自身免疫型肝病等)均有一定的发生率,因此单独Ro52抗体阳性结果缺乏疾病 ,需结合其他检测指标或临床症状综合判断。例如自身免疫性肝炎患者出现SLA/LP抗体和Ro52抗体同时阳性,则提示患者病情较重、预后较差。

如何正确理解自身抗体实验室检测结果

1. 自身抗体滴度与疾病的相关性

有些自身抗体是高特异性指标。如抗Sm 抗体对SLE 、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体对AIH 等,一旦出现阳性(即使是低滴度),基本上就可做出诊断。但如果这些指标为阴性,也不能排除相关疾病的存在。相反有些指标虽然在疾病中的阳性率比较高,但特异性差,在很多疾病甚至健康人群中均可出现阳性(如ANA ),这种抗体只有在高滴度时,才对相关疾病有诊断意义。自身抗体的滴度不仅对疾病诊断非常重要,并且有些抗体的滴度(如抗dsDNA 抗体) 与疾病的活动度密切相关,可用于疗效和病程监控。

2. 关于抗核抗体(ANA)的滴度范围

检测ANA 的标准方法为间接免疫荧光(IIF)法,最好用Hep-2细胞和灵长类肝冰冻组织切片作为检测基质。我科实验室采用的是德国欧蒙公司Hep-2/猴肝检测ANA 间接免疫荧光试剂盒。其起始稀释度为1:100,滴度超过1:320时,则提示自身免疫性疾病。由于不同检测系统的起始稀释度和滴度系统不同,检测到的滴度数值不能直接进行比较。对ANA 的结果不仅要关心其定性和滴度结果,同时还应了解所用检测系统的实验基质和起始稀释度(正常参考范围)。我科实验室ANA (IIF)的临界值(起始稀释度) 为1:100。

在正常人群中ANA 阳性率3-15%,抗体滴度较低,在年龄大于60岁的正常人群中ANA 阳性率可高达10-37%。

ANA 滴度及临床意义如下:

ANA 滴度 荧光强度 临床意义

1:100 (+) 可疑阳性,继续追踪观察。少数正常人群也可能阳性。

1:320 + 弱阳性,提示可能存在相关疾病。极少数正常人也可能阳性。

1:1000 ++ 中等阳性,提示可能存在相关疾病。

1:3200 +++ 强阳性,高度提示存在相关疾病。

1:10000 ++++ 很强的阳性,高度提示存在相关疾病。

3. 自身抗体检测方法对结果的影响

不同的检测方法对实验结果有一定影响,如抗dsDNA 抗体检测常用的方法有ELISA 、放射免疫分析法和间接免疫荧光法(IIF)。这三种方法所能检测的抗体的亲和力差别很大,放射免疫法的特异性最高,IIF 次之,ELISA 较差。因此ELISA 检出抗dsDNA 阳性时,应用其它方法确认。

4. 自身抗体流行病学资料的积累

在IIF 检测时,很多荧光模型相对应的靶抗原尚不清楚,且这些荧光模型的临床意义不明确。随着对自身免疫性疾病及其相关自身抗体研究的深入,越来越多的以前认为没有临床意义的抗体成为新的研究焦点。因而对于这些结果,实验室也应该报告,以引起临床的重视,通过临床和实验室的共同努力,不断积累这些荧光模型的流行病学资料。

5. 为何患者ANA 阳性,却无明显临床症状?

ANA 阴性结果提示患者体内不存在抗核抗体。若患者仅仅出现ANA 阳性结果而无其他临床表现或指征,则并不提示自身免疫性疾病。主要原因如下:

1)ANA 在健康人群中的阳性率约为3-15%,而且ANA 的产生与患者的年龄相关,年龄在65岁以上的健康人群ANA 阳性率可高达10-37%。另外健康人群在感染病毒的情况下,也可能出现ANA 阳性,但这些抗体多为短暂出现。

2)一些药物治疗可能引起ANA 阳性。因此ANA 阳性需结合患者用药情况综合判断。

3) 一些特殊疾病(如肿瘤)也可能导致ANA 阳性。

目前已有的研究表明,自身抗体往往早于临床症状出现。对于SLE 患者而言,至少有一种以上SLE 相关自身抗体在临床诊断前即已出现(最早达9.4年前,平均为3.3年),而且抗体与疾病特异性越高,出现的时间越晚。另外,随着SLE 病情进展,抗体产生的数量逐渐增加(见参考文献[1])。

6. 如何认识间接免疫荧光法ANA 阴性,而印迹法靶抗原(SSA 、Jo-1、M2、和dsDNA 等)结果阳性的实验结果?

客观上不同的检测方法学之间存在敏感度和特异性的差异。因此针对上述问题应根据靶抗原的实际结果,进行具体情况具体分析。

1)由于SSA 和Jo-1抗原在真核细胞中的表达量不高,而且细胞固定剂对于抗原结构也可能产生影响,因此基于培养细胞作为基质的间接免疫荧光法绝非抗SSA 和Jo-1抗体的最佳检测方法(见参考文献[2])。

2)抗线粒体M2抗体对PBC 疾病的诊断具有良好的敏感性和特异性。有研究表明临床明确诊断的PBC 患者样本,即使应用大鼠肾检测抗线粒体M2抗体也可能出现荧光法阴性而重组抗原方法阳性的结果(见参考文献[3])。

3)对于dsDNA 抗体临床检测,由于不同实验体系中所应用的抗原来源不同、抗原呈现形式不同以及反应条件不同等因素的影响,因此不同实验方法学之间的结果并不具备可比性(见参考文献[4])。

7. 单独出现Ro52抗体阳性是否具有临床意义?

目前已有的研究表明,抗SSA 抗体主要提示干燥综合症、SLE 和新生儿红斑狼疮等疾病。但Ro52抗体在许多疾病中(如风湿性疾病、感染性疾病和自身免疫型肝病等)均有一定的发生率,因此单独Ro52抗体阳性结果缺乏疾病 ,需结合其他检测指标或临床症状综合判断。例如自身免疫性肝炎患者出现SLA/LP抗体和Ro52抗体同时阳性,则提示患者病情较重、预后较差。


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